血清半乳甘露聚糖聯(lián)合血漿1,3-β-D葡聚糖對侵襲性真菌病的診斷價值

朱柏珍，張艷玲，李偉鵬

(廣州醫(yī)科大學附屬第五醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州 510700)

血清半乳甘露聚糖聯(lián)合血漿1,3-β-D葡聚糖對侵襲性真菌病的診斷價值

朱柏珍，張艷玲，李偉鵬

(廣州醫(yī)科大學附屬第五醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州 510700)

目的 研究血清半乳甘露聚糖(GM)聯(lián)合血漿1,3-β-D葡聚糖(BG)檢測對侵襲性真菌病(IFD)的臨床診斷價值。方法選取我院于2013年3月至2015年12月期間收治的高危IFD患者252例，檢測和分析其GM及BG濃度，評價GM、BG單獨和聯(lián)合檢測對IFD的診斷效能。結(jié)果252例患者中，GM檢測陽性68例（26.98%），BG檢測陽性83例(32.94%)，GM+BG檢測陽性68例(26.98%)；GM檢測對IFD診斷的特異度、靈敏度、陰性及陽性預測值依次為97.42%、65.98%、82.07%、94.12%，BG檢測依次為82.85%、69.07%、82.85%、80.72%，GM+BG依次為99.35%、69.07%、83.69%、98.53%，GM+BG的特異度、陰性及陽性預測值均明顯高于BG檢測，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；GM+BG檢測的特異度、陰性及陽性預測值均略高于GM檢測，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。結(jié)論GM聯(lián)合BG檢測有利于提高IFD的診斷效能，相較于單一指標檢測具有更高的特異性及陽性預測作用，對IFD診斷及治療具有重要的輔助意義。

侵襲性真菌??；半乳甘露聚糖；1,3-β-D葡聚糖；診斷

侵襲性真菌病(invasive fungal disease，IFD)是指真菌侵襲人體的組織、器官或者血液系統(tǒng)，并在其中大量生長和繁殖，進而誘發(fā)組織臟器損傷以及炎癥反應性疾病[1]。IFD多見于呼吸內(nèi)科、血液科以及重癥監(jiān)護室(ICU)等，尤其是惡性血液病患者繼發(fā)IFD的風險較高[2]。目前，臨床診斷IFD的方法主要有非培養(yǎng)法和傳統(tǒng)真菌檢測法兩種，傳統(tǒng)真菌檢測法在IFD診斷中具有重要作用，但其具有耗時較長且敏感度低等缺陷，難以滿足臨床早期診斷、評估和治療的需求[3]。近年來，非培養(yǎng)法逐漸在臨床中推廣，不僅實現(xiàn)了早期、快速診斷，且診斷敏感性得以顯著提高。本研究應用血清半乳甘露聚糖(GM)聯(lián)合血漿1,3-β-D葡聚糖(BG)檢測進行IFD的診斷，旨在評估該診斷方法對IFD的診斷效能與臨床應用價值，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013年3月至2015年12月期間，我院呼吸內(nèi)科、血液科及ICU收治的高危IFD患者252例，其中，男性154例，女性98例；年齡18～75歲，平均(44.19±6.79)歲。IFD診斷參照《血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌病的診斷標準與治療原則(第四次修訂版)》[1]中的相關(guān)標準進行診斷。

1.2 儀器與試劑 酶標儀(Bio-Rad Model 680型，法國)，干式恒溫浴(天根生化科技(北京)有限公司)，BG采用LKN動態(tài)試管檢測儀及配套試劑盒(湛江安度斯生物有限公司)，GM試劑盒為曲霉半乳甘露聚糖試劑盒(法國Bio-Rad公司)。

1.3 檢測方法

1.3.1 GM檢測 應用干燥管采集2 mL外周血，常規(guī)在3 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心5 min。分別取血清樣本、標準血清、陽性及陰性質(zhì)控，按照3：1的比例向上述標本中加入處理液，搖勻后密封。然后將上述管子置于100℃條件下恒溫水浴3 min。上述管子取出置于10 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心10 min，留取上清液。嚴格按照試劑說明書應用酶標儀進行檢測。

1.3.2 BG檢測 應用肝素管采集2 mL外周血，常規(guī)在3 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心5 min。留取100 μL血漿，將其試劑盒配備的樣品稀釋液瓶中，充分混勻后，置于75℃條件下恒溫水域10 min。吸取100 μL經(jīng)稀釋、恒溫后的血漿樣本，按照試劑說明書應用LKN動態(tài)試管檢測儀進行BG檢測。

1.4 觀察指標 GM檢測以GM檢測濃度≥0.5 pg/mL判定為陽性，BG檢測儀BG檢測濃度≥20 pg/mL判定為陽性。真、假陽性以a、b表示，真、假陰性以c、d表示，計算敏感度=a/(a+d)，特異度=c/(b+ c)，陽性預測值=a/(a+b)，陰性預測值=c/(c+d)。

1.5 統(tǒng)計學方法 應用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，以率(%)表示計數(shù)資料，率的比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 GM與BG檢測結(jié)果比較 252例患者中，確診IFD為2例，臨床診斷為22例，臨床擬診為73例，排除診斷為55例。其中，GM檢測陽性68例，BG檢測陽性83例，GM+BG陽性68例。GM與BG檢測結(jié)果見表1。

表1 GM與BG檢測結(jié)果比較[例(%)]

2.2 GM與BG對IFD的診斷效能 GM、BG及GM+BG對IFI的診斷靈敏度比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但GM+BG的特異度、陰性及陽性預測值均顯著高于BG檢測(P＜0.05)；GM與GM+BG檢測的特異度、陰性及陽性預測值比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但仍有所提高，見表2。

表2 GM與BG對IFD的診斷效能（%）

3 討論

ICU患者病情嚴重、機體抵抗力低下、多長期使用廣譜抗生素或多種抗生素聯(lián)用、應用免疫抑制劑以及接受各類侵襲性治療等，相較于其他科室患者更容易發(fā)生IFD[4]。此外，惡性血液疾病患者也具有較高的IFD發(fā)病率，IFD也是導致惡性血液疾病患者死亡的主要因素之一[2]。IFD早期未及時診斷和有效治療，將增加患者的病死率。因此，如何早期、快速、準確地診斷和治療IFD已成為臨床研究的熱點內(nèi)容之一。

BG是一種重要的真菌細胞壁構(gòu)成組分，在病毒、細菌以及哺乳動物體內(nèi)均無合成，故被認為是特異性真菌細胞壁組分[5]。在真菌感染的情況下，大量BG可進入到人體血液循環(huán)以及其他體液中，在真菌對數(shù)生長期，BG釋放量達到峰值，在真菌生長1 d后呈現(xiàn)逐漸降低趨勢[6]。BG在除隱球菌以及根霉菌屬、毛霉菌屬等結(jié)合菌以外的真菌細胞中廣泛存在，一旦發(fā)生侵襲性真菌病，機體可通過啟動免疫應答而將真菌清除，而真菌細胞壁中的BG則釋放至血液系統(tǒng)中[2]。IFD多是由于曲霉菌以及念珠菌等感染所致，故BG檢測對于IFD感染的早期診斷具有較高的價值。GM是一種曲霉菌多糖細胞壁的構(gòu)成組分，與BG一樣在真菌感染過程中能夠釋放入血，并在真菌生長對數(shù)期達到最高釋放量[7]。目前，GM已成為臨床公認的IFD早期診斷敏感指標之一。GM與BG均為IFD診斷的有效指標，其中，GM陽性結(jié)果僅僅提示患者存在曲霉菌感染，而對于其他類型的真菌感染并無診斷價值；BG陽性結(jié)果對于曲霉菌、念珠菌以及肺泡子菌等多種真菌感染均具有診斷價值，但其無法對真菌種類進行區(qū)分[8]。相關(guān)研究表明，BG與GM在人體內(nèi)具有較為相似的代謝動力學，故在檢測結(jié)果方面具有一定的平行性[7]。張濤等[9]研究顯示，BG及GM檢測對IFD的診斷具有幾乎一致的特異性(93.2%vs 89.9%)、敏感性(61%vs 77%)、陽性預測值(92.4%vs 91.1%)和陰性預測值(64%vs 74.4%)。而何成祿等[10]研究表明，BG檢測的陰性預測值及靈敏度均顯著高于GM檢測，而GM檢測較BG具有更高的特異度，將GM與BG聯(lián)合后，診斷敏感度以及特異度均獲得了提高。Acosta等[11]研究表明，GM聯(lián)合BG檢測有利于減少IFD診斷假陽性以及假陰性，提高診斷特異度以及敏感度，從而為IFD的早期準確診斷提供可靠依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，BG檢測對IFD的診斷靈敏度較GM略高，但差異并無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而GM的特異度、陰性及陽性預測值均高于BG檢測，尤其是陽性預測值明顯高于BG檢測(P＞0.05)。認為BG與GM對于IFD的診斷均具有良好的效能，同時又各具優(yōu)劣。而將BG與GM聯(lián)合應用后，特異度、靈敏度、陽性及陰性預測值均獲得了不同程度的提高，尤其是特異度、陽性及陰性預測值均較單純BG檢測顯著性提高，聯(lián)合檢測的特異度、敏感度、陽性及預測值與GM單獨檢測比較差異雖無統(tǒng)計學意義，但均有不同程度的提高，研究結(jié)果與劉永林等[12]報道一致。由此可見，將GM聯(lián)合BG檢測能夠充分結(jié)合兩種指標的優(yōu)勢，降低假陰性以及假陽性，有效提高診斷敏感性與特異性。

綜上所述，GM聯(lián)合BG檢測對于IFD的早期診斷具有重要輔助意義，能夠提高診斷敏感性及特異性，減少假陰性以及假陽性，為IFD的早期、快速、準確診斷與早期治療提供可靠依據(jù)，值得臨床推廣應用。

[1]中國侵襲性真菌病工作組.血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌病的診斷標準與治療原則(第四次修訂版)[J].中華內(nèi)科雜志,2013,52 (8):607-610.

[2]羅保安.惡性血液病繼發(fā)侵襲性真菌病的診治進展[J].海南醫(yī)學, 2013,24(15):2277-2279.

[3]劉春玉,王紅.侵襲性真菌病非培養(yǎng)診斷方法的研究進展[J].中國真菌學雜志,2011,6(1):57-60.

[4]張勇,李偉,文艷,等.降鈣素原和1,3-β-D葡聚糖聯(lián)合檢測診斷ICU危重患者深部真菌感染的價值[J].海南醫(yī)學,2015,26(15): 2257-2258.

[5]曾淑英,劉霆,孟文彤,等.惡性血液病患者侵襲性真菌病GM和BG抗原檢測的價值[J].中華血液學雜志,2011,32(1):43-46.

[6]趙秋劍,王利公.危重癥患者血漿(1,3)-β-D葡聚糖及血清半乳甘露聚糖聯(lián)合檢測對侵襲性真菌病的意義分析[J].中國醫(yī)師進修雜志,2014,37(13):61-62.

[7]Lengerova M,Kocmanova I,Racil Z,et al.Detection and measurement of fungal burden in a guinea pig model of invasive pulmonary aspergillosis by novel quantitative nested real-time PCR compared with galactomannan and(1,3)-β-D-glucan detection[J].J Clin Microbiol,2012,50(3):602-608.

[8]朱義玲,崔娟娟,甘建和,等.(1-3)-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖抗原檢測在侵襲性真菌病診斷中的臨床意義[J].中國血液流變學雜志,2014,24(1):141-143,162.

[9]張濤,高坤,鄭玉榮.血漿1,3-β-D葡聚糖檢測聯(lián)合曲霉半乳甘露聚糖檢測在惡性血液病侵襲性真菌病中的診斷價值[J].中國實驗診斷學,2013,17(7):1328-1330.

[10]何成祿,何增品,徐從瓊,等.血漿(1,3)-β-D葡聚糖和血清半乳甘露聚糖檢測對重癥患者侵襲性真菌病的早期診斷價值[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2013,28(2):54-56.

[11]Acosta J,Catalan M,del Palacio Perez Medel A,et al.A prospective comparison of galactomannan in bronchoalveolar lavage fluid for the diagnosis of pulmonary invasive aspergillosis in medical patients under intensive care:comparison with the diagnostic performance of galactomannan and of(1,3)-beta-d-glucan chromogenic assay in serum samples[J].Clin Microbiol Infect,2011,17(7):1053-1060.

[12]劉永林,趙金方,陳婷婷,等.血清半乳甘露聚糖聯(lián)合血漿1,3-β-D葡聚糖在診斷侵襲性真菌病中的應用價值[J].中華臨床感染病雜志,2014,7(2):133-136.

Diagnostic value of serum galactomannan combined with plasma(1,3)-β-D-glucan on invasive fungal disease.

ZHU Bai-zhen,ZHANG Yan-ling,LI Wei-peng.Department of Clinical Laboratory,the Fifth Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University.Guangzhou 510700,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the clinical diagnostic value of serum galactomannan(GM)combined with plasma(1,3)-β-D-glucan(BG)on invasive fungal disease(IFD).MethodsA total of 252 patients with high risk IFD in our hospital from March 2013 to December 2015 were selected,in which GM and BG concentrations were detected and analyzed.The diagnostic efficacy of GM,BG and combined detection on IFD were evaluated.ResultsAmong 252 patients,GM test were positive in 68 cases(26.98%),and BG test were positive in 83 cases(32.94%).GM+BG test were positive in 68 cases(26.98%).The specificity,sensitivity,negative and positive predictive value in the diagnosis of IFD were respectively 97.42%,65.98%,82.07%,94.12%for GM detection,89.68%,69.07%,82.85%,80.72%for BG detection,and 99.35%,69.07%,83.69%,98.53%for GM+BG detection.The specificity,negative and positive predictive valueof GM+BG detection were significantly higher than those of BG detection,and the differences were statistically significant (P＜0.05).The specificity,negative and positive predictive value of GM+BG detection were slightly higher than those of GM detection,but the difference was not statistically significant(P＞0.05).ConclusionGM combined with BG detection is helpful to improve the diagnostic efficacy of IFD,which has a higher specificity and positive predictive effect compared with single index detection.It has important auxiliary significance for the diagnosis and treatment of IFD.

Invasive fungal disease(IFD);Galactomannan(GM);(1,3)-β-D-glucan(BG);Diagnosis

R379

A

1003—6350（2016）19—3131—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.19.012

2016-03-08)

朱柏珍。E-mail：1356289234@qq.com