聚維酮碘、硫酸銅及氯氰菊酯對漠斑牙鲆幼魚的急性毒性試驗(yàn)

段秀娟+任延軍

摘 要：研究了聚維酮碘、硫酸銅、高效氯氰菊酯三種藥物在一定條件下對漠斑牙鲆幼魚（70日齡）的毒性效應(yīng)。結(jié)果表明：聚維酮碘的安全濃度為4.062 g/mL；24 h半致死濃度為55.296 mg/L，48 h半致死濃度為34560 mg/L。硫酸銅的安全濃度為0.667 mg/L，24 h半致死濃度為2.812 mg/L，48 h半致死濃度為2.600 mg/L。高效氯氰菊酯的安全濃度為0.079 μg/L，24 h半致死濃度為7.112 μg/L，48 h半致死濃度為2.371 μg/L。

關(guān)鍵詞：漠斑牙鲆； 聚維酮碘；硫酸銅；高效氯氰菊酯；毒性

中圖分類號：S917

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

漠斑牙鲆（ParalichthysLethostigma） 屬硬骨魚綱、鰈形目、鰈亞目、牙鲆亞科、牙鲆屬，又稱“美國漠斑牙鲆”、“大花鲆”，為暖溫性、廣鹽性種[1]，適溫范圍 3～34 ℃，適鹽范圍0～40‰[2]，原產(chǎn)于美國沿海，具有生長快、抗逆性強(qiáng)等優(yōu)良的養(yǎng)殖性能[3]。

漠斑牙鲆自1999年引入福建省，現(xiàn)已成為我國海水魚工廠化養(yǎng)殖的主要品種之一[4]，但在常規(guī)養(yǎng)殖過程中常出現(xiàn)腹脹病、出血病、缺鰓病等疾病[5]，淡化養(yǎng)殖中出現(xiàn)腹水病、爛鰭病、鰓霉病、脂肪肝病等[6]，造成慘重?fù)p失。這些細(xì)菌、真菌、寄生蟲等疾病主要是由于管理不善，養(yǎng)殖密度高，水質(zhì)惡化等因素導(dǎo)致，生產(chǎn)上常用的防治方法是用藥物對魚體進(jìn)行浸泡或全池潑灑[7]，而藥物對牙鲆一般具有顯著毒性，因此，必須在藥浴過程中嚴(yán)格控制藥物的使用濃度和時(shí)間，一般幼魚對有毒物質(zhì)的敏感性高于成魚[8]。為增加幼魚期藥浴的安全性，本試驗(yàn)應(yīng)用聚維酮碘、硫酸銅、高效氯氰菊酯三種藥物對牙鲆幼魚[9]開展急性毒性試驗(yàn)，研究其對聚維酮碘、硫酸銅、高效氯氰菊酯藥物的敏感性，進(jìn)而為患病牙鲆藥浴治療提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

本試驗(yàn)于2014年5月-6月在天津海生水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司在育苗一車間進(jìn)行。

1.1.1 魚的來源和暫養(yǎng) 試驗(yàn)所用漠斑牙鲆幼魚選體長40～50 mm，體質(zhì)健壯、活力強(qiáng)、無外傷的正常魚苗作試驗(yàn)用魚，在水溫為（18±1） ℃，鹽度為22.34‰，24 h連續(xù)充氣，pH為7.6的條件下暫養(yǎng)3 d，餌料是新鮮的鹵蟲，為防止飼料的影響 ，實(shí)驗(yàn)期間不喂食。

1.1.2 試驗(yàn)藥品 試驗(yàn)藥品共有3種，聚維酮碘，硫酸銅（AR）[10-11]、高效氯氰菊酯均為市售，其成分、含量及其來源如表1。

1.1.3 試驗(yàn)儀器 試驗(yàn)所用的物品主要有：充氣泵（若干）、塑料盆、溫度計(jì)、比重計(jì)、電子天平、格尺、燒杯、玻璃棒、網(wǎng)袋（200目、150目）、顯微鏡、自然海水、淡水、pH試紙?jiān)噭?、?biāo)簽、手表、量筒（250 mL、100 mL）、膠頭滴管等。

1.1.4 試驗(yàn)用水 試驗(yàn)所用的海水為自然海水。其中自然海水鹽度34‰左右，自然海水經(jīng)沙濾后在進(jìn)水管口用200目網(wǎng)袋過濾，進(jìn)入池中的海水用0.8 mg/L的菌毒凈曝氣10 min靜置24 h后使用。

1.2 試驗(yàn)方法

急性毒性試驗(yàn)按常規(guī)毒性試驗(yàn)方法[12-13]進(jìn)行。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定正式試驗(yàn)濃度范圍，在此范圍內(nèi)按等比濃度梯度設(shè)定6個(gè)及1個(gè)對照組（CK）。每個(gè)濃度組均設(shè)2個(gè)平行，每個(gè)容器中放置10尾試驗(yàn)用魚。

試驗(yàn)開始后，48 h內(nèi)連續(xù)觀察，并于24 h、48 h和96 h記錄實(shí)驗(yàn)魚的死亡和存活數(shù)，以及中毒癥狀和死亡癥狀。每天更換試驗(yàn)溶液，及時(shí)清理死魚（以喪失游動能力、針刺無反應(yīng)的作為死亡標(biāo)準(zhǔn)）。

試驗(yàn)容器為塑料盆，內(nèi)盛5 L自然海水，水深30 cm。試驗(yàn)藥液配制成母液后，按比例稀釋成所需濃度，試驗(yàn)溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用直線內(nèi)插法[14]以濃度的常用對數(shù)為橫坐標(biāo)，死亡率為縱坐標(biāo)，作出死亡率與實(shí)驗(yàn)藥品質(zhì)量濃度對數(shù)的平面坐標(biāo)圖，并在圖上求出24、48、96 h的半致死濃度（LC50），安全濃度按下式計(jì)算：SC=48 h LC50×0.3/（24 h LC50/48 h LC50）2。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 聚維酮碘對漠斑牙鲆幼魚毒性試驗(yàn)的結(jié)果

由圖1和表3可見，聚維酮碘的安全濃度為4.062 mg/L，24 h的半致死濃度為55.296 mg/L，48 h的半致死濃度為：34.560 mg/L。對照組的正常試驗(yàn)魚在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中都靜伏于底層或緩慢游動，無任何異?，F(xiàn)象。當(dāng)聚維酮碘的質(zhì)量濃度為141.558 mg/L時(shí)，將漠斑牙鲆幼魚放入藥液中應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，四處游動，2 min后可見體形彎曲，呼吸急促，呈現(xiàn)明顯的中毒癥狀，5 min后伏底不動，呼吸頻率加快，10 min后減慢，15 min后鰓蓋張開呼吸停止，心臟停止跳動，死亡率達(dá)100%。濃度為 34.560 mg/L時(shí)，1 h后四處游動，體形有些彎曲，有明顯的中毒癥狀，20 h后開始死亡，24 h死亡率為30%，48 h為50%。當(dāng)質(zhì)量濃度為 21.60 mg/L時(shí)，4 h后開始四處游動，然后恢復(fù)安靜狀態(tài)，96 h后的死亡率為30 %。

2.2 硫酸銅對漠斑牙鲆幼魚毒性試驗(yàn)的結(jié)果

由圖2和表3所示，硫酸銅的安全濃度為0667 mg/L。對照組的正常試驗(yàn)魚在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中同樣都靜伏于底層或緩慢游動，無任何異常現(xiàn)象。當(dāng)硫酸銅的質(zhì)量濃度為4.506 mg/L時(shí)，30 min后牙鲆急劇狂游、撞壁，1 h后表現(xiàn)出明顯的中毒癥狀，身體強(qiáng)烈抽搐、扭曲變形，4 h后開始死亡，24 h死亡率達(dá)100%；質(zhì)量濃度為2404 mg/L時(shí)，1 h后急劇狂游，11 h后有明顯的中毒癥狀，22 h后開始死亡，24 h死亡率為20%，48 h為30%；當(dāng)質(zhì)量濃度為1.756 mg/L時(shí)，6 h后也出現(xiàn)狂游、擊壁，然后變得安靜，96 h死亡率為20%。漠斑牙鲆幼魚死后身體扭曲變形。

2.3 高效氯氰菊酯對漠斑牙鲆幼魚毒性試驗(yàn)的結(jié)果

由圖3和表3所示，高效氯氰菊酯的安全濃度為0.079 μg/L，24 h的半致死濃度為7.112 μg/L，48 h半致死濃度為2.371 μg/L。對照組的正常試驗(yàn)魚在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中依然是靜伏于底層或緩慢游動，無任何異?，F(xiàn)象。當(dāng)其濃度為 9351 μg·L-1時(shí)，7 min幼魚出現(xiàn)上浮現(xiàn)象，20 min幼魚出現(xiàn)明顯中毒癥狀（抽搐，撞壁現(xiàn)象，游動減慢，運(yùn)動失去平衡），1.5 h出現(xiàn)死亡現(xiàn)象；當(dāng)濃度為5400 μg·L-1時(shí)，30 min出現(xiàn)抽搐，撞壁現(xiàn)象，游動減慢，3 h出現(xiàn)死亡。

3 討論

3.1 漠斑牙鲆幼魚對聚維酮碘、硫酸銅和高效氯氰菊酯的敏感程度

根據(jù)現(xiàn)行農(nóng)藥對魚類毒性的分級標(biāo)準(zhǔn)（劇毒，LC50≤0.1 mg/L；高毒，0.1 mg/L10.0 mg/L）[15]

依據(jù)國家環(huán)保局1986 年制訂的 《生物技術(shù)監(jiān)測規(guī)范（水環(huán)境部分）》中將化學(xué)物質(zhì)對魚類的毒性分為 5 級：LC50<1 mg/L 為劇毒；LC50在1～100 mg/L 為高毒；LC50在100～1 000 mg/L 為中等毒性；LC50在 1 000～10 000 mg/L 為低毒；LC50>10 000 mg/L 為微毒或無毒[16-17]據(jù)此本試驗(yàn)得出的結(jié)論為：高效氯氰菊酯>硫酸銅>聚維酮碘。

3.2 聚維酮碘對漠斑牙鲆幼魚毒性影響

聚維酮碘又名聚乙烯吡咯烷酮碘、碘絡(luò)酮，它為廣譜消毒劑，對大部分細(xì)菌、真菌和病毒等均有不同程度的殺滅作用，而且可以調(diào)節(jié)生長與代謝等作用。它主要用于魚卵、水生動物的體表消毒；同時(shí)對病毒也有不同程度的殺滅作用。據(jù)報(bào)道聚維酮碘對海灣扇貝的SC為4.48 mg/L[18]，對皺紋盤鮑的稚鮑[19]SC為0.136 mg/L，由于試驗(yàn)條件所限本試驗(yàn)測得聚維酮碘的SC為4.062 mg/L。據(jù)悉當(dāng)聚維酮碘的濃度達(dá)到一定量時(shí)，它的殺菌效果與其所釋放出的有效碘濃度呈正相關(guān)，一般在較低濃度下，偏酸性環(huán)境下，穩(wěn)定性好，有效碘濃度要高；溫度升高時(shí)殺菌力亦增強(qiáng)，在水體中有機(jī)物會抑制碘的作用；但在較高濃度下聚維酮碘可使魚體彎曲、四處狂游、呼吸急促，直至鰓蓋張開死亡，因此在實(shí)際使用時(shí)應(yīng)注意使用對象、有機(jī)物的含量及環(huán)境條件。

3.3 硫酸銅對漠斑牙鲆幼魚毒性影響

硫酸銅俗稱藍(lán)礬 膽礬或石礬 是一種重金屬鹽類，常溫下為深藍(lán)色的三斜系結(jié)晶體或藍(lán)色透明結(jié)晶性顆粒或結(jié)晶性粉末，對病原體有較強(qiáng)的抑制和殺傷作用，同時(shí)對藻類也有很強(qiáng)的殺滅作用[19]，而本試驗(yàn)則使用的是藍(lán)色透明結(jié)晶性顆粒。硫酸銅在養(yǎng)殖中，常用于一些寄生蟲引起的疾病，特別對原蟲動物如小瓜蟲，刺激隱核蟲等有很強(qiáng)的殺傷力。其主要作用機(jī)理是銅離子與病原體體內(nèi)的蛋白質(zhì)結(jié)合生成蛋白鹽，使蛋白質(zhì)變性、沉淀，使酶失去活性，從而殺死病原體。因此，在防治寄生蟲引起的疾病時(shí)，能獲得較好的效果[20]。漠斑牙鲆幼魚對硫酸銅的耐受性在三種藥物中不是最敏感的，其24 h的LC50為2.912 mg/L，SC為0.667 mg/L，剛剛符合硫酸銅的常用濃度0.500～0.700 mg/L，因此使用時(shí)一定要謹(jǐn)慎，同時(shí)因?yàn)榱蛩徙~的安全濃度范圍較小，據(jù)報(bào)道一般情況 ，濃度應(yīng)控制在0 .7 mg/L，若濃度低于0.5 mg/L，殺蟲效果較差 濃度高于1 mg/L，魚就有中毒死亡的危險(xiǎn)[21]。因此硫酸銅的施用應(yīng)根據(jù)水質(zhì)情況，增減藥量（水中溶解有機(jī)物特別是蛋白質(zhì)及多羥基化合物能與硫酸銅形成復(fù)合物，降低硫酸銅的藥性，因此若水質(zhì)較肥，水溫較低時(shí)，可適當(dāng)加大藥量，反之，減少藥量）。

3.4 高效氯氰菊酯對漠斑牙鲆幼魚毒性影響

高效氯氰菊酯是一種微乳液形式[22]的白色藥液，可在表面活性的作用下增強(qiáng)其穩(wěn)定性。對昆蟲有很高的胃毒和觸殺作用，具有殺卵活性，殺蟲譜廣，對棉花、蔬菜、果樹等農(nóng)林害蟲以及蚊蠅、蟑螂、跳蚤、臭蟲和螞蟻等衛(wèi)生害蟲有極高的殺滅效果。本試驗(yàn)中當(dāng)高效氯氰菊酯[23]達(dá)到一定濃度后，漠斑牙鲆幼魚則出現(xiàn)抽搐、運(yùn)動失調(diào)、麻醉等癥狀，最后死亡。原因如謝文平研究所報(bào)道[24]高效氯氰菊酯通過鰓的吸附進(jìn)入魚體內(nèi)后，增加神經(jīng)系統(tǒng)對其敏感性，同時(shí)對離子轉(zhuǎn)運(yùn)、滲透壓平衡、能量代謝、呼吸等造成嚴(yán)重的影響，所以高效氯氰菊酯應(yīng)在水產(chǎn)上特別注意。

參考文獻(xiàn)：

[1] 林越赳，黃瑞芳，張雅芝，等.漠斑牙鲆人工育苗技術(shù)探討[J].福建水產(chǎn)，2008，6（2）：1-4

[2] 丁亞君.漠斑牙鲆人工育苗技術(shù)要點(diǎn)[S].齊魯漁業(yè)，2006，23（2）：22-25

[3] 楊學(xué)宋，孫瑞曉，等.漠斑牙鲆幼魚和成魚對溫度的適應(yīng)性試驗(yàn)[J].齊魯漁業(yè)，2005（9）：2-9

[4] 王彥懷，王金亮，李萬舉.漠斑牙鲆工廠化養(yǎng)殖技術(shù)研究[J].漁業(yè)現(xiàn)代化，2003（3）：11-15

[5] 繳建華.漠斑牙鲆淡化養(yǎng)殖中的疾病及其防治[J].科學(xué)養(yǎng)魚，2005（4）：52 - 53

[6] 鄭春靜.漠斑牙鲆親魚養(yǎng)成中主要病害的防治[J].中國水產(chǎn)，2006（2）：83

[7] 李碧全，陳明達(dá)，游劍濤，等.不同餌料系列對漠斑牙鲆苗種培育效果的影響[J].集美大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版 ），2007，12（2）：103-107

[8] 王偉，侯林，姚鋒，高巖，等.牙鲆魚白化病因的研究進(jìn)展[J].海洋科學(xué)，2004，28（6）：21-25.

[9] 翟良安，姚愛琴，李紀(jì)芳，等.八種農(nóng)藥對魚種和大型溞毒性致毒研究[J].淡水漁業(yè)，1989，18（3）：18-20

[10] 白麗蓉，陳 剛，張健東，等.表面活性劑SDS與DBS對褐點(diǎn)石斑魚急性毒性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，Journal of Anhui Agri.Sci.2008，36（21）：9087 - 9090

[11] 劉曉倩.硫酸銅在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J].江西農(nóng)業(yè)科技 2003（11）：10-15

[12] 趙長太，隋紅霞.硫酸銅防治魚病注意事項(xiàng)[J].黑龍江水產(chǎn)，2008（2）：35

[13] 邱郁春.水污染魚類毒性實(shí)驗(yàn)方法[M].北京：中國環(huán)境出版社，1992：50-65

[14] 鄭繁生，鄭海濤，盧飛麟.幾種常見藥物對斑點(diǎn)叉尾鮰的毒性試驗(yàn)[J].廣西水產(chǎn)科技，2007（3）：25-28

[15] 蔡道基.農(nóng)藥環(huán)境毒理學(xué)研究[M].北京：中國環(huán)境科學(xué)出版社，1999：79-82

[16] 國家環(huán)境保護(hù)局.生物監(jiān)測技術(shù)規(guī)范（水環(huán)境部分） [S].北京：中國環(huán)境科學(xué)出版社，1986：95

[17] Boyd，C·E·1996·Water quality in ponds for aquaculture [J].A-uburen University，Auburn，alabama，USA·337-343

[18] 姜禮燔.漁藥的安全濃度評價(jià)方法[M].中國漁業(yè)經(jīng)濟(jì)研究——漁藥知識講座.1995：197-198

[19] 呂豪，梁峻，等.聚維酮碘對海灣扇貝等貝類幼蟲的毒性試驗(yàn)研究[J].水產(chǎn)科學(xué)，2003，22（6）：24-28

[20] 高平.高效氯氰菊酯對卿的安全性評價(jià)及其相關(guān)研究[D].武漢：華中師范大學(xué).2007

[21] 李蘭，王化江.硫酸銅在水產(chǎn)病害防治中的使用.農(nóng)家致富，2006（22）：

[22] 王新偉，路福綏，李培強(qiáng).高效氯氰菊酯微乳液形成規(guī)律研究和形成機(jī)理初探[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).2004（2）：69-72

[23] 龐世勛，魏泰莉，賴子尼，等.三種菊酯類農(nóng)藥對劍尾魚、羅非魚的毒性研究[J].淡水漁業(yè)，2004，34（4）：15

[24] 王朝暉，尹伊偉.常見擬除蟲菊酯（原藥、商品）及助溶劑對水生生物毒性的比較.暨南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）[J]，1997，18（1）：98-103

Abstract：the author research the Acute toxicity tests of PVP-I，cupric sulfate and cypermethrin on the ParalichthysLethostigma juveniles（70 d） In this study.The results showed that the safe concentration of the PVP-I to ParalichthysLethostigma juveniles was 4.062 mg/L，the semi-lethal concentrations of 24 h was 55.296 mg/L and 34.560 mg/L was the semi-lethal concentrations of 48 h.The safe concentration，of cupric sulfate was 0.667 mg/L.the semi-lethal concentrations of 24 h was 2812 mg/L and 2.600 mg/L was the semi-lethal concentrations of 48 h.The safe concentration of effective cypermethrin was 0.079 mg/L. Semi-lethal concentrations of 24 h was 7.112 μg/L and 2371 μg/L was its semi-lethal concentrations of 48 h.

Key words：ParlichthysLethostigma； PVP-I； cupric sulfate； effective cypermethrin； acute toxic

（收稿日期：2015-03-10）