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    HSP70—1基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性關(guān)系研究

    2016-02-27 12:00楊毅楊陽
    中國現(xiàn)代醫(yī)生 2015年26期
    關(guān)鍵詞:攜帶者易感性多態(tài)性

    楊毅+楊陽

    [摘要] 目的 探討HSP70-1(+190G/C)基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性關(guān)系。 方法 收集2013年1月~2015年1月在河南省上蔡縣人民醫(yī)院內(nèi)分泌科住院及健康體檢的人群資料,依照納入與排除標準,確定研究對象共480例,其中2型糖尿病患者(病例組)240例,男132例,女108例;健康人群(對照組)240例,男124例,女116例。對研究對象進行問卷調(diào)查、體格檢查和實驗室指標的測定,并采用PCR-RFLP技術(shù)檢測HSP70-1基因+190位點多態(tài)性。 結(jié)果 2型糖尿病病例組和對照組的HSP70-1各基因型及等位基因頻率差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.386,P>0.05;χ2=1.260,P>0.05);C/C基因型攜帶者的體質(zhì)指數(shù)明顯高于G/G基因型攜帶者,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論 HSP70-1基因+190位點基因多態(tài)性可能與糖尿病易感性無關(guān);C/C基因型增加了攜帶者患肥胖病的風險。

    [關(guān)鍵詞] 2型糖尿??;熱應(yīng)激蛋白70-1;+190位點;基因多態(tài)性

    [中圖分類號] R587.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2015)26-0001-03

    Heat stress protein 70-1 gene polymorphisms and the risk of type 2 diabetes

    YANG Yi1 YANG Yang2

    1.Department of Emergency, People's Hospital of Shangcai County in Henan Province, Shangcai 463800, China; 2.Department of Nosocomial Infection, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, China

    [Abstract] Objective To explore the association between HSP70-1 gene polymorphisms and type 2 diabetes. Methods According to the inclusion and exclusion criteria, a total of 480 population who received medical health examination and patients with type 2 diabetes in people's hospital of Shangcai from January 2013 to January 2015 were enrolled in the study. 240 patients were identified as a case group, including 108 women and 132 men, randomly selected 240 healthy people as a control group with 124 men and 116 women. Data was analyzed by physical examination, questionnaire and laboratory examination, and polymerasechain reaction-restrained fragment length polymorphism technique was used to analysed the polymorphisms of HSP70-1+190. Results There was no significant difference in the distribution of allele and genotypes frequencies of HSP70-1 between the type 2 diabetic group and control group (χ2=1.386,P>0.05; χ2=1.260, P>0.05); CC carriers had a higher level of BMI than GG carriers in HSP70-1 gene(P<0.05). Conclusion There is no significant correlation between HSP70-1+190 and type 2 diabetes;C/C genotype of HSP70-1(+190) is related to obesity,CC carrier had increased the susceptibility of obesity.

    [Key words] Type 2 diabetes; Heat shock protein 70-1 gene; +190 site; Gene polymorphism

    2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus,T2DM)是由多種病因引起的內(nèi)分泌代謝紊亂疾病, 其特點是胰島素相對或絕對分泌不足及其周圍組織發(fā)生胰島素抵抗,可造成蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物代謝紊亂,導(dǎo)致各種器官發(fā)生慢性損傷及功能障礙衰竭[1]。有較多數(shù)據(jù)表明[2],糖尿病可能與遺傳因子的易感性有關(guān),糖尿病易感性與相關(guān)候選基因多態(tài)性關(guān)系已成為目前研究的熱點。熱休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)是指機體細胞在高溫下或受到其他有害因素刺激時,適應(yīng)性合成的一類結(jié)構(gòu)上高度保守的多肽,它能幫助恢復(fù)細胞的結(jié)構(gòu)與功能,并提高對應(yīng)激因素的抵抗力[3]。有研究報道[4],HSP70家族基因多態(tài)性與一些疾病的易感性密切相關(guān),HSP70基因多態(tài)性可能是2型糖尿病發(fā)病的重要機制之一。因此,本研究觀察并分析HSP70家族中HSP70-1基因多態(tài)性,探討2型糖尿病是否與HSP70-1(+190G/C)基因多態(tài)性有關(guān),為尋找人群易感生物標志物提供一定的思路和線索,現(xiàn)報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    采用病例-對照研究方法,依照納入與排除標準,選取2013年1月~2015年1月在河南省上蔡縣人民醫(yī)院內(nèi)分泌科及門診健康體檢的人群資料共480例作為研究對象。2型糖尿病患者(病例組)240例,男132例,女108例,平均年齡(56.9±7.6)歲;健康人群(對照組)240例,男124例,女116例,平均年齡(55.1±7.1)歲。

    1.2 診斷標準

    依照WHO1999年制訂的DM新的診斷標準[5]:糖尿病癥狀+空腹血漿血糖(FBG)≥7.0 mmol/L或餐后2 h隨機血漿血糖≥11.1 mmol/L或口服葡萄糖耐量試驗中,2 h血漿葡萄糖水平(P2BG)≥11.1 mmol/L。研究對象的籍貫均為河南省,且相互之間無血緣關(guān)系,并排除患有精神疾病、惡性腫瘤及拒絕配合等調(diào)查者的人群資料。

    1.3 方法

    1.3.1 一般情況及生化指標檢測 對調(diào)查對象進行問卷調(diào)查、體格檢查和實驗室指標的測定。通過問卷了解研究對象的一般情況,如性別、年齡、民族、疾病史、家族史等。體格檢查主要是進行身高、體重、血壓、腰圍、臀圍等指標檢測,并分析腰臀比值(WHR)和體質(zhì)指數(shù)(BMI)。生化指標檢測內(nèi)容:收集調(diào)查對象的血液樣本,進行空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(P2BG)、糖化血紅蛋白(HbA1C)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)等。

    1.3.2 HSP70-1基因多態(tài)性的檢測 采用PCR-RFLP技術(shù)測定HSP70-1(+190G/C)基因多態(tài)性。以抽提全血中DNA為模板,進行目的基因擴增,擴增目的片段為325bp。PCR擴增反應(yīng)引物序列:上游引物:5- TCCGGCGTCCGGAAGGACC-3;下游引物:5- TGCGGCCAATCAGGCGCTT-3。PCR擴增反應(yīng)條件:95℃預(yù)變性5 min→95℃變性35 s→58℃退火35 s→72℃延伸45 s,上述步驟共循環(huán)35次,最后72℃延伸10 min。然后取PCR擴增產(chǎn)物10 μL,加入限制性內(nèi)切酶(BsrBⅠ)進行酶切反應(yīng),根據(jù)目的蛋白分子量用3%瓊脂糖配置凝膠,在膠孔中加入8 μL酶切產(chǎn)物,于100 V恒壓下電泳25~30 min。在凝膠成像系統(tǒng)下觀察電泳結(jié)果,酶切反應(yīng)后G/G基因型酶切片段為171、70、84 bp,C/C基因型酶切片段為241、84 bp,G/C基因型酶切片段為241、70、84、171 bp。

    1.3.3 等位基因頻率計算 假設(shè)G/G基因型、G/C基因型、C/C基因型個數(shù)分別為a、b、c,基因型個數(shù)為N,基因型頻率分別為A、B、C。則A=a/N;B=b/N;C=c/N。G基因頻率=A+2/B;C基因頻率=C+2/B。

    1.4 統(tǒng)計學分析

    Epidata 3.2軟件錄入數(shù)據(jù),統(tǒng)計數(shù)據(jù)的分析使用SPSS19.0軟件。直接計數(shù)法計算各基因型的頻率,依據(jù)遺傳平衡定律的二項式公式分析各等位基因頻率;采用RxC的χ2檢驗分析各組基因型及等位基因頻率分布情況;多組間的比較采用單因素的方差分析。取檢驗水準α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組研究對象一般情況比較

    由表1可見,與對照組相比,病例組的FPG、P2BG、HbA1C、BMI、SBP、DBP、TG和LDL-C水平明顯增高,而HDL-C水平明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。兩組性別、年齡、WHR和TC水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    表1 病例組和對照組一般情況比較(x±s,n=240)

    注:與對照組比較,(1)P<0.05

    2.2 HSP70-1基因+190位點PCR擴增和酶切產(chǎn)物電泳結(jié)果

    HSP70-1基因+190位點的PCR擴增后,片段長度為325 bp,見封三圖1中1~6游道。HSP70-1的酶切產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳后可見C/C基因型為241、84 bp 2個片段(第1泳道),G/G基因型攜帶者為70、84、171 bp 3個片段(第2泳道),G/C基因型為241、70、84、171 bp 4個片段(第3泳道)。見封三圖2。

    2.3 HSP70-1基因各個基因型及等位基因頻率的比較

    HSP70-1基因+190位點基因型頻率在病例組和對照組中分布差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.386,P>0.05);病例組與對照組的等位基因頻率分布差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.260,P>0.05)。見表2。

    2.4 HSP70-1基因+190位點不同基因型間的臨床資料比較

    在本次調(diào)查對象中,G/G基因型的攜帶者為260例,G/C基因型的攜帶者為187例,C/C基因型的攜帶者為26例。由表3可見,在BMI水平上,+190位點的不同基因型間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),而不同基因型間的其他臨床指標差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。通過組間兩兩比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn),與G/G基因攜帶者相比,C/C基因型攜帶者的BMI水平明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

    表3 HSP70-1基因+190位點不同基因型間的臨床資料比較(x±s)

    注:與G/G基因型比較,(1)P<0.05

    3 討論

    熱休克蛋白又稱為熱應(yīng)激蛋白[6],機體細胞在高溫下或受到其他有害因素刺激時,會適應(yīng)性合成的一類結(jié)構(gòu)上高度保守的多肽,其中最為重要、誘導(dǎo)產(chǎn)生最強的是熱應(yīng)激蛋白70。人類HSP70基因定位于多條染色體上[7,8],其中HSP70-1、HSP70-2、HSP70-hom共同編碼分子量從66kD-78kD一類具有高度相關(guān)性的蛋白質(zhì)。有學者研究報道[9,10],HSP70基因多態(tài)性可能在2型糖尿病及其微血管病變的發(fā)病過程中起到重要作用。目前國內(nèi)研究中,有關(guān)2型糖尿病易感性與HSP70基因多態(tài)性關(guān)系尚缺乏較為完善的臨床證據(jù)。因此,本研究以內(nèi)分泌科2型糖尿病患者和體檢人群為調(diào)查對象,觀察2型糖尿病患者與正常人群的HSP70-1基因+190位點基因多態(tài)性的分布差異,以探討HSP70-1基因+190位點基因多態(tài)性與2型糖尿病易感性關(guān)系。

    有學者研究證實[11],HSP70-1基因-110位點和+190位點多態(tài)性均與2型糖尿病腎病相關(guān),而其是否與2型糖尿病有關(guān)尚不明確。本次研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),HSP70-1(+190G/C)的各基因型和等位基因頻率在2型糖尿病組與對照組中的分布差異無統(tǒng)計學意義,提示HSP70-1基因+190多態(tài)性可能與2型糖尿病易感性無關(guān)。通過genebank檢索報道,HSP70-1基因在120、190、438和-110等位點具有多態(tài)性,以上位點是否與2糖尿病易感性有關(guān)有待進一步證實。

    以往有學者研究報道[12],HSP70-1基因+190位點多態(tài)性可能與噪聲性耳聾、高原性反應(yīng)、多環(huán)芳烴類化合物等有關(guān),考慮可能由于190位點存在G→C的突變,引起HSP70-1肽結(jié)構(gòu)的改變,使之無法完成分子伴侶的功能,從而機體不能生成或轉(zhuǎn)運相應(yīng)蛋白以抵抗應(yīng)激,故C/C基因型可能與某些疾病易感性相關(guān)[13-15]。本研究分析了HSP70-1(+190G/C)的不同基因型攜帶者間臨床指標水平,結(jié)果顯示,與G/G基因攜帶者相比,C/C基因型攜帶者的BMI水平明顯增高,差異有統(tǒng)計學意義。BMI是常用的衡量肥胖的依據(jù),其是反應(yīng)全身性性肥胖的一個較好依據(jù)。本次研究結(jié)果提示,HSP70-1基因的C/C基因型可能與全身性肥胖關(guān)系密切,其可能明顯升高了攜帶者患肥胖病的風險。

    綜上所述,HSP70-1基因+190位點多態(tài)性與本次研究人群的2型糖尿病易感性無關(guān)。然而,C/C基因型可能與肥胖相關(guān),其增加了攜帶者患全身性肥胖的風險。熱休克蛋白70作為一個多基因家族,其在生物進化中可能同時存在遺傳和變異,而HSP70-1、HSP70-2和HSP70-hom等基因位點多態(tài)性是否與2型糖尿病及其相關(guān)指標有關(guān),尚需大量研究加以證實,以期為尋找糖尿病及其相關(guān)疾病易感生物標志物提供線索。

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    (收稿日期:2015-06-04)

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