高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變的相關(guān)性研究

俞俊霞戴小波*

(1 無錫市惠山區(qū)人民醫(yī)院病理科，江蘇 無錫 214187；2 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院病理科，江蘇 南京 210008)

高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變的相關(guān)性研究

俞俊霞1戴小波2*

(1 無錫市惠山區(qū)人民醫(yī)院病理科，江蘇 無錫 214187；2 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院病理科，江蘇 南京 210008)

目的探討高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變（CIN1、CIN2、CIN3、ICC）的相關(guān)性。方法隨機(jī)選擇120例宮頸病變患者組織標(biāo)本，檢測(cè)高危型HPV E6、E7 mRN；高危型HPV采用熒光PCR定量檢測(cè)。分析高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變（CIN1、CIN2、CIN3、ICC）的相關(guān)性。結(jié)果在宮頸病變CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV陽(yáng)性表達(dá)率分別為87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異不顯著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率分別為15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異顯著（P＜0.05）。結(jié)論高危型HPV與宮頸病變無相關(guān)性；高危型HPV E6、E7 mRNA與宮頸病變有相關(guān)性。

E6、E7 mRNA；宮頸病變；高危型；人乳頭瘤病毒

宮頸癌是唯一病因明確的癌癥，研究證實(shí)：99.7%的宮頸癌與高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染有關(guān)。高危型HPV的持續(xù)性感染是宮頸組織發(fā)生癌前病變直至癌變的主要病因。宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展有一個(gè)漸進(jìn)的演變過程，從高危型HPV病毒感染，到組織學(xué)低度癌前病變（CIN1），到高度癌前病變（CIN2、3），再到浸潤(rùn)癌（ICC），時(shí)間跨度可以達(dá)到5～10年，所以有效、積極地早期篩查，能夠顯著降低宮頸癌的發(fā)病率。HPV E6、E7 mRNA致癌基因產(chǎn)物是致癌的關(guān)鍵因素，E6、E7 mRNA與組織病理診斷上宮頸病變嚴(yán)重程度的關(guān)系尚未證實(shí)[1]。為探討高危型HPV和其E6、E7 mRNA與宮頸病變的相關(guān)性，找到精準(zhǔn)的篩查宮頸“病變”方法，進(jìn)行以下研究。

1 資料與方法

1.1 資料：隨機(jī)選擇我院2014年至2016年120例宮頸病變患者的手術(shù)切除標(biāo)本，年齡26～72歲，平均45.6歲。病理組織學(xué)分級(jí)：在宮頸病變CIN1 32例CIN2 34例、CIN3 30例、ICC 24例。

1.2 方法

1.2.1 宮頸病變組織學(xué)檢查：所有宮頸病變組織標(biāo)本，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)組織切片，常規(guī)HE染色，進(jìn)行組織學(xué)診斷。

1.2.2 高危型HPV熒光PCR定量檢測(cè)：采用凱普生物科技公司 “高危型人乳頭瘤病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR）”檢測(cè)患者宮頸脫落細(xì)胞HPV DNA載量，共檢測(cè)等13種高危型。以ROCHE Lightcycler480擴(kuò)增儀檢測(cè)和判讀結(jié)果。

1.2.3 HPV E6、E7 mRNA熒光PCR定性檢測(cè)：采用Hologic 的Aptma HPV Assay試劑盒和轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增（TMA）方法。檢測(cè)平臺(tái)采用Hologic公司提供的Panther全自動(dòng)一體化平臺(tái)。樣本采用1 mL ThinPrep細(xì)胞保存液。宮頸病變?cè)\斷按照宮頸病變組織學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS18.進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用“%”表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

宮頸病變組織中高危型HPV和其E6、E7 mRNA表達(dá)比較：在宮頸病變CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV陽(yáng)性表達(dá)率分別為87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異不顯著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率分別為15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異顯著（P＜0.05），見表1。

3 討 論

自從20世紀(jì)90年代末出現(xiàn)的第一個(gè)高危型HPV病毒檢測(cè)試劑盒—基于雜交捕獲技術(shù)的Digene Hybrid Capture2，而2012年批準(zhǔn)的Aptima HPV是唯一針對(duì)高危型HPV病毒E6、E7 mRNA的檢測(cè)，屬于新一代的檢測(cè)[2]。高危型HPV E6、E7 mRNA基因是高危型HPV病毒的兩個(gè)致癌基因，其通過轉(zhuǎn)錄mRNA實(shí)現(xiàn)癌蛋白的表達(dá)，從而改變細(xì)胞正常代謝，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生病變直至癌變[3]。本研究顯示：在宮頸病變CIN1、CIN2、CIN3、ICC中，高危型HPV陽(yáng)性表達(dá)率分別為87.5%、91.2%、93.3和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異不顯著（P＞0.05）；高危型HPV的E6、E7 mRNA陽(yáng)性表達(dá)率分別為15.6%、35.3%、70.0和95.8%。宮頸CIN1、CIN2，宮頸CIN2、CIN3，宮頸CIN3、ICC比較差異顯著（P＜0.05）。高危型HPV與宮頸病變無相關(guān)性；高危型HPV E6、E7 mRNA與宮頸病變有相關(guān)性，E6、E7 mRNA水平與組織學(xué)病變程度之間存在正相關(guān)性。提示：在病毒感染的早期，病毒基因在細(xì)胞內(nèi)為游離狀態(tài)，此時(shí)E6、E7基因處于靜默期，不表達(dá)或低表達(dá)mRNA，這個(gè)階段細(xì)胞不會(huì)發(fā)生高級(jí)別病變，90%以上一過性HPV感染大多處于這個(gè)階段；當(dāng)HPV病毒發(fā)生持續(xù)感染后，病毒基因和人類基因發(fā)生整合，E6、E7基因被激活，利用宿主細(xì)胞大量轉(zhuǎn)錄mRNA、從而導(dǎo)致大量癌蛋白的表達(dá)，細(xì)胞發(fā)生高級(jí)別病變的風(fēng)險(xiǎn)大大增加。提示：高危型 HPV病毒DNA存在，不一定會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變；只有當(dāng)病毒持續(xù)性大量轉(zhuǎn)錄E6、E7mRNA，從而大量表達(dá)E6、E7癌蛋白，才會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生癌變。

表1 宮頸病變組織中高危型HPV和其E6、E7 mRNA表達(dá)比較

相比細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，第一代檢測(cè)高危型HPVDNA的方法有效提高了癌前病變（CIN2，3）檢測(cè)的靈敏度，極大改善了“漏診”的問題，但同時(shí)造成了大量“過診”：由于80%以上的婦女一生中都會(huì)感染HPV病毒，而90%以上的感染是一過性感染，在8～24個(gè)月內(nèi)，被自身的免疫系統(tǒng)清除，只有不到10%會(huì)發(fā)展為持續(xù)性感染[4]。HPV DNA的檢測(cè)方法更多地是檢測(cè)感染，大量的陽(yáng)性結(jié)果都是沒有發(fā)生高級(jí)別病變的一過性感染，檢測(cè)特異性較低。而這些“假陽(yáng)性”結(jié)果，會(huì)給“患者”帶來不必要的心理壓力，并導(dǎo)致一系列家庭和諧和醫(yī)患關(guān)系等社會(huì)問題。

包括中國(guó)在內(nèi)的全球各個(gè)醫(yī)學(xué)組織在制定宮頸癌篩查策略時(shí)的核心價(jià)值是要平衡“篩查益處”和“潛在風(fēng)險(xiǎn)”這兩個(gè)方面，最理想的篩查策略就是要實(shí)現(xiàn)：①篩查益處最大化：發(fā)現(xiàn)那些有可能發(fā)展為癌癥的宮頸癌前病變。②潛在風(fēng)險(xiǎn)最小化：避免對(duì)一過性HPV病毒感染導(dǎo)致的良性病變的檢測(cè)和過度治療（篩查導(dǎo)致的對(duì)“患者”的潛在傷害：心理壓力，身體侵入性創(chuàng)傷，醫(yī)療負(fù)擔(dān)）。本研究證實(shí)：檢測(cè)高危型HPV病毒的E6、E7 mRNA相比檢測(cè)高危型HPV DNA，可以更加精準(zhǔn)的篩查宮頸病變，有效降低對(duì)一過性感染的檢出率，對(duì)患者潛在風(fēng)險(xiǎn)最小化，可以作為宮頸癌篩查最理想的篩查策略。

[1] 杜彩英,李芳.人乳頭瘤病毒DNA及E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸病變?cè)\斷中的比較研究[J].中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(4):38-40.

[2] 張生枝,邵華江,馬建婷.人乳頭瘤病毒 E6/E7mRNA 檢測(cè)在宮頸病變篩查中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2014,18(4):581-583.

[3] 鄭智,呂杰強(qiáng).高危HPV E6 /E7 mRNA 對(duì)宮頸病變?cè)\斷價(jià)值的研究[J].醫(yī)學(xué)研究雜志,2015,44(8):125-128.

[4] 張博,張穎,牛力春,等.液基細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPVmRNA檢測(cè)對(duì)宮頸癌的診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,24(1):119-122.

R737.33

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1671-8194（2016）33-0151-02

*通訊作者：E-mail:8690398@qq.com