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    久積膏的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

    2016-01-26 03:27:45輝李柯黃愛群陳立峰徐琳本李若存湖南省中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院湖南長沙40007湖南省中醫(yī)藥研究院湖南長沙400廣東省江門市蓬江區(qū)白石正骨醫(yī)院廣東江門59000
    中國民族民間醫(yī)藥 2015年3期
    關(guān)鍵詞:藥效學鎮(zhèn)痛抗炎

    肖 輝李 柯黃愛群陳立峰徐琳本李若存.湖南省中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院,湖南 長沙 40007;.湖南省中醫(yī)藥研究院,湖南 長沙 400;.廣東省江門市蓬江區(qū)白石正骨醫(yī)院,廣東 江門 59000

    久積膏的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究

    肖輝1李柯2*黃愛群3陳立峰2徐琳本2李若存2
    1.湖南省中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院,湖南長沙410007;
    2.湖南省中醫(yī)藥研究院,湖南長沙410013;
    3.廣東省江門市蓬江區(qū)白石正骨醫(yī)院,廣東江門529000

    【摘要】目的:研究久積膏的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。方法:采用大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型、大鼠角叉菜膠足跖腫脹模型、小鼠耳廓炎癥模型及小鼠熱板鎮(zhèn)痛模型,60只SD大鼠分成6組:對照組、模型組、久積膏低、中、高劑量組(0.144g/g、0.287 g/g、0.430 g/g)及吲哚美辛組(0.01 g/g),進行久積膏抗炎鎮(zhèn)痛作用研究。結(jié)果:與模型組比較,久積膏低、中劑量組能使佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠體重明顯增加(P<0.01);低、中劑量組對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠原發(fā)病變和繼發(fā)病變足跖腫脹率有明顯抑制作用(P<0.01);高劑量組能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹性炎癥反應(P<0.01);中、高劑量組能明顯抑制二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹性炎癥反應(P<0.01);高劑量組能提高小鼠對熱刺激閾值(P<0.01)。結(jié)論:久積膏具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

    【關(guān)鍵詞】久積膏;藥效學;抗炎;鎮(zhèn)痛

    Effect of Jiuji ointment to anti-inflammatory and analgesic

    XIAO Hui1LI Ke2*HUANG Ai-qun3CHEN Li-feng2XU Lin-ben2LI Ruo-cun2
    1.The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine,Changsha 410007,China; 2.Hunan Academy of Chinese Medicine,Changsha 410013,China; 3.Jiangmen Pengjiang Baishi of Thopaedics Hospital,Jiangmen 529000,China

    Abstract:Objectiv To investigate the effect of Jiuji ointment on anti-inflammatiory and analgesic.Methods Be Used of adjuvant arthritis of rats model and carageen glue in rats foot metatarsus swelling model,the mice auricle inflammation model and hot plate analgesia in mice model,were divided into 6 groups: control group,model group,low,medium and high dose group of jiuji ointment(0.144g/g and 0.287 g/g and 0.430 g/g),and indomethacin(0.01g/g)to study anti-inflammatory and analgesic effects? for Jiuji ointment.Results Compared with the model group,low and middle dose group of jiuji ointment can make the weight of adjuvant arthritis rats increased significant(P<0.01); Low and medium dose group on adjuvant arthritis in rat primary lesions and secondary lesion of the paw swelling rate significantly inhibited(P<0.01).High dose group significantly inhibit rat paw carrageenan-induced paw edema inflammatory response(P<0.01).Medium and high dose group can obviously inhibit the mice auricle swelling caused by xylene inflammation(P<0.01).High dose group can enhance to thermal stimulation threshold of mice(P<0.01).Conclusion Jiuji ointment has anti-inflammatory and analgesic effects obviously。

    Key words:Jiuji ointment; pharmacodynamics; anti-inflammatory; analgesic

    久積膏為廣東省江門市蓬江區(qū)白石正骨醫(yī)院開發(fā)的一種醫(yī)院外用皮膚藥,具有祛濕散寒、活絡舒筋、行瘀止痛的功效,臨床用于關(guān)節(jié)腫痛、筋骨不利、寒濕瘀聚等癥。為了驗證其抗炎鎮(zhèn)痛的功效,采用大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型、大鼠角叉菜膠足跖腫脹模型、小鼠耳廓炎癥模型及小鼠熱板鎮(zhèn)痛模型,觀察不同劑量久積膏抗炎和止痛作用,為久積膏的臨床應用提供實驗依據(jù)。

    1 材料

    1.1藥品與試劑久積膏(批號: 20070612,相當于生藥量為0.574 g/g,由湖南省中醫(yī)藥研究院中藥制劑研究室提供),其他生藥量久積膏用對照膏稀釋。對照膏為久積膏基質(zhì),不含生藥(批號: 20070612,由湖南省中醫(yī)藥研究院中藥制劑研究室提供);吲哚美辛片(批號: A070102,山西云鵬制藥有限公司),用對照膏配制成吲哚美辛含量為0.01g/g;氯化鈉注射液(批號: 070320502,武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責任公司); Freund' s完全佐劑(批號: 016K8900,SIGMA公司);角叉菜(批號: c-4014,sigma公司);二甲苯(批號: 20040518,湖南師大化學試劑廠)。

    1.2動物SD大鼠和ICR小鼠,均為SPF級,由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供,生產(chǎn)許可證號為SCXK(滬)2003-0002,合格證號大鼠為: 0027946,0027947;小鼠為0028201。鼠用全價顆粒飼料由上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供。

    2 方法與結(jié)果

    2.1統(tǒng)計分析方法統(tǒng)計學資料采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計處理。計量資料數(shù)據(jù)用(±sD)表示,用方差分析或者t檢驗判斷組間差異有統(tǒng)計學意義;計數(shù)資料數(shù)據(jù)用Fisher's精確概率檢驗判斷組間差異有統(tǒng)計學意義。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義,P<0.01表示所檢驗的差異有高度統(tǒng)計學意義。

    2.2久積膏對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritia,AA)模型的影響[1]

    2.2.1試驗方法取SD大鼠60只,體重(195±10)g,雄性,按體重分層將動物隨機分為6組,用游標卡尺測左、右后足跖厚度后,參照文獻方法[1],取其中5組動物,右后足跖皮內(nèi)注射Freund's完全佐劑0.05 ml致炎;另1組右后足跖皮內(nèi)注射氯化鈉注射液0.05 ml作為對照;致炎約18h

    后和第8天、第28天再用游標卡尺測左、右后足跖厚度;每周稱體重1次。致炎第8天開始給藥,對照組和模型組給對照膏,其他組分別給久積膏(低、中、高含量)0.144、0.287、0.430 g/g和吲哚美辛0.010g/g,給藥膏量為1 g/kg,涂于右側(cè)足跖,每天1次,給藥3周。觀察指標:計算致炎18h、第8天和第28天左、右后足跖腫脹率和腫脹抑制率。腫脹率(%)=(致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚度×100%,腫脹抑制率(%)=(對照組腫脹度-給藥組腫脹度)/對照組腫脹度×100%

    2.2.2久積膏對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠體重的影響與對照組比較,從第2周開始,佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠體重明顯減輕,持續(xù)到第4周試驗結(jié)束。與模型組比較,久積膏0.144(P <0.01)、0.287(P<0.01)、0.430 g/g(P<0.05)給藥2周時大鼠體重明顯回升,差異都有統(tǒng)計學意義,給藥3周時體重達到對照組水平;吲哚美辛0.010 g/g也能使大鼠體重回升,但作用弱于久積膏,見表1。

    表1 久積膏對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠體重(g)的影響(±sD,n =10)

    表1 久積膏對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠體重(g)的影響(±sD,n =10)

    注:與對照組比較,+P<0.05;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

    藥物 含量(g/g) 致炎前體重(g)給藥不同時間大鼠體重(g)給藥前1周 給藥后1周 給藥后2周 給藥后3周對照組 —195±9 243±14 278±12 297±18 316±18模型組 — 195±10 238±15 260±13+ 272±17+ 289±18+久積膏 0.144 195±8 245±9 271±15 296±15** 318±13**0.287 194±11 244±17 267±15 295±18* 316±19**0.43 195±10 246±15 270±18 294±25** 312±20*吲哚美辛 0.01 195±10 235±14 266±14 296±13* 309±11*

    2.2.3久積膏對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠原發(fā)病變的影響與對照組比較,大鼠足跖注射Freund's完全佐劑致炎后18h開始,原發(fā)病變足跖明顯腫脹;持續(xù)到第4周試驗結(jié)束時腫脹稍微減輕。與模型組比較,久積膏0.287、0.430 g/g給藥3 周(致炎后第4周)對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠原發(fā)病變足跖腫脹率都有降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

    表2 久積膏對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎原發(fā)病變足跖腫脹率的影響(±sD,n =10)

    表2 久積膏對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎原發(fā)病變足跖腫脹率的影響(±sD,n =10)

    注:與對照組比較,+ +P<0.01;與模型組比較,*P<0.05。

    藥物 含量(g/g)致炎前足跖厚度(mm)致炎后不同時間足跖腫脹率(%)18h 8d 4周對照組?。?.39±0.21 2.76±6.17 2.45±3.14 4.46±4.68模型組 - 4.59±0.25 55.9±10.1+ +52.3±8.0+ +41.3±12.1+ +久積膏 0.144 4.49±0.26 52.3±12.1 52.1±8.5 32.8±14.8 0.287 4.57±0.23 52.2±12.4 51.0±6.2 28.5±4.5*0.43 4.51±0.35 51.4±10.9 52.6±7.1 27.4±11.3*吲哚美辛 0.01 4.52±0.26 51.5±6.8 52.5±7.3 29.8±7.3*

    2.2.4久積膏對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠繼發(fā)病變的影響與對照組比較,模型組大鼠足跖注射Freund's完全佐劑致炎后4周,大鼠繼發(fā)病變足跖(對照足跖)出現(xiàn)明顯腫脹(P<0.01)。與模型組比較,久積膏0.144、0.287g/g和吲哚美辛0.010 g/g對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠繼發(fā)病變足跖腫脹顯著降低,差異有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表3。

    表3 久積膏對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎對照足跖腫脹率的影響(±sD,n =10)

    表3 久積膏對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎對照足跖腫脹率的影響(±sD,n =10)

    注:與對照組比較,+ +P<0.01;與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

    藥物 含量(g/g)致炎前足跖厚度(mm)致炎后足跖腫脹率(%)18h 8d 4周對照組?。?.47±0.18 1.34±5.83 1.43±3.66 1.97±2.76模型組 - 4.45±0.14 1.25±4.34 3.52±3.88 10.8±3.1+ +久積膏 0.144 4.50±0.25 1.64±2.94 4.45±6.03 4.53±4.96**0.287 4.47±0.20 2.28±6.23 2.62±5.10 3.33±4.96**0.43 4.45±0.21 2.09±6.01 3.02±6.54 3.30±6.33*吲哚美辛 0.01 4.46±0.28 2.69±8.81 4.05±7.52 3.56±6.28**

    2.3久積膏對大鼠角叉菜膠足跖腫脹的影響[2]取SD大鼠60只,體重(159±7)g,雄性,按性別體重分層隨機分為6組,對照組和模型組給對照膏,其他組分別給久積膏(低、中、高含量)0.144、0.287、0.430 g/g和吲哚美辛0.01 g/g,給藥膏量為1g/kg,涂于右側(cè)足跖,每天1次,給藥5d。末次給藥同時除對照組大鼠右后足跖皮內(nèi)注射氯化鈉注射液0.1 ml外,其他組大鼠右后足跖皮內(nèi)注射1%角叉菜膠0.1ml;末次給藥前和給藥后2、4、6h分別用游標卡尺測右后足跖厚度,計算足跖腫脹度和腫脹抑制率。腫脹(mm)=致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度,腫脹率(%)=(致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚度×100%,腫脹抑制率(%)=(模型組腫脹度-給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%。

    與對照組比較,大鼠右后足跖注射角叉菜膠后出現(xiàn)明顯腫脹,腫脹持續(xù)6h未見明顯消退。與模型組比較,久積膏0.430 g/g和吲哚美辛0.01 g/g對角叉菜膠所致炎后4h足跖腫脹有降低,差異有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01);久積膏0.287g/g對角叉菜膠致炎后6h足跖腫脹有降低,差異有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表4。

    表4 久積膏對大鼠角叉菜致足跖腫脹的影響(±sD,n =10)

    表4 久積膏對大鼠角叉菜致足跖腫脹的影響(±sD,n =10)

    注:與對照組比較,+ +P<0.01;與模型組比較,**P<0.01。

    藥物 含量(g/g)致炎前足跖厚度(mm)致炎后足跖腫脹度(mm)/腫脹率(%)2h 4h 6h對照組 - 4.41±0.24 0.29±0.16 0.29±0.18 0.23±0.19 6.57±3.83 6.72±4.18 5.32±4.38模型組?。?.50±0.21 1.79±0.27+ + 2.23±0.28+ +1.99±0.43+ +39.9±6.5+ + 49.8±7.6+ +44.6±11.3+ +久積膏 0.144 4.55±0.16 1.73±0.35 2.03±0.37 1.71±0.48 38.2±8.7 44.7±9.3 37.7±11.5 0.287 4.57±0.26 1.72±0.40 1.87±0.34 1.27±0.29**37.8±9.8 41.1±8.6 28.0±7.8**0.43 4.70±0.24 1.53±0.41 1.73±0.40**1.33±0.27**32.8±9 37.0±9.8** 28.5±7.2**吲哚美辛 0.01 4.53±0.14 1.22±0.35** 1.45±0.38**1.14±0.39**27.0±8.3** 32.3±9.2** 25.4±9.2**

    2.4久積膏對小鼠耳廓炎癥模型試驗[3]ICR小鼠60只,體重(19.5±1.2)g,雄性,按體重分層隨機分為6組,對照組和模型組給對照膏,其他分別給久積膏(低、中、高含量)0.144、0.287、0.430 g/g和吲哚美辛0.010g/g,給藥膏量為5 g/kg,涂于雙側(cè)耳廓,每天1次,給藥5d。末次給藥后30 min除對照組小鼠右耳廓2面各涂水0.01 ml外,其他組小鼠右耳廓2面各涂二甲苯0.01 ml;涂二甲苯后1h頸椎脫臼處死小鼠,剪下雙耳,用9 mm打孔器在相應部位分別打下圓耳片,電子天平稱重,計算耳廓腫脹度和腫脹抑制率。腫脹度(mg)=右耳片重-左耳片重,腫脹率(%)=(右耳片重-左耳片重)/左耳片重× 100%,抑制率(%)=(模型組腫脹度-給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%與對照組比較,小鼠右耳廓涂二甲苯1h后出現(xiàn)明顯腫脹。與模型組比較,久積膏0.287、0.430 g/g和吲哚美辛0.010 g/g能明顯抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹,差異有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表5。

    表5 久積膏對小鼠二甲苯致耳廓腫脹的影響(±sD,n =10)

    表5 久積膏對小鼠二甲苯致耳廓腫脹的影響(±sD,n =10)

    注:與對照組比較,+ +P<0.01;與模型組比較,**P<0.01。

    藥物 含量(g/g)左耳重(mg)右耳腫脹度(mg)腫脹率(%)抑制率(%)對照組 - 9.70±1.24 0.03±0.18 0.46±1.92?。P徒M - 9.89±1.08 4.88±1.67+ +49.60±16.50+ + ?。梅e膏 0.144 9.21±0.62 3.58±1.61 39.30±18.60 26.6 0.287 10.20±0.80 2.82±0.69**27.60±7.30** 42.2 0.43 9.28±1.01 2.05±0.99**21.60±8.60** 60吲哚美辛 0.01 9.83±0.79 1.74±0.70**17.70±7.20**64.3

    2.5久積膏對小鼠熱板鎮(zhèn)痛試驗的影響[4]取ICR小鼠,體重(19.0±1.2)g,雌性,熱板法(55.0±0.1)℃測痛閾值。取痛閾值范圍為>5s和<30 s的小鼠50只,按痛閾值分層隨機分為5組,對照組給對照膏,其他組分別給久積膏(低、中、高含量)0.144、0.287、0.430 g/g和吲哚美辛0.010 g/g,給藥膏量為5 g/kg,涂于雙后足跖,每天1次,給藥5d。末次給藥后2、4h分別用熱板法測痛閾值,計算痛閾變化率;以痛閾達60s或基礎(chǔ)痛閾值的2倍判斷為有鎮(zhèn)痛作用,計算鎮(zhèn)痛率。

    與模型組比較,久積膏0.144、0.287和0.430g/g給藥后2h使小鼠熱板痛閾值開始增加,4h時痛閾值增加顯著。按鎮(zhèn)痛作用標準分析,模型組給對照膏無鎮(zhèn)痛作用;久積膏0.430g/g和吲哚美辛0.010g/g鎮(zhèn)痛率分別為40%和50%,差異有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)。見表6。

    表6 久積膏對小鼠熱板痛閾的影響(±sD,n =10)

    表6 久積膏對小鼠熱板痛閾的影響(±sD,n =10)

    注:與模型組比較,*P<0.05,**P<0.01。

    藥物 含量(g/g)給藥前痛閾(s)給藥不同時間痛閾變化率(%)2h 4h鎮(zhèn)痛率(%)模型組 - 15.5±4.4 3.04±6.50 6.15±9.89 0久積膏 0.144 15.7±5.1 34.3±26.3 56.1±41.4* 20 0.287 16.1±5.6 41.5±41.4 55.5±33.3* 30 0.43 15.5±4.2 63.6±41.7 67.2±36.8* 40**吲哚美辛 0.01 15.0±4.7 118.0±75.0 99.6±47.8 50**

    3 討論

    類風濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種以關(guān)節(jié)滑膜慢性炎癥為主要特征的系統(tǒng)性自身免疫病,是一種原因不詳、發(fā)病率及致殘率均較高,并且尚無特效藥物治療的常見病癥[5]?,F(xiàn)代醫(yī)學研究對治療類風濕性關(guān)節(jié)炎的藥理作用主要包括免疫抑制、抗炎、鎮(zhèn)痛以及對骨關(guān)節(jié)的影響。本研究選用Freund's完全佐劑成功復制AA大鼠模型,試驗動物均出現(xiàn)了體重減輕、繼發(fā)性和原發(fā)性的關(guān)節(jié)腫脹炎癥;實驗結(jié)果證實久積膏能使佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠體重明顯增加,對原發(fā)病變足跖腫脹和繼發(fā)病變足跖腫脹有治療作用。角叉菜膠誘導的大鼠足跖腫脹模型、二甲苯所致小鼠耳廓炎癥模型屬于急性非特異性炎癥模型和免疫性炎癥模型,主要表現(xiàn)為局部的充血、水腫及滲出等病理反應過程,常用于評價藥物對急性炎癥過程的影響[6]。結(jié)果表明久積膏能明顯抑制角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹性炎癥反應和二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹性炎癥反應,該實驗結(jié)果進一步從抗炎方面佐證了久積膏臨床治療類風濕性關(guān)節(jié)炎。研究鎮(zhèn)痛藥的效價,主要測定對其痛閾的影響。久積膏能延長小鼠熱板痛反應時間,提高痛閾值,并與給藥劑量呈正相關(guān),其實驗研究結(jié)果與久積膏臨床鎮(zhèn)痛效果是一致的。

    久積膏是廣東省江門市蓬江區(qū)白石正骨醫(yī)院李焯文家族治療寒濕痹阻型類風濕性關(guān)節(jié)炎的有效良方。方中白芥子辛溫利氣豁痰,散寒開結(jié),化皮里膜外之凝痰;羌活、獨活發(fā)散周身之風寒濕邪,舒利關(guān)節(jié)而止痹痛,三者共為君藥。生半夏、生南星相須為用,驅(qū)散經(jīng)絡中之風痰濕濁;川烏、草烏祛風散寒,除濕通痹之功,且尤擅止痛;乳香新散溫通既能活血化瘀,又能行氣散滯;桂枝味甘和緩,可發(fā)汗;荊芥、防風為解表平和之藥,同用發(fā)汗解表,開泄皮毛,使風寒之邪外達而解,上藥合用共為臣藥。佐以石菖蒲芳香化濕,醒脾行氣;丁香辛溫而溫中散寒行氣止痛;白芷通經(jīng)理氣能散風除濕止痛;為防止方中辛熱行氣之藥動血致血液離經(jīng)之虞,使以具有收斂之性的五倍子收澀解毒消腫;白蘞、白芨消腫散結(jié)止痛。三藥均有收斂之性可使血活瘀散而不至于太過。全方配伍寒溫并用,痰瘀并治,具有溫經(jīng)通絡,化濕、化痰、化瘀的功效、使寒散、濕化、痰消、瘀祛而治療RA。

    參考文獻

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    收稿日期:( 2014.10.31)

    通信作者:李柯,助理研究員,主要從事中藥制劑與質(zhì)量控制的研究。E-mail: 17848689@ qq.com

    作者簡介:肖輝,主管藥師,主要從事中藥新制劑的研究。

    【文章編號】1007-8517(2015)03-0013-03

    【文獻標志碼】A

    【中圖分類號】R285.5

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