薄層色譜法鑒別康腎顆粒中茜草研究

周翠蘭　曾曉燕　姚遠(yuǎn)忠廣州一品紅制藥有限公司，廣東　廣州　510760

薄層色譜法鑒別康腎顆粒中茜草研究

周翠蘭曾曉燕姚遠(yuǎn)忠
廣州一品紅制藥有限公司，廣東廣州510760

【摘要】目的:建立康腎顆粒中茜草的薄層色譜定性鑒別方法，為將茜草鑒別納入其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。方法:采用薄層色譜法對(duì)康腎顆粒中茜草進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果:在薄層色譜中，供試品溶液在與對(duì)照藥材及對(duì)照品相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。結(jié)論:本薄層色譜鑒別方法驗(yàn)證結(jié)果較好，專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性、耐用性好，可用于康腎顆粒的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】康腎顆粒;茜草;薄層鑒別

康腎顆粒具有補(bǔ)脾益腎，化濕降濁的功效，臨床用于脾腎兩虛所致的水腫、頭痛而暈、惡心嘔吐、畏寒肢倦、輕度尿毒癥。該藥源于彝族民間驗(yàn)方，臨床使用多年，療效好，很受廣大患者的歡迎。該品種收載于國家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編內(nèi)科腎系分冊(cè)，處方由連錢草、忍冬藤、石韋、茜草等12味藥材組成。其中茜草為臣藥，具有涼血、止血、祛痰、通經(jīng)等功效[1]，是傳統(tǒng)的止血藥，與方中諸藥配伍可活血祛邪，又可應(yīng)于止血生津、調(diào)通氣路、改善尿毒癥癥狀?？的I顆?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)只做了5味藥材的鑒別，不含茜草鑒別。為了提高中成藥質(zhì)量控制水平、提高藥品標(biāo)準(zhǔn)、確保產(chǎn)品質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)參照《中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》[2]及相關(guān)文獻(xiàn)[3]，采用薄層色譜鑒別方法對(duì)處方中的茜草進(jìn)行了定性鑒別。

1　儀器與材料

1.1儀器ZF－1紫外分光儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司); SB－5200D超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司);電子天平(廣州市授科儀器科技有限公司)。

1.2試藥與材料大葉茜草素對(duì)照品(批號(hào): 121049－201003)、茜草對(duì)照藥材(批號(hào): 110884－200604)購自中國藥品生物制品檢定所;康腎顆粒(批號(hào): 20140603、20140604、20140605、20140606，廣州一品紅制藥有限公司);硅膠G板:青島海洋化工廠、德國默克公司生產(chǎn);所用試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1供試品溶液的制備取康腎顆粒12g，研細(xì)，加甲醇30ml，超聲處理30min，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml、鹽酸2ml，加熱20min，放冷，用乙酸乙酯20ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，揮干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。

2.2陰性對(duì)照溶液的制備按處方比例稱取除茜草之外的其它藥材，照康腎顆粒的制備工藝制成缺茜草空白顆粒，取缺茜草空白顆粒12g，照上述供試品溶液的制備方法同法制備成陰性對(duì)照溶液。

2.3對(duì)照藥材溶液的制備取茜草對(duì)照藥材0.5g，照上述供試品溶液的制備方法同法處理，作為對(duì)照藥材溶液。

2.4對(duì)照品溶液的配制取大葉茜草素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.5TLC鑒別照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)[2]，吸取對(duì)照品、對(duì)照藥材溶液各2μl，陰性對(duì)照溶液、供試品溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－正已烷－甲酸－甲醇(10∶2∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。

2.6方法驗(yàn)證

2.6.1專屬性照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，采用缺茜草陰性對(duì)照、對(duì)照品、對(duì)照藥材進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，本法專屬性較好。

2.6.2靈敏度照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，比較供試品不同點(diǎn)樣量(1、2、5、10、15、20μl)對(duì)斑點(diǎn)的影響。結(jié)果隨著點(diǎn)樣量的增加，斑點(diǎn)的清晰度增加，點(diǎn)樣1μl也能檢出，但斑點(diǎn)非常模糊，點(diǎn)樣5μl以上斑點(diǎn)明顯，點(diǎn)樣到20μl薄層板有點(diǎn)超載，但斑點(diǎn)未拖尾，結(jié)果表明本方法靈敏度較好，點(diǎn)樣量可以選擇5～10μl。實(shí)驗(yàn)選擇的是普通薄層板，使用高效板可減少點(diǎn)樣量。

2.6.3重現(xiàn)性照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，同時(shí)點(diǎn)樣三個(gè)批號(hào)(批號(hào): 20140603、20140604、20140605)的樣品，結(jié)果三批供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，本法重現(xiàn)性較好。

2.6.4耐用性

2.6.4.1不同廠家的薄層板考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，采用兩個(gè)不同廠家的硅膠G薄層板及自制板進(jìn)行點(diǎn)樣，結(jié)果顯示不同廠家的薄層板Rf值有所差異，但不影響薄層鑒別。

2.6.4.2不同相對(duì)濕度考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，平行點(diǎn)樣四個(gè)薄層板，分別在RH18%、RH42%、RH65%、RH88%四個(gè)相對(duì)濕度條件下展開，比較TLC圖譜的差異，結(jié)果RH18%～88%范圍內(nèi)檢視結(jié)果良好，故常規(guī)實(shí)驗(yàn)室條件下相對(duì)濕度對(duì)此鑒別試驗(yàn)沒有影響。

2.6.4.3不同溫度的考察照康腎顆粒茜草鑒別方法操作，平行點(diǎn)樣三個(gè)薄層板，分別在5、25、35℃三個(gè)溫度條件下展開，比較TLC圖譜的差異，結(jié)果顯示環(huán)境溫度5～35℃不影響本品薄層鑒別。

2.6.4.4檢視時(shí)間的考察文獻(xiàn)報(bào)道[4]，甲醇溶液中大葉茜草素在光照條件下含量明顯下降，因此在薄層板展開晾干之后，在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)光照環(huán)境下，在0min、30min、1h、2h四個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)觀察了熒光強(qiáng)度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的變化，大葉茜草素的熒光強(qiáng)度下降，斑點(diǎn)顏色變淡，展開晾干后2h對(duì)照品斑點(diǎn)顏色明顯變淡，供試品已經(jīng)觀察不到

斑點(diǎn)。故建議樣品配制后置于棕色試劑瓶中避光保存，薄層板晾干之后即刻觀察。

2.7結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品和對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，色譜圖見圖1。

圖1　康腎顆粒中茜草薄層色譜圖

3　討論

康腎顆粒處方由12味中藥組成，組分復(fù)雜，影響鑒別的干擾因素較多，樣品的處理方法非常重要。試驗(yàn)甲醇提取、乙酸乙酯提取多種方法，最后確定采用甲醇提取，再乙酸乙酯萃取。采用茜草對(duì)照藥材、大葉茜草素對(duì)照品作為對(duì)照，對(duì)不同展開劑進(jìn)行了篩選:(1)石油醚－丙酮(5∶1);(2)乙酸乙酯－正已烷－甲酸－甲醇(10∶28∶1∶0.5);(3)二氯甲烷－乙酸乙酯－正已烷－甲酸－甲醇(20∶10∶8∶1∶0.5)。結(jié)果展開劑(2)操作方便，斑點(diǎn)分離清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。

研究結(jié)果表明，所建立的薄層色譜鑒別方法對(duì)康腎顆粒中茜草的定性鑒別專屬性強(qiáng)，提取方法和展開效果良好，方法靈敏度高，重現(xiàn)性、耐用性均達(dá)到鑒別檢驗(yàn)要求，可較好地用于康腎顆粒的質(zhì)量控制。本法也可用于原藥材的鑒別檢驗(yàn)，具有良好的通用性。

參考文獻(xiàn)

[1]楊連榮．茜草的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J]．中醫(yī)藥信息，2007，24(1): 21－23．

[2]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄130－131．

[3]歐陽榮．肝達(dá)康片中茜草的薄層色譜鑒別方法探討[J]．中國中醫(yī)藥信息雜志，2001，8(10): 38．

[4]劉廣．大葉茜草素在甲醇溶液中的穩(wěn)定性研究[J]．華西藥學(xué)雜志，2010，25(3): 318－320．

收稿日期:( 2014.10.28)

作者簡介:周翠蘭(1978－)，女，碩士研究生，執(zhí)業(yè)藥師，從事新藥研發(fā)工作。

【文章編號(hào)】1007－8517(2015)03－0030－02

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類號(hào)】R286.0