轉(zhuǎn)筋草生藥學(xué)研究

轉(zhuǎn)筋草生藥學(xué)研究

張琳,程虎印,王繼濤,張妮,張崗*

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

摘要：目的對(duì)轉(zhuǎn)筋草進(jìn)行性狀、顯微及理化鑒別。方法采用組織學(xué)、形態(tài)學(xué)鑒別方法，研究原植物形態(tài)、生藥特征、各部分組織及粉末顯微特征，并且進(jìn)行粉末的生物堿化學(xué)鑒別。結(jié)果轉(zhuǎn)筋草根莖、莖及葉的薄壁細(xì)胞均含草酸鈣方晶；粉末中可見不定式氣孔及非腺毛。粉末與3種生物堿沉淀試劑分別生成沉淀。結(jié)論以上性狀特征、顯微特征及理化結(jié)果可以作為轉(zhuǎn)筋草生藥鑒別的依據(jù)。

關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)筋草；顯微結(jié)構(gòu)；生藥學(xué)

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.10.030

中圖分類號(hào)：R282.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)10-1071-03

基金項(xiàng)目:陜西省教育廳專項(xiàng)科研計(jì)劃項(xiàng)目(2013JK0829)。

作者簡介:張琳,女,碩士,高級(jí)實(shí)驗(yàn)師,主要從事中藥資源學(xué)研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：趙玉芝2015-04-14)

*通信作者:張崗,電話-18709108808,電子信箱-25784319@qq.com

Pharmacognosical studies onPachysandraterminalisSieb.et Zucc.

ZHANG Lin,CHENG Huyin,WANG Jitao,ZHANG Ni,ZHANG Gang*

(Shaanxi University of Chinese Medicine,Xianyang 712046,Shaanxi Province,China)

Abstract:ObjectiveTo perform the trait identification,microscopy authentication and physiochemical determination.MethodsUsing histological and morphological methods,systemically studied traits of the original plant morphology,pharmacognosy,various tissues and microscopic characters of powder from Pachysandra terminalis.And alkaloids were physiochemically determined in powder.ResultsThere were cubic crystal of calcium oxalate in rhizome,stems,and leaves of Pachysandra terminalis Sieb et Zucc;Anomocytic type stomas and non-glandular hair were visible in powder.The herbal powder could produce precipitation with three types of alkaloids.ConclusionAbove traits,microscopic characteristics and physicochemical results can be used as the basis for Pachysandra terminalis Sieb.et Zucc.identification.

Keywords:Pachysandra terminalis Sieb.et Zucc.;microscopic structure;pharmacognosy

轉(zhuǎn)筋草，又名雪山林、頂蕊三角咪、粉蕊黃楊、頂蕊板凳果、捆仙繩等，為黃楊科(Buxaceae)板凳果屬(Pachysandra)植物頂花板凳果PachysandraterminalisSieb etZucc的帶根全草，常綠亞灌木，主要分布于陜西、湖北、甘肅、四川、貴州等地[1]。其味苦微辛，性涼；具有除風(fēng)濕、清熱解毒、調(diào)經(jīng)活血、止帶舒筋活絡(luò)的功效；主要治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性氣管炎、小腿轉(zhuǎn)筋、白帶、月經(jīng)過多、煩躁不安等病癥。中藥化學(xué)和現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，轉(zhuǎn)筋草包含生物堿、酚類、三萜類、木質(zhì)素等多種活性成分[2-13]，具有抗腫瘤、抗氧化、抗癌等多重藥理活性[7-16]。因此，轉(zhuǎn)筋草在臨床中應(yīng)用廣泛。本研究對(duì)轉(zhuǎn)筋草根莖、莖、葉及粉末性狀和顯微進(jìn)行了系統(tǒng)性生藥學(xué)研究。

1材料

ZEISS 顯微鏡(德國蔡司，型號(hào) ImagerA1)，粉碎機(jī)，恒溫箱(上海一恒)，LY-WN-HPCD型萬能視頻成像裝置(成都勵(lì)揚(yáng))；202-1型手搖式切片機(jī)。轉(zhuǎn)筋草原植物材料于2014年6月采自太白皂角灣、林場、塘口三地，分別編號(hào)標(biāo)記，并經(jīng)王繼濤高級(jí)實(shí)驗(yàn)師鑒定為黃楊科板凳果屬植物頂花板凳果P.terminalis。所用化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純,包括二甲苯、乙醇、FAA固定液、石蠟、蒸餾水、中性樹膠、番紅、固綠、水合氯醛、稀甘油等。

2方法

2.1石蠟切片法[17]制片選取直徑約為2～5 mm的藥材根莖、莖、葉(通過主脈)切成0.5 cm的小段；分別固定于FAA溶液中，用系列乙醇脫水，二甲苯透明，40 ℃恒溫箱過夜浸蠟后石蠟包埋；修塊后在202-1型手搖式切片機(jī)上切片，切片厚度為10 μm，待干燥后用二甲苯脫蠟，系列乙醇復(fù)水后用番紅-固綠染色，系列乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封藏，用LY-WN-HPCD型萬能視頻成像裝置照相。

2.2藥材粉末制片藥材粉碎后過4號(hào)篩,分別用蒸餾水與水合氯醛透化裝片進(jìn)行顯微觀察、照相。

2.3葉表面制片分別撕取葉上表皮和葉下表皮水合氯醛透化裝片，進(jìn)行顯微觀察并照相。

2.4理化實(shí)驗(yàn)取本品粉末0.4 g，加0.1 mol/L鹽酸溶液20 mL，超聲30 min，濾過,濾液分為3份，置于3支試管中，分別加入碘化鉍鉀、碘化鉀碘、碘化汞鉀試液，根據(jù)顏色反應(yīng)進(jìn)行生物堿沉淀的鑒別實(shí)驗(yàn)。

3結(jié)果

3.1植物的性狀特征常綠亞灌術(shù)，莖直立，高約30 cm，綠色，根莖橫臥或匍匐向上,黃白色，有纖細(xì)須根；葉薄革質(zhì)，互生或簇生于枝頂，葉片菱狀倒卵形，長2.5～5(～9)cm，寬1.5～3(～6)cm，先端尖，上部邊緣有粗齒，下部全緣，上面深綠色，有光澤，下面淺綠色，基部楔形，漸狹成長1～1.5 cm的葉柄；穗狀花序頂生，長1～3.5 cm,花單性同株,白色，雄花數(shù)超過15，幾占花序軸的全部，無花梗，苞片及萼片均闊卵形，雄蕊4枚，雌花1～2，生花序軸基部，苞片及萼片均卵形，覆瓦狀排列，子房3室，每室有胚珠2枚，花柱2；果實(shí)漿果狀核果，卵狀球形(圖1)。

3.2生藥的性狀特征皺縮，根莖黃色，有纖細(xì)須根；葉薄革質(zhì)，易碎，互生或簇生于枝頂，葉片菱狀倒卵形，長2.5～5(～9) cm，寬1.5～3(～6) cm，先端尖，上部邊緣有粗齒，下部全緣，上面深綠色，下面淺綠色，基部楔形，葉柄長1～1.5 cm。氣辛，略嗆鼻，味淡。

3.3顯微結(jié)構(gòu)

3.3.1根莖橫切面顯微特征圖2結(jié)果表明，根莖木栓層細(xì)胞4～6列，含草酸鈣方晶；皮層較寬，內(nèi)皮層明顯，1列，細(xì)胞排列整齊緊密，徑向壁凱氏帶明顯,皮層中部散布單個(gè)木質(zhì)化的厚壁細(xì)胞(經(jīng)間苯三酚濃鹽酸染成紅色，蘇丹Ⅲ不顯色)，中柱鞘纖維可見；韌皮部稍窄，韌皮射線1～2列，無韌皮纖維；形成層明顯，3～4列細(xì)胞；木質(zhì)部較寬，導(dǎo)管多角形，多單個(gè)或2～3個(gè)相聚，成放射狀排列，木纖維多數(shù)，木射線多單列；髓明顯。

圖1　轉(zhuǎn)筋草原植物

注：1草酸鈣方晶　2木栓層　3皮層　4木質(zhì)化厚壁細(xì)胞　5內(nèi)皮層　6中柱鞘纖維　7韌皮部　8形成層　9木質(zhì)部　10髓 圖2　轉(zhuǎn)筋草根莖橫切面顯微特征

3.3.2莖橫切面顯微特征由圖3可以看出，莖木栓層細(xì)胞4～6列，含草酸鈣方晶；皮層寬廣；韌皮部較窄，射線多單列；形成層明顯，3～4列；木質(zhì)部導(dǎo)管呈放射狀排列，纖維多數(shù)，射線單列，髓明顯，大。

3.3.3葉主脈橫切面顯微特征葉上下表皮均1列細(xì)胞，外被較厚的角質(zhì)層，部分表皮細(xì)胞含草酸鈣方晶；葉肉組織為異(兩)面型，上表皮下有柵欄組織1～2列，偶3列,但不通過主脈，細(xì)胞垂直壁較平直；海綿組織細(xì)胞間隙明顯，大小不一；主脈維管束外韌型，半圓狀，木質(zhì)部導(dǎo)管2～6個(gè)徑向排列成行，韌皮部細(xì)胞多角形(圖4)。

3.3.4葉表面觀顯微特征圖5示葉表面觀，上表皮細(xì)胞類圓形，有細(xì)胞間隙，無氣孔；下表皮細(xì)胞徑向壁波狀彎曲，氣孔多數(shù)。

注：1上表皮　2柵欄組織　3草酸鈣方晶　4海綿組織　5木質(zhì)部　6韌皮部　7下表皮　8氣孔 圖4　轉(zhuǎn)筋草葉主脈橫切面顯微特征

注：1上表皮　2下表皮 圖5　轉(zhuǎn)筋草葉表面觀顯微特征

3.3.5粉末顯微特征如圖6所示，薄壁細(xì)胞類圓形，有間隙；導(dǎo)管多環(huán)紋、螺紋或梯紋，直徑10～40 μm；葉下表皮細(xì)胞多角形，排列緊密；纖維多成束，兩端平截；方晶多見；非腺毛單細(xì)胞；木栓細(xì)胞長方形，壁稍厚，排列緊密；氣孔不定式，副衛(wèi)細(xì)胞4～7個(gè)，以5～6個(gè)居多。此外還含有淀粉粒，多單粒，類圓形，復(fù)粒2～6分粒組成。

注：1薄壁細(xì)胞　2導(dǎo)管　3葉下表皮細(xì)胞　4纖維　5草酸鈣方晶　6非腺毛　7木栓細(xì)胞　8氣孔 圖6　轉(zhuǎn)筋草粉末顯微特征

3.4理化鑒別用3種生物堿沉淀試劑進(jìn)行理化鑒別,分別產(chǎn)生有色沉淀。加碘化鉍鉀試液的試管，生成橙黃色沉淀；加碘化鉀碘試液，生成褐色沉淀；加碘化汞鉀試液，生成白色沉淀；說明了生物堿成分的存在。

4討論

腫瘤、癌癥、風(fēng)濕類疾病是危害人類身體健康的世界性重大醫(yī)學(xué)疑難疾病。秦嶺特色資源轉(zhuǎn)筋草在臨床應(yīng)用中廣泛用于這些疾病的治療[1]，尤其在陜西省太白縣、眉縣、周至縣、漢中等地，民間用于風(fēng)濕類疾病的治療效果顯著。國內(nèi)外學(xué)者就其中藥化學(xué)和藥理學(xué)研究[4-16]說明轉(zhuǎn)筋草資源有廣闊的開發(fā)和利用前景。本文首次開展了轉(zhuǎn)筋草生藥學(xué)基礎(chǔ)研究。通過形態(tài)學(xué)和組織學(xué)系統(tǒng)性比較分析，揭示藥材不同器官、組織和粉末的導(dǎo)管、纖維、方晶、氣孔(軸式)等特征，且進(jìn)行生物堿沉淀理化反應(yīng)，這些可作為生藥鑒別的重要依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國科學(xué)院西北植物研究所.秦嶺植物志[M].北京:科學(xué)出版社,1985:2086.

[2]KIKUCHI T,NAKANISHI T,INAGAKI M,et al.Pachysandra alkaloids XIII,structure and stereochemistry of spiropachysine,a novel spirolactam alkaloid[J].Chemical & Pharmaceutical Bulletin,1975,23(2):416-417.

[3]肖會(huì)君,李晨陽,唐生安,等.轉(zhuǎn)筋草中化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志,2013,38(3):350-353.

[4]FUNAYAMA S,NOSHITA T,SHINODA K,et al.Cytotoxic alkaloids of Pachysandra terminalis[J].Biological & Pharmaceutical Bulletin,2000,23(2):262-264.

[5]邱明華,聶瑞麟,李忠榮.Pachysandra型生物堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)及活性篩選[J].云南植物研究,1994,6(3):296-300.

[6]李晨陽,翟慧媛,唐生安,等.轉(zhuǎn)筋草化學(xué)成分及其活性研究[J].中藥材,2010,33(5):729-732.

[7]翟慧媛,李晨陽,唐生安,等.轉(zhuǎn)筋草中的酚類成分及其抗氧化活性[J].中國中藥雜志,2010,35(14):1820-1823.

[8]ZHAI Huiyuan,ZHAO Chuan,ZHANG Ning,et al.Alkaloids from Pachysandra terminalis Inhibit Breast Cancer Invasion and Have Potential for Development As Antimetastasis Therapeutic Agen-ts[J].Journal of Natural Products,2012,75(7):1305-1311.

[9]翟慧媛.轉(zhuǎn)筋草的脂溶性成分及其生物活性研究[D].天津:天津醫(yī)科大學(xué),2010.

[10]李晨陽.轉(zhuǎn)筋草中極性化學(xué)成分及生物活性研究[D].天津:天津醫(yī)科大學(xué),2010.

[11]馬勝男.轉(zhuǎn)筋草紫羅蘭酮型生物堿的抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性及作用機(jī)制[D].天津:天津醫(yī)科大學(xué),2013.

[12]趙川.轉(zhuǎn)筋草生物堿成分及抗腫瘤轉(zhuǎn)移活性研究[D].天津:天津醫(yī)科大學(xué),2013.

[13]翟慧媛,李晨陽,靳美娜,等.轉(zhuǎn)筋草的抗腫瘤遷移化學(xué)成分研究[J].中南藥學(xué),2014,12(11):1080-1083.

[14]JACQUES,ISABELLE S,RAJESH D,et al.Cancer incidence and mortality worldwide:sources,methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J].International Journal of Cancer,2015,136(5):359-386.

[15]CATHARINA H,AMY-JO C,WERB Z.Balancing the innate immune system in tumor development[J].Trends in Cell Biology,2015,25(4):214-220.

[16]BAL A,ATAMAN S.PMS1 characteristics of patients with rheumatoid arthritis in Turkey:results from the Turkish league against rheumatism RA registry[J].Value in Health,2012,15(7):A439.

[17]張琳,張毅達(dá).秦嶺玄參的生藥學(xué)研究[J].陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2013,36(4):118-119,130.