小兒清肺分散片中黃芩苷溶出度測定方法

小兒清肺分散片中黃芩苷溶出度測定方法

孫妍，姚琳，李金山，王偉明

(黑龍江省中醫(yī)藥科學院中藥所，哈爾濱 150036)

摘要：目的建立小兒清肺分散片中黃芩苷的溶出度測定方法。方法采用HPLC法，建立黃芩苷的含量測定方法；采用單因素試驗法，以同一時間點的溶出度為指標，分別考察了溶出介質、溶出方式及轉速對黃芩苷溶出的影響。結果黃芩苷濃度在0.025～0.125 mg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r=0.999 9)，平均回收率為100.41%(n=9)，RSD=2.98%；小兒清肺分散片的溶出條件為采用槳法，以pH值為6.8磷酸鹽緩沖液為溶出介質，轉速為75 r/min，取樣時間為40 min。結論本方法操作簡便，結果準確，重復性好，可作為小兒清肺分散片的溶出度測定方法。

關鍵詞：小兒清肺分散片；黃芩苷；溶出度；色譜法，高壓液相

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.03.025

中圖分類號：R284文獻標志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)03-0297-04

基金項目:黑龍江省中醫(yī)藥科研項目(ZHY12-W027)。

作者簡介:孫妍(1981-)，女，碩士研究生，主管藥師，主要從事中藥新藥及質量標準研究。

收稿日期:(責任編輯：張瑞彬2014-08-04)

Method for determination of Baicalin solubility of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet

SUN Yan,YAO Lin,LI Jinshan,WANG Weiming

(Heilongjiang Academy of Traditional Chinese Medicine,Harbin 150036,China)

Abstract:ObjectiveTo establish the method for determination of Baicalin solubility of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet.MethodsHPLC methed was used to determine the content of baicalin;By single factor experiment,at the same time with the solubility as index,investigating the stripping medium,stripping method,stripping speed respectively that effect of baicalin stripping.ResultsBaicalin was linear in the range of 0.025～0.125 mg/mL(r=0.999 9),and the average recovery was 100.41% (n=9) with RSD=2.98%;The digestion conditions of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet is using the paddle,with pH 6.8 artificial intestinal solution,stripping speed 75 r/min,the sampling time is 40 min.ConclusionThis method is accurate,reliable,specific and reproducible,and can be used for the stripping method of Xiaoer Qingfei Dispersible Tablets.

Keywords:Xiaoer Qingfei Dispersible Tablet;Baicalin;solubility;HPLC

小兒清肺分散片[1]是由小兒清肺片改劑型而成，小兒清肺片為我院研制的純中藥制劑，用于小兒風熱閉肺所致的喘咳及支原體引起的上呼吸道感染等病癥，經多年臨床驗證，對小兒支原體肺炎療效確切、抗復發(fā)、抗耐藥作用強、毒副作用小?；谛呵宸纹狗窝字гw肺炎的確切療效及支原體肺炎發(fā)病迅速的特點，本研究旨在開發(fā)具有抗肺炎支原體肺炎作用的速釋制劑。分散片適合于老、幼和吞咽困難的患者[2-3]。分散片能否迅速顯效的決定因素是其有效成分的溶出和吸收的速度[4]，為更好地控制藥品質量，本試驗參照《中國藥典》2010年版2部附錄XC溶出度測定法,采用高效液相色譜法，建立小兒清肺分散片中黃芩苷的溶出度測定方法。

1實驗材料

YP202N型電子天平(上海精密科學儀器有限公司)，日本SCL-10A島津高效液相色譜儀，島津SPD-10A紫外檢測器，BP211D型十萬分之一分析天平(賽多利斯有限公司),KQ-300DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，RC806溶出試驗儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司)。

黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：715-200111)，小兒清肺分散片(自制，批號：130601、130602、130603)，小兒清肺片(黑龍江省中醫(yī)藥科學院制劑室，批號：130501、130502、130503)，甲醇為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2含量測定方法的建立[5-10]

2.1色譜條件色譜柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)；檢測波長：280 nm；流速:1.0 mL/min；進樣量：10 μL。理論板數按黃芩苷峰計算應不低于2 000。

2.2對照品溶液的制備精密稱取黃芩苷對照品12.5 mg，置100 mL量瓶中,加50%甲醇適量，超聲使其溶解，放置至室溫，加入50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.125 mg/mL的對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備取小兒清肺分散片約0.2 g，研細，精密稱定，置100 mL量瓶中，加50%甲醇適量，超聲處理(功率300 W，頻率40 kHz)30 min,放置至室溫，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性對照溶液的制備取按處方比例配制的缺黃芩藥材的陰性樣品，同2.3項下供試品溶液制備方法制成黃芩陰性對照溶液。

2.5干擾試驗精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、供試品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，按2.1項下色譜條件進行測定，結果陰性對照液在與黃芩苷對照品色譜的相應位置上無干擾峰，可見方中其他成分及輔料對測定無干擾。

2.6線性關系考察分別精密吸取2.2項下對照品液5，10，15，20，25 mL于25 mL容量瓶中，用50%甲醇液稀釋至刻度，得到濃度分別為0.025，0.05，0.075，0.1，0.125 mg/mL的對照品溶液，按2.1項下色譜條件，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，以黃芩苷峰面積積分值(Y)為縱坐標，黃芩苷進樣濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程:Y=4 255 613X-224 135.8(r=0.999 9)。表明黃芩苷在0.025～0.125 mg/mL之間呈良好的線性關系。

2.7精密度試驗精密吸取濃度為0.05 mg/mL黃芩苷對照品溶液，按2.1項下色譜條件連續(xù)進樣6次，每次10 μL,記錄黃芩苷峰面積積分值，RSD為0.51%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗取同一批小兒清肺分散片供試品(130601)，按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件，分別于0，2，4，6，8，10 h進樣，每次10 μL，記錄黃芩苷的峰面積積分值，RSD為0.52%(n=6)，表明供試品溶液在10 h內穩(wěn)定性良好。

2.9重復性試驗取同一批小兒清肺分散片供試品(130601),分別精密稱取6分，按2.3項下的方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定黃芩苷的含量，結果均值為33.63 mg/g，RSD為0.26%(n=6)。

2.10加樣回收試驗取已知含量的小兒清肺分散片(批號130601)9分，研細，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品，按2.3項下的方法配制供試品溶液，并按2.1項下色譜條件測定黃芩苷含量，計算回收率和相對標準偏差。結果見表1。

表1　黃芩苷的加樣回收率試驗結果( n=9)

3溶出度測定方法的建立[11-15]

3.1溶出介質的選擇分別以pH值為1.0的人工胃液、2.8的鹽酸溶液、4.5的乙酸銨冰乙酸溶液及pH值為6.8磷酸鹽緩沖液900 mL作溶出介質,轉速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃，在30 min時精密吸取5 mL溶出介質，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算黃芩苷溶出度。結果表明黃芩苷在人工腸液中有較好的溶出效果，故選擇pH值為6.8的人工腸液作為溶出介質。

3.2溶出方式的選擇分別以籃法和槳法進行實驗，以pH值為6.8磷酸鹽緩沖液900 mL為溶出介質，轉速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃，在30 min時精密吸取5 mL溶出介質,0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，計算黃芩苷溶出度。結果槳法的黃芩苷峰面積優(yōu)于籃法，故采用槳法進行溶出度試驗。

3.3轉速的選擇以pH值為6.8磷酸鹽緩沖液900 mL作為溶出介質，溫度為(37±0.5)℃，采用槳法進行試驗，轉速分別為50，75，100 r/min，在30 min時精密吸取5 mL溶出介質，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定,計算黃芩苷溶出度。結果表明，轉速為100 r/min時，溶出效果最好，但轉速為75 r/min和100 r/min時溶出度差別不大，所以選擇轉速為75 r/min，進行溶出度實驗。

3.4小兒清肺分散片溶出度驗證試驗依照《中國藥典》2010版2部附錄XC溶出度第2法進行測定，分別取小兒清肺分散片6片，加入900 mL的經脫氣處理的pH值為6.8磷酸鹽緩沖液,轉速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃，分別于5，10，15，20，30，40 min精密吸取5 mL溶出介質，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液,同時補加同溫介質5 mL；另取小兒清肺分散片20片,研細，精密稱取適量(相當于1片的平均重量)，加入溶出介質超聲處理30 min，濾過，取續(xù)濾液作為對照液。取上述溶液，按2.1項下色譜條件，分別測定黃芩苷的峰面積，用兩者之比計算每片的溶出度，繪制溶出曲線。見圖1。

3.5小兒清肺片的溶出度試驗依照《中國藥典》2010版2部附錄XC溶出度第2法測定，取小兒清肺片6片,加入900 mL的經脫氣處理的人工腸液，轉速為75 r/min，溫度為(37±0.5)℃，分別于5，10，15，20，30，40 min精密吸取5 mL介質，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，同時補加同溫介質5 mL；另取小兒清肺片20片，研細，精密稱取適量(相當于1片的平均重量)，加入溶出介質超聲處理30 min，濾過，取續(xù)濾液作為對照液。取上述溶液，按2.1項下色譜條件，分別測定黃芩苷的峰面積，用兩者之比計算每片的溶出度，繪制溶出曲線。見圖1。

圖1　小兒清肺片、小兒清肺分散片的累計溶出度曲線

3.6溶出度指標的制定分別取小兒清肺分散片3批(批號:130601、130602、130603)，每批6片，按3.4項下溶出度測定方法試驗。結果顯示，3批小兒清肺分散片在溶出介質中溶出行為相似，且小兒清肺分散片在40 min時累計溶出率超過90%。為控制本品質量，適當延遲溶出度取樣時間及限度，初步確定為40 min時溶出不低于85%。

4討論

溶出度的檢查方法主要包括轉籃法、槳法和小杯法等。片劑多采用槳法，因為中藥分散片分散后成混懸細顆粒壯溶液，槳法可以避免混懸液堵塞轉籃網的篩孔，且試驗也證明槳法比轉籃法更適用于中藥固體制劑。 小兒清肺分散片是由小兒清肺片改劑型而成，小兒清肺分散片在15 min累計溶出度達到70%以上，而小兒清肺片在15 min時累計溶出度剛剛達到40%。制成分散片，崩解迅速、有利于藥物的溶出，有利于提高藥物的血藥濃度及生物利用度，方便臨床用藥，拓展了小兒清肺片的劑型應用范圍。

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