解郁開心丹對抑郁模型大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

解郁開心丹對抑郁模型大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

周慶瑩，劉宏巖*

(長春中醫(yī)藥大學，長春 130117)

摘要：目的觀察解郁開心丹對抑郁模型大鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素(NA)、多巴胺(DA)和5-羥色胺(5-HT)含量的影響。方法80只SD大鼠自由飲食，自然光線下適應性喂養(yǎng)1周后，按照 Open-Field評分方法，將得分≤20分、≥130分的大鼠剔除，剩余的大鼠隨機分為6組:正常對照組、模型組、陽性藥物對照組、中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組。后5組通過禁水24 h、禁食24 h、4 ℃冰水游泳5 min、2 h行為限制、夾尾1 min、潮濕環(huán)境、晝夜顛倒，7種應激刺激每天隨機安排一種，各種刺激不連續(xù)出現(xiàn)，連續(xù)刺激3周造模。造模后灌胃給藥，陽性藥物對照組給予鹽酸氟西汀混懸液10 mg/d；解郁開心丹高、中、低劑量組分別給予解郁開心丹2.0，1.0，0.5 g/d(給藥體積為每100 g體質(zhì)量給予1.0 mL)。模型組給予等量生理鹽水，持續(xù)28 d。用酶聯(lián)免疫法檢測大鼠腦內(nèi)NA，DA，5-HT的含量。結果與模型組比較，中藥高劑量組、中藥中劑量組大鼠腦內(nèi)NA，DA，5-HT含量明顯增高且P<0.05；中藥高劑量組、中藥中劑量組與陽性藥物對照組比較無明顯差異且P>0.05。結論解郁開心丹具有與西藥抗抑郁藥物氟西汀同樣的抗抑郁作用，且抗抑郁作用機制可能與調(diào)節(jié)大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的平衡有關。

關鍵詞：解郁開心丹;抑郁模型;單胺類神經(jīng)遞質(zhì);去甲腎上腺素;多巴胺;5-羥色胺

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.03.021

中圖分類號：R741文獻標志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)03-0282-04

基金項目:吉林省自然科學基金(201015118)。

作者簡介:周慶瑩(1985-)，女，碩士，助教，主要從事中醫(yī)臨床基礎理論研究。

收稿日期:(責任編輯：張瑞彬2015-02-10)

*通信作者:劉宏巖，電話-18686698557，電子信箱-hong.yancc@163.com

JieYuKaiXinDanwithin the depression model rats on single amine neurotransmitter

ZHOU Qingying,LIU Hongyan*

(Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract:ObjectiveObserve Jie Yu Kai Xin Dan within the depression model rats on norepinephrine (NA),dopamine (DA) and serotonin (5-HT) content.Methods80 SD rats in free diet,natural light,and adaptive feeding for one week.Make the behavioral score by Open-Field scoring method.Exclude the rats who’s score is ≥120 or ≤30,the last rats are randomly divided into six groups.normal control group,model group,Fluoxetine group,Chinese medicine high dose group,Chinese medicine middle dose group,and Chinese medicine low dose group,the last 5 groups was treated by water deprivation for 24 h,fasted for 24 h,4 ℃ ice water swimming 5 min,2 h behavior restrictions,tail clamp 1 min,humid environment,day and night reversed,and the rat was in different stress factors every day which is randomly decided.After 3 weeks’ continuous stimulation,the depression model was made,normal control group were not treated.Intragastric administration was given after the completion of the modeling,positive control group was given fluoxetine hydrochloride suspension 10 mg/d,positive control drug’s high,middle and low dose group were given Jie Yu Kai Xin Dan 2.0 g/d,1.0 g/d,0.5 g/d (Given 1.0 mL dose volume per 100 g body weight).Model control group were given normal saline.for 28 day.Enzyme league immune method to detect the rats NA,DA and 5-HT content.ResultsConclusion Compared with model group,Chinese medicine dose group of rats in high dose group,the traditional Chinese medicine (TCM) in NA,DA and 5-HT content increased obviously and P<0.05;Traditional Chinese medicine (TCM) in high dose group,Chinese medicine dose group compared with positive drug control group no significant difference(P>0.05).ConclusionJie Yu Kai Xin Dan with western medicine antidepressants fluoxetine same antidepressant effect,and the antidepressant mechanism may be related to regulating single amine neurotransmitter balance in rats.

Keywords:Jie Yu Kai Xin Dan;Depression model;Single amine neurotransmitter;NA;DA;5-HT

抑郁癥是現(xiàn)代醫(yī)學病名，表現(xiàn)為情緒低落、興趣缺乏、快感缺失、思維遲緩、運動性遲滯或激越、焦慮、自責自罪、自殺觀念和行為、精神病性癥狀、軀體癥狀(主要有睡眠障礙、食欲減退、性欲減退、軀體疼痛不適、乏力、自主神經(jīng)功能失調(diào)癥狀等)[1]。從20世紀中后期到現(xiàn)在，對抑郁癥的研究越來越多，腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)功能異常是目前較為公認的假說之一[2]。西藥治療抑郁癥療效確切，但存在依從性差、起效時間長、停藥后病情反復、治療費用高、毒副作用廣泛等問題[3]。近年來中醫(yī)治療抑郁癥顯示了其自身的優(yōu)勢，經(jīng)過多年臨床實踐總結出部分抑癥患者因多臟腑虛損而致病。結合《內(nèi)經(jīng)》“五神臟”理論提出“五臟精虧，精不養(yǎng)神”是抑郁癥的病機之一。在此病機的指導下創(chuàng)立了方劑解郁開心丹，從而總結出填精益氣養(yǎng)血的治療方法。以下實驗是對解郁開心丹抗抑郁療效和抗抑郁機制的研究。

1實驗材料

1.1實驗動物由長春中醫(yī)藥大學基礎實驗動物中心提供的清潔級健康成年雄性SD大鼠80只，體質(zhì)量(200±20)g，合格證號：SCXK(吉-2011-0004)。

1.2實驗藥品及試劑解郁開心丹由柴胡、桂枝、茯苓、人參、龍骨、牡蠣、黃芩、大黃、夜交藤、制何首烏等組成(藥材購于長春市中東市場醫(yī)藥超市)。按照灌胃劑量制成水煎劑濃縮至相應濃度后，置4 ℃冰箱儲存?zhèn)溆谩｛}酸氟西汀每片20 mg,蘇州中化藥品工業(yè)有限公司，批號H20064844。按照灌胃劑量制成相應濃度的混懸液后,置4 ℃冰箱儲存?zhèn)溆?。大鼠去甲腎上腺素(NA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒、大鼠5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒、大鼠多巴胺(DA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒：均為美國R&D公司產(chǎn)品。

1.3實驗儀器電子顯微鏡(萊卡)，寶特ELX-808酶標儀(ELX-808),TKY-LA冷凍切片機(湖北泰康醫(yī)療設備有限公司)，GHP-9270隔水式培養(yǎng)箱(上海莜翼儀器設備有限公司),BS-1100型分析天平(天津斯維科科技有限公司生產(chǎn))。

2實驗方法

2.1動物分組80只SD大鼠自由飲食，自然光線，適應性喂養(yǎng)1周后。按照Open-Field評分方法：將得分≤20分和得分≥130分的大鼠剔除后，剩余的大鼠隨機分為6組。分別為：正常對照組、模型組、陽性藥物對照組、中藥高劑量組、中藥中劑量組和中藥低劑量組，每組10只。

2.2模型制備具體造模方法采用慢性不可預見性溫和應激結合孤養(yǎng)法制備大鼠抑郁模型。從第8天起，正常組大鼠同籠飼養(yǎng),自由飲食飲水，不給予任何刺激。其余各組大鼠單籠飼養(yǎng)，并開始接受21 d各種不同的應激刺激。包括：1)禁水24 h；2)禁食24 h；3)4 ℃冰水游泳5 min；4)2 h行為限制；5)夾尾1 min；6)潮濕環(huán)境；7)晝夜顛倒。7種應激刺激每天隨機安排1種，每種應激刺激不連續(xù)出現(xiàn)。

2.3給藥情況除正常組外，其余各組大鼠在接受21 d應激刺激后，開始灌胃給藥。給藥量如下:陽性藥物對照組給予鹽酸氟西汀混懸液10 mg/d；解郁開心丹高、中、低劑量組分別給予解郁開心丹2.0，1.0，0.5 g/d(給藥體積為每100 g體質(zhì)量給予1.0 mL)，模型組給予等量生理鹽水。

2.4單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NA、DA、5-HT的測定大鼠麻醉后，剝離腦殼,分離除腦干部分外的全腦組織，放置于-70 ℃冰箱內(nèi)待檢測使用。具體檢測方法如下，加樣：分別設空白孔、標準孔、然后再加待測樣品10 μL(樣品最終稀釋度為5倍)。將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。溫育：用封板膜封板后置37 ℃溫育30 min。配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每空加洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復5次，拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50 μL，空白孔除外。再次溫育：用封板膜封板后置37 ℃溫育30 min。再次洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每空加洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復5次，拍干。顯色：每孔加入顯色劑A50 μL，再加入顯色劑B50 μL，輕輕振蕩混勻，37 ℃避光顯色15 min。終止：每孔加終止液50 μL，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定：以空白孔調(diào)零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定在加終止液后15 min以內(nèi)進行。

3實驗結果

與模型組比較，中藥高劑量組、中藥中劑量組大鼠腦內(nèi)5-HT，NA，DA含量明顯增高,且差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中藥高劑量組、中藥中劑量組與陽性藥物對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1～3。

表1　治療后各組大鼠腦組織中5-HT的表達水平 ± s, n=10)　ng/L

注：與空白組比較，△ P<0.05；與模型組比較，▲ P<0.05

注：與空白組比較，△ P<0.05；與模型組比較，▲ P<0.05

注：與空白組比較，△P<0.05；與模型組比較，▲P<0.05

4討論

4.1解郁開心丹的作用機制解郁開心丹以五臟精虧，精不養(yǎng)神為病機指導，從整體出發(fā)，利用填精益氣養(yǎng)血的方法，由柴胡、桂枝、茯苓、人參、龍骨、牡蠣、黃芩、大黃、夜交藤、制何首烏等藥物配伍組成。柴胡，味辛而苦，能行能泄，性善條達肝氣，疏肝解郁，與茯苓配伍可疏肝養(yǎng)血，利濕健脾，與人參同用又可補氣升陽；桂枝性溫，可溫通經(jīng)脈，助陽化氣，溫化心脾之陽氣；龍骨，入肝經(jīng)，質(zhì)重沉降，有較強的平肝潛陽作用，與牡蠣同用可滋補肝陰，平肝潛陽；大黃，苦降，能使上炎之火下泄，與黃芩同用可治火邪上炎，防治火邪攻心、傷胃；夜交藤，味甘、性平，歸心、肝二經(jīng)，能補養(yǎng)陰血，養(yǎng)心安神；制首烏功善補肝腎、益精血。通過以上中藥的配伍，可達到滋養(yǎng)五臟陰陽之虛、顧護五臟之神，防止邪氣傷及五臟，填精益氣養(yǎng)血、舒肝解郁、鎮(zhèn)靜安神的功效。解郁開心丹，寓舒肝解郁于填精益氣養(yǎng)血之中，可避免長期單純的疏肝解郁至人體氣血耗傷；不局限于對局部臟腑的調(diào)補而是補養(yǎng)五臟陰陽之虛，整體調(diào)和人體氣機與陰陽，使人體自身達到抗御疾病的最佳狀態(tài)，從而起到抗抑郁癥的作用。

“填精益氣養(yǎng)血法”是在中醫(yī)基礎理論的指導下和臨床實踐的經(jīng)驗中總結出來的，通過十幾味中藥配伍，滋養(yǎng)五臟陰陽之虛、顧護五臟之神，防止邪氣傷及五臟，具有填精益氣養(yǎng)血、舒肝解郁、鎮(zhèn)靜安神的功效，從而補充人體之氣血，整體調(diào)和人體之氣機、陰陽，使人體自身達到一個抗御疾病的最佳狀態(tài)而達到抗抑郁的作用。

4.2解郁開心丹抗抑郁作用的優(yōu)勢實驗結果證實解郁開心丹與氟西汀具有相同的抗抑郁療效。但是解郁開心丹與氟西汀相比目前沒有發(fā)現(xiàn)臨床治療過程中產(chǎn)生的性功能障礙、出血、脫發(fā)、認知功能障礙、額葉損害綜合征、單純或帶狀皰疹病毒感染復發(fā)、肺損傷、藥物相互作用、誘發(fā)狂躁癥、誘發(fā)自殺意圖等不良反應[4-7]。所以解郁開心丹在治療抑郁癥的過程中不僅具有確實可信的抗抑郁療效，而且與現(xiàn)代臨床中常用的抗抑郁西藥相比具有其獨特的優(yōu)勢和良好的開發(fā)前景。

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