SPF級(jí)BALB/c裸小鼠的生產(chǎn)管理與質(zhì)量控制

管理科學(xué)

SPF級(jí)BALB/c裸小鼠的生產(chǎn)管理與質(zhì)量控制

劉科，夏冠玲，田青鷺，楊林，饒子亮，唐小江

(廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 佛山528248)

【摘要】SPF級(jí)裸小鼠的飼養(yǎng)及質(zhì)量控制涉及多方面的環(huán)節(jié)和工作。生產(chǎn)管理及質(zhì)量控制效果，直接影響動(dòng)物的數(shù)量和質(zhì)量。我中心2007年開始，逐步建立了規(guī)范的SPF級(jí)BALB/c裸小鼠生產(chǎn)繁育體系。裸小鼠生產(chǎn)繁育至今，數(shù)量和質(zhì)量得到較好的保證。本文通過介紹我中心SPF級(jí)BALB/c裸小鼠的設(shè)施、種群、飼養(yǎng)管理及質(zhì)量控制的具體做法和經(jīng)驗(yàn)體會(huì)，為SPF級(jí)BALB/c裸小鼠相關(guān)繁育和研究提供參考和借鑒。

【關(guān)鍵詞】BALB/c裸小鼠；SPF級(jí)；生產(chǎn)管理；質(zhì)量控制

[作者簡介]廣東省醫(yī)學(xué)科研基金(A2014143)。

[通訊作者]唐小江(1967-)，男，主任醫(yī)師，博導(dǎo)， 主要從事實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和毒理學(xué)研究。

【中圖分類號(hào)】R332【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A

doi:10.3969.j.issn.1671.7856. 2015.001.016

Breeding management and quality control of SPF BALB/c nude mice

LIU Ke，XIA Guang-lin，TIAN Qing-lu，YANG Lin，RAO Zi-liang，TANG Xiao-jiang

(Guangdong Medical Laboratory Animal Center, Guangdong Foshan 528248, China)

Abstract【】 Breeding and quality control of SPF nude mice involves many links and works. The quality and quantity of animals are directly affected by breeding management and quality control. A standardized breeding system of SPF BALB/c nude mice were gradually established at the center after 2007. This paper introduces specific practices and experience in facilities, stock, breeding management, and quality control of SPF BALB/c nude mice, in order to provide the reference for related breeding and study in SPF BALB/c nude mice.

【Key words】BALB/c nude mice；SPF；Breeding management；Quality control

裸小鼠是先天性免疫缺陷動(dòng)物，已成為醫(yī)學(xué)、生物學(xué)研究領(lǐng)域不可缺少的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，特別是在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、毒理學(xué)、遺傳學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用[1-2]。BALB/c裸小鼠又是裸小鼠品系中發(fā)現(xiàn)較早，使用量較多的品系，也是我國使用最廣泛的裸小鼠品系。我國在1979年開始引進(jìn)，但因BALB/c裸小鼠先天性免疫缺陷，對(duì)飼養(yǎng)繁育條件極為嚴(yán)格，在微生物控制方面，難以長久維持SPF級(jí)別，至今能長期規(guī)模化提供SPF裸小鼠的單位仍較少。作者于2007年建立SPF級(jí)BALB/c裸小鼠生產(chǎn)種群，規(guī)范生產(chǎn)繁育、管理、質(zhì)量控制體系，注重供應(yīng)動(dòng)物質(zhì)量。多年來，已在裸小鼠繁育和質(zhì)量控制方面積累了實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。本文簡介BALB/c裸小鼠生產(chǎn)管理與質(zhì)量控制實(shí)際做法，供科研及生產(chǎn)人員參考和借鑒。

1SPF級(jí)裸小鼠生產(chǎn)設(shè)施

SPF級(jí)裸小鼠飼養(yǎng)繁育對(duì)環(huán)境設(shè)施要求較高，生產(chǎn)設(shè)施必需符合國家屏障設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)【GB14925-2010】[3]，且需實(shí)施嚴(yán)格的環(huán)境控制措施。為穩(wěn)定的供應(yīng)高質(zhì)量的SPF級(jí)裸小鼠，建設(shè)了屏障配套隔離包的裸小鼠保種設(shè)施，以及2個(gè)獨(dú)立SPF裸小鼠擴(kuò)大生產(chǎn)群飼養(yǎng)室。裸小鼠保種設(shè)施形成隔離包加屏障的雙重保障，隔離包和屏障采用單獨(dú)的送排風(fēng)系統(tǒng)，以實(shí)現(xiàn)動(dòng)物環(huán)境和人員操作的獨(dú)立，良好控制，可長期維持高級(jí)別的裸小鼠種群，并為擴(kuò)大生產(chǎn)區(qū)源源不斷的提供種源。擴(kuò)大生產(chǎn)群分2個(gè)獨(dú)立的飼養(yǎng)室，可實(shí)現(xiàn)規(guī)?；峁㏒PF裸小鼠品系，并可隨時(shí)更換質(zhì)量下降飼養(yǎng)室種群。SPF級(jí)裸小鼠保種配套設(shè)施(彩插5圖1)。

2SPF裸小鼠種群

SPF級(jí)BALB/c裸小鼠種源來自國家種子中心或國家認(rèn)可的種源單位，質(zhì)量合格[4]。目前，BALB/c裸小鼠種群為3000對(duì)，月可提供BALB/c裸小鼠約4500只，裸小鼠微生物質(zhì)量符合SPF級(jí)別【SCXK(粵)2013-0002】。

3SPF裸小鼠飼養(yǎng)管理及質(zhì)量控制

3.1保種、生產(chǎn)繁殖方式

裸小鼠是一種先天性免疫缺陷型動(dòng)物，雌性純合子(nu/nu)裸小鼠母鼠母性差，乳腺發(fā)育不良，本身不能育成仔鼠。本中心采用nu/+雌鼠與nu/nu雄鼠交配方法。保種核心群雌雄按1∶1比例交配，采用單線法繁育方式，生產(chǎn)擴(kuò)大群采用雌雄2∶1比例長期同居交配，交配方式為隨機(jī)交配，每對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)四胎后淘汰。用此繁殖方式，生產(chǎn)仔鼠有純合子(nu/nu) 和雜合子(nu/+)。(nu/nu) 小鼠21 d斷奶，雜合子(nu/+)小鼠若不留種，7 d內(nèi)(最好3 d內(nèi))根據(jù)胡須多少和表皮有無絨毛全部挑出，需留種的每窩雜合子不超過2只，若有代乳鼠母鼠，雜合子應(yīng)單獨(dú)代乳，從而確保純合子小鼠正常哺乳，良好的生長發(fā)育。生產(chǎn)繁育設(shè)立繁殖登記卡和生產(chǎn)記錄，對(duì)每只動(dòng)物進(jìn)行詳細(xì)登記。

3.2飼料、飲水

裸小鼠相對(duì)其他免疫功能正常小鼠而言，消化代謝功能較差，飼料吸收和利用率較低。所以，裸小鼠飼料蛋白質(zhì)和脂肪等營養(yǎng)成分相對(duì)較高。SPF級(jí)裸小鼠飼料是由飼料生產(chǎn)部生產(chǎn)的裸小鼠專用全價(jià)配合飼料【SCXK(粵)2013-0002】，飼料成分：粗蛋白23.5%，粗纖維3.8%，粗灰分7.3%，粗脂肪5.4%，鈣1.2%，磷0.85%，鈉0.25%。飼料采用輻照劑量為20～25 kGY的CO60滅菌。我們對(duì)裸小鼠用水滅菌比較謹(jǐn)慎，嚴(yán)格控制，動(dòng)物飲水由凈化水配置pH2.5～3.0的酸化水，然后再經(jīng)真空高溫高壓滅菌，傳入屏障設(shè)施內(nèi)使用。動(dòng)物采用自由采食和飲水，在喂全價(jià)顆粒料的同時(shí)，每周加喂滅菌蛋黃、瓜子和黃豆各1次，確保裸小鼠繁育和生長良好。

3.3環(huán)境控制

3.3.1溫濕度

裸小鼠體表無毛或稀疏、較短的被毛，所以對(duì)溫濕度較為敏感。裸小鼠飼養(yǎng)室內(nèi)溫濕度由水冷式中央空調(diào)控制，以確保屏障及隔離包內(nèi)恒溫恒濕。送風(fēng)經(jīng)初效、中效、高效3級(jí)過濾，符合屏障環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)。溫度控制在22℃～24℃，濕度50%～60%。為確?？照{(diào)機(jī)組正常、穩(wěn)定運(yùn)行，對(duì)中央空調(diào)機(jī)組及空氣處理機(jī)加裝報(bào)警裝置，及溫濕度監(jiān)控裝置，設(shè)備維護(hù)人員對(duì)其24 h巡查。

3.3.2光照

不同光照時(shí)間影響B(tài)ALB/c裸小鼠的繁育性能[5]，裸小鼠光照時(shí)間為10 h/d，通過定時(shí)器自動(dòng)控制開啟、關(guān)閉。

3.3.3墊料

使用的墊料有楊木刨花、玉米芯和楊木片，裸小鼠繁殖鼠籠使用墊料為楊木刨花，維持或供應(yīng)裸小鼠籠盒使用玉米芯和楊木片墊料。為徹底殺滅墊料中微生物，墊料需滅菌爐132℃ 20 min高溫高壓滅菌2次，首次高溫高壓滅菌后，再裝入裸小鼠專用籠具，經(jīng)高溫高壓滅菌傳入屏障系統(tǒng)和隔離包內(nèi)。

3.3.4衛(wèi)生消毒

屏障設(shè)施消毒后，各項(xiàng)環(huán)境指標(biāo)均符合屏障環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)要求。裸小鼠飼養(yǎng)籠具、墊料每星期更換1～2次，每次更換籠具時(shí)，用消毒液對(duì)隔離包和飼養(yǎng)籠架做1次大清潔，隔離包及用品(鑷子、毛刷等)每天工作后，進(jìn)行清潔、消毒。屏障設(shè)施每天工作后，用消毒液進(jìn)行拖地和噴霧消毒。此外設(shè)施內(nèi)地面、墻壁、天花板、籠具、用品)1周全面消毒清潔1次。排風(fēng)口及過濾膜1周清洗1～2次，消毒液定期更換，屏障及隔離包等區(qū)域日常使用的消毒液1周輪換1次，以確保消毒液的效力。目前，我們常用消毒液有：酒精，百毒殺，強(qiáng)力消毒靈，過氧乙酸等。

3.4人員管理

人員管理是裸小鼠高效生產(chǎn)繁育、供應(yīng)，維持高級(jí)別和高質(zhì)量的關(guān)鍵。裸小鼠生產(chǎn)工作人員嚴(yán)格遵守各項(xiàng)管理制度，按照標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程開展工作，參加相關(guān)各類培訓(xùn)。

3.4.1生產(chǎn)人員嚴(yán)格遵守各項(xiàng)管理制度。生產(chǎn)人員家里不能養(yǎng)寵物，SPF生產(chǎn)人員工作期間不能接觸普通級(jí)及疾病動(dòng)物，患病、攜帶疾病及非工作人員均禁止進(jìn)入裸小鼠屏障設(shè)施。時(shí)刻保持無菌意識(shí)，人員進(jìn)出、物品進(jìn)出、人員操作對(duì)設(shè)施和動(dòng)物均不造成任何污染。

3.4.2生產(chǎn)人員嚴(yán)格執(zhí)行各項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，嚴(yán)格按屏障設(shè)施、保種、繁育、飼養(yǎng)管理規(guī)程要求開展工作。

3.4.3生產(chǎn)人員上崗前取得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物上崗證，并進(jìn)行內(nèi)部崗前培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后才能上崗，上崗后定期開展相關(guān)知識(shí)和技術(shù)培訓(xùn)，及時(shí)掌握新知識(shí)和新技術(shù)。

3.5環(huán)境、微生物監(jiān)測

裸小鼠自身免疫缺陷，對(duì)環(huán)境設(shè)施要求高，易受微生物感染，在飼養(yǎng)繁育過程要做好環(huán)境和微生物的監(jiān)測。

3.5.1設(shè)施環(huán)境監(jiān)測：除按照國家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境與設(shè)施》要求做好環(huán)境設(shè)施定期監(jiān)測外，還要做好日常監(jiān)測：包括溫度、濕度、壓差、送排風(fēng)過濾系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)環(huán)境指標(biāo)超出要求范圍，及時(shí)調(diào)節(jié)。

1.1 3.5.2微生物監(jiān)測：我中心3個(gè)月對(duì)裸小鼠進(jìn)行1次微生物質(zhì)量監(jiān)測，監(jiān)測微生物種類和方法參照國家標(biāo)準(zhǔn)GB 14922. 2-2011《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測》[6]和GB 14922. 1-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測》[7]。每月對(duì)裸小鼠飼料、飲水、墊料、籠具進(jìn)行1次微生物監(jiān)測，監(jiān)測方法參照GBB 14926. 41-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無菌動(dòng)物生活環(huán)境及糞便標(biāo)本的檢測方法》[8]。

4裸小鼠生產(chǎn)繁育及質(zhì)量控制情況

4.1繁殖情況

嚴(yán)格按照上述方法對(duì)SPF裸小鼠進(jìn)行繁育、飼養(yǎng)，選取2代裸小鼠保種群的繁育情況進(jìn)行分析，結(jié)果顯示裸小鼠生長、繁育良好，裸鼠生產(chǎn)繁育率較高。裸小鼠不同胎次繁育情況見表1。

4.2微生物控制情況

根據(jù)自檢結(jié)果，裸小鼠生產(chǎn)用滅菌飼料、墊料、飲水均無微生物檢出。裸小鼠符合SPF等級(jí)，2013-2014年BALB/c裸小鼠檢測結(jié)果見表2。

4.3動(dòng)物生理生化、臟器特性

對(duì)成年BALB/c裸小鼠生理、生化，臟器特性進(jìn)行了測定，測定結(jié)果顯示，不同性別裸小鼠血液生理生化參數(shù)、臟器指標(biāo)有所不同，具體指標(biāo)及測定結(jié)果詳見論文《不同性別BALB/c裸小鼠血液學(xué)及臟器系數(shù)觀察》[9]。

表1　SPF級(jí)BALB/c裸小鼠不同胎次繁育情況

5經(jīng)驗(yàn)體會(huì)

裸小鼠的飼養(yǎng)繁育及質(zhì)量控制涉及多方面的環(huán)節(jié)和工作，任何一方面工作沒有做到位，一個(gè)環(huán)節(jié)沒有控制好，都難以繁育出高質(zhì)量的動(dòng)物。(1)設(shè)施的質(zhì)量好壞直接影響動(dòng)物的質(zhì)量，裸鼠長期飼養(yǎng)，并維持SPF級(jí)，最好配置隔離包或IVC系統(tǒng)。(2)裸鼠飼養(yǎng)做好運(yùn)行管理、設(shè)施維護(hù)、各參數(shù)指標(biāo)的控制，設(shè)施、用品、動(dòng)物應(yīng)定時(shí)自檢，并及時(shí)調(diào)整和整改。設(shè)施內(nèi)使用物品做好及時(shí)、定期清潔消毒，盡量減少屏障設(shè)施及隔離器內(nèi)物品的存放，做到使用的物品整齊、潔凈，多余的物品及時(shí)移除。屏障設(shè)施內(nèi)滅菌過的籠具、墊料盡量3 d內(nèi)用完、開封的飼料應(yīng)當(dāng)天用完。(3)裸小鼠的營養(yǎng)需求較高，飼料最好選用輻照，且要添加輔料雞蛋、瓜子、黃豆。(4)裸小鼠較有毛小鼠體型小和活動(dòng)能力弱，飼養(yǎng)籠盒飼料架最好定制，飼料架底部距籠盒底部應(yīng)滿足裸鼠站立便可吃到飼料，否則，對(duì)裸小鼠的生長影響較大。(5)加強(qiáng)人員管理、培訓(xùn)，建立無菌意識(shí)，防止人員、物品、操作，污染設(shè)施和動(dòng)物。(6)加強(qiáng)裸小鼠特性認(rèn)知，雖裸小鼠表現(xiàn)為無毛、裸體，但裸小鼠并非真正意義上無毛鼠，部分個(gè)體長有稀疏被毛的現(xiàn)象[10]；而且，裸小鼠隨著鼠齡的增加，皮膚變薄、頭頸部皮皺褶、發(fā)育遲緩等特點(diǎn)；裸小鼠是先天性免疫缺陷，T 淋巴細(xì)胞功能缺陷，無胸腺，僅有胸腺殘跡或異常上皮。

總之，裸小鼠的飼養(yǎng)、管理及質(zhì)量控制涉及多方面的環(huán)節(jié)及工作。只有當(dāng)這些條件滿足后，才能保證裸小鼠質(zhì)量，使繁育的動(dòng)物及相關(guān)科學(xué)實(shí)驗(yàn)符合標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范。

表2　2013-2014年BALB/c裸小鼠微生物及寄生蟲檢測結(jié)果

參考文獻(xiàn)：

[1]吳細(xì)丕，錢林法．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與腫瘤研究[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2000．

[2]富群華．裸小鼠生物學(xué)特性簡介[J]．上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，1988，8(1)：48-49．

[3]中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，中國質(zhì)檢出版社第一編輯室． GB 14922. 2-2010 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境及設(shè)施[S]． 中國質(zhì)檢出版社，中國標(biāo)準(zhǔn)出版社．2011．

[4]廣東省人民代表大會(huì)常務(wù)委員會(huì)．廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例[S]． 2010年6月2日公布，2010年10月1日實(shí)施．

[5]李志東，王暉，歐陽軼強(qiáng)，等．不同光照時(shí)間對(duì)BALB/c裸小鼠生長發(fā)育及繁殖影響的比較研究[J]．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)，2008，25(8)：13-15．

[6]中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，中國質(zhì)檢出版社第一編輯室． GB 14925-2011 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測[S]． 中國質(zhì)檢出版社，中國標(biāo)準(zhǔn)出版社． 2011．

[7]中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，中國質(zhì)檢出版社第一編輯室． GB 14922. 1-2001 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲學(xué)等級(jí)及監(jiān)測[S]． 中國質(zhì)檢出版社，中國標(biāo)準(zhǔn)出版社． 2011．

[8]中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所，中國質(zhì)檢出版社第一編輯室．GBT 14926. 41-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無菌動(dòng)物生活環(huán)境及糞便標(biāo)本的檢測方法[S]． 中國質(zhì)檢出版社，中國標(biāo)準(zhǔn)出版社． 2011．

[9]劉科，劉盛來，楊林，等．不同性別BALB/c裸小鼠血液學(xué)及臟器系數(shù)觀察[J]．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)，2014，34(1)：65-67．

[10]Mecklenburg L, Tychsen B, Paus R. Learning from nudity: lessons from the nude phenotype [J]. Exp Dermatol, 2005, 14: 797-810．

〔修回日期〕2014-11-20