右歸飲對(duì)腎陽(yáng)虛型子宮頸癌患者術(shù)后免疫功能的影響

·臨床研究·

右歸飲對(duì)腎陽(yáng)虛型子宮頸癌患者術(shù)后免疫功能的影響

霍熾文林小琦

東莞市第三人民醫(yī)院婦科，廣東東莞523000

摘要目的探討右歸飲對(duì)腎陽(yáng)虛型子宮頸癌患者術(shù)后CD8+CD28- T細(xì)胞免疫功能的影響。方法搜集72例腎陽(yáng)虛型子宮頸癌術(shù)后患者，將患者隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，并選擇33例健康者作為健康對(duì)照組。觀察組35例給予右歸飲治療，對(duì)照組37例給予常規(guī)治療，比較治療前及治療3個(gè)月后2組患者CD8+CD28-T細(xì)胞及其細(xì)胞因子白介素10(IL-10)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)百分含量變化。結(jié)果治療前，觀察組與對(duì)照組的CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且均顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)。治療后，觀察組CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1水平均較治療前明顯下降(P<0.05)，且均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論CD8+CD28-T細(xì)胞及其細(xì)胞因子升高是子宮頸癌患者的重要表現(xiàn)，右歸飲可顯著下調(diào)腎陽(yáng)虛型子宮頸癌患者術(shù)后CD8+CD28-T細(xì)胞的免疫功能。

關(guān)鍵詞子宮頸癌患者；腎陽(yáng)虛；右歸飲；免疫功能

doi：10.3969/j.issn.1674-4616.2015.05.001

收稿日期：(2015-05-26)

Effect of Yougui Yin on the CD8+CD28-T Cells’Function for the Cervical Cancer Patients of

Kidney Yang Deficiency Who Underwent Excision

HUO Chiwen，LIN Xiaoqi

DepartmentofGynecology，theThirdPeople’sHospitalofDongguan，GuangdongDongguan523000，China

AbstractObjectiveTo study the effect of Yougui Yin on the CD8+CD28- T cells’function for the cervical cancer patients of kidney yang deficiency who underwent excision.MethodsSeventy-two cases of postoperative cervical cancer patients with kidney Yang deficiency were included.Thirty-five cases in the observation group were given Yougui Yin；the other thirty-seven cases in the control group were not given Yougui Yin.CD8+CD28- T cells，interleukin 10(IL-10)，and transforming growth factor beta 1(TGF-β1)were compared before and after treatment in the two groups.ResultsBefore treatment，there were no statistical differences for CD8+CD28-T cells，IL-10 and TGF-β1 between the observation group and the control group，and all of these were significantly higher than those of healthy people(P<0.05).After treatment，CD8+CD28-T cells，IL-10 and TGF-β1 in the observation group was significantly reduced(P<0.05)，and were significantly lower than those of the control group(P<0.05).ConclusionThe increase of CD8+CD28-T cells and its cytokines is one of the important manifestations in cervical cancer patients with kidney Yang deficiency；Yougui Yin can significantly improve by down-regulating CD8+CD28- T cell immune function.

Key wordscervical cancer patients；kidney Yang deficiency；Yougui Yin；immune function

腫瘤免疫調(diào)節(jié)治療是當(dāng)前的熱點(diǎn)。中藥復(fù)方是腫瘤術(shù)后治療的主要措施之一，且多數(shù)經(jīng)典方劑已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)具有調(diào)節(jié)免疫的藥理學(xué)作用[1]，因此探討婦科腫瘤術(shù)后的中藥復(fù)方治療具有重要臨床意義。婦科腫瘤的辨證與腎緊密相關(guān)，其中腎精不足是主要病機(jī)，右歸飲是常用的中藥復(fù)方[2]。研究顯示，CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)與子宮頸癌發(fā)病相關(guān)，且國(guó)內(nèi)學(xué)者章圣輝等[3]發(fā)現(xiàn)子宮頸癌患者外周血CD4+CD25+Treg升高。同樣作為Treg的CD8+CD28-T細(xì)胞，是否也參與子宮頸癌的發(fā)??？目前尚缺少該方面的探討。為此，筆者使用右歸丸治療腎陽(yáng)虛型子宮頸癌術(shù)后患者，觀察CD8+CD28-Treg及其細(xì)胞因子變化，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2011年1月—2014年7月于本院就診的腎陽(yáng)虛型子宮頸癌術(shù)后患者72例作為觀察對(duì)象，按隨機(jī)法分為觀察組(35例)與對(duì)照組(37例)，觀察組給予右歸丸治療，對(duì)照組給予常規(guī)治療，并另選33例健康者作為健康對(duì)照組。2患者組的年齡、性別、病程、子宮切除范圍等臨床資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見(jiàn)表1。

表1　2組一般臨床資料比較

1.2納入標(biāo)準(zhǔn)

①經(jīng)術(shù)后病理學(xué)確診為子宮頸癌；②術(shù)后證實(shí)分期為I～Ⅱ期，無(wú)病灶轉(zhuǎn)移，不需化療或放療；③無(wú)合并其他腫瘤；④排除自身免疫性疾?。虎萁?周未使用激素或免疫抑制劑[4]；⑥依從性好，能堅(jiān)持隨訪。按照中醫(yī)證候標(biāo)準(zhǔn)[5]：證見(jiàn)虛胖體弱，畏寒怕冷，頭昏無(wú)力，腰膝酸軟，腹脹隆起，或腹脹有積液，白帶稀薄，或貧血消瘦，胎薄白，脈細(xì)無(wú)力者歸屬腎陽(yáng)虛。

1.3CD8+CD28-Treg的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

CD8-FITC、CD28-PE、IFN-γ及IL-4抗體購(gòu)自BECTON DICKINSON；溶血素OptiLyse C、同型對(duì)照試劑IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PC5購(gòu)自BECKMAN COULTER公司；FACS Calibur多色流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD公司。采用Ficoll分離獲得外周血單核細(xì)胞，隨后應(yīng)用尼龍毛柱獲得T淋巴細(xì)胞，再用免

疫磁珠(MACS)孵育30 min后進(jìn)行磁珠而分離出CD8+CD28-Treg，使用固定穿透劑對(duì)CD8+CD28-Treg胞內(nèi)IL-10及TGF-β1進(jìn)行染色，使用雙激光光源，其中FL1和FL2熒光通道以相應(yīng)同種型鼠IgG染色細(xì)胞作陰陽(yáng)分界線，仔細(xì)設(shè)置各熒光通道之間的熒光補(bǔ)償，然后進(jìn)行IL-10及TGF-β1的檢測(cè)，運(yùn)用FACSDIVA軟件對(duì)CD8+CD28-Treg、IL-10及TGF-β1百分含量進(jìn)行分析[6]。

1.4治療方法與隨訪

觀察組在此基礎(chǔ)上給予右歸丸(北京同仁堂股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z11021040，10丸裝，大蜜丸)治療，每次1丸，每日3次，連服3個(gè)月。對(duì)照組給予常規(guī)治療。治療3個(gè)月后復(fù)查CD8+CD28-Treg及其細(xì)胞因子水平。2組患者均予基本隨訪，包括3大常規(guī)、腹部及婦科超聲等檢查[7]。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

治療前，觀察組與對(duì)照組CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但均顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)。治療后，觀察組CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1水平均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，且觀察組CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1均較治療前明顯下降(P<0.05)，且CD8+CD28-T細(xì)胞下降水平與健康對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；對(duì)照組僅CD8+CD28-T細(xì)胞較治療前顯著下降(P<0.05)，而IL-10及TGF-β1均較治療前差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2　2組治療前后免疫功能的變化 ± s)

與健康組比較*P<0.05；與對(duì)照組比較△P<0.05；與治療前比較▲P<0.05

3討論

CD8+T細(xì)胞與腫瘤的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。部分腫瘤，如獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)患者表現(xiàn)為CD8+T細(xì)胞增多，而部分腸道腫瘤表現(xiàn)為CD8+T細(xì)胞降低[8]。因此，CD8+T細(xì)胞對(duì)于腫瘤而言具有異質(zhì)性，亦即在不同的腫瘤，其扮演不同性質(zhì)的角色。根據(jù)細(xì)胞膜是否表達(dá)CD28分子，CD8+T細(xì)胞可以被分為CD8+CD28+殺傷性T細(xì)胞及CD8+CD28-抑制性T細(xì)胞，后者由于可以表達(dá)細(xì)胞因子IL-10、TGF-β1從而發(fā)揮免疫增強(qiáng)或抑制的雙重作用，因此CD8+CD28-T細(xì)胞歸屬到CD4+CD25+同類的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)當(dāng)中[9]。究竟子宮頸癌患者的CD8+CD28-Treg發(fā)揮何種作用，目前尚缺少相關(guān)探討。

宮頸癌屬于中醫(yī)“帶下”、“無(wú)色帶下”、“崩漏”等范疇。根據(jù)天癸學(xué)說(shuō)及養(yǎng)生學(xué)說(shuō)，子宮頸癌的核心病因病機(jī)為腎虛，此類患者多有起居無(wú)常，房事無(wú)節(jié)等，耗傷腎氣而致腎陽(yáng)虛[10]。

“以藥測(cè)證”是重要的臨證思想，是論證藥物與證候是否呼應(yīng)的重要手段。為探討上述問(wèn)題，筆者采用了右歸飲作為觀察CD8+CD28-Treg變化趨勢(shì)及判斷性質(zhì)的藥物。右歸飲出自《景岳全書(shū)》，組成為熟地、山茱萸、山藥、枸杞子、杜仲、菟絲子、附子、肉桂、當(dāng)歸、鹿角膠，具有溫補(bǔ)腎陽(yáng)、填充精血之功效[11]。近年右歸丸被應(yīng)用于卵巢癌、子宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌等婦科惡性腫瘤，盡管其藥理機(jī)制尚未完全闡明，但現(xiàn)有的證據(jù)[12]顯示，熟地、山藥、枸杞子及鹿角膠等具有明確的免疫調(diào)節(jié)作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，治療前觀察組與對(duì)照組CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且均顯著高于健康人，這與Pita-Lopez等[13]報(bào)道的低分化子宮頸癌患者外周血CD8+CD28-T細(xì)胞升高具有一致性，這初步說(shuō)明CD8+CD28-T細(xì)胞可能是子宮頸癌的一個(gè)免疫學(xué)特征，提示其可能是一個(gè)對(duì)發(fā)病起負(fù)面作用的淋巴細(xì)胞；觀察組與對(duì)照組上述三者無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明2組具有可比性。治療后，觀察組CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1均較治療前明顯下降，進(jìn)一步印證CD8+CD28-T細(xì)胞可能是對(duì)病情不利的指標(biāo)，而且觀察組CD8+CD28-T細(xì)胞已下降至與健康人無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1三者都是右歸丸的主要靶淋巴細(xì)胞及靶細(xì)胞因子。治療后，對(duì)照組僅CD8+CD28-T細(xì)胞較治療前顯著下降，而IL-10及TGF-β1均較治療前無(wú)顯著性差異，說(shuō)明在手術(shù)本身可能僅促進(jìn)CD8+CD28-T細(xì)胞的下降，而對(duì)其細(xì)胞因子分泌無(wú)明顯影響。治療后，觀察組CD8+CD28-T細(xì)胞、IL-10及TGF-β1均顯著低于對(duì)照組，進(jìn)一步印證了是否應(yīng)用右歸丸治療，2組患者的免疫功能呈現(xiàn)顯著性差異。

通過(guò)本研究筆者認(rèn)為，CD8+CD28-T細(xì)胞及其細(xì)胞因子升高是子宮頸癌患者的重要表現(xiàn)，前者可能是腎陽(yáng)虛的物質(zhì)基礎(chǔ)，可能是屬于“邪”范圍的淋巴細(xì)胞。右歸飲可顯著下調(diào)腎陽(yáng)虛型子宮頸癌患者術(shù)后CD8+CD28-T細(xì)胞的免疫功能，可能是該復(fù)方通過(guò)“驅(qū)邪”而實(shí)現(xiàn)“扶正”的藥理學(xué)基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[1]余霞.參麥注射液對(duì)早期子宮頸癌手術(shù)患者免疫功能的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16(5)：218-219.

[2]李升華，鄭冬梅.右歸丸治療腎陽(yáng)虛型圍絕經(jīng)期功能失調(diào)性子宮出血的臨床觀察[J].中國(guó)中醫(yī)藥科技，2013，20(6)：666-667.

[3]章圣輝，韓義香，吳建波，等.子宮頸癌患者外周血CD4+CD2+CD127lo/-調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的含量及腫瘤免疫水平檢測(cè)[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2007，42(6)：419-420.

[4]鄭愛(ài)文，陳雅卿，方靜，等.早期子宮頸癌術(shù)后肺轉(zhuǎn)移的臨床病理特征及危險(xiǎn)因素分析[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2015，50(3)：204-209.

[5]王居詳，徐力.中醫(yī)腫瘤治療學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2014：396-403.

[6]KOSMACZEWSKA A，BOCKO D，CISZAK L，et al.Dysregulated expression of both the costimulatory CD28 and inhibitory CTLA-4 molecules in PB T cells of advanced cervical cancer patients suggests systemic immunosuppression related to disease progression[J].Pathol Oncol Res，2012，18(2)：479-489.

[7]阿仙姑·哈斯木，李巧稚，阿布力孜·阿布杜拉.維吾爾族婦女宮頸病變組織中HLA-Ⅰ類抗原、CD3和CD8的表達(dá)[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2010，26(6)：684-687.

[8]陳瑜，徐曼，肖琳，等.人子宮頸癌異常表達(dá)程序性死亡配體-1并促CD4+T和CD8+T細(xì)胞凋亡[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，37(10)：859-863.

[9]LI N，JI PY，SONG LG，et al The expression of molecule CD28 and CD38 on CD4+/CD8+T lymphocytes in thymus and spleen elicited by Schistosoma japonicum infection in mice model[J].Parasitol Res，2015，114(8)：3047-3058.

[10]周敏，方曉陽(yáng).左歸丸及右歸丸創(chuàng)方思想的歷史考察[J].中醫(yī)雜志，2015，56(11)：901-905.

[11]陳杰，李晶，封玉玲，等.右歸丸補(bǔ)腎填精的藥理作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21(3)：134-137.

[12]楊鋒，李小群，楊利學(xué)，等.右歸丸含藥血清對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨及成脂分化的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015，30(1)：263-266.

[13]PITA-LOPEZ ML，ORTIZ-LAZARENO PC，NAVARR-O-MEZA M，et al.CD28-，CD45 RA(null/dim)and natural killer-like CD8+T cells are increased in peripheral blood of women with low-grade cervical lesions[J].Cancer Cell Int，2014，14(1)：97-98.