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    血栓與止血檢測(cè)用于出血病與易栓癥中的臨床診斷應(yīng)用研究

    2016-01-07 19:59:05劉美蘭
    現(xiàn)代養(yǎng)生·下半月 2015年11期
    關(guān)鍵詞:止血出血病血栓

    劉美蘭

    【摘要】目的:本文主要探討血栓與止血檢測(cè)用于出血病與易栓癥中的臨床診斷應(yīng)用研究。方法:選取出血病15個(gè)病種、156個(gè)家系、168例先證者和616名家族成員進(jìn)行了檢測(cè),在人類(lèi)基因庫(kù)中尋找相關(guān)的基因序列,通過(guò)RT-PCR、AS-PCR和實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增,得到PCR的純化產(chǎn)物,再用RFLP、TA克隆和直接測(cè)序等方法進(jìn)行基因診斷;同時(shí)采用抽取DNA、合成引物、PCR擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物純化及直接測(cè)序分析方法,并采用RFLP和AS-PCR驗(yàn)證等技術(shù),分別對(duì)4個(gè)家系的AT缺陷癥、4個(gè)家系的PC缺陷癥及2個(gè)家系的PS缺陷癥作出基因診斷。結(jié)果:在血栓與止血檢測(cè)在出血病方面的應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)診斷準(zhǔn)確率達(dá)100%;在血栓與止血檢測(cè)在易栓癥方面的應(yīng)用,診斷準(zhǔn)確率達(dá)100%。結(jié)論:發(fā)現(xiàn)栓和止血監(jiān)測(cè)的結(jié)果在一定程度上可反應(yīng)出血病和易栓癥的診斷。

    【關(guān)鍵詞】血栓;止血;出血??;易栓癥

    出血癥是由于凝血系統(tǒng)出現(xiàn)問(wèn)題而發(fā)生的出血現(xiàn)象,而易栓癥是由于凝血因子、抗凝蛋白等的遺傳性或獲得性缺陷而發(fā)生血栓栓塞癥狀。其二者是臨床中最為常見(jiàn)的危害人類(lèi)健康的疾病,而血栓和止血監(jiān)測(cè)的結(jié)果在一定程度上可反應(yīng)出血病和易栓癥的診斷。

    1、資料與方法

    1.1血栓與止血檢測(cè)

    對(duì)血栓和止血的檢測(cè)一定程度上可反應(yīng)出血病和易栓癥的診斷,診斷方法大致可分為表型檢測(cè)和篩選試驗(yàn)這兩類(lèi)。表型檢測(cè)常用作診斷試驗(yàn);篩選試驗(yàn)常需監(jiān)測(cè)的指標(biāo)主要有血小板計(jì)數(shù)(PLT)、出血時(shí)間(BT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)、優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間(ELT)、纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物(FDPs)等等。

    目前對(duì)部分先天性和遺傳性出血疾病和易栓癥需要進(jìn)行基因檢測(cè),以確定是否存在基因缺陷。

    1.2血栓與止血檢測(cè)在出血病和易栓癥中的應(yīng)用

    出血病包括有新生兒出血癥和腦干出血癥和兩種,主要是由一期止血缺陷和二期止血缺陷所導(dǎo)致的,一期止血缺陷主要由血管壁和血小板異常所引發(fā)的止血性功能缺陷,而二期止血缺陷主要由抗凝物質(zhì)和凝血障礙所引起的止血性功能缺陷。本研究對(duì)15個(gè)病種、156個(gè)家系、168例先證者和616名家族成員進(jìn)行了檢測(cè)。在人類(lèi)基因庫(kù)中尋找相關(guān)的基因序列,通過(guò)RT-PCR、AS-PCR和實(shí)時(shí)PCR擴(kuò)增,得到PCR的純化產(chǎn)物,再用RFLP、TA克隆和直接測(cè)序等方法進(jìn)行基因診斷,并已獲得102種國(guó)內(nèi)外首先報(bào)道的突變基因。

    血栓病在臨床上可以分為遺傳性和獲得性?xún)煞N,無(wú)論是遺傳性易栓癥還是獲得性易栓癥,二者共同的最主要臨床特點(diǎn)都是血栓易發(fā)傾向,又多數(shù)以靜脈血栓栓塞性疾病(VTE)形式出現(xiàn),有些疾病動(dòng)脈血栓的發(fā)生率也有升高。體內(nèi)主要抗凝蛋白如抗凝血酶(antithrombin,AT)、蛋白S(proteinS,PS)、蛋白C(proteinC,PC)的先天缺乏會(huì)導(dǎo)致血栓性疾病。對(duì)靜脈系統(tǒng)血栓病的檢測(cè)可發(fā)現(xiàn)部分患者具備這種先天性缺陷。肺栓塞(PulmonaryembolismPE)是DVT中常見(jiàn)的并發(fā)癥,也是靜脈血栓形成和導(dǎo)致死亡的最為主要的因素,易栓癥的診斷見(jiàn)表1。

    2、結(jié)果

    在血栓與止血檢測(cè)用于出血病應(yīng)用方面,基于研究閱讀文獻(xiàn),通過(guò)對(duì)137名血友病患者進(jìn)行產(chǎn)前診斷,采用Southern-Blot和PCR-DGGE技術(shù)手段,檢測(cè)F8內(nèi)含子22倒位;根據(jù)性別基因位點(diǎn)和多態(tài)性位點(diǎn),再對(duì)內(nèi)含子22倒位陰性者進(jìn)行間接連鎖分析,發(fā)現(xiàn)其累積識(shí)別能力高達(dá)99.4%,準(zhǔn)確率高達(dá)100%,同時(shí)診斷率也高達(dá)100%。

    在血栓與止血檢測(cè)用于易栓癥應(yīng)用方面,本研究采用抽取DNA、合成引物、PCR擴(kuò)增、PCR產(chǎn)物純化及送入公司進(jìn)行測(cè)序等分析方法,并采用AS-PCR和RFLP等驗(yàn)證技術(shù),分別對(duì)4個(gè)家系的PC缺陷癥、4個(gè)家系的AT缺陷癥及2個(gè)家系的PS缺陷癥進(jìn)行基因診斷,發(fā)現(xiàn)突變基因共計(jì)8種,最終診斷準(zhǔn)確率高達(dá)100%。

    3、討論

    基于前人研究發(fā)現(xiàn)血栓和止血監(jiān)測(cè)的結(jié)果在一定程度上可反應(yīng)出血病和易栓癥的診斷。本實(shí)驗(yàn)首先研究了血栓與止血檢測(cè)在出血病中的臨床應(yīng)用,對(duì)137名血友病患者進(jìn)行產(chǎn)前診斷,發(fā)現(xiàn)累積識(shí)別能力達(dá)99.4%,準(zhǔn)確率高達(dá)100%,同時(shí)診斷率也高達(dá)100%。其次研究了血栓與止血檢測(cè)在易栓癥中的臨床應(yīng)用,采用多種醫(yī)學(xué)手段對(duì)易栓癥多種病癥進(jìn)行基因診斷,診斷準(zhǔn)確率達(dá)100%。綜上可見(jiàn),在診斷出血病與易栓癥中,血栓和止血檢測(cè)可作為決定性檢測(cè)指標(biāo)。

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