蔓荊子醇提物抗衰老與抗花生油氧化作用研究

尹愛武 黃賽金 羅紫英 龔 燈

蔓荊子醇提物抗衰老與抗花生油氧化作用研究

尹愛武1黃賽金1羅紫英2龔 燈2

（湖南工程學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院1，湘潭 411104）
（湖南科技學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院2，永州 425199）

研究蔓荊子醇提物的抗衰老與抗花生油氧化作用。昆明種小白鼠經(jīng)頸背皮下注射D-半乳糖建立亞急性衰老模型。蔓荊子醇提物以高、中、低劑量（300、150、75 mg／kg）灌胃衰老小鼠。結(jié)果表明，7周后蔓荊子醇提物中、高劑量均能顯著降低小鼠血清、肝和腦組織中的MDA含量（P＜0.01，P＜0.05），顯著增加小鼠血清、肝和腦組織中SOD的活力、小鼠脾臟和胸腺指數(shù)以及腦神經(jīng)元數(shù)（P＜0.01，P＜0.05）。在35 d貯藏期內(nèi)添加蔓荊子醇提物（添加量0.04%、0.06%、0.08%）花生油的酸值（AV）和過氧化值（POV）均顯著降低。蔓荊子醇提物有較好的抗衰老與抗氧化作用。

蔓荊子 抗衰老 抗氧化

蔓荊子為馬鞭科植物蔓荊（Vitex trifolia L.）或單葉蔓荊（Vitex trifolia L.Var.simplicifolia Cham.）的干燥成熟果實［1］。研究報道蔓荊子有抗自由基［2］、抗氧化［3-4］、抗炎［5］、抗腫瘤［6］及降壓［7］等多種藥理作用。

隨著經(jīng)濟的發(fā)展和人們對食物安全意識的提高，食品中傳統(tǒng)的人工合成抗氧化劑如二丁基羥基甲苯（BHT）、丁基羥基茴香醚（BHA）及沒食子酸丙酯（PG）等因其給人體帶來毒副作用，現(xiàn)逐漸退出或停止使用。天然植物資源含有豐富的黃酮類、多酚類等物質(zhì)，已成為發(fā)現(xiàn)與提取抗衰老和抗氧化活性成分的寶庫。

蔓荊子中含有黃酮與多酚類物質(zhì)［8］?，F(xiàn)代研究表明黃酮、多酚類物質(zhì)有抗衰老與抗氧化作用［9-10］。本研究以D-半乳糖建立小鼠亞急性衰老模型，觀察蔓荊子醇提取物對小鼠血清、肝、腦組織中超氧化物歧化酶（SOD）的活力及丙二醛（MDA）含量以及胸腺、脾臟指數(shù)，腦神經(jīng)元數(shù)的影響，以期探討蔓荊子醇提取物的抗衰老作用及可能機制并探討蔓荊子醇提取物的抗花生油氧化作用。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

蔓荊子：市售；花生油：實驗室自行壓榨；D-半乳糖：Sigma公司（用生理鹽水配成10%的溶液）；蘆丁對照品：中國醫(yī)藥（集團）上?；瘜W(xué)試劑公司；沒食子酸對照品：中國藥品生物制品檢定所。

1.2 動物與儀器

昆明種小白鼠90只，雌雄各半，體重18～22 g［湖南省動物實驗中心提供（SPF級動物）］，飼養(yǎng)在恒濕（55±5）%，溫度（22±2）℃的環(huán)境中，標準飼料與自來水隨機取食。

KD-2508-Ⅲ恒溫冷凍切片機：廈門伯力電子科技有限公司；N-1000S-WA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：日本EYELA；agiLent 19091S-433型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。

1.3 蔓荊子醇提物的制備

稱取一定量蔓荊子粗粉，加7倍量75%的乙醇加熱回流提取60 min，過濾，濾渣加7倍量75%的乙醇再提取1次，合并2次濾液，減壓濃縮至無醇味，經(jīng)噴霧干燥得蔓荊子醇提物。

1.4 動物分組與給藥

昆明種小白鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機分為模型組、空白組及蔓荊子高、中、低劑量組?？瞻捉M每日經(jīng)頸背皮下注射0.5 mL生理鹽水，其余各組每日注射0.5 mL 5%D-半乳糖，連續(xù)給藥6周［11］。蔓荊子醇提物用生理鹽水配成15 mg／mL的溶液。給藥10 d后，蔓荊子高、中、低劑量組每日灌胃給予蔓荊子醇提物溶液，給量藥分別為300、150、75 mg／kg，空白組和模型組每天灌胃等量生理鹽水，連續(xù)灌胃7周。

1.5 生化指標及脾臟、胸腺指數(shù)測定

給藥7周后，稱取小鼠體重，小鼠斷頭取血、分離血清。迅速摘取小鼠肝臟和腦并用冰冷生理鹽水清洗2次，濾紙吸干后稱重。將小鼠肝臟、腦剪碎后分別倒入勻漿瓶中，加入9倍質(zhì)量的生理鹽水，勻漿，制成10%的肝臟、腦組織勻漿。按測試盒所附方法測定MDA和SOD含量。摘取小鼠胸腺和脾臟，生理鹽水洗凈，濾紙吸干后稱重。計算胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)。

1.6 小鼠腦神經(jīng)元數(shù)的測定

取小鼠腦組織，經(jīng)干冰快速冷凍，然后切片，用10%甲醛溶液固定，用石蠟包埋后切片，經(jīng)HE染色，在常規(guī)透射電鏡下觀察。每張切片隨機選取10個視野觀察神經(jīng)元數(shù)。

1.7 蔓荊子醇提物抗花生油氧化試驗

精確稱取4.0 g蔓荊子醇提物，溶于200 mL無水乙醇中，制備質(zhì)量濃度為20 g／L的蔓荊子醇提物的乙醇溶液。取5只錐形瓶，分別加入一定質(zhì)量的花生油，在1、2、3號錐形瓶中分別加入一定量的蔓荊子醇提物的乙醇溶液（花生油中蔓荊子醇提物的含量分別為0.04%、0.06%、0.08%）；4號錐形瓶中加入一定量的BHT乙醇溶液作為對照，BHT添加量為0.02%；5號錐形瓶為空白。將花生油與添加物攪拌混合均勻，然后置于（45±1）℃恒溫培養(yǎng)箱中放置35 d。試驗第1天測定花生油的酸值（AV）和過氧化值（POV），以后每7 d測定酸值（AV）和過氧化值（POV），每個樣品測定6次，取平均值。酸值的測定參照GB／T 5530—1998，過氧化值的測定參照GB／T 5538—2005（碘量法）。

1.8 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)均以ˉx±s表示，用SPSS 14.0統(tǒng)計分析，采用成組資料均數(shù)的t檢驗，P＜0.05為有顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 蔓荊子醇提物化學(xué)成分測定

化學(xué)成分測定表明蔓荊子醇提物中主要含有萜類、黃酮、酚類。其含量分別為101.4 mg／g（包含單萜、倍半萜、二萜，氣相色譜-質(zhì)譜儀測定）、53.8 mg／g（蘆丁為對照，紫外可見分光光度法測定）、40.6 mg／g（沒食子酸為對照，F(xiàn)olin-Ciocalteu 測定法）。

2.2 蔓荊子醇提物對血清、肝和腦組織MDA含量的影響

小鼠血清、肝和腦組織MDA含量見表1。與空白組比較，模型組血清、肝組織、腦組織中MDA含量顯著增加（P＜0.01），表明衰老昆明種小白鼠模型建立。蔓荊子低劑量組小鼠血清、肝和腦組織中MDA含量與模型組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異。與模型組比較蔓荊子高、中劑量組小鼠血清、肝和腦組織中MDA含量顯著降低（P＜0.01，P＜0.05），且MDA含量隨給藥劑量的增加而減少。結(jié)果表明蔓荊子醇提物能顯著降低小鼠血清、肝和腦組織中MDA含量。

表1 血清、肝組織和腦組織MDA含量（n＝18，ˉx±s）

2.3 蔓荊子醇提物對血清、肝和腦組織SOD活力的影響

小鼠血清、肝和腦組織SOD的活力見表2。由表2可知，與空白組比較，模型組小鼠血清、肝和腦組織中SOD活性顯著降低（P＜0.01）。蔓荊子低劑量組小鼠血清、肝和腦組織中SOD的活力與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。與模型組比較蔓荊子高、中劑量組小鼠血清、肝和腦組織中SOD的活力顯著增加（P＜0.01，P＜0.05），且SOD 的活力隨給藥劑量的增加而增強。結(jié)果表明蔓荊子醇提物能顯著增加小鼠血清、肝和腦組織中SOD的活力。

表2 血清、肝組織和腦組織SOD活力（n＝18，ˉx±s）

2.4 蔓荊子醇提物對衰老小鼠脾臟和胸腺指數(shù)的影響

蔓荊子醇提物抑制小鼠脾臟和胸腺萎縮結(jié)果見表3。與空白組比較，模型組小鼠脾臟和胸腺指數(shù)顯著降低（P＜0.01），表明模型組小鼠脾臟、腺胸萎縮。蔓荊子低劑量組小鼠脾臟及胸腺指數(shù)與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。與模型組比較，蔓荊子高、中劑量組小鼠脾臟及胸腺指數(shù)顯著增加（P ＜0.01，P ＜0.05），且小鼠脾臟及胸腺指數(shù)隨給藥劑量的增加而增加。結(jié)果表明蔓荊子醇提物有顯著的抗小鼠脾臟及胸腺萎縮作用。

表3 蔓荊子醇提物對小鼠脾臟和胸腺指數(shù)的影響（n＝18，ˉx±s）

2.5 蔓荊子醇提物對小鼠腦神經(jīng)元數(shù)的影響

蔓荊子醇提物對小鼠腦神經(jīng)元數(shù)的影響見表4。由表4可知，與空白對照組比較，模型組小鼠腦神經(jīng)元數(shù)顯著降低（P＜0.01）。蔓荊子低劑量組小鼠腦神經(jīng)元數(shù)與模型組比較無統(tǒng)計學(xué)差異。與模型組比較，蔓荊子高、中劑量組小鼠腦神經(jīng)元數(shù)顯著增加（P＜0.01，P＜0.05），且小鼠腦神經(jīng)元數(shù)隨給藥劑量的增加而增加。結(jié)果表明蔓荊子醇提物能顯著地抑制小鼠腦神經(jīng)元的死亡。

表4 蔓荊子醇提物對小鼠腦神經(jīng)元數(shù)的影響（n＝16，ˉx±s）

2.6 花生油酸值的測定結(jié)果

貯藏期間花生油樣酸值的變化見表5，在整個貯藏期內(nèi)，蔓荊子高、中、低劑量組及BHT組的花生油酸值極顯著低于空白組（P＜0.01），隨蔓荊子醇提物添加量的逐漸增加，同期內(nèi)花生油的酸值逐漸減小，在貯藏期內(nèi)添加0.08%蔓荊子醇提物的高劑量組花生油酸值極顯著低于BHT組（P＜0.01）。結(jié)果表明蔓荊子醇提物有顯著的抑制油脂酸敗作用。在一定的添加劑量下其抑制油脂酸敗作用要優(yōu)于人工合成抗氧化劑二丁基羥基甲苯（BHT）。

表5 不同貯藏期花生油酸值（n＝6，ˉx±s）

2.7 花生油過氧化值的測定結(jié)果

在35 d的貯藏期間內(nèi)花生油過氧化值（POV）的變化見表6。在整個貯藏期內(nèi)，蔓荊子高、中、低劑量組及BHT組的POV值極顯著低于空白組（P＜0.01），隨蔓荊子醇提物添加量的逐漸增加，同期內(nèi)花生油的POV值逐漸減小。在貯藏期內(nèi)添加0.08%蔓荊子醇提物的高劑量組花生油POV值顯著低于BHT組（P＜0.01），表明蔓荊子醇提物有顯著地抗油脂氧化作用，在一定的添加劑量下其抗氧化效果要優(yōu)于人工合成抗氧化劑二丁基羥基甲苯（BHT）。

表6 不同貯藏期花生油過氧化值（n＝6，ˉx±s）

3 結(jié)論

試驗結(jié)果表明，蔓荊子醇提物能顯著降低小鼠血清、肝和腦組織中的MDA含量，增加小鼠血清、肝和腦組織中SOD的活力、小鼠脾臟和胸腺指數(shù)、腦神經(jīng)元數(shù)，降低花生在貯藏期內(nèi)的酸值和過氧化值。蔓荊子醇提物有抗機體衰老和抑制油脂的酸敗和氧化作用。蔓荊子醇提物經(jīng)化學(xué)成分定性試驗，表明其中含有黃酮類和酚類物質(zhì)，其抗衰老與抗花生油氧化作用可能與含有的黃酮類和酚類物質(zhì)有關(guān)。

［1］高學(xué)敏.中藥學(xué)［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007：75

Gao，X M.Chinese herbology［M］.Beijing，China traditional medicine press，2007：75

［2］劉紅燕.蔓荊子揮發(fā)油體外化學(xué)模擬抗氧化活性的研究［J］. 抗感染藥學(xué)，2014，11（2）：119-120

Liu H Y.Study on antioxidative activity of essential oil form Fructus Viticis in vitro［J］.Anti-infection pharmacy，2014，11（2）：119-120

［3］Choudhary M I，Jalil S，Nawaz SA，et al.Antiinflammatory and lipoxygenase inhibitory compounds from Vitex agnuscastus［J］.Phytotherapy Research，2009，23（9）：1336-1339

［4］Ono M，Yanaka T，Yamamoto M，et al.New diterpenes and norditerienes from the fruits of Vitex rotundifolia ［J］.Journal of Natural Products，2002，65（4）：537-541

［5］Koh D J，Ahn H S，Chung H S，et al.Inhibitory efects of casticin on migration of eosinophil and expression of chemokines and adhesion molecules in A549 lung epithelial cells via NP-kappaB inactivation［J］.Journal Ethnopharmacol，2011，136（3）：399-405

［6］Tang SY，Zhong M Z，Yuan G，et al.Casticin，A flavonoid，potentiates TRAIL-induced apoptosis through modulation of anti-apoptotic proteins and death receptor 5 in colon cancer cells［J］.oncology reports ，2013，29（2）：474-48

［7］王本祥.現(xiàn)代中藥藥理學(xué)［M］.天津：科技出版社，1997：182

Wang B X.Modern Chinese medicine pharmacology［M］.Tianjin：Science and Technology Press，1997：182

［8］吳闖，張健，殷志琦.蔓荊子化學(xué)成分研究.藥物生物技術(shù)［J］，2010，17（6）：504-507

Wu C，Zhang J，Yin Z Q.Chemical Constituents from the Fruits of Vitex rotundifolia［J］.Chinese journal of pharmaceutical biotechnology［J］，2010，17（6）：504-507

［9］吳正平.金花葵花總黃酮對衰老模型小鼠抗氧化和免疫功能的影響［J］. 中國老年學(xué)雜志，2011，5（31）：1800-1802

Wu，Z P.Anti-oxidation and immunological function of total flavonoids from Hibiseu Smanihot L.on senile mice［J］.Chinese journal of gerontology，2011，5（31）：1800-1802

［10］古紹彬，吳影，董紅敏，等.蘋果多酚抗氧化作用及其清除自由基能力的研究［J］.2013，28（4）：58-62

Gu SB，Wu Y，Dong H M，et al.Study on the antioxidant and free radical scavenging ability of apple polypbenol［J］.Journal of the Chinese cereals and oils association，2013，28（4）：58-62

［11］齊冰，丁濤，常正堯，等.泰山黃精對D-半乳糖所致衰老小鼠的抗衰老作用研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，21（7）：1811-1812

Qi B，Ding T，Chang Z R，et al.Anti-aging effect of taishan polygonatum sibiricum on d-galactose-induce mice aging［J］.Lishizhen medicine and materia medica research，2010，21（7）：1811-1812.

The Anti-aging and Antioxidant Effects of Alcohol Abstracts from Vitex Trifolia L.on Peanut Oils

Yin Aiwu1Huang Saijin1Luo Ziying2Gong Deng2
（Department of Chemistry Engineering，Hunan Institute of Engineering1，Xiangtan 411104）
（Department of Life Science and Chemistry，Hunan University of Science and Engineering2，Yongzhou 425199）

The anti-aging and antioxidant effects of alcohol abstracts from Vitex trifolia L.were studied in this paper.The subacute aging model was established by neck hypodermic injection D-galactose in Kunming mouse.The aging model mice were administered intragastrically with alcohol abstracts from Vitex trifolia L.for 7 weeks at the doses of 350 （high），150 （middle）and 75 （low）mg／kg each day.The results showed the content of malondialdehyde（MDA）in serum，liver and brain tissue was significantly decreased（P ＜0.01，P ＜0.05），while the activity of superoxide dismutase（SOD）in serum，liver and brain tissue，the spleen index and thymus index，and number of brain neurons was significantly increased in high and medium dosage group（P ＜0.01，P ＜0.05）.Within 35d storage time，alcohol abstracts（0.04%，0.06%，0.08%）from Vitex trifolia L.were added，and then the acid value（AV）of peanut oil and peroxide value（POV）were significantly decreased.The results showed that alcohol abstracts from Vitex trifolia L.had good anti-aging and antioxidant effects.

Vitex trifolia L.，anti-aging，antioxidation

R965

A

1003-0174（2016）09-0091-04

湖南省重點學(xué)科建設(shè)項目（2011-76），湖南省高?？萍紕?chuàng)新團隊支持計劃（2012-318）

2014-11-09

尹愛武，男，1981年出生，副教授，天然資源的開發(fā)與利用