• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    mTOR在運動干預高脂膳食大鼠胰島素抵抗形成中的作用及機制研究

    2015-12-31 20:34:43劉霞孫青陳志軍
    山東體育學院學報 2015年5期
    關鍵詞:運動干預胰島素抵抗高脂

    劉霞 孫青 陳志軍

    摘 要:目的:探討哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在高脂膳食誘導胰島素抵抗(IR)的形成及運動干預中的作用。方法:選用清潔級的雄性SD大鼠40只,隨機分為4組:正常對照組(C組,n=10);高脂膳食組(H,n=10);游泳運動組(E,n=10);高脂膳食+游泳運動組(HE,n=10)。按實驗要求分別給予普通飼料和高脂飼料,E、HE組每天無負重游泳運動1小時。11周后檢測各組大鼠空腹血糖(FBG)、血清胰島素(FBG)、骨骼肌AMPK、PI3K、Akt、mTOR、S6K1的表達量。結果:1)與C組相比,H組FBG、FINS、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)均顯著性升高(P<001)(P<0.05),E組FINS極顯著性下降(P<0.01);與H組相比,HE組FINS顯著性下降(P<0.05)。2)與C組比較,H組骨骼肌mTOR含量和mRNA都有顯著性增加(P<0.05),S6K1mRNA極顯著性升高(P<0.01);與H組比較,HE組骨骼肌mTOR、S6K1mRNA顯著性減少(P<0.05)。3)與C組比較, E組骨骼肌Akt和AMPK含量顯著性增加(P<0.01);與H組比較,HE組骨骼肌PI3K、Akt、AMPK含量有增加,但均無顯著性(P>0.05)。結論:1)長期的高脂膳食可激活mTOR/S6K1信號通路,導致胰島素抵抗的發(fā)生。2)有氧運動激活AMPK,抑制mTOR的作用,AMPK/mTOR/S6K1可能在運動干預高脂膳食誘導IR形成中起著重要的作用。

    關鍵詞:高脂;胰島素抵抗;運動干預; mTOR;AMPK

    中圖分類號:G804.7 文獻標識碼:A 文章編號:1006-2076(2015)05-0057-05

    Abstract:Objective:Explore the effect of mTOR on the generation of insulin resistance of high-fat diet and exercise induced.Methods:40 Sprague-Dawley(SD)male rats were randomly divided into control group(C,n=10),High-Fat Diet Rats(H,n=10),Swimming Exercise Rats(E,n=10) and High-Fat Diet+Swimming Exercise Rats(HE,n=10).According to the acquirement, they should be fed separately normal diet and high-fat diet.Rats in group E and group HE were both asked to swim for one hour with non-weight bearing everyday.After 11weeks,measuring the content of FBG,F(xiàn)INS,the expression of AMPK,PI3K,Akt,mTOR,S6K1 in skeletal muscles.Results:1)Compared with group C,

    哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,是胰島素經(jīng)典PI3K/AKT信號通路的下游靶蛋白,受營養(yǎng)物質、能量變化以及生長因子的激活,可調控蛋白質合成、細胞生長和增殖[1]。已有研究發(fā)現(xiàn),mTOR與胰島素抵抗(IR)的關系密切,外界信號刺激導致mTOR持續(xù)高度活化時,mTOR可通過負反饋途徑引起胰島素受體底物-1(IRS-1)絲氨酸磷酸化是IR形成的主要原因[2]。而NiuYM[3]等研究發(fā)現(xiàn),mTOR/S6K1信號通路與高脂飲食誘導IR的發(fā)生有著密切的關系,有氧運動可能是通過抑制mTOR/S6K1信號通路,使IR得到改善,但其調控機制尚不清楚,為此本研究將通過高脂膳食誘導IR形成的同時進行運動干預,來進一步探討mTOR與IR的關系以及運動對mTOR的調控機制。

    1 研究對象與方法

    1.1 實驗動物與分組

    選用清潔級6周齡雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重160~180 g,購于南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場。分籠飼養(yǎng),每籠5只,環(huán)境溫度(25±1)℃,自然光照,每天更換一次墊料,保持籠內干燥。隨機分成4組:正常對照組(C,n=10);運動訓練組(E,n=10);高脂對照組(H,n=10);高脂+運動訓練組(HE,n=10)。高脂飼料的配方為78.8%基礎飼料、10%蛋黃粉、10%豬油、1%膽固醇和0.2%膽鹽[4],由南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場配制。

    1.2 運動訓練方案

    運動組(E、HE)大鼠每天進行無負重的游泳訓練,每周訓練6天,第1周進行適應性訓練,游泳時間在1周之內過渡到60 min,正式運動訓練11周。游泳池為100 cm×70 cm×60 cm長方體水桶,水深50 cm、水溫(33±1)℃。在訓練過程中時刻觀察大鼠游泳狀態(tài)防止溺水死亡或偷懶休息,并及時撈出老鼠糞便,確保泳池水質清潔。

    1.3 實驗取材

    大鼠在末次運動后,禁食12 h,次日晨分別按50 mg/kg的劑量腹腔注射2%的戊巴比妥鈉麻醉,然后腹主動脈取血3 mL,放入無菌試管中,在室溫靜置30 min后,4℃、3 500 rpm離心15 min,在2 h內測定空腹血糖(FBG),其余血清在-80℃冰箱中保存,以備測定空腹血清胰島素(FINS);取大鼠腓腸肌,立刻放入液氮中,再轉入-80℃保存。然后稱量約300 mg的腓腸肌淺層組織,剪碎后移入玻璃勻漿器中,加入預冷的生理鹽水3 mL,在冰浴下仔細研磨制備10%的組織勻漿,并以3 000 rpm低溫離心10 min,取上清液-40℃保存,以備測定骨骼肌中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶(Akt)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和 mTOR含量;稱量80~100 mg的淺層腓腸肌,用Trizol (購自Life technologies)法從骨骼肌組織中提取總RNA后,采用NanoDrop ND-3300微量分光光度計檢測260/ 280吸光度比值,判斷RNA純度。按照cDNA合成試劑盒(購自上海東洋紡生物科技有限公司)中說明書上的操作步驟,使用2720 Thermal Cycler梯度PCR儀(美國)進行cDNA合成,反應結束后,在-20℃條件下保存。

    1.4 指標測試

    FBG采用葡萄糖氧化酶法測定,測定儀器為日立全自動生化分析儀;FINS、骨骼肌PI3K、Akt、AMPK和 mTOR采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定,試劑盒購于上海博古生物科技有限公司,測定儀器為美國產的ELX800型酶標儀;胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=FBG×FINS/22.5。腓腸肌勻漿液中蛋白定量采用BCA法,試劑購于碧云天生物技術研究所,測試儀器為全波長酶標儀;骨骼肌mTOR、S6K1mRNA采用RT-PCR法測定。使用SYBR Green Master(ROX)試劑盒(購自Roche Diagnostics),以cDNA為模板,β-actin為內參,在ABI 7500 RT-PCR儀進行基因擴增。擴增程序為:50℃預處理2 min,95℃預變性10 min,95℃變性15 s,60℃退火60 s共進行40個循環(huán)。程序運行結束后,將目的基因的Ct值與內參GAPDH進行標準化,計算出目的基因的相對表達量。mTOR、S6K1和GAPDH的引物由均由上海生物工程有限公司設計并合成,引物序列見表1。

    表1 mTOR、S6K1和β-actin的引物序列

    1.5 統(tǒng)計分析

    實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理,結果用均數(shù)±標準差(M±SD)表示,H組、E組與C組之間和HE組與H組之間分別采用獨立樣本t檢驗進行比較,P<0.05表示具有顯著性差異,P<0.01表示有非常顯著性差異。

    2 研究結果與分析

    2.1 實驗大鼠FBG、FINS和HOMA-IR的變化

    從表2可見,與C組相比,H組FBG極顯著性升高(P<0.01),F(xiàn)INS和HOMA-IR均顯著性升高(P<0.05);E組FBG降低,但無顯著性差異(P>0.05),F(xiàn)INS極顯著性降低(P<0.01),HOMA-IR顯著性降低(P<0.05)。與H組相比,HE組FINS有顯著性下降(P<0.05),F(xiàn)BG和HOMA-IR有下降趨勢,但沒有顯著性(P>0.05)。

    表2 實驗大鼠FBG、FINS和HOMA-IR的變化

    注:H組、E組與C組相比,*,P<0.05,**,P<0.01;HE組與H組相比,#,P<0.05,##,P<0.01。

    2.2 實驗大鼠骨骼肌mTOR和S6K1含量的變化

    從表3可見,與C組比較,H組骨骼肌mTOR含量和mRNA都有顯著性增加(P<0.05),S6K1mRNA極顯著性升高(P<0.01),E組骨骼肌mTOR含量無顯著性差異,mTOR和S6K1mRNA顯著性下降(P<005)。與H組比較,HE組骨骼肌mTOR含量有所減少,但無顯著性差異(P>0.05),mTOR、S6K1mRNA顯著性減少(P<0.05)

    表3 實驗大鼠骨骼肌mTOR蛋白、mTOR和S6K1 mRNA的變化

    注:H組、E組與C組相比,*,P<0.05,**,P<0.01;HE組與H組相比,#,P<0.05,##,P<0.01。

    2.3 實驗大鼠骨骼肌PI3K、Akt、AMPK含量的變化

    從表4可見,與C組比較,H組骨骼肌PI3K和Akt含量無顯著性差異(P>0.05),E組骨骼肌PI3K含量有所增加,但無顯著性差異(P>0.05),Akt含量顯著性增加(P<0.01);與H組比較,HE組骨骼肌PI3K、Akt含量有增加,但均無顯著性(P>0.05)。與C組比較,E組骨骼肌AMPK含量極顯著性增加(P<0.01),H組骨骼肌AMPK含量下降,但無顯著性差異(P>0.05);與H組比較,HE組骨骼肌AMPK含量有增加趨勢,但無顯著性(P>0.05)。

    表4 實驗大鼠骨骼肌PI3K、AKT、AMPK的變化

    注:*與C組相比;**為P<0.01。

    3 討論

    3.1 mTOR在高脂膳食大鼠骨骼肌IR形成與運動干預中的作用

    與C組相比,11周高脂膳食組大鼠體重、FBG和FIns顯著性升高,且HOMA-IR也顯著性升高,說明高脂膳食組產生了IR。與此同時,與H組相比,HE組空腹胰島素有顯著性下降(P<0.05),空腹血糖和HOMA-IR有所下降,但沒有顯著性(P>0.05),說明長期的運動對高脂誘導的IR有一定的干預作用,但不足以完全改善高脂誘導的IR。

    不少研究發(fā)現(xiàn),mTOR/S6K1信號通路與高脂飲食誘導IR的發(fā)生有著密切的關系[3,5-6]。在正常情況下,mTOR參與機體蛋白質合成、細胞增殖、能量代謝等生理活動,但當外界信號如氨基酸過度刺激導致mTOR持續(xù)高度活化時,mTOR通過反饋性途徑產生IR[5]。本研究發(fā)現(xiàn),與C組比較,H組骨骼肌mTOR含量和mRNA量都有顯著性增加(P<0.05),S6K1mRNA極顯著性升高(P<0.01),說明高脂膳食引起的血糖和胰島素含量的升高激活了骨骼肌mTOR/S6K1信號通路,使IRS絲氨酸過度磷酸化,從而導致胰島素的反應性下降,誘發(fā)IR的出現(xiàn)。實驗表明,8W的高糖高脂膳食可使大鼠產生肥胖、高FFA及炎癥反應,從而成功誘導大鼠產生IR,并使脂肪組織 PI3K表達降低,P70S6K升高[6]。如將db/db小鼠肝臟S6K1基因沉默后,IR有明顯的改善,特別是在空腹狀態(tài)時,增強了胰島素的信號傳導,糖異生水平下降[7] 。探討其機制,炎癥及高脂等狀態(tài)可使mTOR及其下游靶點S6K1活化加強有可能導致IRS-1絲氨酸磷酸化,從而抑制胰島素的作用,引發(fā)機體產生IR[8-10]。RSK(P90核糖體S6K)能有效抑制IRS-1絲氨酸磷酸化,可能是一個新的調節(jié)IR和糖代謝的因子[11]

    研究證實,有氧運動能下調mTOR/S6K1信號通路,增加骨骼肌對胰島素的敏感性,從而改善IR[12]。WangT[13]研究認為,吳茱萸堿可能通過抑制脂肪組織mTOR-S6K信號和IRS1絲氨酸磷酸化,改善葡萄糖耐量,阻止IR的發(fā)生。但是Medeiros C[14]研究發(fā)現(xiàn),運動訓練能夠上調飲食性肥胖大鼠心肌中mTOR/p70S6k信號途徑,促進蛋白質合成。本研究進一步研究了長期有氧運動對高脂膳食大鼠骨骼肌mTOR/p70S6k信號途徑的影響,結果發(fā)現(xiàn),與H組比較,HE組骨骼肌mTOR和S6K1mRNA顯著性下降(P<005),說明長期的有氧運動在一定程度上可下調高脂膳食大鼠骨骼肌mTOR/S6K1mRNA的表達,有效防止IR的形成。

    3.2 在IR形成與運動干預中的mTOR變化的可能機制

    mTOR主要受到PI3K/AKT/mTOR和LKB1/AMPK/mTOR信號通路的調控[15]。PI3K/Akt/mTOR信號通路是胰島素重要的作用途徑,胰島素、生長因子和細胞因子等可激活PI3K,在磷脂酰肌醇依賴的蛋白激酶(PDK)的協(xié)同作用下,導致Akt從胞漿轉位到質膜,并促進Akt的磷酸化,通過mTOR、糖原合成酶激酶-3(GSK-3)等下游底物磷酸化而發(fā)揮廣泛的生物學效應[16]。但當營養(yǎng)水平過剩時,生長因子等通過mTOR和S6K1可反饋調節(jié)PI3K的激活,導致IR。孟艷[17]實驗證實,PI3K-mTOR信號通路持續(xù)激活時,可以通過下調PDGFR-IRS導致細胞胰島素信號通路的傳遞阻滯,發(fā)生IR現(xiàn)象,這與肥胖伴發(fā)的IR和2型糖尿病有著相似的生物學基礎。但本研究發(fā)現(xiàn),與C組比較,11周高脂喂養(yǎng)的大鼠(H組)骨骼肌PI3K和Akt含量無顯著性差異(P>0.05),這可能與實驗方法的選擇以及指標測試的方法不同有關。而長期的有氧運動對IR骨骼肌PI3K/Akt/mTOR信號通路的影響,目前結果并不一致。高晶[18]實驗發(fā)現(xiàn),與糖尿病組比較,8周有氧運動可使骨骼肌PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平均顯著性增加。但Christ-Roberts等研究發(fā)現(xiàn),8周的有氧運動訓練并不能增加超重非糖尿病與2型糖尿病患者骨骼肌中PI3K的活性[19]。在本實驗中,與C組比較,E組骨骼肌PI3K含量有所增加,但無顯著性差異(P>0.05),Akt含量顯著性增加(P<0.01);與H組比較,HE組骨骼肌PI3K、Akt含量有增加,但均無顯著性(P>0.05)。從而進一步說明長期的有氧運動并不能有效地提高高脂膳食大鼠骨骼肌中PI3K、Akt含量。

    AMPK能夠參與細胞和組織的糖脂代謝,調節(jié)機體的能量攝入和消耗。長期高脂飲食可減少肝臟組織AMPKα蛋白的磷酸化和AMPK的活性,影響體內能量代謝[20]。有研究表明,AMPK也是mTOR重要的上游調節(jié)因子。在SD大鼠血管平滑肌細胞中,AICAR激活AMPK可以顯著抑制細胞內mTOR的mRNA表達,并顯著抑制p-mTOR的活性[21]。Saha AK[22]在調節(jié)葡萄糖和亮氨酸誘導的IR實驗中發(fā)現(xiàn),AMPK可下調mTOR/p70S6K活性。電刺激引起的肌肉收縮可激活AMPK,從而減弱Akt/mTOR、S6K1、4E-BP1和eEF2的信號作用,并認為AMPK對PI3K信號通路可發(fā)揮雙重作用,即激活PI3K/Akt和抑制mTOR/p70S6K[23]。AMPK激活后一方面能夠直接磷酸化mTORThr2446位點而抑制其活性[24],另一方面通過激活TSC2而間接抑制mTOR的活性[25]。運動時細胞內AMP/ADP明顯升高,可激活AMPK進而抑制mTOR的活性[26]。而長期的運動訓練可以使骨骼肌細胞AMPK表達水平及其活性顯著升高,從而抑制mTOR的活性[27]。本實驗結果發(fā)現(xiàn),與C組相比,H組大鼠骨骼肌AMPK含量降低,mTOR含量和S6K1mRNA顯著性升高,運動組骨骼肌AMPK含量顯著性增加,高脂運動組骨骼肌mTOR和S6K1mRNA顯著性下降,從而說明AMPK途徑可能參與了運動對mTOR/S6K1信號通路的調節(jié)。由此推斷運動刺激或能量限制引起AMPK的激活,可直接磷酸化mTOR而抑制其活性,從而減輕高脂膳食引起mTOR過度激活而形成的IR。因此,長期的高脂膳食激活mTOR可能引起胰島素受體底物的作用減弱,從而導致IR的發(fā)生;而長期的有氧運動可激活AMPK,導致mTOR的下降,從而改善IR。

    4 結論

    4.1 長期的高脂膳食可激活mTOR/S6K1信號通路,導致胰島素抵抗的發(fā)生。

    4.2 有氧運動可激活AMPK,抑制mTOR的作用,AMPK/mTOR/S6K1可能在運動干預高脂膳食誘導IR形成中起著重要的作用。

    參考文獻:

    [1]Fingar DC,Blenis J.Target of rapamycin(TOR):an integrator of nutrient and growth factor signals and coordinator of cell growth and cell cycle progression [J] .On cogene,2004,23(18):3151-3171.

    [2]牛培廣,史道華.雷帕霉素抑制mTOR 活性調控糖脂代謝的研究進展[J].中國藥師,2010,13(11):1583-1585.

    [3]Niu YM,Yuan H,Zhang N,et al.The relationship between mTOR/S6K1 signaling pathway and insulin resistance and the study of aerobic exercise on this pathway [J].Chinese Journal of Applied Physiology,2010,26(4):399-403.

    [4]田雷,陳鋼.運動對高脂飲食大鼠下丘腦SOCS-3和BDNF以及瘦素抵抗的影響[J].廣州體育學院學報,2013,33(6):85-89

    [5]Vinod PK,Venkatesh KV.Quantification of the effect of amino acids on an integrated mTOR and insulin signaling pathway [J].Mol Biosyst,2009,5(10):1163-1173.

    [6]王艷軍,尤雪娜,趙丹.PI3K、P70S6K在胰島素抵抗大鼠脂肪中的表達及其意義[J].中國老年學雜志,2008,28(6):559-561.

    [7]李樹穎.S6KI在肝臟胰島素抵抗及脂肪肝中作用機制的研究[D].天津:天津醫(yī)科大學,2009.

    [8] Um SH,D'Alessio D,Thomas G.Nutrient overload,insulin resistance,and ribosomal protein S6 kinase 1,S6K1 [J].Cell Metab,2006,3(6):393-402.

    [9]吳瑜,趙蕾,李青,等.高脂飲食致C57BL/6J 小鼠脂肪組織中胰島素受體底物蛋白1異常磷酸化的分子機制[J].重慶醫(yī)科大學學報,2013,38(4):350-354.

    [10]王堯,萬立華,蔣樸,等.觀察炎癥狀態(tài)和高脂狀態(tài)對mTOR/S6K/IRS1-Ser和IRS1-Tyr信號通路表達的影響[J].免疫學雜志,2012,28(6):497-501.

    [11] Smadja-Lamere N,Shum M,Deleris P,et al.Insulin activates RSK(p90 ribosomal S6 kinase) to trigger a new negative feedback loop that regulates insulin signaling for glucose metabolism [J].J Biol Chem,2013,288(43):31165-31176.

    [12]苑紅.mTOR/S6K1信號通路在高脂飲食誘導C57BL/6小鼠胰島素抵抗發(fā)生中的作用及有氧運動對其影響的研究[D].天津:天津體育學院,2008.

    [13] Wang T,Kusudo T,Takeuchi T,et al.Evodiamine inhibits insulin-stimulated mTOR-S6K activation and IRS1 serine phosphorylation in adipocytes and improves glucose tolerance in obese/diabetic mice [J].PLoS One,2013,8(12):e83264

    [14]Medeiros C,F(xiàn)rederico MJ,da Luz G,et al.Exercise training reduces insulin resistance and upregulates the mTOR/p70S6k pathway in cardiac muscle of diet-induced obesity rats [J].J Cell Physiol,2011,226(3):666-674.

    [15]Brazil D P,Hemmings B A.Ten years of protein kinase B signalling:A hard Akt to follow[J].Trend Biochem Sci,2001,26(11):657- 664.

    [16]張明軍.運動對RBP4誘導的胰島素抵抗大鼠骨骼肌 PI3-K表達的影響[J].天津體育學院學報,2010,25(4):482-485.

    [17]孟艷.PI3K-Akt-mTOR信號通路參與調控細胞分化[D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學院,2008.

    [18]高晶.運動對糖尿病大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信號轉導途徑的影響[D].沈陽:中國醫(yī)科大學,2009.

    [19]Christ-Roberts CY,Pratipanawatr T,Pratipanawatr W,et al.Exercise training increases glycogen synthase activity and GLUT4 expression but not insulin signaling in overweight nondiabetic and type 2 diabetic subjects [J].Metabolism,2004,53(9):1233-1242.

    [20]丁曉潔.高脂飲食對大鼠肝臟組織AMPK表達及其活性的影響[J].安徽醫(yī)科大學學報,2009,44(6):680-684.

    [21]張萌.AMPK通過mTOR途徑影響大鼠血管平滑肌細胞增殖的研究[D].廣州:廣州醫(yī)學院,2010.

    [22] Saha AK,Xu XJ,Balon TW,et al.Insulin resistance due to nutrient excess:is it a consequence of AMPK downregulation [J].Cell Cycle,2011,10(20):3447-3451.

    [23]Tao R,Gong J,Luo X,et al.AMPK exerts dual regulatory effects on the PI3K pathway [J].J Mol Signal, 2010,5(1):1-9.

    [24]Cheng SW,F(xiàn)ryer LG,Carling D,et al.Thr 2446 is a novel mammamlian target of rapamycin(mTOR) phosphorylation site regulated by nutrient status [J].J Biol Chem,2004,279:15719-15722.

    [25]Inoki K,Zhu T,Guan K L.TSC2 mediates cellular energy response to control cell growth and surviva [J].Cell,2003,115(5):577-590.

    [26]Matsakas A,Narkar VA.Endurance exercise mimetics in skeletal muscle [J].Curr Sports Med Rep,2010,9(4):227-232.

    [27]張國華,曾凡星.AMPK抑制運動中骨骼肌蛋白合成的研究進展[J].中國運動醫(yī)學雜志,2008 ,27(4):536-539.第31卷第5期2015年10月

    猜你喜歡
    運動干預胰島素抵抗高脂
    高脂血標本對臨床檢驗項目的干擾及消除對策
    盤點與梳理:網(wǎng)絡成癮大學生的運動干預研究
    血清脂聯(lián)素、胰島素抵抗與代謝綜合征的相關性研究
    妊娠期糖尿病與腫瘤壞死因子—α啟動子基因多態(tài)性相關性的研究
    胰島素抵抗與非胰島素抵抗多囊卵巢綜合征的臨床治療分析
    長期有氧運動對高血壓的影響
    體育時空(2016年8期)2016-10-25 20:39:04
    說說“胰島素抵抗”那些事
    大眾健康(2016年9期)2016-10-13 15:34:06
    當代大學生焦慮和抑郁心理的運動干預研究
    教師·中(2016年6期)2016-08-23 21:02:16
    探討運動干預對老年骨質疏松癥患者骨密度及臨床癥狀的影響
    運動降低MG53表達及其在緩解高脂膳食大鼠IR中的作用
    麻豆成人av在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲久久久国产精品| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 免费观看精品视频网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精品二区激情视频| 窝窝影院91人妻| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲 国产 在线| 日本 欧美在线| 亚洲最大成人中文| 国产xxxxx性猛交| 两性夫妻黄色片| 色综合婷婷激情| 在线永久观看黄色视频| x7x7x7水蜜桃| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费高清视频大片| 在线av久久热| 精品电影一区二区在线| 老司机在亚洲福利影院| 88av欧美| 免费高清视频大片| 在线国产一区二区在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲av片天天在线观看| 日韩有码中文字幕| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 日日干狠狠操夜夜爽| 丝袜人妻中文字幕| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产av精品麻豆| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 一本大道久久a久久精品| 好男人在线观看高清免费视频 | 日本免费a在线| 成人av一区二区三区在线看| 精品日产1卡2卡| 99国产精品一区二区三区| 黄片大片在线免费观看| 午夜福利一区二区在线看| 成人精品一区二区免费| 欧美色视频一区免费| 国产一卡二卡三卡精品| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久天堂一区二区三区四区| 久久国产亚洲av麻豆专区| 两人在一起打扑克的视频| 欧美成人性av电影在线观看| 国产xxxxx性猛交| 国产精品99久久99久久久不卡| 黄色片一级片一级黄色片| 国产成人精品在线电影| 妹子高潮喷水视频| 99国产精品免费福利视频| 免费看a级黄色片| 欧美性长视频在线观看| 久久久久久久久久久久大奶| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 757午夜福利合集在线观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 国产人伦9x9x在线观看| 最好的美女福利视频网| 国产成人免费无遮挡视频| 日本 av在线| 国产成人精品久久二区二区免费| 波多野结衣一区麻豆| АⅤ资源中文在线天堂| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲成人免费电影在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲精华国产精华精| 在线永久观看黄色视频| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜久久久在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 91精品三级在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲成国产人片在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 久久久久久久久中文| 热99re8久久精品国产| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产乱人伦免费视频| 免费不卡黄色视频| 亚洲黑人精品在线| 国产野战对白在线观看| 人妻久久中文字幕网| 69av精品久久久久久| 亚洲自拍偷在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 高清在线国产一区| 午夜福利在线观看吧| 99国产精品免费福利视频| 此物有八面人人有两片| 日韩国内少妇激情av| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲精品美女久久av网站| 大型黄色视频在线免费观看| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美乱妇无乱码| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| www日本在线高清视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲人成电影观看| 久久中文字幕人妻熟女| 18禁观看日本| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久九九热精品免费| 电影成人av| 成人av一区二区三区在线看| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久精品国产综合久久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 91麻豆av在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久久久久大精品| 1024香蕉在线观看| 亚洲美女黄片视频| 午夜福利高清视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 老司机深夜福利视频在线观看| 看片在线看免费视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产男靠女视频免费网站| av天堂在线播放| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久这里只有精品19| 性色av乱码一区二区三区2| 精品久久久久久,| 亚洲中文字幕日韩| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 精品久久久久久成人av| 两个人视频免费观看高清| 久久天堂一区二区三区四区| av在线播放免费不卡| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久久国产欧美日韩av| 香蕉久久夜色| 多毛熟女@视频| 一进一出抽搐动态| 18禁观看日本| 中文字幕人妻熟女乱码| 精品国产美女av久久久久小说| 身体一侧抽搐| 亚洲熟女毛片儿| 咕卡用的链子| 亚洲午夜理论影院| 国产片内射在线| 久久伊人香网站| 国产欧美日韩一区二区精品| av有码第一页| 男人舔女人下体高潮全视频| www.自偷自拍.com| 免费无遮挡裸体视频| 91精品国产国语对白视频| 香蕉丝袜av| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品亚洲美女久久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产野战对白在线观看| 亚洲成人久久性| 一二三四在线观看免费中文在| 可以在线观看毛片的网站| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 啪啪无遮挡十八禁网站| 淫秽高清视频在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 电影成人av| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 美国免费a级毛片| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 69精品国产乱码久久久| 成在线人永久免费视频| av视频免费观看在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产97色在线日韩免费| 日韩有码中文字幕| 最近最新免费中文字幕在线| 视频区欧美日本亚洲| 国产精品一区二区三区四区久久 | 香蕉久久夜色| 精品久久久久久久久久免费视频| 狂野欧美激情性xxxx| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 国产日韩一区二区三区精品不卡| 精品日产1卡2卡| 国产麻豆69| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久久久久国产a免费观看| 一区福利在线观看| 韩国精品一区二区三区| 亚洲中文字幕日韩| 香蕉久久夜色| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产成人av教育| 给我免费播放毛片高清在线观看| 51午夜福利影视在线观看| av天堂在线播放| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 亚洲色图综合在线观看| 精品久久蜜臀av无| 一级作爱视频免费观看| 精品国产亚洲在线| 9191精品国产免费久久| 日韩精品中文字幕看吧| 悠悠久久av| 国产精品影院久久| 午夜a级毛片| 亚洲第一青青草原| 国产精品日韩av在线免费观看 | 精品久久久久久成人av| 亚洲国产精品久久男人天堂| 人人澡人人妻人| 国产亚洲精品av在线| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久精品91蜜桃| 婷婷精品国产亚洲av在线| 在线观看一区二区三区| 欧美午夜高清在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 老鸭窝网址在线观看| 午夜福利高清视频| 999久久久国产精品视频| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 精品国产国语对白av| 曰老女人黄片| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 神马国产精品三级电影在线观看 | 大香蕉久久成人网| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产成人影院久久av| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久性视频一级片| 在线观看日韩欧美| 国产区一区二久久| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 成人18禁在线播放| 日韩欧美国产在线观看| 看免费av毛片| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美性长视频在线观看| 日日爽夜夜爽网站| 脱女人内裤的视频| 日日爽夜夜爽网站| 一本大道久久a久久精品| 国产成人精品久久二区二区免费| 色综合婷婷激情| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 欧美性长视频在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 一区二区三区高清视频在线| www.自偷自拍.com| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 成人国产一区最新在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看 | 香蕉国产在线看| 女人被狂操c到高潮| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产熟女xx| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 精品高清国产在线一区| 国产免费男女视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 在线免费观看的www视频| 香蕉丝袜av| 欧美成狂野欧美在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 精品久久久精品久久久| 欧美日韩黄片免| 亚洲片人在线观看| 国产av精品麻豆| 在线观看免费日韩欧美大片| 操美女的视频在线观看| 亚洲第一电影网av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲精品国产区一区二| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 日韩欧美免费精品| 国产色视频综合| 午夜福利成人在线免费观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 757午夜福利合集在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 婷婷六月久久综合丁香| 国产亚洲精品久久久久5区| 久99久视频精品免费| √禁漫天堂资源中文www| 男男h啪啪无遮挡| 国产视频一区二区在线看| 国产成人系列免费观看| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲五月天丁香| e午夜精品久久久久久久| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 午夜免费观看网址| 国产伦人伦偷精品视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 午夜久久久在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲成人精品中文字幕电影| videosex国产| 男人的好看免费观看在线视频 | 欧美日韩精品网址| 国产精品影院久久| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 视频在线观看一区二区三区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 99riav亚洲国产免费| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品国产国语对白av| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 久久久久国产一级毛片高清牌| av网站免费在线观看视频| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲成国产人片在线观看| 国产1区2区3区精品| 欧美日韩黄片免| 亚洲成人国产一区在线观看| 日本a在线网址| 一区在线观看完整版| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲精品av麻豆狂野| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 99re在线观看精品视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 变态另类丝袜制服| 午夜免费激情av| 国产单亲对白刺激| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 91字幕亚洲| 国产精品一区二区三区四区久久 | 乱人伦中国视频| 亚洲av电影在线进入| bbb黄色大片| 人人澡人人妻人| 身体一侧抽搐| 国产精品免费一区二区三区在线| 男女下面插进去视频免费观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 成人永久免费在线观看视频| 自线自在国产av| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日韩高清综合在线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国语自产精品视频在线第100页| 99国产极品粉嫩在线观看| 大陆偷拍与自拍| 精品国产一区二区久久| 色播在线永久视频| 午夜福利高清视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 黄色片一级片一级黄色片| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 日本a在线网址| 精品欧美国产一区二区三| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 悠悠久久av| 美女高潮到喷水免费观看| 国产麻豆69| 欧美日本视频| 午夜免费成人在线视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 精品国产一区二区三区四区第35| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 男人舔女人的私密视频| 久久久精品欧美日韩精品| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 91九色精品人成在线观看| 成人三级黄色视频| 日本免费a在线| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲欧美激情在线| 亚洲成人国产一区在线观看| 亚洲黑人精品在线| 伦理电影免费视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 黄片小视频在线播放| 在线观看免费日韩欧美大片| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品不卡国产一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费 | 美女国产高潮福利片在线看| 女性被躁到高潮视频| 99国产精品99久久久久| svipshipincom国产片| 看免费av毛片| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲精品美女久久av网站| 国产极品粉嫩免费观看在线| 丝袜美足系列| 亚洲精品在线观看二区| 午夜亚洲福利在线播放| √禁漫天堂资源中文www| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 免费av毛片视频| 久久午夜亚洲精品久久| 色播在线永久视频| 波多野结衣av一区二区av| av超薄肉色丝袜交足视频| av天堂久久9| 悠悠久久av| 久久久精品欧美日韩精品| 精品欧美一区二区三区在线| av免费在线观看网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 一区在线观看完整版| 波多野结衣巨乳人妻| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 看免费av毛片| 国产激情欧美一区二区| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 少妇被粗大的猛进出69影院| 嫁个100分男人电影在线观看| 窝窝影院91人妻| 精品人妻1区二区| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美成人免费av一区二区三区| 成人国产综合亚洲| 国产精品免费一区二区三区在线| 大型av网站在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 9191精品国产免费久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 99riav亚洲国产免费| 怎么达到女性高潮| 日韩成人在线观看一区二区三区| 视频在线观看一区二区三区| 欧美一级a爱片免费观看看 | 久久久久九九精品影院| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美在线黄色| 国产精华一区二区三区| 看片在线看免费视频| 亚洲国产精品999在线| 又大又爽又粗| 中文字幕av电影在线播放| 午夜福利欧美成人| 欧美乱妇无乱码| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产欧美日韩一区二区精品| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 免费在线观看完整版高清| 国产国语露脸激情在线看| 成年版毛片免费区| 久久中文看片网| 无人区码免费观看不卡| 精品福利观看| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品久久电影中文字幕| 妹子高潮喷水视频| 大型av网站在线播放| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久狼人影院| 69精品国产乱码久久久| 手机成人av网站| videosex国产| 黄色丝袜av网址大全| 乱人伦中国视频| 又大又爽又粗| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产一卡二卡三卡精品| 在线av久久热| 在线观看www视频免费| 51午夜福利影视在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 身体一侧抽搐| 啪啪无遮挡十八禁网站| 91精品国产国语对白视频| 亚洲国产精品999在线| 好男人在线观看高清免费视频 | 可以在线观看毛片的网站| 国产一区在线观看成人免费| 色播亚洲综合网| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产精品一区二区在线不卡| 波多野结衣高清无吗| 日韩高清综合在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品,欧美在线| 性欧美人与动物交配| 麻豆成人av在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 一本大道久久a久久精品| 丰满的人妻完整版| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 日本三级黄在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| av超薄肉色丝袜交足视频| 无限看片的www在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| x7x7x7水蜜桃| 亚洲熟女毛片儿| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 操出白浆在线播放| 手机成人av网站| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 日韩视频一区二区在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 男人舔女人的私密视频| 夜夜爽天天搞| 午夜日韩欧美国产| 少妇被粗大的猛进出69影院| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 天天添夜夜摸| 久久久久久久久免费视频了| 在线视频色国产色| 亚洲五月天丁香| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久精品国产清高在天天线| 在线观看免费午夜福利视频| 国产乱人伦免费视频| 90打野战视频偷拍视频| 久久热在线av| 午夜福利一区二区在线看| 少妇的丰满在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 99riav亚洲国产免费| 国产成+人综合+亚洲专区| 黄色视频不卡| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 一级作爱视频免费观看| 手机成人av网站| 国产成人精品在线电影| 亚洲在线自拍视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 日本欧美视频一区| 精品欧美国产一区二区三| 日本黄色视频三级网站网址| 欧美在线一区亚洲| 亚洲午夜理论影院| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美在线黄色| 国产极品粉嫩免费观看在线| 精品国产亚洲在线| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲自拍偷在线| 欧美色欧美亚洲另类二区 | 禁无遮挡网站| 一二三四在线观看免费中文在| 性色av乱码一区二区三区2| 久久久久久久久中文| 99国产精品免费福利视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 在线观看免费视频网站a站| 极品人妻少妇av视频| 97碰自拍视频| 黄色片一级片一级黄色片| 久久精品91蜜桃| 视频在线观看一区二区三区| 9热在线视频观看99| 亚洲七黄色美女视频| 美国免费a级毛片| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲专区国产一区二区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 在线观看舔阴道视频| 国产一区二区在线av高清观看| 日日爽夜夜爽网站| 天堂√8在线中文| 丁香六月欧美| 亚洲熟妇熟女久久| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 女人精品久久久久毛片| 亚洲少妇的诱惑av| 国产97色在线日韩免费| 国产精品影院久久| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 午夜影院日韩av| e午夜精品久久久久久久| 国产三级在线视频| 欧美中文日本在线观看视频| 国产在线观看jvid| 婷婷丁香在线五月| 一区福利在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲视频免费观看视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 一进一出好大好爽视频|