• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    mTOR在運動干預高脂膳食大鼠胰島素抵抗形成中的作用及機制研究

    2015-12-31 20:34:43劉霞孫青陳志軍
    山東體育學院學報 2015年5期
    關鍵詞:運動干預胰島素抵抗高脂

    劉霞 孫青 陳志軍

    摘 要:目的:探討哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在高脂膳食誘導胰島素抵抗(IR)的形成及運動干預中的作用。方法:選用清潔級的雄性SD大鼠40只,隨機分為4組:正常對照組(C組,n=10);高脂膳食組(H,n=10);游泳運動組(E,n=10);高脂膳食+游泳運動組(HE,n=10)。按實驗要求分別給予普通飼料和高脂飼料,E、HE組每天無負重游泳運動1小時。11周后檢測各組大鼠空腹血糖(FBG)、血清胰島素(FBG)、骨骼肌AMPK、PI3K、Akt、mTOR、S6K1的表達量。結果:1)與C組相比,H組FBG、FINS、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)均顯著性升高(P<001)(P<0.05),E組FINS極顯著性下降(P<0.01);與H組相比,HE組FINS顯著性下降(P<0.05)。2)與C組比較,H組骨骼肌mTOR含量和mRNA都有顯著性增加(P<0.05),S6K1mRNA極顯著性升高(P<0.01);與H組比較,HE組骨骼肌mTOR、S6K1mRNA顯著性減少(P<0.05)。3)與C組比較, E組骨骼肌Akt和AMPK含量顯著性增加(P<0.01);與H組比較,HE組骨骼肌PI3K、Akt、AMPK含量有增加,但均無顯著性(P>0.05)。結論:1)長期的高脂膳食可激活mTOR/S6K1信號通路,導致胰島素抵抗的發(fā)生。2)有氧運動激活AMPK,抑制mTOR的作用,AMPK/mTOR/S6K1可能在運動干預高脂膳食誘導IR形成中起著重要的作用。

    關鍵詞:高脂;胰島素抵抗;運動干預; mTOR;AMPK

    中圖分類號:G804.7 文獻標識碼:A 文章編號:1006-2076(2015)05-0057-05

    Abstract:Objective:Explore the effect of mTOR on the generation of insulin resistance of high-fat diet and exercise induced.Methods:40 Sprague-Dawley(SD)male rats were randomly divided into control group(C,n=10),High-Fat Diet Rats(H,n=10),Swimming Exercise Rats(E,n=10) and High-Fat Diet+Swimming Exercise Rats(HE,n=10).According to the acquirement, they should be fed separately normal diet and high-fat diet.Rats in group E and group HE were both asked to swim for one hour with non-weight bearing everyday.After 11weeks,measuring the content of FBG,F(xiàn)INS,the expression of AMPK,PI3K,Akt,mTOR,S6K1 in skeletal muscles.Results:1)Compared with group C,

    哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,是胰島素經(jīng)典PI3K/AKT信號通路的下游靶蛋白,受營養(yǎng)物質、能量變化以及生長因子的激活,可調控蛋白質合成、細胞生長和增殖[1]。已有研究發(fā)現(xiàn),mTOR與胰島素抵抗(IR)的關系密切,外界信號刺激導致mTOR持續(xù)高度活化時,mTOR可通過負反饋途徑引起胰島素受體底物-1(IRS-1)絲氨酸磷酸化是IR形成的主要原因[2]。而NiuYM[3]等研究發(fā)現(xiàn),mTOR/S6K1信號通路與高脂飲食誘導IR的發(fā)生有著密切的關系,有氧運動可能是通過抑制mTOR/S6K1信號通路,使IR得到改善,但其調控機制尚不清楚,為此本研究將通過高脂膳食誘導IR形成的同時進行運動干預,來進一步探討mTOR與IR的關系以及運動對mTOR的調控機制。

    1 研究對象與方法

    1.1 實驗動物與分組

    選用清潔級6周齡雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,體重160~180 g,購于南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場。分籠飼養(yǎng),每籠5只,環(huán)境溫度(25±1)℃,自然光照,每天更換一次墊料,保持籠內干燥。隨機分成4組:正常對照組(C,n=10);運動訓練組(E,n=10);高脂對照組(H,n=10);高脂+運動訓練組(HE,n=10)。高脂飼料的配方為78.8%基礎飼料、10%蛋黃粉、10%豬油、1%膽固醇和0.2%膽鹽[4],由南京市江寧區(qū)青龍山動物繁殖場配制。

    1.2 運動訓練方案

    運動組(E、HE)大鼠每天進行無負重的游泳訓練,每周訓練6天,第1周進行適應性訓練,游泳時間在1周之內過渡到60 min,正式運動訓練11周。游泳池為100 cm×70 cm×60 cm長方體水桶,水深50 cm、水溫(33±1)℃。在訓練過程中時刻觀察大鼠游泳狀態(tài)防止溺水死亡或偷懶休息,并及時撈出老鼠糞便,確保泳池水質清潔。

    1.3 實驗取材

    大鼠在末次運動后,禁食12 h,次日晨分別按50 mg/kg的劑量腹腔注射2%的戊巴比妥鈉麻醉,然后腹主動脈取血3 mL,放入無菌試管中,在室溫靜置30 min后,4℃、3 500 rpm離心15 min,在2 h內測定空腹血糖(FBG),其余血清在-80℃冰箱中保存,以備測定空腹血清胰島素(FINS);取大鼠腓腸肌,立刻放入液氮中,再轉入-80℃保存。然后稱量約300 mg的腓腸肌淺層組織,剪碎后移入玻璃勻漿器中,加入預冷的生理鹽水3 mL,在冰浴下仔細研磨制備10%的組織勻漿,并以3 000 rpm低溫離心10 min,取上清液-40℃保存,以備測定骨骼肌中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶(Akt)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和 mTOR含量;稱量80~100 mg的淺層腓腸肌,用Trizol (購自Life technologies)法從骨骼肌組織中提取總RNA后,采用NanoDrop ND-3300微量分光光度計檢測260/ 280吸光度比值,判斷RNA純度。按照cDNA合成試劑盒(購自上海東洋紡生物科技有限公司)中說明書上的操作步驟,使用2720 Thermal Cycler梯度PCR儀(美國)進行cDNA合成,反應結束后,在-20℃條件下保存。

    1.4 指標測試

    FBG采用葡萄糖氧化酶法測定,測定儀器為日立全自動生化分析儀;FINS、骨骼肌PI3K、Akt、AMPK和 mTOR采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定,試劑盒購于上海博古生物科技有限公司,測定儀器為美國產的ELX800型酶標儀;胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)=FBG×FINS/22.5。腓腸肌勻漿液中蛋白定量采用BCA法,試劑購于碧云天生物技術研究所,測試儀器為全波長酶標儀;骨骼肌mTOR、S6K1mRNA采用RT-PCR法測定。使用SYBR Green Master(ROX)試劑盒(購自Roche Diagnostics),以cDNA為模板,β-actin為內參,在ABI 7500 RT-PCR儀進行基因擴增。擴增程序為:50℃預處理2 min,95℃預變性10 min,95℃變性15 s,60℃退火60 s共進行40個循環(huán)。程序運行結束后,將目的基因的Ct值與內參GAPDH進行標準化,計算出目的基因的相對表達量。mTOR、S6K1和GAPDH的引物由均由上海生物工程有限公司設計并合成,引物序列見表1。

    表1 mTOR、S6K1和β-actin的引物序列

    1.5 統(tǒng)計分析

    實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理,結果用均數(shù)±標準差(M±SD)表示,H組、E組與C組之間和HE組與H組之間分別采用獨立樣本t檢驗進行比較,P<0.05表示具有顯著性差異,P<0.01表示有非常顯著性差異。

    2 研究結果與分析

    2.1 實驗大鼠FBG、FINS和HOMA-IR的變化

    從表2可見,與C組相比,H組FBG極顯著性升高(P<0.01),F(xiàn)INS和HOMA-IR均顯著性升高(P<0.05);E組FBG降低,但無顯著性差異(P>0.05),F(xiàn)INS極顯著性降低(P<0.01),HOMA-IR顯著性降低(P<0.05)。與H組相比,HE組FINS有顯著性下降(P<0.05),F(xiàn)BG和HOMA-IR有下降趨勢,但沒有顯著性(P>0.05)。

    表2 實驗大鼠FBG、FINS和HOMA-IR的變化

    注:H組、E組與C組相比,*,P<0.05,**,P<0.01;HE組與H組相比,#,P<0.05,##,P<0.01。

    2.2 實驗大鼠骨骼肌mTOR和S6K1含量的變化

    從表3可見,與C組比較,H組骨骼肌mTOR含量和mRNA都有顯著性增加(P<0.05),S6K1mRNA極顯著性升高(P<0.01),E組骨骼肌mTOR含量無顯著性差異,mTOR和S6K1mRNA顯著性下降(P<005)。與H組比較,HE組骨骼肌mTOR含量有所減少,但無顯著性差異(P>0.05),mTOR、S6K1mRNA顯著性減少(P<0.05)

    表3 實驗大鼠骨骼肌mTOR蛋白、mTOR和S6K1 mRNA的變化

    注:H組、E組與C組相比,*,P<0.05,**,P<0.01;HE組與H組相比,#,P<0.05,##,P<0.01。

    2.3 實驗大鼠骨骼肌PI3K、Akt、AMPK含量的變化

    從表4可見,與C組比較,H組骨骼肌PI3K和Akt含量無顯著性差異(P>0.05),E組骨骼肌PI3K含量有所增加,但無顯著性差異(P>0.05),Akt含量顯著性增加(P<0.01);與H組比較,HE組骨骼肌PI3K、Akt含量有增加,但均無顯著性(P>0.05)。與C組比較,E組骨骼肌AMPK含量極顯著性增加(P<0.01),H組骨骼肌AMPK含量下降,但無顯著性差異(P>0.05);與H組比較,HE組骨骼肌AMPK含量有增加趨勢,但無顯著性(P>0.05)。

    表4 實驗大鼠骨骼肌PI3K、AKT、AMPK的變化

    注:*與C組相比;**為P<0.01。

    3 討論

    3.1 mTOR在高脂膳食大鼠骨骼肌IR形成與運動干預中的作用

    與C組相比,11周高脂膳食組大鼠體重、FBG和FIns顯著性升高,且HOMA-IR也顯著性升高,說明高脂膳食組產生了IR。與此同時,與H組相比,HE組空腹胰島素有顯著性下降(P<0.05),空腹血糖和HOMA-IR有所下降,但沒有顯著性(P>0.05),說明長期的運動對高脂誘導的IR有一定的干預作用,但不足以完全改善高脂誘導的IR。

    不少研究發(fā)現(xiàn),mTOR/S6K1信號通路與高脂飲食誘導IR的發(fā)生有著密切的關系[3,5-6]。在正常情況下,mTOR參與機體蛋白質合成、細胞增殖、能量代謝等生理活動,但當外界信號如氨基酸過度刺激導致mTOR持續(xù)高度活化時,mTOR通過反饋性途徑產生IR[5]。本研究發(fā)現(xiàn),與C組比較,H組骨骼肌mTOR含量和mRNA量都有顯著性增加(P<0.05),S6K1mRNA極顯著性升高(P<0.01),說明高脂膳食引起的血糖和胰島素含量的升高激活了骨骼肌mTOR/S6K1信號通路,使IRS絲氨酸過度磷酸化,從而導致胰島素的反應性下降,誘發(fā)IR的出現(xiàn)。實驗表明,8W的高糖高脂膳食可使大鼠產生肥胖、高FFA及炎癥反應,從而成功誘導大鼠產生IR,并使脂肪組織 PI3K表達降低,P70S6K升高[6]。如將db/db小鼠肝臟S6K1基因沉默后,IR有明顯的改善,特別是在空腹狀態(tài)時,增強了胰島素的信號傳導,糖異生水平下降[7] 。探討其機制,炎癥及高脂等狀態(tài)可使mTOR及其下游靶點S6K1活化加強有可能導致IRS-1絲氨酸磷酸化,從而抑制胰島素的作用,引發(fā)機體產生IR[8-10]。RSK(P90核糖體S6K)能有效抑制IRS-1絲氨酸磷酸化,可能是一個新的調節(jié)IR和糖代謝的因子[11]

    研究證實,有氧運動能下調mTOR/S6K1信號通路,增加骨骼肌對胰島素的敏感性,從而改善IR[12]。WangT[13]研究認為,吳茱萸堿可能通過抑制脂肪組織mTOR-S6K信號和IRS1絲氨酸磷酸化,改善葡萄糖耐量,阻止IR的發(fā)生。但是Medeiros C[14]研究發(fā)現(xiàn),運動訓練能夠上調飲食性肥胖大鼠心肌中mTOR/p70S6k信號途徑,促進蛋白質合成。本研究進一步研究了長期有氧運動對高脂膳食大鼠骨骼肌mTOR/p70S6k信號途徑的影響,結果發(fā)現(xiàn),與H組比較,HE組骨骼肌mTOR和S6K1mRNA顯著性下降(P<005),說明長期的有氧運動在一定程度上可下調高脂膳食大鼠骨骼肌mTOR/S6K1mRNA的表達,有效防止IR的形成。

    3.2 在IR形成與運動干預中的mTOR變化的可能機制

    mTOR主要受到PI3K/AKT/mTOR和LKB1/AMPK/mTOR信號通路的調控[15]。PI3K/Akt/mTOR信號通路是胰島素重要的作用途徑,胰島素、生長因子和細胞因子等可激活PI3K,在磷脂酰肌醇依賴的蛋白激酶(PDK)的協(xié)同作用下,導致Akt從胞漿轉位到質膜,并促進Akt的磷酸化,通過mTOR、糖原合成酶激酶-3(GSK-3)等下游底物磷酸化而發(fā)揮廣泛的生物學效應[16]。但當營養(yǎng)水平過剩時,生長因子等通過mTOR和S6K1可反饋調節(jié)PI3K的激活,導致IR。孟艷[17]實驗證實,PI3K-mTOR信號通路持續(xù)激活時,可以通過下調PDGFR-IRS導致細胞胰島素信號通路的傳遞阻滯,發(fā)生IR現(xiàn)象,這與肥胖伴發(fā)的IR和2型糖尿病有著相似的生物學基礎。但本研究發(fā)現(xiàn),與C組比較,11周高脂喂養(yǎng)的大鼠(H組)骨骼肌PI3K和Akt含量無顯著性差異(P>0.05),這可能與實驗方法的選擇以及指標測試的方法不同有關。而長期的有氧運動對IR骨骼肌PI3K/Akt/mTOR信號通路的影響,目前結果并不一致。高晶[18]實驗發(fā)現(xiàn),與糖尿病組比較,8周有氧運動可使骨骼肌PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平均顯著性增加。但Christ-Roberts等研究發(fā)現(xiàn),8周的有氧運動訓練并不能增加超重非糖尿病與2型糖尿病患者骨骼肌中PI3K的活性[19]。在本實驗中,與C組比較,E組骨骼肌PI3K含量有所增加,但無顯著性差異(P>0.05),Akt含量顯著性增加(P<0.01);與H組比較,HE組骨骼肌PI3K、Akt含量有增加,但均無顯著性(P>0.05)。從而進一步說明長期的有氧運動并不能有效地提高高脂膳食大鼠骨骼肌中PI3K、Akt含量。

    AMPK能夠參與細胞和組織的糖脂代謝,調節(jié)機體的能量攝入和消耗。長期高脂飲食可減少肝臟組織AMPKα蛋白的磷酸化和AMPK的活性,影響體內能量代謝[20]。有研究表明,AMPK也是mTOR重要的上游調節(jié)因子。在SD大鼠血管平滑肌細胞中,AICAR激活AMPK可以顯著抑制細胞內mTOR的mRNA表達,并顯著抑制p-mTOR的活性[21]。Saha AK[22]在調節(jié)葡萄糖和亮氨酸誘導的IR實驗中發(fā)現(xiàn),AMPK可下調mTOR/p70S6K活性。電刺激引起的肌肉收縮可激活AMPK,從而減弱Akt/mTOR、S6K1、4E-BP1和eEF2的信號作用,并認為AMPK對PI3K信號通路可發(fā)揮雙重作用,即激活PI3K/Akt和抑制mTOR/p70S6K[23]。AMPK激活后一方面能夠直接磷酸化mTORThr2446位點而抑制其活性[24],另一方面通過激活TSC2而間接抑制mTOR的活性[25]。運動時細胞內AMP/ADP明顯升高,可激活AMPK進而抑制mTOR的活性[26]。而長期的運動訓練可以使骨骼肌細胞AMPK表達水平及其活性顯著升高,從而抑制mTOR的活性[27]。本實驗結果發(fā)現(xiàn),與C組相比,H組大鼠骨骼肌AMPK含量降低,mTOR含量和S6K1mRNA顯著性升高,運動組骨骼肌AMPK含量顯著性增加,高脂運動組骨骼肌mTOR和S6K1mRNA顯著性下降,從而說明AMPK途徑可能參與了運動對mTOR/S6K1信號通路的調節(jié)。由此推斷運動刺激或能量限制引起AMPK的激活,可直接磷酸化mTOR而抑制其活性,從而減輕高脂膳食引起mTOR過度激活而形成的IR。因此,長期的高脂膳食激活mTOR可能引起胰島素受體底物的作用減弱,從而導致IR的發(fā)生;而長期的有氧運動可激活AMPK,導致mTOR的下降,從而改善IR。

    4 結論

    4.1 長期的高脂膳食可激活mTOR/S6K1信號通路,導致胰島素抵抗的發(fā)生。

    4.2 有氧運動可激活AMPK,抑制mTOR的作用,AMPK/mTOR/S6K1可能在運動干預高脂膳食誘導IR形成中起著重要的作用。

    參考文獻:

    [1]Fingar DC,Blenis J.Target of rapamycin(TOR):an integrator of nutrient and growth factor signals and coordinator of cell growth and cell cycle progression [J] .On cogene,2004,23(18):3151-3171.

    [2]牛培廣,史道華.雷帕霉素抑制mTOR 活性調控糖脂代謝的研究進展[J].中國藥師,2010,13(11):1583-1585.

    [3]Niu YM,Yuan H,Zhang N,et al.The relationship between mTOR/S6K1 signaling pathway and insulin resistance and the study of aerobic exercise on this pathway [J].Chinese Journal of Applied Physiology,2010,26(4):399-403.

    [4]田雷,陳鋼.運動對高脂飲食大鼠下丘腦SOCS-3和BDNF以及瘦素抵抗的影響[J].廣州體育學院學報,2013,33(6):85-89

    [5]Vinod PK,Venkatesh KV.Quantification of the effect of amino acids on an integrated mTOR and insulin signaling pathway [J].Mol Biosyst,2009,5(10):1163-1173.

    [6]王艷軍,尤雪娜,趙丹.PI3K、P70S6K在胰島素抵抗大鼠脂肪中的表達及其意義[J].中國老年學雜志,2008,28(6):559-561.

    [7]李樹穎.S6KI在肝臟胰島素抵抗及脂肪肝中作用機制的研究[D].天津:天津醫(yī)科大學,2009.

    [8] Um SH,D'Alessio D,Thomas G.Nutrient overload,insulin resistance,and ribosomal protein S6 kinase 1,S6K1 [J].Cell Metab,2006,3(6):393-402.

    [9]吳瑜,趙蕾,李青,等.高脂飲食致C57BL/6J 小鼠脂肪組織中胰島素受體底物蛋白1異常磷酸化的分子機制[J].重慶醫(yī)科大學學報,2013,38(4):350-354.

    [10]王堯,萬立華,蔣樸,等.觀察炎癥狀態(tài)和高脂狀態(tài)對mTOR/S6K/IRS1-Ser和IRS1-Tyr信號通路表達的影響[J].免疫學雜志,2012,28(6):497-501.

    [11] Smadja-Lamere N,Shum M,Deleris P,et al.Insulin activates RSK(p90 ribosomal S6 kinase) to trigger a new negative feedback loop that regulates insulin signaling for glucose metabolism [J].J Biol Chem,2013,288(43):31165-31176.

    [12]苑紅.mTOR/S6K1信號通路在高脂飲食誘導C57BL/6小鼠胰島素抵抗發(fā)生中的作用及有氧運動對其影響的研究[D].天津:天津體育學院,2008.

    [13] Wang T,Kusudo T,Takeuchi T,et al.Evodiamine inhibits insulin-stimulated mTOR-S6K activation and IRS1 serine phosphorylation in adipocytes and improves glucose tolerance in obese/diabetic mice [J].PLoS One,2013,8(12):e83264

    [14]Medeiros C,F(xiàn)rederico MJ,da Luz G,et al.Exercise training reduces insulin resistance and upregulates the mTOR/p70S6k pathway in cardiac muscle of diet-induced obesity rats [J].J Cell Physiol,2011,226(3):666-674.

    [15]Brazil D P,Hemmings B A.Ten years of protein kinase B signalling:A hard Akt to follow[J].Trend Biochem Sci,2001,26(11):657- 664.

    [16]張明軍.運動對RBP4誘導的胰島素抵抗大鼠骨骼肌 PI3-K表達的影響[J].天津體育學院學報,2010,25(4):482-485.

    [17]孟艷.PI3K-Akt-mTOR信號通路參與調控細胞分化[D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學院,2008.

    [18]高晶.運動對糖尿病大鼠骨骼肌PI3K/PKB/mTOR信號轉導途徑的影響[D].沈陽:中國醫(yī)科大學,2009.

    [19]Christ-Roberts CY,Pratipanawatr T,Pratipanawatr W,et al.Exercise training increases glycogen synthase activity and GLUT4 expression but not insulin signaling in overweight nondiabetic and type 2 diabetic subjects [J].Metabolism,2004,53(9):1233-1242.

    [20]丁曉潔.高脂飲食對大鼠肝臟組織AMPK表達及其活性的影響[J].安徽醫(yī)科大學學報,2009,44(6):680-684.

    [21]張萌.AMPK通過mTOR途徑影響大鼠血管平滑肌細胞增殖的研究[D].廣州:廣州醫(yī)學院,2010.

    [22] Saha AK,Xu XJ,Balon TW,et al.Insulin resistance due to nutrient excess:is it a consequence of AMPK downregulation [J].Cell Cycle,2011,10(20):3447-3451.

    [23]Tao R,Gong J,Luo X,et al.AMPK exerts dual regulatory effects on the PI3K pathway [J].J Mol Signal, 2010,5(1):1-9.

    [24]Cheng SW,F(xiàn)ryer LG,Carling D,et al.Thr 2446 is a novel mammamlian target of rapamycin(mTOR) phosphorylation site regulated by nutrient status [J].J Biol Chem,2004,279:15719-15722.

    [25]Inoki K,Zhu T,Guan K L.TSC2 mediates cellular energy response to control cell growth and surviva [J].Cell,2003,115(5):577-590.

    [26]Matsakas A,Narkar VA.Endurance exercise mimetics in skeletal muscle [J].Curr Sports Med Rep,2010,9(4):227-232.

    [27]張國華,曾凡星.AMPK抑制運動中骨骼肌蛋白合成的研究進展[J].中國運動醫(yī)學雜志,2008 ,27(4):536-539.第31卷第5期2015年10月

    猜你喜歡
    運動干預胰島素抵抗高脂
    高脂血標本對臨床檢驗項目的干擾及消除對策
    盤點與梳理:網(wǎng)絡成癮大學生的運動干預研究
    血清脂聯(lián)素、胰島素抵抗與代謝綜合征的相關性研究
    妊娠期糖尿病與腫瘤壞死因子—α啟動子基因多態(tài)性相關性的研究
    胰島素抵抗與非胰島素抵抗多囊卵巢綜合征的臨床治療分析
    長期有氧運動對高血壓的影響
    體育時空(2016年8期)2016-10-25 20:39:04
    說說“胰島素抵抗”那些事
    大眾健康(2016年9期)2016-10-13 15:34:06
    當代大學生焦慮和抑郁心理的運動干預研究
    教師·中(2016年6期)2016-08-23 21:02:16
    探討運動干預對老年骨質疏松癥患者骨密度及臨床癥狀的影響
    運動降低MG53表達及其在緩解高脂膳食大鼠IR中的作用
    国产黄片美女视频| 亚洲专区国产一区二区| 久久久久久大精品| av在线观看视频网站免费| 我的老师免费观看完整版| 国产一区二区在线观看日韩| 久久久久久久久大av| 亚洲综合色惰| 精品乱码久久久久久99久播| 日韩强制内射视频| 一区二区三区四区激情视频 | 长腿黑丝高跟| 亚洲精品成人久久久久久| 欧美日韩在线观看h| 亚洲欧美日韩无卡精品| 精品人妻视频免费看| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产午夜福利久久久久久| 日日啪夜夜撸| 国产不卡一卡二| 国产精品一及| 国产一区亚洲一区在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 色播亚洲综合网| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 性插视频无遮挡在线免费观看| 波野结衣二区三区在线| 国产成人freesex在线 | 丰满乱子伦码专区| 一级毛片久久久久久久久女| 中国美女看黄片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩亚洲欧美综合| 天堂动漫精品| 我要看日韩黄色一级片| 亚州av有码| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 两个人视频免费观看高清| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久久国产成人免费| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久韩国三级中文字幕| 久久午夜福利片| a级毛色黄片| 淫妇啪啪啪对白视频| 高清毛片免费看| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 男人舔奶头视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日韩强制内射视频| 国产成人影院久久av| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲四区av| 少妇熟女欧美另类| 成人二区视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 中文字幕久久专区| 国内精品一区二区在线观看| 亚洲最大成人中文| 免费看a级黄色片| 国产亚洲91精品色在线| 色播亚洲综合网| 晚上一个人看的免费电影| 久久久精品大字幕| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产成人freesex在线 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 最近的中文字幕免费完整| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 欧美中文日本在线观看视频| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 中文字幕熟女人妻在线| 精品久久久久久久末码| 久99久视频精品免费| 校园春色视频在线观看| 在线国产一区二区在线| 国产视频一区二区在线看| 两个人的视频大全免费| 黄片wwwwww| 丰满乱子伦码专区| 亚洲va在线va天堂va国产| 夜夜夜夜夜久久久久| av在线老鸭窝| 搞女人的毛片| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久久久伊人网av| 综合色av麻豆| 午夜精品在线福利| 色尼玛亚洲综合影院| 少妇熟女aⅴ在线视频| eeuss影院久久| 久久6这里有精品| 蜜桃久久精品国产亚洲av| av福利片在线观看| 国产私拍福利视频在线观看| 久99久视频精品免费| 18+在线观看网站| 免费看a级黄色片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产极品精品免费视频能看的| 精华霜和精华液先用哪个| 久久99热这里只有精品18| 有码 亚洲区| 欧美一区二区亚洲| av在线天堂中文字幕| 国产成人aa在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 久久久久久久久久成人| 免费观看在线日韩| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲最大成人av| 在现免费观看毛片| 色视频www国产| 看片在线看免费视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 一区二区三区高清视频在线| 亚洲av中文av极速乱| 国产精品免费一区二区三区在线| 一个人免费在线观看电影| 国产真实乱freesex| 国产精品久久久久久久久免| 看片在线看免费视频| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产伦精品一区二区三区视频9| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美区成人在线视频| 悠悠久久av| 日日啪夜夜撸| 波多野结衣高清作品| 午夜亚洲福利在线播放| 一级黄片播放器| 天堂网av新在线| av福利片在线观看| 亚洲精品成人久久久久久| 最近视频中文字幕2019在线8| 日本一二三区视频观看| 国产久久久一区二区三区| 伦精品一区二区三区| 男女啪啪激烈高潮av片| 久久中文看片网| 两个人视频免费观看高清| 桃色一区二区三区在线观看| av专区在线播放| 国产免费一级a男人的天堂| 久久人人爽人人爽人人片va| or卡值多少钱| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲,欧美,日韩| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 欧美日本亚洲视频在线播放| 哪里可以看免费的av片| www.色视频.com| 成人漫画全彩无遮挡| 久久国内精品自在自线图片| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产伦在线观看视频一区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产成人影院久久av| 亚洲美女搞黄在线观看 | 99热网站在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 最近的中文字幕免费完整| 男女那种视频在线观看| 免费av毛片视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 午夜精品国产一区二区电影 | 午夜爱爱视频在线播放| 国产大屁股一区二区在线视频| av天堂中文字幕网| 国产成人91sexporn| 欧美在线一区亚洲| 人妻久久中文字幕网| 国产精品乱码一区二三区的特点| 无遮挡黄片免费观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 秋霞在线观看毛片| 久久久久久久久中文| 人人妻人人澡欧美一区二区| a级毛片a级免费在线| 成人av在线播放网站| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品一区二区三区人妻视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 日本欧美国产在线视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲av中文av极速乱| 露出奶头的视频| 一级黄片播放器| 免费av观看视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久精品国产自在天天线| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 天美传媒精品一区二区| 51国产日韩欧美| av黄色大香蕉| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产不卡一卡二| 久久午夜福利片| 免费看av在线观看网站| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 国产精品久久久久久久久免| 久久人妻av系列| av天堂中文字幕网| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 久久久久久久午夜电影| 99国产精品一区二区蜜桃av| 一级毛片我不卡| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产亚洲欧美98| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 午夜福利高清视频| 91久久精品国产一区二区三区| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲中文日韩欧美视频| 日本五十路高清| av在线播放精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲无线在线观看| 极品教师在线视频| 成人综合一区亚洲| 欧美+亚洲+日韩+国产| 黄色视频,在线免费观看| 久久人人爽人人片av| 99精品在免费线老司机午夜| 日本黄色视频三级网站网址| 成人特级av手机在线观看| 午夜激情欧美在线| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 99在线视频只有这里精品首页| 久久久久精品国产欧美久久久| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 22中文网久久字幕| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 最近视频中文字幕2019在线8| 1024手机看黄色片| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 色综合站精品国产| 欧美xxxx性猛交bbbb| 欧美xxxx性猛交bbbb| 热99re8久久精品国产| 97超碰精品成人国产| 亚洲成人中文字幕在线播放| 美女内射精品一级片tv| 日本一本二区三区精品| 又粗又爽又猛毛片免费看| 99九九线精品视频在线观看视频| 性欧美人与动物交配| 18+在线观看网站| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美精品国产亚洲| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲经典国产精华液单| 成年版毛片免费区| 日本爱情动作片www.在线观看 | 在线观看免费视频日本深夜| 看片在线看免费视频| 午夜日韩欧美国产| 亚洲人成网站高清观看| 天天躁日日操中文字幕| 一本久久中文字幕| 美女高潮的动态| 俺也久久电影网| 国产中年淑女户外野战色| 色视频www国产| 成年免费大片在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久久a久久爽久久v久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品国内亚洲2022精品成人| 国内精品久久久久精免费| 在线播放国产精品三级| 亚洲人成网站在线观看播放| 免费看光身美女| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美又色又爽又黄视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日本一二三区视频观看| 99热6这里只有精品| 成人精品一区二区免费| 国产乱人视频| 97在线视频观看| 99久国产av精品国产电影| 日本三级黄在线观看| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲精品在线观看二区| 国产精品无大码| 丰满乱子伦码专区| 日本爱情动作片www.在线观看 | 日韩国内少妇激情av| 大型黄色视频在线免费观看| 婷婷六月久久综合丁香| 99热网站在线观看| 热99在线观看视频| 亚洲国产欧美人成| 国模一区二区三区四区视频| 一级黄片播放器| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 成人亚洲欧美一区二区av| 欧美潮喷喷水| 乱码一卡2卡4卡精品| 天堂影院成人在线观看| 最近的中文字幕免费完整| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美高清性xxxxhd video| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩一区二区视频免费看| 成年版毛片免费区| 国产精品国产高清国产av| 美女免费视频网站| 99热这里只有是精品在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| av在线播放精品| 成人一区二区视频在线观看| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 如何舔出高潮| 国产 一区精品| 乱系列少妇在线播放| 日本黄大片高清| 亚洲va在线va天堂va国产| 日韩精品中文字幕看吧| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 九色成人免费人妻av| 国产av一区在线观看免费| 精华霜和精华液先用哪个| 午夜激情欧美在线| 中文字幕av成人在线电影| 高清毛片免费观看视频网站| av天堂中文字幕网| 我要搜黄色片| 国产精品一区二区免费欧美| 我的女老师完整版在线观看| 精品久久久久久成人av| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲精品一区av在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 国产极品精品免费视频能看的| 91在线精品国自产拍蜜月| 内射极品少妇av片p| 久久久久久国产a免费观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日韩欧美三级三区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久精品国产清高在天天线| 日韩欧美国产在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 欧美日韩在线观看h| 一级黄片播放器| 97碰自拍视频| 久久人人爽人人片av| 亚洲av中文av极速乱| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美色视频一区免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国内精品一区二区在线观看| 欧美激情在线99| 国产探花极品一区二区| or卡值多少钱| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲人成网站在线观看播放| 国产精品精品国产色婷婷| 赤兔流量卡办理| 深夜精品福利| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 深夜精品福利| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产av不卡久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 免费高清视频大片| 国产av麻豆久久久久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 午夜视频国产福利| 日韩强制内射视频| 午夜日韩欧美国产| 校园人妻丝袜中文字幕| 又黄又爽又免费观看的视频| 夜夜爽天天搞| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲精品影视一区二区三区av| 大香蕉久久网| 丝袜美腿在线中文| .国产精品久久| 69av精品久久久久久| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 六月丁香七月| h日本视频在线播放| av卡一久久| 伦理电影大哥的女人| 久久综合国产亚洲精品| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产欧美日韩精品亚洲av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| a级毛片a级免费在线| a级一级毛片免费在线观看| 国产成人91sexporn| 国产在视频线在精品| 一级a爱片免费观看的视频| 成年免费大片在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久午夜福利片| 国产老妇女一区| 午夜精品在线福利| 午夜福利高清视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产精品一二三区在线看| 日日啪夜夜撸| 91精品国产九色| 欧美bdsm另类| 亚洲人成网站高清观看| 露出奶头的视频| 国产伦在线观看视频一区| 日本a在线网址| 白带黄色成豆腐渣| 一本一本综合久久| 此物有八面人人有两片| 又爽又黄无遮挡网站| 日韩中字成人| 一本精品99久久精品77| 亚洲熟妇熟女久久| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲av第一区精品v没综合| 日韩精品中文字幕看吧| 久久国内精品自在自线图片| 日韩一本色道免费dvd| 韩国av在线不卡| 3wmmmm亚洲av在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品国产高清国产av| 插阴视频在线观看视频| av.在线天堂| 国产欧美日韩一区二区精品| 男女啪啪激烈高潮av片| 又爽又黄无遮挡网站| 草草在线视频免费看| av黄色大香蕉| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲成av人片在线播放无| 我要搜黄色片| 九九在线视频观看精品| 久99久视频精品免费| 国产男靠女视频免费网站| 特大巨黑吊av在线直播| 国产私拍福利视频在线观看| 青春草视频在线免费观看| 变态另类丝袜制服| 99热这里只有是精品50| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产单亲对白刺激| av.在线天堂| 97热精品久久久久久| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美一区二区亚洲| 国产久久久一区二区三区| 成人三级黄色视频| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久九九热精品免费| 亚洲av二区三区四区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲无线观看免费| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成人综合一区亚洲| 精品乱码久久久久久99久播| 国产综合懂色| 我的女老师完整版在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚洲精品久久国产高清桃花| 婷婷亚洲欧美| 69人妻影院| 亚洲欧美日韩东京热| 免费看美女性在线毛片视频| 91狼人影院| 日韩欧美免费精品| 在线播放无遮挡| 淫秽高清视频在线观看| 国产毛片a区久久久久| 精品欧美国产一区二区三| av中文乱码字幕在线| 亚洲美女搞黄在线观看 | 久久久久久久久久成人| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲精品在线观看二区| 久久久久精品国产欧美久久久| 97在线视频观看| 国产毛片a区久久久久| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产成人a区在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 三级经典国产精品| 欧美xxxx性猛交bbbb| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 香蕉av资源在线| 亚洲成av人片在线播放无| 午夜福利在线观看吧| 日本免费一区二区三区高清不卡| 特大巨黑吊av在线直播| 变态另类丝袜制服| 99久久九九国产精品国产免费| 国产片特级美女逼逼视频| 国产一区二区三区av在线 | 人妻夜夜爽99麻豆av| 啦啦啦啦在线视频资源| 色吧在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 午夜久久久久精精品| 淫秽高清视频在线观看| 九九在线视频观看精品| 最新在线观看一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 午夜福利在线观看吧| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 日本在线视频免费播放| 欧美性猛交黑人性爽| 国产黄片美女视频| 国产麻豆成人av免费视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 99久久精品一区二区三区| а√天堂www在线а√下载| 日本-黄色视频高清免费观看| 成人二区视频| 99在线人妻在线中文字幕| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 成人一区二区视频在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 日韩欧美 国产精品| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲经典国产精华液单| 三级毛片av免费| 五月伊人婷婷丁香| 欧美最黄视频在线播放免费| 欧美zozozo另类| 欧美+亚洲+日韩+国产| 天堂影院成人在线观看| 欧美日韩乱码在线| 精品一区二区三区人妻视频| 精品久久久久久成人av| 亚洲最大成人av| 在线观看免费视频日本深夜| 又爽又黄无遮挡网站| 变态另类丝袜制服| .国产精品久久| 成年免费大片在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日韩国内少妇激情av| 乱系列少妇在线播放| 国产精品久久久久久精品电影| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 毛片女人毛片| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 99精品在免费线老司机午夜| 国产精品久久视频播放| 国产真实伦视频高清在线观看| 久久久精品大字幕| 国产成人a∨麻豆精品| 日本五十路高清| 国内精品久久久久精免费| 毛片一级片免费看久久久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 日本爱情动作片www.在线观看 | 午夜福利成人在线免费观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 精品不卡国产一区二区三区| 国产精品伦人一区二区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 高清午夜精品一区二区三区 | 黄色配什么色好看| 99热6这里只有精品| 国产一区亚洲一区在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品人妻久久久影院| 三级经典国产精品| 干丝袜人妻中文字幕| 国产一区二区激情短视频| 国产高清不卡午夜福利| 国产69精品久久久久777片| 国产亚洲91精品色在线|