高效液相色譜法測(cè)定保泰松片的有關(guān)物質(zhì)

李 玲 姜 燕 陳乃江

江蘇省連云港市藥品檢驗(yàn)所，江蘇連云港 222006

保泰松片為非甾體類抗炎鎮(zhèn)痛藥，用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及痛風(fēng)。保泰松片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)二部第5冊(cè)［1］，但現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未收載其有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)，本研究查閱相關(guān)文獻(xiàn)［2-6］，發(fā)現(xiàn)目前國內(nèi)還沒有文獻(xiàn)報(bào)道保泰松片的有關(guān)物質(zhì)。保泰松片在生產(chǎn)過程中可能會(huì)引入工藝雜質(zhì)，也可能會(huì)產(chǎn)生降解產(chǎn)物［7］，而且本品不良反應(yīng)發(fā)生率較高［8-11］，為了更好地控制本品的質(zhì)量，我們采用高效液相色譜法對(duì)保泰松片中的工藝雜質(zhì)及可能降解雜質(zhì)進(jìn)行了測(cè)定和方法學(xué)考察，并對(duì)收集到的2個(gè)廠家的4批樣品進(jìn)行了檢驗(yàn)，結(jié)果表明該方法專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀、Waters 2996 DAD檢測(cè)器，Empower色譜工作站，Sartorius BP-211D電子天平，PHS-3C型酸度計(jì)，BRANSON B5500S-MT型超聲儀。

對(duì)照品保泰松（批號(hào)100481-200601，含量99.9％）購自中國食品藥品檢驗(yàn)研究院；保泰松片（A廠家，國藥準(zhǔn)字H41024168，批號(hào)13082702，14043001，15012101；B廠家，國藥準(zhǔn)字H41025373，批號(hào)20141001），規(guī)格均為0.1g；乙腈、甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性

采用Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-水（磷酸調(diào)pH至3.0）（50∶50）；流速為1.0mL/min；檢測(cè)波長為239nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣量為10μL。理論板數(shù)按保泰松峰計(jì)算不低于4000，保泰松與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的制備

取本品20片，除去包衣后，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約20mL，超聲處理30min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻?yàn)V過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用甲醇定量稀釋制成每1mL約含保泰松20μg的溶液，作為對(duì)照溶液。

精密稱取保泰松對(duì)照品10.0mg，置100mL量瓶中，加甲醇超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

3 方法

3.1 強(qiáng)制降解試驗(yàn)

取A企業(yè)樣品（批號(hào)：13082702）進(jìn)行高溫、水浴、光照、酸、堿和氧化破壞的強(qiáng)制降解試驗(yàn)［12-15］。

3.1.1 高溫破壞 取本品細(xì)粉適量，105℃放置2h，精密稱取適量（約相當(dāng)于保泰松50mg），置25mL量瓶中，照“2.3”項(xiàng)下配制供試品溶液。

3.1.2 水浴破壞 精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約20mL，超聲處理30min，水浴溫度加熱3h，放冷，用甲醇稀釋定容，搖勻?yàn)V過，取續(xù)濾液。

3.1.3 光照破壞 取本品供試品溶液置4500lx日光燈下，照射24h。

3.1.4 酸破壞 精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約10mL，超聲處理30min，再加1mol/L鹽酸溶液2mL，放置6h，加1mol/L氫氧化鈉溶液2mL中和，用甲醇稀釋定容，搖勻?yàn)V過，取續(xù)濾液。

3.1.5 堿破壞 精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約10mL，超聲處理30min，再加1mol/L氫氧化鈉溶液2mL，放置7h，加1mol/L鹽酸溶液2mL中和，用甲醇稀釋定容，搖勻?yàn)V過，取續(xù)濾液。

3.1.6 氧化破壞 精密稱取本品細(xì)粉適量（約相當(dāng)于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約10mL，超聲處理30min，再加30％過氧化氫溶液2mL，放置5h，用甲醇稀釋定容，搖勻?yàn)V過，取續(xù)濾液。

3.1.7 輔料干擾試驗(yàn) 取不含保泰松的空白輔料適量，制成空白輔料溶液。

3.1.8 強(qiáng)制降解試驗(yàn)結(jié)果 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定上述溶液，記錄色譜圖，見圖1，試驗(yàn)結(jié)果表明：各降解產(chǎn)物峰與保泰松主峰完全分離，輔料無干擾。說明本法專屬性強(qiáng)，適用于保泰松片有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。

3.2 檢測(cè)限和定量限

精密吸取保泰松對(duì)照品溶液適量，加甲醇逐步稀釋至色譜圖中保泰松峰高分別為噪音的3倍和10倍，測(cè)得保泰松的檢測(cè)限和定量限分別為0.2μg/mL和0.5μg/mL。

3.3 精密度試驗(yàn)

取樣品測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照溶液，照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，保泰松峰面積的RSD為0.7％。結(jié)果表明儀器精密度符合要求。

3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品測(cè)定項(xiàng)下的供試品溶液在0、2、4、8h分別測(cè)定保泰松與各雜質(zhì)的峰面積。結(jié)果單個(gè)最大未知雜質(zhì)均為0.09％，雜質(zhì)總量均為0.22％，說明溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 強(qiáng)制降解試驗(yàn)色譜圖

3.5 樣品有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)

根據(jù)供試品溶液中的有關(guān)物質(zhì)含量和強(qiáng)制降解試驗(yàn)條件下的雜質(zhì)降解情況，制定保泰松片的有關(guān)物質(zhì)限度。供試品溶液色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.5倍（0.5％），各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（1.0％）。結(jié)果批號(hào)分別為13082702、14043001、15012101、20141001的樣品中單個(gè)最大未知單雜分別為0.09％、0.09％、0.05％、0.07％，雜質(zhì)總量分別為0.22％、0.19％、0.18％、0.15％。

4 討論

4.1 流動(dòng)相的選擇

考察緩沖液-乙腈、水-甲醇系統(tǒng)在不同pH條件下對(duì)峰型的影響，對(duì)雜質(zhì)與主峰的分離及雜質(zhì)之間的分離情況的影響。發(fā)現(xiàn)在pH3.0條件下，雜質(zhì)均能完全分離；雜質(zhì)在乙腈系統(tǒng)下，雜質(zhì)的分離情況優(yōu)于甲醇系統(tǒng)；在水系統(tǒng)與緩沖液系統(tǒng)下，雜質(zhì)分離情況基本相當(dāng)?？紤]流動(dòng)相操作簡(jiǎn)便，且對(duì)色譜柱損害最小原則，選擇乙腈-水（pH 3.0）作為流動(dòng)相。

4.2 檢測(cè)波長的確定

本研究通過DAD檢測(cè)器進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果顯示保泰松的最大吸收波長為239nm，按規(guī)定貯存的樣品雜質(zhì)和強(qiáng)制降解試驗(yàn)條件下的降解雜質(zhì)的最大吸收波長均在236～239nm之間；可見各種雜質(zhì)的最大吸收波長均非常接近保泰松的最大吸收波長，所以試驗(yàn)選擇在保泰松的最大吸收波長239nm下測(cè)定有關(guān)物質(zhì)。

4.3 雜質(zhì)譜分析

不同條件下的降解試驗(yàn)表明，保泰松片在堿性條件下較穩(wěn)定，在光照、氧化條件下略有降解，在酸、高溫、水浴條件下降解嚴(yán)重；各個(gè)降解試驗(yàn)條件下的降解雜質(zhì)為光照（RRT=0.52）、氧化（RRT=0.52、1.47）、酸（RRT=0.60、1.47）、高溫（RRT=0.52）、水浴（RRT=0.52）；供試品溶液放置48h，有輕微降解，降解雜質(zhì)為RRT=0.52、1.47，而在兩個(gè)廠家4批供試品溶液中單個(gè)最大未知雜質(zhì)均為RRT=0.52，該雜質(zhì)在光照、氧化、高溫、水浴條件下均有降解，要進(jìn)一步確認(rèn)主要降解產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，應(yīng)用LC-TOF-MS，LC-MS-MS聯(lián)用技術(shù)分析。

本研究采用的高效液相色譜法能夠較準(zhǔn)確地測(cè)定保泰松片中的有關(guān)物質(zhì)，各雜質(zhì)峰均能有效分離，方法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，方法可靠。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（二部）［S］.第五冊(cè).1996：65.

［2］孫旌文，馬洪濤.高效液相色譜法測(cè)定保泰松片的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2010，25（5）：332-333.

［3］穆同娜，王浩，劉艷琴，等.高效液相色譜法測(cè)定化妝品中的保泰松［J］.日用化學(xué)工業(yè)，2011，41（6）：459-461.

［4］車洪勇，楊元玉，馮愛萍.HPLC法測(cè)定關(guān)節(jié)鎮(zhèn)痛片中保泰松和馬來酸氯苯那敏的含量［J］.中國藥事，2003，17（3）：167-168.

［5］杜興.HPLC法測(cè)定風(fēng)濕松片中保泰松及氨基比林的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，1999，14（2）：53.

［6］姜澤慧，吳勇.市售保泰松片溶出度方法的考察［J］.中國藥師，2014，17（6）：962-964.

［7］劉文英.藥物分析［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：27-29.

［8］朱學(xué)義，董樂，李澤純.保泰松合用地塞米松致藥物剝脫性皮炎并藥物性肝炎1例［J］.中國藥業(yè)，2013，22（13）：77.

［9］但蓓蓓.保泰松急性中毒患兒1例救治報(bào)道［J］.兒科藥學(xué)雜志，2012，18（3）：1.

［10］肖曙芳，李亞玲，陳祝，等.保泰松中毒致多器官功能障礙1例［J］.兒科藥學(xué)雜志，2006，12（6）：62.

［11］王蕊婷，盧亞弟，尉亞娥.保泰松引起頻發(fā)多源性室性期前收縮一例［J］.山西醫(yī)藥雜志，2002，4（2）：156.

［12］中國藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄204-206.

［13］劉文英.藥物分析［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：380-381.

［14］施捷，車寶泉，鄭焱，等.HPLC法測(cè)定不同來源米非司酮膠囊的有關(guān)物質(zhì)［J］.藥物分析雜志，2014，34（3）：480-484.

［15］石云峰，林麗琴.HPLC法測(cè)定孟魯司特鈉片含量與有關(guān)物質(zhì)［J］.藥物分析雜志，2013，33（2）：308-311.