HS-SPME-GC-MS對建陽小湖魚腥草不同部位揮發(fā)性成分的比較研究

李 穎 吳 斌 嚴(yán)錦賢 李 宗

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院藥學(xué)部，福建福州 350003；2.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二人民醫(yī)院，福建福州 350003；3.福建省藥品不良反應(yīng)監(jiān)測中心，福建福州 350003

參照以往研究者對中藥材及中藥制劑的研究工作，中藥材相同產(chǎn)地、同一品種、不同部位所含成分的種類和相對含量往往不盡相同［1-6］。中藥材的入藥部位不同，制成的制劑質(zhì)量必然存在差異，這種差異很可能影響該中藥制劑的臨床療效甚致安全性［7-12］。因此，有必要用一種被證實穩(wěn)定、有效、可行的質(zhì)量分析方法對同種中藥材不同部位的成分進(jìn)行提取、比較，辨明其中的差異性，以優(yōu)選中藥材的用藥部位，提高中藥制劑質(zhì)量和臨床療效，盡可能降低甚至消除中藥制劑的不良反應(yīng)。本研究在前期研究先后建立了魚腥草注射液中甲基正壬酮的含量測定方法［13］、采用HS-SPME-GC-MS檢測9個不同種質(zhì)來源魚腥草揮發(fā)性成分，建立了成熟的魚腥草成分分析方法［14］的基礎(chǔ)上，對福建建陽小湖魚腥草GAP研究及標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)示范基地種植的魚腥草4個不同部位（根、莖、葉、果實）所含揮發(fā)性成分進(jìn)行進(jìn)一步系統(tǒng)性研究、比較，為優(yōu)選魚腥草適宜的用藥部位、提高魚腥草制劑的質(zhì)量水平、臨床療效和用藥安全性奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗用魚腥草單株材料采自福建建陽小湖魚腥草GAP研究及標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)示范基地，生長期2年，采收期為種植次年6月果實初熟時，采集帶花、果的全草，經(jīng)福建中醫(yī)藥大學(xué)倪立堅副主任藥師鑒定為魚腥草（Herba Houttuyniae）。

1.2 儀器

Agilent 6890N氣相色譜儀（美國安捷倫）；Thermo Polaris Q氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Thermo-Finnegan）；色譜柱：HP-5 MS毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm，0.25μm）（美國安捷倫）；SPME萃取手柄、聚二甲基硅氧烷（PDMS，100μm）萃取頭、20mL頂空取樣瓶、聚四氟乙烯瓶塞（美國Supelco）；HHS型數(shù)顯恒溫水?。ㄉ虾２┭笇崢I(yè)有限公司）；BT125D型分析天平（賽多利斯公司），AL104型分析天平（梅特勒-托利多公司）。

1.3 實驗條件與方法［15］

1.3.1 色譜條件 色譜柱HP-5 MS毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm，0.25μm）；載氣為氦氣；進(jìn)樣口溫度250℃；升溫程序：初始溫度60℃，保持5min，以6℃/min升溫至240℃；恒流模式，流速0.8mL/min，不分流。

1.3.2 質(zhì)譜條件 電子轟擊（EI）離子源；電子能量70ev；離子阱溫度230℃；質(zhì)量掃描范圍m/z 30～500amu。

1.3.3 頂空固相微萃?。瓪赓|(zhì)聯(lián)用法（HS-SPMEGC-MS）比較、分析小湖魚腥草不同部位的揮發(fā)性成分 取小湖產(chǎn)魚腥草全草，分別篩選不同部位（根、莖、葉、果實），剪碎，各稱取0.5g，置20mL頂空取樣瓶中，加蓋聚四氟乙烯瓶塞，水浴加熱至55℃預(yù)平衡40min，于55℃下以100μm PDMS固相微萃取頭頂空萃取40min，萃取完畢后在氣相色譜進(jìn)樣口以250℃解吸附30s，按“3.1、3.2”項條件進(jìn)行GC-MS成分分析，結(jié)合NIST98標(biāo)準(zhǔn)譜庫檢索結(jié)合人工譜圖解析，分離、鑒定魚腥草4個部位所含的揮發(fā)性成分，以面積歸一化法計算各組分的相對含量。

2 結(jié)果

2.1 成分分析

小湖產(chǎn)魚腥草不同部位（根、莖、葉、果實）揮發(fā)性成分相對含量。見表1。

表1 HS-SPME-GC-MS分析小湖產(chǎn)魚腥草不同部位（根、莖、葉、果實）揮發(fā)性成分

2.2 樣品魚腥草藥材各部位含量

本研究樣品魚腥草藥材各部位含量較高的成分包括萜類、醇類、醛酮類、脂肪酸等，這4類成分分別占不同部位提取出揮發(fā)性成分總量的66.9％、60.4％、69.0％和57.7％。其他成分，如酯類、烷烴、烯烴等，含量則相對較低。其中，魚腥草根部含量最高的組分為龍腦（9.09％），其余主要揮發(fā)性成分相對含量從高到低依次為：α-萜品醇（8.99％）、魚腥草素（8.94％）、1-癸醇（8.69％）；莖含量最高組分為α-萜品醇（11.51％），其次為：1-癸醇（10.57％）、魚腥草素（7.05％）、甲基正壬酮（5.92％）、乙酸香芹酯（5.88％）；葉中含量最高的成分是甲基正壬酮（9.12％），其次是：乙酸冰片酯（6.73％）、二異丁基丁二酸酯（6.16％）、d-檸檬烯（5.42％）、α-萜品醇（5.27％）；果實含量最高的組分是1-癸醇（17.55％），其次是：α-萜品醇（15.82％）、甲基正壬酮（13.62％）、魚腥草素（11.61％）、石竹烯（4.42％）、亞麻酸（4.01％）。

2.3 HS-SPME-GC-MS提取、鑒定

小湖產(chǎn)魚腥草的根、莖、葉、果實4個部位所含揮發(fā)性成分的種類分別為66種、61種、56種、55種，其中有36種成分是4個部位共同含有的，共有化合物的總峰面積占檢出揮發(fā)性成分總峰面積的百分比分別為：75.2％、80.7％、83.3％和88.5％。

2.4 魚腥草主要有效成分

魚腥草主要有效成分為魚腥草素和甲基正壬酮。對不同部位的橫向?qū)Ρ蕊@示，這2種成分均在本試驗樣品果實中含量最高，而在其他部位含量則相對較低。甲基正壬酮有40.8％來自果實，其余部位含量依次為：根14.2％、葉2.7％、莖1.8％；魚腥草素有36.3％來源于果實，其余部位含量依次為：葉13.8％、根2.8％、莖2.2％。

3 討論

本試驗采用HS-SPME-GC-MS技術(shù)成功地對魚腥草4個不同部位進(jìn)行揮發(fā)性成分分離分析，表明該方法簡便、快速、環(huán)保、準(zhǔn)確、穩(wěn)定，適用于中藥樣品揮發(fā)性成分研究。魚腥草揮發(fā)性成分主要由萜類、醇類、醛酮類、脂肪酸等4類組成，此結(jié)論與其他研究者先前的成分分析試驗結(jié)果相吻合［16］。成分分析結(jié)果提示魚腥草藥材的采收需要考量季節(jié)因素，在藥材適當(dāng)?shù)陌l(fā)育期進(jìn)行。由“2.4”結(jié)果可以看出，主要有效成分魚腥草素、甲基正壬酮均在果實中分布最多，而在植株其他部位分布甚少，因此考慮最佳采收期為花期至之后的一個月。入藥部位不同導(dǎo)致的成分差異與魚腥草制劑療效及安全性的相關(guān)度有待進(jìn)一步探討。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，李勝華等［17］曾對比魚腥草不同發(fā)育期揮發(fā)油含量，得出花果后期揮發(fā)油達(dá)到最高，枯葉期含量最低的結(jié)論，從另一個側(cè)面印證了本研究所得之結(jié)論，但該試驗并未深入進(jìn)行。延續(xù)該研究者的思路，筆者推斷隨著植株的生長發(fā)育，不同生長年限的魚腥草揮發(fā)性成分的種類、相對含量以及魚腥草素、甲基正壬酮等2種主要有效成分的含量很有可能呈現(xiàn)一個動態(tài)變化的過程，延續(xù)該假設(shè)的思路，本研究將展開后續(xù)研究。值得注意的是，楊文凡等［18］用水蒸氣蒸餾法分別提取魚腥草莖、葉中揮發(fā)性成分，通過GC-MS加以鑒定，檢出表藍(lán)桉醇、異植醇、氧化石竹烯、六氫金合歡基丙酮、橙花叔醇等5種成分（相對百分含量＞1％），而本課題對莖、葉的成分分析未檢出以上5種化合物；此外，本課題新發(fā)現(xiàn)莖、葉中所含的3-蒈烯、乙酸香芹酯、2-十三烷酮等3種相對含量較高的成分未見文獻(xiàn)報道，屬首次發(fā)現(xiàn)。以上成分差異可能同藥材品種、產(chǎn)地、采收季節(jié)、干燥程度及揮發(fā)性成分提取手段不同有關(guān)。

［1］梁歡，胡志剛，盧金清，等.不同生長年限和不同部位金釵石斛中石斛堿含量比較與分析［J］.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014，16（2）：335-338.

［2］劉衛(wèi)根，王亮生，周國英，等.羌活不同部位有機(jī)酸和香豆素類化合物含量的比較研究［J］.藥物分析雜志，2012，32（11）：1950-1956，1967.

［3］周濤，張小波，郭蘭萍，等.粗毛淫羊藿不同部位、不同生境中淫羊藿苷、總黃酮含量的變化分析［J］.中國中藥雜志，2012，37（13）：1917-1921.

［4］田浩，石瑤，吳麗華，等.不同產(chǎn)地不同部位云黃連生物堿成分累積研究［J］.云南大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2012，34（5）：570-576.

［5］李建蕊，陳建波，周群，等.中藥三七不同部位和組織的紅外光譜分析［J］.光譜學(xué)與光譜分析，2014，34（3）：634-637.

［6］楊敏麗，王麗婷.金銀花不同品種及不同部位木犀草素含量的比較［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2007，22（10）：666-668.

［7］盛昌翠.蒼耳子不同部位毒性評價及成分分析［D］.武漢：湖北中醫(yī)藥大學(xué)，2014：30-49.

［8］閆婕.馬爾康柴胡不同部位藥用價值評價研究［D］.成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2014：42-56.

［9］吳麗莉.驅(qū)蚊草不同部位抗氧化系統(tǒng)的研究［D］.重慶：西南大學(xué)，2008：37-50.

［10］楊文雁，石孟瓊，龔學(xué)謙，等.威靈仙不同部位對小鼠耳廓微循環(huán)的影響［J］.中藥材，2013，36（8）：1316-1321.

［11］柏冬，牛曉紅，范斌，等.桂枝湯在腸道不同部位的吸收研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2010，21（2）：167-170.

［12］王健，薛山，趙國華，等.紫蘇不同部位精油成分及體外抗氧化能力的比較研究［J］.食品科學(xué)，2013，34（7）：86-91.

［13］嚴(yán)輝，段金廒，尚爾鑫，等.當(dāng)歸不同部位入藥功效取向差異的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)與藥性關(guān)聯(lián)性研究［J］.中草藥，2014，45（21）：3208-3212.

［14］李穎，鄭申西，李宗.頂空固相微萃取-氣相色譜法測定魚腥草注射液中甲基正壬酮含量［J］.中國現(xiàn)代中藥，2008，10（4）：26-28，41.

［15］李穎，曾茂貴，王頌，等.頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法對不同種質(zhì)類型魚腥草揮發(fā)性成分的比較研究［J］.中藥材，2014，37（8）：1349-1352.

［16］劉素紅，王呈仲，蘇越，等.保留指數(shù)結(jié)合準(zhǔn)確質(zhì)量測定對魚腥草揮發(fā)性成分的定性分析［J］.分析測試學(xué)報，2010，29（2）：126-130.

［17］李勝華.魚腥草化學(xué)成分與抑菌作用研究［D］.貴陽：貴州大學(xué)，2006：47-54.

［18］楊文凡，陳勇，程翼宇.魚腥草不同部位揮發(fā)油成分的研究［J］.中草藥，2006，37（8）：1149-1151.