局部注射丹參酮Ⅱ-A對兔正畸牙移動(dòng)中破骨細(xì)胞的影響

局部注射丹參酮Ⅱ-A對兔正畸牙移動(dòng)中破骨細(xì)胞的影響*

**通信作者 E-mail:zjm46688@126.com

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-09-11網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150911.2247.010.html

楊夏晴， 張軍梅**， 王藪馨， 馮安琪， 莫朝倫

(貴州醫(yī)科大學(xué)附院 口腔科， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 觀察局部注射丹參酮Ⅱ-A對家兔正畸牙移動(dòng)過程中牙周膜壓力側(cè)破骨細(xì)胞的影響。方法： 選取20只雄性健康大耳白兔復(fù)制雙側(cè)下頜第一磨牙近中移動(dòng)模型，左側(cè)下頜第一磨牙近中牙齦黏膜下注射丹參酮Ⅱ-A磺酸鈉注射液0.36 mg/d，作為實(shí)驗(yàn)組，對側(cè)同名牙位處注射等量生理鹽水作為對照組，于實(shí)驗(yàn)第1、3、7、14及21天時(shí)處死兔，取下頜印模灌石膏模型并測量雙側(cè)下頜第一磨牙近中移動(dòng)距離；取兔雙側(cè)下頜第一磨牙和周圍牙槽骨組織，行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色，光鏡下計(jì)數(shù)牙根中1/3壓力側(cè)牙周膜及牙槽骨表面破骨細(xì)胞數(shù)量。結(jié)果： 除實(shí)驗(yàn)第1天外，實(shí)驗(yàn)組其余各組兔牙移動(dòng)距離大于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩組兔牙周膜壓力側(cè)破骨細(xì)胞數(shù)量均有增加，實(shí)驗(yàn)組破骨細(xì)胞數(shù)量明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論： 牙移動(dòng)過程中，適量丹參酮II-A可以有效的增加破骨細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)細(xì)胞活性，提高骨吸收強(qiáng)度，對加速正畸牙移動(dòng)有一定的作用。

[關(guān)鍵詞]丹參酮； 兔； 正畸； 破骨細(xì)胞； 牙移動(dòng)

[基金項(xiàng)目]*貴陽市科技局基金筑科合同(20151001)

[中圖分類號]R783.5

The Impact of Local Injection of Tanshinone II-A on

Osteoclast of Orthodontic Tooth of Rabbit

YANG Xiaqing， ZHANG Junmei， WANG Souxin， FENG Anqi， MO Chaolun

(DepartmentofStomatology,AffiliatedHispitalofGuizhouMedialUniversity，Guiyang550004,Guizhou,China)

Abstract[] Objective: To observe the effect of local inject tanshinone II-A on the osteoclast in the pressure side of periodontal membrane during orthodontic tooth movement. Methods: Twenty healthy and male rabbits were randomly divided into 5 groups (4 rabbits each group) to copy the bilateral mandibular first molar movement model. 0.36 mg/d tanshinone II A sulfonate was injected into the gingival mucosa of mesial surface of the left first molar once a day as experimental group while the same amount of normal saline was injected into the opposite molar of the same name as control group. The rabbits were killed at 1th, 3th, 7th, 14th, 21th day after injection. The distance of bilateral mandibular first molar mesial movement was measured by plaster cast. The periodontal slice of the mandibular first molar was taken and conducted by HE staining and tartrate resistant acid phosphatase staining. The osteoclasts in the pressure side of periodontal membrane were counted under the light microscope. Results: Except for the frist day, the tooth movement distance of experimental group were significantly higher than that of control group (P<0.05). Compared with control group, the number of osteoclasts significantly increased in experimental group (P<0.05). Conclusion: In the process of orthodontic tooth movement, tanshinone II-A can increase the number of osteoclasts, enhance cell activity and bone resorption intensity and improve the tooth movement.

[Key words] tanshinone II-A; rabbits; orthodontic; osteoclast; tooth movement

正畸治療是針對錯(cuò)頜畸形進(jìn)行有效的牙齒移動(dòng)來改變牙齒的排列位置的一種臨床常規(guī)治療方式，其缺點(diǎn)是矯治過程較長，尤其是牙齒通過牙槽骨改建移動(dòng)到新的位置耗時(shí)較久，一定程度上阻礙了患者接受治療。正畸醫(yī)師不斷嘗試各種安全、有效促進(jìn)牙移動(dòng)的方法來縮短正畸療程。相關(guān)研究已報(bào)道中藥丹參可以加速正畸牙移動(dòng)，本實(shí)驗(yàn)旨在觀察丹參的活性成分丹參酮Ⅱ-A在正畸牙移動(dòng)過程中對牙周膜壓力側(cè)破骨細(xì)胞的影響，探討其是否能增加骨吸收強(qiáng)度，提高牙移動(dòng)速度。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料與動(dòng)物

抗酒石酸酸性磷酸酶染色試劑盒(南京建成生物工程研究所)，參酮Ⅱ-A磺酸鈉注射液(上海第一生化藥業(yè)有限公司，國藥批字號H310225588)。健康成年雄性大耳白兔20只，體重(2.5±0.2)kg，由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2方法

1.2.1正畸牙移動(dòng)模型復(fù)制2%戊巴比妥鈉1 mL/kg經(jīng)耳緣靜脈麻醉動(dòng)物并固定，精確制取兔下頜牙印模，石膏灌模。牙科慢速手機(jī)噴灑蒸餾水，于雙側(cè)下頜第一磨牙及切牙近頸部同一水平磨0.3 mm深的固位溝，于下頜前牙與第一磨牙之間安裝鎳鈦拉簧，測量力值約80 g。下頜兩切牙用0.25 mm正畸結(jié)扎絲連扎后，牙釉質(zhì)粘結(jié)劑輔助粘接加強(qiáng)固位。定期檢查矯治器情況，如有脫落及時(shí)補(bǔ)救[2]。每日1次于左側(cè)下頜第一磨牙近中牙齦黏膜下注射丹參酮Ⅱ-A磺酸鈉注射液0.36 mg/d作為實(shí)驗(yàn)組[2]，對側(cè)同名牙位處注射等量生理鹽水作為對照組。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，分別在實(shí)驗(yàn)第1、3、7、14、21天時(shí)處死正畸牙移動(dòng)模型兔，每次4只，共計(jì)20只。

1.2.3牙移動(dòng)距離測量及破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)用電子游標(biāo)卡尺測量石膏模型上，雙側(cè)下頜第1磨牙近中面到下頜切牙遠(yuǎn)中面的距離。測量由同一人進(jìn)行，測量3次取平均值。下頜第一磨牙近中移動(dòng)距離(mm)=牙移動(dòng)前距離-牙移動(dòng)后距離。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1下頜第一磨牙移動(dòng)距離

實(shí)驗(yàn)第1天，實(shí)驗(yàn)組及對照組牙齒移動(dòng)無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其余各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對照組牙近中移動(dòng)距離隨著時(shí)間的變化不斷增加，實(shí)驗(yàn)組牙移動(dòng)距離均大于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　兩組大耳白兔下頜第一磨牙近中牙移動(dòng)距離

2.2破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)

第1天實(shí)驗(yàn)組和對照組壓力側(cè)牙周膜及牙槽骨表面破骨細(xì)胞數(shù)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)第3、7、14、21天兩組破骨細(xì)胞數(shù)目均有不同程度的增加，實(shí)驗(yàn)第7天破骨細(xì)胞數(shù)量增加最明顯，細(xì)胞胞體增大，有2～4核，骨吸收陷窩大，對照組牙槽骨吸收不均勻，在牙根中1/3處破骨細(xì)胞數(shù)量與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2和圖1。

表2　兩組大耳白兔壓力側(cè)牙槽骨表面破骨細(xì)胞數(shù)

3討論

近年來，錯(cuò)牙合畸形的發(fā)病率逐漸升高，越來越多的患者選擇正畸治療，但漫長的矯治過程一直是困擾患者及家屬的問題。長期佩戴矯治器影響了患者的顏面美觀、口腔衛(wèi)生、咀嚼功能、生長發(fā)育等，矯治過程中部分患者也會因?yàn)檫@些原因產(chǎn)生負(fù)面情緒不愿積極配合治療，延長矯治時(shí)間。因此如何有效的縮短正畸治療的時(shí)間是正畸醫(yī)生和患者共同關(guān)注的問題。正畸力會打破牙齒周圍原有的穩(wěn)態(tài)，通過牙周組織改建，實(shí)現(xiàn)牙齒移動(dòng)。牙槽骨的改建是牙移動(dòng)的生物學(xué)基礎(chǔ)之一，骨改建的速度影響了牙齒移動(dòng)的速度。骨改建包括了增生和吸收兩個(gè)過程。破骨細(xì)胞是影響骨吸收過程中至關(guān)重要的因素之一，能促進(jìn)破骨細(xì)胞生成、分化和成熟的因素可能會加速正畸牙齒的移動(dòng)。

注：a為第7天實(shí)驗(yàn)組，b為第7天對照組，c為第14天實(shí)驗(yàn)組，d為第14天對照組；黑色箭頭處為破骨細(xì)胞 圖1　兩組家兔壓力側(cè)牙周膜內(nèi)及牙槽骨根面破骨細(xì)胞(TRAP，×200) Fig.1　The staining of osteoclast of tartrate resistant acid phosphatase

丹參酮Ⅱ-A是中藥丹參的重要藥理成分之一，丹參酮ⅡA磺酸鈉注射液是丹參酮ⅡA經(jīng)磺化形成的水溶性鈉鹽，藥效高且利于機(jī)體吸收，其藥理作用包括促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，修復(fù)損傷內(nèi)皮細(xì)胞，抗凝血作用等[4-9]。破骨細(xì)胞分化成熟是其發(fā)揮骨吸收功能的前提，牙周膜中的破骨細(xì)胞一方面是由破骨細(xì)胞的前體細(xì)胞分化而來，在機(jī)械力作用下，可能需要48 h牙周膜內(nèi)及牙槽骨表面才會出現(xiàn)成熟的破骨細(xì)胞，局部注射甲狀腺素能在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)誘導(dǎo)破骨細(xì)胞生成[6]；另一方面破骨細(xì)胞能通過血液循環(huán)從遠(yuǎn)隔區(qū)域遷移到牙槽骨表面。張世英等[4]發(fā)現(xiàn)，丹參酮Ⅱ-A可因注射劑量的不同而影響破骨細(xì)胞的數(shù)量，研究表明牙周膜中骨保護(hù)素/破骨細(xì)胞分化因子比率分析結(jié)果：骨保護(hù)素/破骨細(xì)胞分化因子比率大于1，說明骨保護(hù)素相對過剩，破骨細(xì)胞的分化和激活受到抑制，促進(jìn)骨形成；骨保護(hù)素/破骨細(xì)胞分化因子比率小于1，破骨細(xì)胞分化因子相對過剩，促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化和激活。當(dāng)?shù)⑼狪IA劑量為0.36 mg/d時(shí)比例接近于1，利于骨改建。牙移動(dòng)過程中，受壓側(cè)牙周膜

內(nèi)局部呈淤血狀態(tài)，丹參ⅡA可以改善牙周膜內(nèi)血液循環(huán)，運(yùn)輸營養(yǎng)及運(yùn)走代謝廢物，減少破骨細(xì)胞代謝障礙促進(jìn)破骨細(xì)胞分化成熟；另外，良好的血液循環(huán)能促進(jìn)破骨細(xì)胞的遷移，不斷補(bǔ)充破骨細(xì)胞數(shù)量能增加牙槽骨吸收的進(jìn)展速度和延長吸收的持續(xù)時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示丹參酮II-A能增加牙周膜壓力側(cè)破骨細(xì)胞的數(shù)目，增加骨吸收強(qiáng)度，提高牙齒移動(dòng)的速度，對縮短正畸療程提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

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(2015-05-07收稿，2015-08-10修回)

中文編輯： 文箐潁； 英文編輯： 劉華