產(chǎn)纖維素酶菌株的篩選及產(chǎn)酶條件優(yōu)化

張麗影，汪寒寒，潘 婷，邢承華*，蔡妙珍

產(chǎn)纖維素酶菌株的篩選及產(chǎn)酶條件優(yōu)化

張麗影1，汪寒寒2，潘 婷2，邢承華3*，蔡妙珍2

（1. 浙江師范大學(xué) 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江 金華 321004；2. 浙江師范大學(xué) 地理與環(huán)境科學(xué)學(xué)院，浙江 金華 321004；3. 金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院 農(nóng)業(yè)與生物工程學(xué)院，浙江 金華 321007）

以羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基和液體發(fā)酵培養(yǎng)基篩選菌株，經(jīng)初篩和復(fù)篩篩選出目的菌株后，通過(guò)觀察菌落形態(tài)、顏色和孢子形態(tài)等方法初步鑒定目的菌株。結(jié)果表明，本研究篩選出的2株目的菌株均為黑曲霉。菌株的最佳碳源和氮源分別為1.0%CMC-Na和0.3%酵母膏，最佳培養(yǎng)起始pH值和最適宜溫度分別為4和40℃。在此條件下培養(yǎng)7d后菌株1和菌株2的CMCase酶活分別達(dá)到0.504 IU/mL和0.277 IU/mL。

產(chǎn)纖維素酶菌；篩選；羧甲基纖維素酶；酶活力

纖維素是地球中最豐富、來(lái)源最廣泛的碳水化合物，它的降解與循環(huán)利用是實(shí)現(xiàn)碳循環(huán)的重要途徑[1]。近年來(lái)，由于持續(xù)的能量耗損，枯竭的化石燃料與環(huán)境污染的加重，使得人們?cè)絹?lái)越關(guān)注碳資源的利用[2]。因此，纖維素的降解利用引起高度關(guān)注與重視。目前，纖維素一般用作燃料，或是被燒荒、遺棄腐爛掉，這不僅浪費(fèi)了資源，還會(huì)引起嚴(yán)重的環(huán)境污染[3-4]。所以，纖維素的綜合利用與有效的轉(zhuǎn)化對(duì)于解決當(dāng)前的能源危機(jī)、糧食短缺、環(huán)境污染等有重大的意義。

纖維素酶（cellulase）是降解纖維素的一組酶系總稱[5]，它能將纖維素分解為葡萄糖，在食品、造紙、紡織、洗滌和飼料等工業(yè)有重要作用[6-9]。而降低纖維素酶的生產(chǎn)成本是纖維素酶真正用于工業(yè)生產(chǎn)的首要條件。因此，選育高酶活的纖維素分解菌株就成了關(guān)鍵之一。目前，大多數(shù)的商業(yè)纖維素酶都是由木霉屬和曲霉屬菌株生產(chǎn)得到的[10-11]。已有報(bào)道研究篩選產(chǎn)纖維素酶菌株，使經(jīng)過(guò)微生物處理的玉米秸稈等轉(zhuǎn)化為動(dòng)物易吸收或利用的能源、物、料或化工原料，以實(shí)現(xiàn)纖維素的合理應(yīng)用[12-13]。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)于產(chǎn)纖維素酶菌株篩選的報(bào)導(dǎo)雖較多，但大部分研究集中在對(duì)秸稈的降解上[14?16]，而且多數(shù)試驗(yàn)均采用單一的菌株對(duì)秸稈進(jìn)行降解，降解效果不佳[17]。本文從長(zhǎng)期栽培水稻的土壤中分離出產(chǎn)纖維素酶菌株，測(cè)定了纖維素酶活力并對(duì)其進(jìn)行產(chǎn)纖維素酶條件優(yōu)化，最大程度的增大菌株的產(chǎn)酶量及菌株的酶活力，利用優(yōu)化的菌株共同處理平菇菌糠及杏鮑菇菌糠，以便降解菌糠中的粗纖維成分，使菌糠轉(zhuǎn)化成利于動(dòng)物消化和吸收的菌糠飼料。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 試劑與材料

菌種來(lái)源：從浙江師范大學(xué)生物園栽培水稻半年以上的土壤中，采集距地面約5～25 cm深處的土樣，從中分離篩選產(chǎn)纖維素酶菌株。

初篩培養(yǎng)基：孟加拉紅瓊脂培養(yǎng)基[18]、羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基（CMC-Na）[19]。

斜面培養(yǎng)基：PDA完全培養(yǎng)基[18]。

液體發(fā)酵培養(yǎng)基[4]：蛋白胨3 g，NH4NO32 g，酵母粉 0.5 g，KH2PO44 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，CaCl2·2H2O 0.3 g，CMC-Na 10 g，蒸餾水1 000 mL，pH7.0～7.4。

初步鑒定培養(yǎng)基：察氏培養(yǎng)基[18]。

1.2 菌株的篩選

將采集的土樣置于生理鹽水中震蕩，以制備菌懸液。取0.1 mL懸浮液涂布于孟加拉紅培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分別挑取生長(zhǎng)不同的菌落劃線分離接種于以CMC-Na為唯一碳源的CMC培養(yǎng)基中，直至分離得到純菌株，采用剛果紅染色法觀察純菌落的透明圈直徑[20]，篩選出透明圈直徑最大的菌株，即初步斷定具有纖維素降解活性。將初篩得到的菌株接入到PDA斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)3～4 d后，加入無(wú)菌蒸餾水將斜面上孢子洗下并經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋制成孢子懸浮液（活菌數(shù)106CFU/mL）。以3%（V/V）的量將孢子懸浮液接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基，測(cè)定酶活力，篩選出纖維素酶高產(chǎn)菌株。

1.3 羧甲基纖維素酶（CMCase）活力的測(cè)定及菌株產(chǎn)酶條件的優(yōu)化

1.3.1 CMCase活力的測(cè)定

培養(yǎng)5～7 d的復(fù)篩發(fā)酵液，經(jīng)4℃，3 000 r/min離心15 min后得到粗酶液[21]。采用3,5-二硝基水楊酸（DNS）比色法[22]，通過(guò)測(cè)經(jīng)粗酶液反應(yīng)后所得的葡萄糖含量來(lái)測(cè)菌株CMCase活性[23]。

按照上述條件，以國(guó)際單位為依據(jù)，定義1 min催化纖維素水解生成1 μmol葡萄糖的酶量為一個(gè)酶活力單位（IU），其計(jì)算公式如式（1）所示[24]。

1.3.2 菌株產(chǎn)CMCase條件的優(yōu)化

分別對(duì)菌株1和菌株2進(jìn)行產(chǎn)酶條件的優(yōu)化，優(yōu)化指標(biāo)包括碳源、氮源、培養(yǎng)基起始pH、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間（如表1所示）。通過(guò)檢測(cè)菌株的CMCase活力確定菌株產(chǎn)酶的最佳條件。

表1 菌株的優(yōu)化條件

1.4 數(shù)據(jù)處理

各實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，根據(jù)3次實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)計(jì)算平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差，利用EXCEL2003進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，用SPSS.17軟件進(jìn)行方差分析。

1.5 菌株的初步鑒定

將菌株1和菌株2分別接種到察氏培養(yǎng)基中，于28℃培養(yǎng)2～3 d后，初步肉眼觀察菌落大小、形狀、顏色；然后利用水浸片法，取干凈載玻片，加無(wú)菌水一滴，用接種環(huán)挑取少量菌體放入無(wú)菌水中，蓋好蓋玻片，顯微鏡下觀察菌株的菌絲及孢子形態(tài)。根據(jù)真菌分類鑒定手冊(cè)對(duì)菌株進(jìn)行初步鑒定[25]。

2 結(jié)果與討論

2.1 產(chǎn)纖維素酶菌株的篩選、初步鑒定和活性比較

由圖1可見，分離得到的菌株接種到CMC-Na固體培養(yǎng)基培養(yǎng)2～3 d后，經(jīng)剛果紅染色可以看到明顯、穩(wěn)定的透明圈，菌株1的菌落直徑（d1）是2.142 cm，透明圈直徑（D1）是4.598 cm，D1/d1是2.147；菌株2的菌落透明圈直徑（d2）是2.7 cm，透明圈直徑（D2）是2.774 cm，D2/d2是1.027。經(jīng)液體發(fā)酵后，菌株1和菌株2的CMCase活力分別是0.214 IU/mL和0.188 IU/mL，其中菌株1比活力比菌株2的CMCase活力高出14.2%。此后菌株采用察氏培養(yǎng)基培養(yǎng)，兩種菌株的菌落質(zhì)地呈絲絨狀，顏色呈黑褐色，后呈不同程度的黃色。菌株1的菌落具有輻射狀溝紋，菌株2菌落則表現(xiàn)平坦（如圖2所示）。在顯微鏡下進(jìn)一步觀察菌落，兩種菌株頂囊呈球形，雙層小梗，小梗上長(zhǎng)有成串褐黑色的球狀，分生孢子呈黑褐色球形，菌絲體發(fā)達(dá)，有隔（如圖3所示）。初步判定兩種菌株均為黑曲霉。

圖1 菌株的透明圈觀察

圖2 菌株在察氏培養(yǎng)基下菌落形態(tài)觀察

圖3 菌株的孢子形態(tài)觀察

2.2 目的菌株產(chǎn)CMCase條件的優(yōu)化

2.2.1 不同碳源對(duì)菌株1和菌株2產(chǎn)CMCase活力的影響

為研究菌株的最佳碳源，分別利用葡萄糖、蔗糖、淀粉、濾紙和CMC-Na為唯一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株，對(duì)菌株的CMCase活力進(jìn)行測(cè)定。由圖4可見，CMC-Na為唯一碳源時(shí)，菌株1和菌株2的CMCase活性最高，顯著高于其它碳源。當(dāng)葡萄糖作為碳源培養(yǎng)菌株時(shí)，菌株CMCase分泌量比CMC-Na為唯一碳源時(shí)低，可能是以葡萄糖為碳源時(shí)引起了葡萄糖效應(yīng)所致。蔗糖、淀粉和濾紙為碳源時(shí)，菌株的CMCase分泌量很少。因此，菌株1和菌株2的最佳碳源均為CMC-Na，其中菌株1的酶活力要比菌株2的酶活力高出14.2%。

圖4 菌株的最佳碳源

圖5 菌株的最佳氮源

2.2.2 不同氮源對(duì)菌株1和菌株2產(chǎn)CMCase活力的影響

為研究菌株的最佳氮源，分別利用蛋白胨、硫酸銨、酵母膏、硝酸銨和草酸為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)菌株，對(duì)菌株的CMCase活力進(jìn)行測(cè)定。由圖5可見，菌株1的最佳氮源順序依次是酵母膏、蛋白胨、硝酸銨、硫酸銨和草酸銨，測(cè)得菌株1的CMCase活力之比約是17∶8∶7∶1∶1。菌株2的最佳氮源順序依次是酵母膏、硫酸銨、草酸銨、蛋白胨和硝酸銨，測(cè)得菌株2的CMCase活力之比約是14∶12∶10∶10∶10。故菌株1和菌株2的最佳氮源均為酵母膏。酵母膏與其他氮源相比，既為菌株提供了氮源的同時(shí)，也為菌株提供了碳源和生長(zhǎng)因子，所以菌株在以酵母膏為唯一氮源時(shí)長(zhǎng)勢(shì)最好。兩種菌株利用酵母膏為氮源時(shí)，菌株2的酶活力要比菌株1的酶活力高出3.48%。

2.2.3 培養(yǎng)基起始pH對(duì)目的菌株產(chǎn)CMCase活力的影響

為研究菌株的最佳培養(yǎng)基起始pH，用醋酸鈉―醋酸緩沖液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，制成pH分別為4、5、6、7和8的培養(yǎng)基后，對(duì)菌株的CMCase活力進(jìn)行測(cè)定。由圖6可見，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的起始pH值至4時(shí)，菌株1和菌株2的CMCase活力分別是0.183 IU/mL和0.182 IU/mL。當(dāng)pH值上升至7時(shí)，菌株1和菌株2的CMCase活力分別降低了27.6%和40.5%。當(dāng)pH值上升至8時(shí)，菌株幾乎不分泌CMCase。由此可見兩種菌株的最適培養(yǎng)pH值均為4，該結(jié)果與Wen[26]和Latifian等[27]得出的產(chǎn)纖維素酶菌株培養(yǎng)基的最適起始pH值介于4.0～5.0一致。羧甲基纖維素鈉液體培養(yǎng)基呈酸性，菌株從該培養(yǎng)基中復(fù)篩得到，因而也適應(yīng)酸性環(huán)境。

圖6 菌株的最佳培養(yǎng)pH值

圖7 菌株的最佳培養(yǎng)溫度

2.2.4 培養(yǎng)溫度對(duì)菌株I和菌株2產(chǎn)CMCase活力的影響

溫度設(shè)定為10、20、30、40和50℃對(duì)菌株的CMCase活力進(jìn)行測(cè)定。由圖7可見，溫度從10℃上升至40℃時(shí)，兩株菌株的CMCase活力不斷提高，當(dāng)溫度上升至50℃時(shí)，幾乎測(cè)不到兩種菌株的CMCase活力。表明菌株1和菌株2的最佳培養(yǎng)溫度均為40℃，此時(shí)菌株1的酶活力要比菌株2的酶活力高出8.97%。Sangrila等[28]的結(jié)果表明產(chǎn)纖維素酶菌株優(yōu)化后，菌株的最適溫度多集中在35～55℃。本文中菌株的最適溫度是40℃，處于最適溫度范圍。由于菌株是從夏日中午采集的土樣中進(jìn)行篩選的，所以最適培養(yǎng)溫度稍高。

2.2.5 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)菌株1和菌株2產(chǎn)CMCase活力的影響

由圖8可見，菌株產(chǎn)CMCase的活力均隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加而增大，第7 d時(shí)達(dá)到最大，此時(shí)菌株1的酶活力是菌株2酶活力的1.70倍。

圖8 菌株1和菌株2的最佳培養(yǎng)時(shí)間

2.2.6 兩種目的菌株優(yōu)化后的CMCase活力

綜合以上各優(yōu)化條件，配制含1% CMC-Na和0.3%酵母膏，起始pH值為4的培養(yǎng)基，于40℃條件培養(yǎng)，優(yōu)化后的菌株1和菌株2的CMCase活力分別是0.504 IU/mL和0.277 IU/mL。優(yōu)化后菌株1和菌株2的CMCase活力分別是優(yōu)化前酶活力的2.35和1.47倍，優(yōu)化后菌株1的CMCase活力比菌株2高82.0%。表明菌株經(jīng)過(guò)培養(yǎng)條件優(yōu)化后，產(chǎn)CMCase能力有很大幅度的提高，優(yōu)化后的菌株更有益于纖維素的降解。在該優(yōu)化培養(yǎng)基中，最佳碳源CMC-Na在提供碳源的同時(shí)也提供了Na元素易于菌株的生長(zhǎng)，同時(shí)CMC-Na作為底物，在適當(dāng)濃度下可以促進(jìn)菌株的CMCase分泌。最佳氮源酵母膏與其它氮源相比除了提供氨基酸外，也提供了碳源及生長(zhǎng)因子。本文中菌株能夠在以菌糠為唯一碳源的液體培養(yǎng)基中生勢(shì)良好，原因可能在于菌糠中除了含粗纖維以外，還含有粗蛋白、粗纖維及其他Ca、Zn、Mg等微量元素[29-30]，而這些營(yíng)養(yǎng)元素可以保證菌株正常生長(zhǎng)，同時(shí)菌株分泌的纖維素酶可以降解菌糠中的粗纖維成分，使菌糠轉(zhuǎn)化成更易于動(dòng)物消化和吸收的飼料，增加菌糠的利用率。

3 結(jié)論

利用羧甲基纖維素鈉培養(yǎng)基，采用剛果紅染色法，并進(jìn)一步利用液體發(fā)酵培養(yǎng)基篩選得到黑曲霉2株。

菌株的最適產(chǎn)酶條件：液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方10 g/L CMC-Na，3 g/L 酵母膏，0.3 g/L MgSO4，0.3 g/L CaCl2，4 g/L KH2PO4，pH值4，培養(yǎng)溫度是40℃，發(fā)酵培養(yǎng)到第7 d時(shí)，菌株1和菌株2粗酶液的CMCase活力分別達(dá)到0.504 IU/mL和0.277 IU/mL。

[1] Bayer E A, Belaich J P, Shoham Y, et al. The cellulosomes: multienzyme machines for degradation of plant cell Wall polysaccharides[J]. Annual Review of Microbiology, 2004, 58: 521-524.

[2] Deutschmann R, Dekker R F H. From plant biomass to bio-based chemicals: latest developments in xylan research[J]. Biotechnology Advances, 2012, 30(16): 1627-1632.

[3] 辛亞平, 昝林森, 杜雙田, 等. 降解纖維素菌株篩選及其鑒定[J]. 畜牧獸醫(yī)雜志, 2011, 30(5): 1-5.

[4] 趙方圓, 范寧杰, 朱建春, 等. 纖維素高效降解菌YN1的篩選及其降解特性[J]. 微生物學(xué)通報(bào), 2010, 37(4): 496-502.

[5] 張傳富, 顧文杰, 彭科峰, 等. 微生物纖維素酶的研究現(xiàn)狀[J]. 生物信息學(xué), 2007, 5(1): 34-36.

[6] 王亮, 尚會(huì)建, 楊立彥, 等. 纖維素酶的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 河北工業(yè)科技, 2010, 27(6): 441-443.

[7] 陳義長(zhǎng), 余憲虎. XYT-1高效廢紙脫墨劑的研制與應(yīng)用[J]. 湖北化工, 2001, 3: 2-4.

[8] 戚建華, 姚增玉, 鄧西平, 等. 板栗殼對(duì)水中Cu2+吸附性能的研究[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)/自然科學(xué)版, 2009, 37(4): 197-202.

[9] Yu Y Y, Yuan J G, Wang Q, et al. Cellulase immobilization onto the reversibly soluble methacrylate copolymer for denim washing[J]. Carbohydrate Polymers, 2013, 95: 675-680.

[10] Cherry J R, Fidantsef A L. Directed evolution of industrial enzymes: an update[J]. Current Opinion in Biotechnology, 2003, 14: 438-439.

[11] Kirk O, Borchert T V, Fuglsang C C. Industrial enzyme applications[J]. Current Opinion in Biotechnology, 2002, 13: 345- 351. [12] Qaisar S, Zohra R R, Aman A, et al. Enhanced production of cellulose degrading CMCase by newlyisolated strain of Aspergillus versicolor[J]. Carbohydrate Polymers, 2014, 104: 199-203.

[13] Sanjeev R, Deepa D, Matti K, et al. Bioprocessing of enhanced cellulase production from a mutant of Trichoderma asperellum RCK2011 and its application in hydrolysis of cellulose[J]. Fuel, 2014, 124: 183-189.

[14] 付傳明, 何金祥, 黃寧珍, 等. 秸稈纖維素分解真菌產(chǎn)酶條件優(yōu)化及高酶活突變株誘變選育[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2010, 23(3): 714-718.

[15] Chen J, Xu L X, Wu Y. Production, characterization of acetyl esterase from a rumen bacteria strain RB3, and application potential of the strain in biodegradation of crop residues[J]. Renewable Energy, 2014, 68: 134-139.

[16] 宋安東, 王磊, 王風(fēng)芹, 等. 微生物處理對(duì)秸稈結(jié)構(gòu)的影響[J]. 生物加工過(guò)程, 2009, 7(4): 72-76.

[17] 劉起麗, 張建新, 葛文嬌, 等. 一株產(chǎn)纖維素酶真菌的篩選及其對(duì)秸稈的降解效果研究[J]. 現(xiàn)代食品科技, 2014, 30(6): 82-86.

[18] 劉志偉, 譚興和, 周紅麗, 等. 自然制曲的蠶豆曲中優(yōu)勢(shì)微生物的分離與初步鑒定[J]. 中國(guó)調(diào)味品, 2011, 36(5): 97-99.

[19] 張建強(qiáng), 李亞瀾, 李勇. 纖維素降解菌的分離鑒定及固態(tài)發(fā)酵條件[J]. 西南交通大學(xué)學(xué)報(bào), 2006, 41(4): 442-446.

[20] Tehater R M, Wood P J. Use of Congo Red-Polysaccharide interactions in enumeration and characterization of cellulolytic bacteria from the bovine rumen[J]. Applied and Environment Microbiology, 1982, 43: 777-780.

[21] 齊云, 袁月祥, 陳飛, 等. 一組纖維素分解菌的分離、篩選及其產(chǎn)酶條件的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2003, 15(6): 510-512.

[22] 劉德海, 楊玉華, 安明理, 等. 纖維素酶酶活的測(cè)定方法[J]. 中國(guó)飼料, 2002, 17: 27-28.

[23] 趙亞華. 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)教程[M]. 廣州: 華南理工大學(xué)出版社, 2000, 8: 149-151.

[24] 鄭惠華, 陳惠, 張志才. 常溫纖維素分解菌篩選及JSU-5產(chǎn)纖維素酶條件的優(yōu)化[J]. 藥物生物技術(shù), 2009, 16(3): 237-240.

[25] 邵力平, 沈瑞祥, 張素軒, 等. 真菌分類學(xué)[M]. 北京: 中國(guó)林業(yè)出版社, 1984, 12: 307-309.

[26] Wen Z Y, Liao W, Chen S L. Productionof cellulase/β-glucosidase by themixed fungi culture Trichoderma reesei and Aspergillus phoenicis on dairy manure[J]. Process Biochemistry, 2005, 40: 3087-3094.

[27] Latifian M, Esfahani Z H, Barzegar M. Evaluation of culture conditions for cellulose production by two Trichoderma reesei mutants under solid state fermentation conditions[J]. Bioresource Technology, 2007, 98: 3634-3637.

[28] Sangrila S, Pallab K G, Goutam A, et al. Optimization and strain improvement by mutation for enhanced cellulase production by Bacillus sp. (MTCC10046) isolated from cow dung[J]. Journal of King Saud University-Science, 2014, 26(4): 323-332.

[29] 李加友. 菌糠綜合開發(fā)利用進(jìn)展[ J]. 浙江食用菌, 2009, 17(3): 45-46.

[30] 呂文亭, 劉春凌, 狄文強(qiáng). 稻草菌糠對(duì)AA肉雞生產(chǎn)性能及部分代謝激素水平的影響[J]. 中國(guó)家禽, 2010, 32(10): 18-20.

Isolation of Cellulase-Producting Strains and Optimization of Cellulase-Producting Conditions

ZHANG Li-ying1, WANG Han-han2, PAN Ting2, XING Cheng-hua3*, CAI Miao-zhen2
（1. College of Chemistry and Life Science, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004, China; 2. College of Geography and Environmental Science, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004, China; 3. Bioengineering Institute, Jinhua College of Vocation and Technology, Jinhua 321007, China）

Two cellulase-producting strains were isolated by sodium carboxymethyl cellulose medium and liquid fermentation from the rice cultivated soil. The colony morphologic, color and spore morphologic analysis suggested that the two strains were Aspergillus Niger. The premium CMCase activity and optimized cellulase-producting conditions were determined. Under the optimum condition of 1.0%CMC-Na and 0.3% yeast extract yeast extract, 4 in pH and 40℃ in temperature, the crude CMCase activities reached the maximum at 0.504 IU/mL and 0.277 IU/mL.

cellulase-produting strains; screening; CMCase; enzyme activity

Q93.331

A

1004-8405(2015)02-0001-07

2015-03-02

浙江省公益性技術(shù)應(yīng)用研究計(jì)劃項(xiàng)目（2013C32047）；金華市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2011-2-005）。

張麗影（1990～），女，碩士研究生；研究方向：環(huán)境修復(fù)與逆境植物生理。1138625296@qq.com

* 通訊作者：邢承華（1976～），男，博士，教授；研究方向：植物營(yíng)養(yǎng)、植物生態(tài)。xingchenghua@ hotmail.com