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    足三里穴位注射參麥注射液對SIRS大鼠IL-6和IL-8水平的影響

    2015-12-27 05:48:17任大為傅天嘯傅永清
    山西中醫(yī)藥大學學報 2015年1期
    關鍵詞:參麥生理鹽水空白對照

    任大為,傅天嘯,蘭 菲,傅永清

    (浙江中醫(yī)藥大學,浙江杭州310053)

    足三里穴位注射參麥注射液對SIRS大鼠IL-6和IL-8水平的影響

    任大為,傅天嘯,蘭 菲,傅永清

    (浙江中醫(yī)藥大學,浙江杭州310053)

    目的:探討足三里穴位注射參麥注射液對全身炎癥反應綜合征(SIRS)大鼠IL-6和IL-8水平的影響。方法:40只SD大鼠隨機分成空白對照組、針刺治療組、生理鹽水組和參麥注射液組,每組10只。采用大鼠尾靜脈注射大腸桿菌內毒素(LPS)制備SIRS大鼠動物模型。造模1 h后,針刺治療組針刺足三里,留針5 min;生理鹽水組足三里穴位注射生理鹽水,0.1 mL/100 g;參麥注射液組足三里穴位注射參麥注射液,0.1 mL/100 g,以后每24 h給藥1次。空白對照組不予藥物干預。5 d后,予大鼠腹主動脈采血,測量血清生化指標(ALT、AST和CREA)和炎癥因子(IL-6和IL-8)水平。結果:與空白對照組比較,參麥注射液組、針刺治療組和生理鹽水組CREA、ALT、AST、IL-6及IL-8水平升高(P<0.05);與針刺治療組及生理鹽水組比較,參麥注射液組CREA、ALT、AST、IL-6及IL-8水平明顯降低(P<0.05)。結論:參麥注射液通過足三里穴位注射能夠顯著抑制SIRS大鼠炎性細胞因子IL-6和IL-8的表達,顯著改善大鼠肝腎功能,發(fā)揮了抗SIRS的作用。

    全身炎癥反應綜合征;參麥注射液;白細胞介素-6;白細胞介素-8;足三里;穴位注射

    外科全身炎癥反應綜合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)是由嚴重的病理損傷引導全身炎癥反應的一種臨床過程,多發(fā)生于嚴重創(chuàng)傷、外科感染或大手術后恢復期間。1991年ACCP/ SCCM提出了SIRS的概念并相應地確立了診斷標準[1]。SIRS一旦發(fā)生,如不加以足夠重視,很容易發(fā)展成為多器官功能障礙綜合癥(metadata object description schema,MODS),導致治療困難,最終死于不可逆的多器官功能衰竭(multiple organ failure,MOF)。而外科腫瘤患者,尤其是老年患者,在原發(fā)病基礎上,加上手術創(chuàng)傷、麻醉及手術中可能出現(xiàn)的出血、低血壓、缺氧及術后感染的因素,術后大多出現(xiàn)肝、腎功能不全甚至肝、腎功能衰竭。目前,中藥參與SIRS治療在臨床上越來越引起高度的重視。本文為探討術后改善肝、腎功能的有效方法,通過建立SIRS大鼠動物模型,模擬外科臨床術后常見的病理生理狀況,聯(lián)合足三里穴位注射中藥參麥注射液作為干預手段,通過觀察實驗中各組外周血炎癥因子白介素因子-6(IL-6)和白介素因子-8(IL-8)的表達量及與全身情況、重要臟器功能改變的相關性,揭示足三里穴位注射參麥注射液對全身炎癥反應防治作用的機制,為臨床穴位注射參麥注射液防治外科SIRS奠定實驗基礎。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料

    1.1.1 實驗動物 健康SPF級雄性SD大鼠40只,平均體重(350±40)g。由浙江中醫(yī)藥大學動物實驗研究中心提供,動物許可證號:SYXK(浙)2008-0115。1.1.2 藥品與試劑 3%戊巴比妥鈉(美國sigma公司,批號:P3761);參麥注射液(杭州正大青春寶藥業(yè)有限公司,批號:Z33020021);大腸桿菌內毒素(LPS,E Coil 055:B5美國Sigma公司產品);ELISA(IL-6和IL-8)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

    1.1.3 實驗儀器 針灸針(0.35 mm×40 mm,華佗牌,蘇州醫(yī)療用品有限公司,編號:GB2024-1994)。動物手術器械、體重器、體溫計、全自動生化分析儀(型號:BK-800,購于山東博科生物產業(yè)有限公司)等均由浙江中醫(yī)藥大學動物實驗研究中心提供。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 分組與造模 40只大鼠隨機分成空白對照組、針灸足三里治療組(針刺治療組)、足三里穴位注射生理鹽水組(生理鹽水組)和足三里穴位注射參麥注射液組(參麥注射液組),每組10只。分組后,分別監(jiān)測各組大鼠血壓、心率、脈搏、呼吸頻率等,體溫計測定肛溫。24 h后,除空白對照組外,其余3組大鼠均采用尾靜脈注射LPS 5 mg/kg建立一次打擊大鼠SIRS模型[2](針刺治療組、生理鹽水組及參麥注射液組合稱SIRS模型組)。注射LPS 6 h后分別記錄大鼠體溫、平均動脈壓、脈搏及呼吸頻率各1次。發(fā)現(xiàn)SIRS模型組大鼠在注射LPS后直腸溫度升高或降低1℃,心率較對照值增加50%,呼吸頻率超過對照值的2倍,外周血白細胞超過對照值的2倍或減少50%。經(jīng)鑒定,模型組動物全部達到SIRS診斷標準[2]。

    1.2.2 治療方法 空白對照組不予藥物干預處理。針刺治療組針刺足三里(據(jù)擬人比照法,大鼠膝關節(jié)外下方當膝骨小頭下約5 mm處),留針5 min;生理鹽水組足三里穴位注射生理鹽水,0.1 mL/100 g;參麥注射液組足三里穴位注射參麥注射液,0.1 mL/ 100 g。分別于造模1 h后開始第1次干預,以后每24 h干預1次。

    1.2.3 標本采集與檢測 SIRS大鼠造模并經(jīng)過5 d治療后,上述4組大鼠分別予3%戊巴比妥鈉(16 mg/kg)腹腔注射麻醉,麻醉成功后,取上腹部正中切口,剖開腹腔,完全暴露腹主動脈,快速抽取腹主動脈血8 mL~10 mL。丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、肌酐(CREA)取血3 mL~5 mL,采用全自動生化分析儀檢測;IL-6、IL-8采用ELISA法測定,具體步驟按試劑盒進行。

    1.3 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 15.0統(tǒng)計軟件進行分析,計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。多個樣本的均數(shù)比較采用單因素方差分析。

    2 結 果

    2.1 一般情況

    空白對照組大鼠活潑好動,皮毛潔白、細密有光澤,呼吸均勻,雙目有神,大便棕黑色、成形。SIRS模型組大鼠先后出現(xiàn)精神疲軟、反應慢、少動;毛發(fā)無光澤甚至掉毛;不欲飲食、大便不成形等。

    2.2 各組大鼠血清ALT、AST、CREA、IL-6及IL-8水平比較

    與空白對照組比較,參麥注射液組、針刺治療組和生理鹽水組CREA、ALT、AST、IL-6及IL-8水平升高(P<0.05);與針刺治療組及生理鹽水組比較,參麥注射液組CREA、ALT、AST、IL-6及IL-8水平明顯降低(P<0.05);針刺治療組與生理鹽水組比較,上述指標差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),表明參脈注射液作用較好。結果見表1。

    3 討論

    表1 各組大鼠血清ALT、AST、CREA、IL-6及IL-8水平比較 (x±s)

    近幾年中西醫(yī)結合治療SIRS得到重視,目前臨床上運用中西醫(yī)結合治療方法取得一定療效。中醫(yī)理論認為,若病邪侵襲陽明,經(jīng)絡失調,則病邪易于深入機體,并熾盛于周身,形成“胃家實”。此時,可引起機體循環(huán)系統(tǒng)功能紊亂,微血管內皮細胞和臟器實質細胞缺血、缺氧和功能障礙,血管通透性改變,細胞因子和炎癥介質大量釋放,從而導致SIRS[3]。腧穴是人體臟腑經(jīng)絡之氣輸注于體表的特殊部位。而足三里為足陽明經(jīng)合穴、胃下合穴,位于小腿前外側,當犢鼻下3寸,主治胃痛、嘔吐、腹脹、腸鳴、消化不良等病癥?,F(xiàn)代醫(yī)學研究證實,針刺足三里穴可使胃腸蠕動有力而規(guī)律,并能提高多種消化酶的活力;在神經(jīng)系統(tǒng)方面,可促進腦細胞機能的恢復,提高大腦皮層細胞的工作能力;在循環(huán)、血液系統(tǒng)方面,可以改善心功能,調節(jié)心律,增加紅細胞、白細胞、血色素和血糖量等[4]。因此足三里穴位注射在防治SIRS中作用的研究有積極意義。

    穴位注射療法是以經(jīng)絡學說為指導,將經(jīng)絡、腧穴、藥物效應有機結合起來,在穴位或特定部位注入藥液以治療疾病的一種治療方法。大量觀察證實,穴位注射在一定程度上療效優(yōu)于口服、肌注,甚至接近或超過靜脈給藥,其主要是與藥物的藥理作用特點及其對不同經(jīng)絡、不同穴位的作用緊密相關[5]。肝為剛臟,體陰而用陽,肝氣常有余,肝陰肝血常不足,而腎為水臟,主津液。外科手術患者術前多有血容量不足,加上手術不同程度出血,術后引流都會因失血而傷陰耗氣,故患者術后多有氣陰不足表現(xiàn)。而參麥注射液是在古方參麥散的基礎上運用現(xiàn)代科學技術改型的中藥靜脈注射液,由人參、麥冬兩味藥物提取精制而成(含人參皂苷、麥冬黃酮、麥冬皂苷),具有大補元氣、益氣固脫、養(yǎng)陰生津之功效。SIRS病情篤重,發(fā)展迅速,可徑直出現(xiàn)氣陰俱傷,進而“氣隨液脫”致“陰陽離絕”,后果不堪設想[6]。所以術后早期使用參麥注射液符合中醫(yī)學辨證論治的觀點。

    實驗研究表明,在SIRS時,參麥注射液對組織損傷及機體具有“多靶”作用。例如提高微循環(huán)供血,改善再灌注損傷,抗氧化自由基及調節(jié)細胞內糖代謝中的2,3-DPC水平,從而促進氧的釋放和攝取等。尤其是人參,其含有胸腺肽成分,具有提高細胞免疫(CD4)的功能,此點對阻斷炎癥反應及炎癥-免疫聯(lián)合反應(免疫粘連)起著重要作用。此外,參麥注射液還具有免疫調節(jié)功能和維持水/電解質平衡的作用[7]。臨床中我們發(fā)現(xiàn),中醫(yī)學之氣虛在某種特定情況下相當于西醫(yī)的缺氧,而陰虛與西醫(yī)的水電解質失衡部分相似,故兼顧“氣陰兩虛”之參麥注射液用于SIRS這類疾患十分恰當。

    SIRS的發(fā)生涉及多種病理生理機制,主要有炎癥反應、細胞因子失衡及細胞凋亡等。其中多種炎性細胞因子與SIRS的發(fā)病密切有關,包括腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-1(IL-1)、IL-6、IL-8和白細胞介素-10(IL-10)等。IL-6和IL-8是具有化學趨化作用的細胞因子,由多種參與炎性反應的細胞產生,是多形核細胞和T淋巴細胞激活和趨化因子。IL-6和IL-8在炎性反應過程可激活中性粒細胞多方面的功能,包括外形的改變、溶酶體酶的釋放、超氧化物的產生和增加、黏附分子的表達等。多數(shù)學者認為它們與SIRS的發(fā)病和導致死亡關系最為密切,有效地抑制IL-6、IL-8的產生有利于降低SIRS的死亡率[8-9]。

    研究表明,LPS是格蘭陰性桿菌致SIRS的主要原因,LPS進入血液循環(huán)后,會與脂多糖結合蛋白(lipopolysaccharide binding protein,LBP)結合形成復合物。這種復合物通過與單核細胞或巨噬細胞表面高親和力的受體CD14結合再作用于T細胞抗原受體4(TCR4),引起靶細胞激活并釋放一系列的炎癥介質進入全身循環(huán),繼而引起瀑布式的炎癥級聯(lián)反應,造成組織繼發(fā)損害,甚至最終由SIRS發(fā)展為多器官功能障礙綜合征MODS[10]。趙明等[11]報道參麥注射液及丹參注射液均能降低LPS腹腔注射后血清TNF-α和IL-6水平,下調過高的炎癥反應,從而發(fā)揮對SIRS的治療作用。在本研究中,從空白對照組與SIRS模型組比較,可見LPS致SIRS形成后,血清生化指標(ALT、AST和CREA)明顯升高,表明SIRS對肝腎功能的影響。而參麥注射組和針刺治療組、生理鹽水組比較,各項生化指標明顯降低,表明參麥注射液足三里穴位注射對大鼠SIRS能明顯起到保護肝腎功能的作用。

    綜上所述,本研究采用純中藥提取液參麥注射液,進行足三里穴位注射,綜合了經(jīng)絡穴位針灸及中藥外用等療效,改變了臨床注射劑的一般常規(guī)用法,使得其更加簡便,療效更多元化。實驗表明,參麥注射液能較好地改善肝臟、腎臟的微循環(huán),抵抗炎性介質對肝臟、腎臟細胞的破壞,對維護肝臟、腎臟功能,減少或避免出現(xiàn)急性肝臟、腎臟的功能衰竭有比較肯定的臨床意義。同時,本研究中對于血清中IL-6和IL-8含量的分析結果表明,參麥注射液能夠顯著抑制SIRS大鼠炎性細胞因子IL-6和IL-8的表達。提示參麥注射液對SIRS具有一定的保護作用,其作用機制可能與下調IL-6和IL-8,抑制促炎因子表達,減輕局部炎癥反應所致肝腎損傷有關。這一研究為外科臨床應用參麥注射液治療SIRS提供了理論依據(jù)。

    [1]邱海波,杜斌,陳德昌,等.危重病患者全身性炎癥反應綜合征的臨床分析[J].中華醫(yī)學雜志,1997,77(3):234-235.

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    (編輯:翟春濤)

    Effect of Shenmai injection injected in Zusanli acupoint on the content of IL-6 and IL-8 in SIRS rats

    Ren Dawei,F(xiàn)u Tianxiao,Lan Fei,F(xiàn)u Yongqing
    (Zhejiang Chinese Medicine University,Hangzhou Zhejiang 310053)

    Objective:To study the effect of Shenmai injection injected in Zusanli acupoint on the content of IL-6 and IL-8 in SIRS rats.Methods:40 SD rats were randomly divided into blank control group,acupuncture treatment group,normal saline group and the Shenmai injection group with 10 rats in each group.SIRS rats models were established by injecting LPS in caudal vein.1 h after model establishment,except blank control group,acupuncture treatment group acupuncture Zusanli acupoint,retaining needle 5 min and normal saline group and the Shenmai injection group inject normal saline(0.1 mL/100 g)and shenmai injection(0.1 mL/100 g)in Zusanli acupoint respectively,each 1 time per 24 h.5 days after treatment,biochemical indexes(ALT,AST CREA)and inflammatory factors(IL-6 and IL-8)levels were measured through extracting the blood of the abdominal aorta in rats.Results:Compared with the blank control group,the serum ALT,AST,CREA,IL-6 and IL-8 levels in acupuncture treatment group,normal saline group and Shenmai injection group were increased(P<0.05).Compared with acupuncture treatment group and normal saline group,the serum ALT,AST,CREA,IL-6 and IL-8 levels in Shenmai injection group were decreased(P<0.05).Conclusion:Shenmai injection injected in Zusanli acupoint can significantly inhibit the expression of inflammatory cytokines IL-6 and IL-8 in SIRS rats,improve the function of liver and kidney of rats and play the role of anti-SIRS.

    SIRS;Shenmai injection;IL-6;IL-8;Zusanli;acupoint injection

    R285.5

    A

    1671-0258(2015)01-0027-04

    浙江中醫(yī)藥管理局資助項目(2014ZA043)

    任大為,在讀碩士,E-mail:420269890@qq.com

    傅永清,教授,碩士研究生導師,E-mail:fuyongqing1949@163.com

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