抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ及心肌細(xì)胞TGF-β1的影響

抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ及心肌細(xì)胞TGF-β1的影響

麻京豫

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，河南鄭州450000)

摘要〔〕目的探討抗心衰顆粒對舒張性心衰(DHF)大鼠血漿醛固酮(ALD)、腎素活性(PRA)、血管緊張素(AT)-Ⅱ及心肌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子 (TGF)-β1的影響。方法建立DHF大鼠模型，隨機(jī)分為模型組，陽性藥組(鹽酸貝那普利)，抗心衰顆粒大、中、小劑量組和假手術(shù)組，采用放射免疫法(RIA)測定大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ，免疫熒光染色法測定大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1蛋白表達(dá)水平。結(jié)果陽性藥組及抗心衰顆粒大劑量組AT-Ⅱ均較模型組降低(均P<0.05)，且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；陽性藥組及抗心衰顆粒大、中劑量組ALD均較模型組降低(均P<0.05)，且抗心衰顆粒大、中劑量組ALD與陽性藥組均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；陽性藥組及抗心衰顆粒各劑量組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的平均熒光強(qiáng)度均較模型組降低(均P<0.05)。結(jié)論抗心衰顆粒具有有效抑制DHF發(fā)生發(fā)展過程中腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的過度激活和抗心肌纖維化的作用，具有較好的臨床應(yīng)用價值。

關(guān)鍵詞〔〕醛固酮；血管緊張素Ⅱ；腎素；轉(zhuǎn)化生長因子β1；抗心衰顆粒；舒張性心力衰竭

中圖分類號〔〕R541.4〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A〔

第一作者：麻京豫(1969-)，女，碩士，副教授，副主任醫(yī)師，主要從事心衰方面的研究。

目前研究〔1〕認(rèn)為舒張性心力衰竭(DHF)的主要發(fā)生發(fā)展機(jī)制主要與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的過度激活和心肌纖維化有關(guān)，而心肌的纖維化則與心肌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1有著緊密聯(lián)系。本研究通過建立DHF大鼠模型，觀察分析抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿醛固酮(ALD)、腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AT-Ⅱ)及心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的影響，為DHF的臨床治療提供新的思路。

1材料與方法

1.1動物模型的建立選擇8周齡SD雄性大鼠120只，體重(200±10)g，鄭州大學(xué)實驗室動物中心提供(合格證號511020)，隨機(jī)分為模型組(100只)和假手術(shù)組(20只)。采用腹主動脈縮窄法建立DHF大鼠模型，使大鼠腹主動脈直徑減少35%～45%，在建模后8 w采用超聲心電圖和心導(dǎo)管等方法判斷DHF大鼠模型是否建立成功。假手術(shù)組僅開腹暴露腹主動脈不做結(jié)扎縮窄，其余步驟和模型組相同。術(shù)后1 w內(nèi)給每只大鼠腹腔注射青霉素10萬單位/d。

1.2分組與給藥將DHF大鼠模型隨機(jī)分為模型組，陽性藥組，抗心衰顆粒大、中、小劑量組和假手術(shù)組。其中抗心衰顆粒大、中、小劑量分別予以48.29、24.14、12.07 g/kg抗心衰顆粒(河南省中醫(yī)院制劑部提供，批號：20130411)進(jìn)行灌胃，陽性藥組予以1.43 mg/kg的鹽酸貝那普利(商品名：洛汀新，北京惠通醫(yī)藥有限公司提供，批號:C0005)進(jìn)行灌胃，而模型組和假手術(shù)組則僅予以蒸餾水灌胃。給藥8 w后，每組隨機(jī)抽取6只大鼠進(jìn)行測定。

1.3大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ的測定采用放射免疫法(RIA)測定大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ，所有試劑盒均由北京解放軍總醫(yī)院東亞免疫所提供。抽取大鼠頸總動脈血液，使用肝素抗凝，2 500 r/min離心10 min。

1.4大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的測定采用免疫熒光染色法測定大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1蛋白表達(dá)水平，所有試劑盒均由南京凱基生物科技有限公司提供。將大鼠心室相同部位心肌進(jìn)行冰凍切片染色及置片，用激光488 nm/530 nm激發(fā)20%發(fā)射后觀察照相。

2結(jié)果

2.1抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿ALD、PRA、AT-Ⅱ的影響模型組大鼠血漿PRA、ALD、AT-Ⅱ均較假手術(shù)組升高(均P<0.05)；抗心衰顆粒中劑量組PRA較模型組降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而陽性藥組及抗心衰顆粒大、小劑量組PRA均與模型組無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)；陽性藥組及抗心衰顆粒大劑量組AT-Ⅱ均較模型組降低(均P<0.05)，且兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；陽性藥組及抗心衰顆粒大、中劑量組ALD均較模型組降低(均P<0.05)，且抗心衰顆粒大、中劑量組ALD與陽性藥組均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。見表1。

表1　抗心衰顆粒對DHF大鼠血漿ALD、

與假手術(shù)組比較：1)P<0.05；與模型組比較： 2)P<0.05

2.2抗心衰顆粒對DHF大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的影響模型組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的平均熒光強(qiáng)度(60.12±12.32)較假手術(shù)組(15.62±2.19)升高(P<0.05)；陽性藥組(18.21±2.41)及抗心衰顆粒大、中、小劑量組(19.47±2.86，31.32±7.96，41.32±8.78)均較模型組降低(均P<0.05)，其中陽性藥組與抗心衰顆粒大劑量組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，而與抗心衰顆粒中、小劑量組存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

3討論

DHF是以心室肌舒張功能僵硬度升高及順應(yīng)性下降而心室肌收縮功能正常(射血分?jǐn)?shù)>50%)為主要特征，臨床表現(xiàn)為充血性心力衰竭癥狀與體征的一組臨床癥候群〔2〕。目前研究〔3〕認(rèn)為RAAS在心血管系統(tǒng)功能的調(diào)節(jié)和維持方面具有重要的意義，近年的研究發(fā)現(xiàn)RAAS系統(tǒng)不僅參與調(diào)節(jié)大血管功能，而且在心力衰竭過程中心肌細(xì)胞的增殖與凋亡中也具有一定的促進(jìn)作用，能夠間接或直接導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)生〔4〕。PRA可以使血管緊張素原水解成AT-Ⅰ，而血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)可以使AT-Ⅰ進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成AT-Ⅱ，AT-Ⅱ不但能促進(jìn)ALD在腎上腺皮質(zhì)的分泌，而且同時還具有膠原轉(zhuǎn)化等生物學(xué)作用〔5〕。近年來很多學(xué)者〔6～8〕從不同角度對構(gòu)建了一系列心衰動物模型，這些模型有利于對心衰的全過程進(jìn)行研究。DHF的病因多種多樣〔6〕，目前研究發(fā)現(xiàn)高血壓是造成DHF的主要疾病〔7〕。

抗心衰顆粒由黃芪、山萸肉、蒲黃及海藻等中草藥組成，有益氣滋陰、化痰利水、活血養(yǎng)血、軟堅散結(jié)的功效〔8〕。其中黃芪為君藥，具有增強(qiáng)心肌細(xì)胞缺血缺氧耐受力的能力；山萸肉可以提高受損心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)活性氧水平；蒲黃可以抑制血小板的聚集作用，延長復(fù)鈣時間；海藻有調(diào)節(jié)血管收縮、抗動脈粥樣硬化及保護(hù)心肌等作用〔9〕。

本研究結(jié)果與RAAS的過度激活理論一致。另外本研究可能與鹽酸貝那普利不能直接作用于PRA，其可能直接通過抑制ACE使AT-Ⅱ的生成減少有關(guān)，這與苗夢露等〔10〕的研究結(jié)果一致。本研究還發(fā)現(xiàn)抗心衰顆粒可能對PRA具有最佳效應(yīng)劑量，若需進(jìn)一步確認(rèn)，可以適當(dāng)增加劑量組繪制劑量效應(yīng)曲線。而且本研究提示抗心衰顆粒與鹽酸貝那普利抗心衰的效果一致，抗心衰顆粒能抑制RAAS的過度激活，可以用于臨床治療DHF。

DHF的發(fā)展過程中，心肌細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞能夠發(fā)生代償性變化，造成心肌纖維化，使心肌發(fā)生重構(gòu)〔11〕。RAAS的激活是造成心肌纖維化的主要原因，而同時細(xì)胞因子中最重要的促纖維化生長因子則為TGF-β1，其能促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)mRNA的表達(dá)及蛋白質(zhì)的形成，同時能抑制細(xì)胞外基質(zhì)的降解〔12〕。本研究結(jié)果提示鹽酸貝那普利和抗心衰顆粒均能抑制TGF-β1的表達(dá)，其抑制程度與抗心衰顆粒的劑量呈正相關(guān)關(guān)系。

綜上所述，抗心衰顆粒具有有效抑制DHF發(fā)生發(fā)展過程中RAAS的過度激活和抗心肌纖維化的作用，臨床應(yīng)用抗心衰顆粒具有一定的有效性及理論依據(jù)。

4參考文獻(xiàn)

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10苗夢露,李七一,嚴(yán)士海,等.抗心衰顆粒對舒張性心衰大鼠RAAS及心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1的影響〔J〕.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2013;29(3):247-50.

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〔2014-11-17修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)