CBX7蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及意義

陳 敏

（武漢市江夏區(qū)第一人民醫(yī)院老年病科 武漢430200）

甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是人類內(nèi)分泌器官中最常見的惡性腫瘤，占所有惡性甲狀腺腫瘤的60%－80%。在一些碘攝入量高的國家，如日本，PTC發(fā)病率更高，占到所有甲狀腺癌患者的85%以上［1］。近年來，我國甲狀腺癌的發(fā)病率呈明顯上升的趨勢［2］。為了使甲狀腺癌患者得到正確診斷和及時有效治療，我們需要進(jìn)一步研究和探討甲狀腺癌的發(fā)病機制。

CBX7（ehromoboxhomolog7）與黑腹果蠅的異染色質(zhì)蛋白（Heteroehromatin Protein，HPI）具有同源性，主要分布于染色質(zhì)、核，其分子功能通過與染色質(zhì)結(jié)合實現(xiàn)。目前已有研究表明CBX7在腫瘤細(xì)胞中有表達(dá)，但不同腫瘤中CBX7表達(dá)情況與腫瘤的惡性程度的關(guān)系有不同表現(xiàn)，部分腫瘤CBX7高表達(dá)提示腫瘤惡性程度高，在另外的腫瘤則相反［3－5］。

通過應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法和圖像分析技術(shù)檢測CBX7蛋白在甲狀腺乳頭狀癌及癌旁組織中的表達(dá)水平，以探討其在甲狀腺乳頭狀癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和侵襲過程中的作用機制，為臨床上治療甲狀腺乳頭狀癌提供理論依據(jù)。

材料和方法

1.材料

1.1 材料來源

收集江夏區(qū)人民醫(yī)院病理科2009－2013年手術(shù)切除及活檢的甲狀腺乳頭狀癌標(biāo)本40例和癌旁組織20例。其中甲狀腺乳頭狀癌中男12例，女28例；年齡23－68歲。癌旁組織中男6例，女14例；年齡20－60歲。隨訪時間為8－36個月，平均隨訪時間20.3個月，中位隨訪時間18個月。

1.2 材料分組

蠟塊切片厚5μm，粘片于涂有多聚賴氨酸的潔凈載玻片上，置于烤箱烤干待用。常規(guī)HE染色，用免疫組織化學(xué)S－P法檢測CBX7蛋白在各組中的表達(dá)。

2.主要試劑和儀器

2.1 主要試劑

（1）濃縮型兔抗人CBX7蛋白多克隆抗體（北京中杉生物技術(shù)有限公司）；

（2）超敏即用型S－P通用型免疫組織化學(xué)試劑盒（北京中杉生物技術(shù)有限公司）；

（3）顯色試盒及多聚賴氨酸（北京中杉生物技術(shù)有限公司）。

3.方法

3.1 免疫組織化學(xué)S－P法檢測CBX7蛋白相關(guān)抗原

主要步驟：

（1）4μm組織切片常規(guī)脫蠟入水；（2）抗原修復(fù)（檸檬酸緩沖液微波抗原修復(fù)法）；（3）滴加3%H2O2，37℃濕盒孵育10min以抑制內(nèi)源性過氧化物酶活性；（4）正常羊血清37℃濕盒孵育10min以減少非特異性背景；（5）分別滴加一抗；（6）滴加鏈霉素抗生物素蛋白－過氧化物復(fù)合物37℃濕盒孵育；（7）滴加新鮮配置的DAB顯色液顯色；（8）蘇木素復(fù)染；（9）梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片并鏡檢；（10）用PBS代替一抗作為陰性對照組，購買的陽性片作為CBX7的陽性對照組。

3.2 免疫組織化學(xué)結(jié)果判斷

3.2.1 以胞漿和胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)。陰性對照除細(xì)胞核染成藍(lán)色外，胞漿內(nèi)無棕黃色反應(yīng)物。

3.2.2 采用HPIAS－2000高清晰度彩色病理圖文報告管理系統(tǒng)（同濟千屏影像公司）對CBX7的表達(dá)進(jìn)行定量分析，每張切片隨機選取5個完整而不重疊的高倍鏡視野（×400），測定每個視野下RECK和MT1－MMP的陽性反應(yīng)的平均光密度、陽性反應(yīng)面積和所有細(xì)胞總面積，計算陽性面積率。以每例5個視野的平均光密度、陽性面積率的平均值作為該例的測量值。

（陽性面積率＝單位面積中陽性反應(yīng)的總面積／單位面積中細(xì)胞的總面積×100%）

4.統(tǒng)計學(xué)處理

對各組免疫組織化學(xué)反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度、陽性面積率作單因素方差分析和SNK－q檢驗，檢驗水準(zhǔn)α為0.05。

結(jié) 果

CBX7蛋白的表達(dá) 甲狀腺乳頭狀癌組織內(nèi)可見少量的棕黃色顆粒，CBX7蛋白表達(dá)弱（圖1）；癌旁組織中可見密集分布的棕黃色顆粒，CBX7蛋白表達(dá)呈強陽性（圖2）。圖像分析結(jié)果顯示：癌旁組織和甲狀腺乳頭狀癌組織之間CBX7蛋白表達(dá)的平均光密度及陽性面積率的差異有顯著性意義（P＜0.05）見表。

表 甲狀腺乳頭狀癌與癌旁組織中CBX7蛋白表達(dá)的平均光密度和陽性面積率（）Table the average optical density and the rate of positive area of CBX7protein in thyroid papillary carcinoma and in Carcinoma adjacent tissue（）

表 甲狀腺乳頭狀癌與癌旁組織中CBX7蛋白表達(dá)的平均光密度和陽性面積率（）Table the average optical density and the rate of positive area of CBX7protein in thyroid papillary carcinoma and in Carcinoma adjacent tissue（）

▲甲狀腺乳頭狀癌與癌旁組織比較 （P＜0.05）▲ comparison between thyroid papillary carcinoma and Carcinoma adjacent Tissue P＜0.05

組別Group ositive area甲狀腺乳頭狀癌thyroid papillary carcinoma 40 0.0924±0.0386▲ 0.0906±0.0383例數(shù)n平均光密度average optical density陽性面積率rate of p▲癌旁組織Carcinoma adjacenttissue 20 0.2852±0.0750 0.2796±0.0735

討 論

臨床研究結(jié)果顯示，PTC的預(yù)后和很多因素有關(guān)，其中對甲狀腺乳頭狀癌預(yù)后產(chǎn)生不利影響的因素包括：年齡（＞50歲），男性，腫瘤尺寸較大，缺乏包膜，甲狀腺外浸潤，多灶性和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［8－9］。盡管大多數(shù)PTC患者表現(xiàn)為無痛性甲狀腺腫塊，治療后無病生存期長且治愈率高，但PTC的一些組織學(xué)亞型具有胞膜侵犯和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性，導(dǎo)致病人死亡。早期診斷和及時正確的治療是提高生存率的關(guān)鍵。深入認(rèn)識甲狀腺癌的發(fā)病機制，將有可能為治療提供新的線索和途徑［10］。

CBX7蛋白是PolyColnb家族一員；Polycomb group（PcG）蛋白家族是基因調(diào)控決定細(xì)胞命運的組成部分，它被認(rèn)為能通過下調(diào)INK4a／ARF腫瘤抑制因子的表達(dá)控制細(xì)胞增殖，它的紊亂能夠?qū)е履[瘤發(fā)生.已有的研究表明CBX7在淋巴瘤、胃癌、前列腺癌中表達(dá)上調(diào)，但另外一些研究表明CBX7在一些其他惡性腫瘤中表達(dá)量卻下調(diào)。目前CBX7在大部分惡性腫瘤中的表達(dá)情況還未明確。近年來研究發(fā)現(xiàn)，CBX7在甲狀腺癌、膀胱癌和胰腺癌等多種腫瘤組織和細(xì)胞中低表達(dá)，CBX7的缺失與腫瘤形成、生長 、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān) ，被認(rèn)為是一種新的抑癌基因［11－12］。

在甲狀腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌等各種腫瘤患者中，CBX7 低 表 達(dá) 均 預(yù) 示 預(yù) 后 不 良［13］。Pallante等［14］使用自制的多克隆抗體進(jìn)行免疫組化研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)腸癌組織呈CBX7低表達(dá)，CBX7低表達(dá)的結(jié)腸癌患者生存時間低于高表達(dá)者。本實驗研究結(jié)果顯示：CBX7在癌旁組織中呈高表達(dá)，而在甲狀腺乳頭狀癌組織中呈低表達(dá)。圖像分析結(jié)果顯示：甲狀腺乳頭狀癌與癌旁組織之間，CBX7的平均光密度及陽性面積率有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)果提示：CBX7在甲狀腺乳頭狀癌中呈現(xiàn)的表達(dá)異?？赡芘c腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。CBX7基因可能對甲狀腺乳頭狀癌的診斷和治療提供輔助參考價值，但其作用機制尚不清楚，仍有待進(jìn)一步的研究。

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圖 版 說 明

圖1 CBX7蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá) 可見少量的棕黃色顆粒，CBX7蛋白表達(dá)弱（S－P×200）；

圖2 CBX7蛋白在癌旁組織中的表達(dá) 可見密集分布的棕黃色顆粒，CBX7蛋白表達(dá)呈強陽性（S－P×200）；

EXPLANATION OF FIGURES

Fig.1Expression of CBX7in thyroid papillary carcinoma There were few brown particles in the cytoplasm of thyroid papillary carcinoma，CBX7was weakly masculine.S－P×200

Fig.2Expression of CBX7in Carcinoma adjacent tissue There were plenty of brown particles in the cytoplasm of carcinoma adjacent tissue.CBX7was strongly masculine.S－P×200