膽管結(jié)扎誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的建立

·經(jīng)驗(yàn)交流·

膽管結(jié)扎誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的建立

崔萬麗(

吉林醫(yī)藥學(xué)院生理學(xué)教研室，吉林 吉林132013)

關(guān)鍵詞：膽管結(jié)扎；肝纖維化；模型

文章編號：1673-2995(2015)06-0450-02

中圖分類號：R364.1

作者簡介：崔萬麗(1979-)，女(漢族)，講師，碩士.

收稿日期：(2015-03-14)

肝纖維化是各種致病因素長期刺激肝臟引起炎癥而形成的肝損傷，屬于肝硬化的早期階段。目前，國內(nèi)研究者多采取腹腔注射CCl4或二甲基亞硝胺以及硫代乙胺誘導(dǎo)肝纖維化的形成，但由于其存在著藥物具有毒性以及價(jià)格昂貴等問題。因此，為了尋求一種更安全以及更適于實(shí)驗(yàn)操作的模型，我們參考國外的文獻(xiàn)，建立了結(jié)扎大鼠的膽總管而使膽汁反流造成肝細(xì)胞損傷來誘導(dǎo)肝纖維的模型。

1　材料與方法

1.1　實(shí)驗(yàn)材料

清潔級雄性Wistar大鼠，體重180～220 g，由吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號：scxk(吉)2007-0003。谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(AKP)、透明質(zhì)酸(HA)、層連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原氨基端(PⅢNP)等試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2　模型建立

雄性Wistar大鼠自由進(jìn)食、飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，按體重隨機(jī)分成兩組，假手術(shù)組、模型組，每組12只。造模方法：實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由飲水。模型組：將大鼠用10%的水合氯醛按照3.5 mL/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，手術(shù)視野消毒，去毛，逐層沿腹正中線打開腹腔，在十二指腸起始端找到膽總管并分離，并于膽總管下方穿兩根棉線，分別結(jié)扎，并于結(jié)扎線中間剪斷膽管，關(guān)腹[1]。假手術(shù)組：打開腹腔，游離膽總管，關(guān)腹。術(shù)后給予抗炎治療，連續(xù)五天青霉素腹腔注射。5周后處死，處死前禁食12 h，自由飲水。麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，離心。血清-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3　指標(biāo)檢測

酶標(biāo)儀測定大鼠血清AST、ALT、AKP的OD值;

酶聯(lián)免疫吸附法測定大鼠血清總膽汁酸的水平及血清HA、LN、PⅢNP的水平。

2　結(jié)　果

2.1　血清肝功能指標(biāo)的變化

由表1可知，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清的ALT、AST、AKP顯著升高，說明造模后大鼠的肝功能有損傷。

2.2　血清膽汁酸的變化

血清總膽汁酸是反應(yīng)膽汁淤積的一個(gè)特異性指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與假手術(shù)組(13.8 ng/L±0.7 ng/L)比較，模型組總膽汁酸水平(19.9 ng/L±0.8 ng/L)顯著升高，P<0.05，說明膽管結(jié)扎成功。

2.3　血清纖維化指標(biāo)的變化

血清HA、LN、PⅢNP的水平與肝纖維化呈正相關(guān)，是篩選肝纖維化的敏感指標(biāo)[2]。由表2可知，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清的HA、LN、PⅢNP顯著升高，說明大鼠肝組織形成了纖維化。

表 1　膽管結(jié)扎后大鼠ALT、AST、AKP變化

與假手術(shù)組比較， *P<0.05

與假手術(shù)組比較，*P<0.05

3　討　論

肝纖維化是各種慢性肝臟疾病的共同反應(yīng)，而肝纖維化如果不早期干預(yù)治療則會(huì)發(fā)展為肝癌。所以肝纖維的預(yù)防和治療是預(yù)防肝癌發(fā)生的關(guān)鍵，因此本實(shí)驗(yàn)研究肝纖維化模型的制備，能夠模擬人類膽管阻塞而造成的肝損傷，一方面為研究肝纖維化的發(fā)病機(jī)制提供條件，另一方面也為篩選抗纖維化藥物打下基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]Tarcin O,Basaranoglu M,Tahan V,et al.Time course of collagen peak in bile duct-ligated rats[J].BMC Gastroenterol,2011,11:45.

[2]Homsi J,Daud AI.Spectrum of activity and mechanism of action of VEGF/PDGF inhibitors[J].Cancer Control,2007,14(3):285-294.