牡丹皮藥材規(guī)格等級初探

牡丹皮藥材規(guī)格等級初探

張雨鳳1， 王軍2,3，方成武1,2,3，李靜3,4，吳計劃4,5

(1. 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥230031；2. 亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，

安徽 亳州236800；3安徽省中醫(yī)藥科學(xué)院亳州中醫(yī)藥研究所，安徽 亳州236800；

4.亳州食品藥品檢驗(yàn)所，安徽 亳州236800；5.北京同仁堂安徽中藥材有限公司，安徽 銅陵244000)

[摘要]目的探索牡丹皮中主要活性成分的積累量與根的粗細(xì)、根的組織結(jié)構(gòu)之間的相關(guān)性，為評價牡丹皮質(zhì)量及牡丹皮藥材規(guī)格等級的劃分提供科學(xué)依據(jù)。方法采集安徽省亳州栽培5年生鳳丹根系，將根系中的根依據(jù)粗細(xì)、長度及部位分別進(jìn)行劃分。同時收集市場常見不同規(guī)格的牡丹皮商品。采用高效液相色譜法同時測定各樣品中芍藥苷和丹皮酚含量。結(jié)果在不同等級中，四等牡丹皮中芍藥苷含量最高，一等牡丹皮中丹皮酚含量最高；芍藥苷含量在主根中最少，在支根中最多；市場上連丹比刮丹中芍藥苷含量高，刮丹比連丹中丹皮酚含量高。結(jié)論細(xì)的牡丹皮中芍藥苷含量反而高，由此推測芍藥苷在周皮中積累量較多。由于芍藥苷和丹皮酚積累量的趨勢相反，因此牡丹皮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待進(jìn)一步研究。

[關(guān)鍵詞]牡丹皮；鳳丹根系；規(guī)格等級；芍藥苷；丹皮酚

[中圖分類號]R282[DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2015.05.023

基金項目：國家“十二五”科技支撐計劃(2011BAI04B05)；安徽省教育廳自然科學(xué)研究重點(diǎn)項目(KJ2015A388)；亳州市創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)領(lǐng)軍人才科研團(tuán)隊項目(亳組(2014)21)

作者簡介：張雨鳳(1991-)，女，碩士

收稿日期：(2015-04-10；編輯：張倩)

鳳丹皮為芍藥科多年生落葉小灌木鳳丹(PaeoniaostiiT. Hong et J. X. Zhang)的干燥根皮[1]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為歷代常用中藥之一，具有清熱涼血、活血化瘀的功效。牡丹皮主產(chǎn)于安徽銅陵、南陵、亳州，山東菏澤，河南等地，其中安徽銅陵的鳳丹皮為傳統(tǒng)道地藥材，而安徽亳州栽培面積近20萬畝，所產(chǎn)鳳丹皮在目前市場上流通量最大[2]。

2015版《中華人民共和國藥典》僅將丹皮酚作為指標(biāo)性成分用來控制牡丹皮質(zhì)量[3]。牡丹皮中主要活性成分包括丹皮酚和芍藥苷類[4]，芍藥苷類是牡丹皮的一大類成分，具有多種生物活性，對心血管、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及平滑肌等方面均有確定的藥效[5-6]。目前，文獻(xiàn)多以丹皮酚和芍藥苷為指標(biāo)研究牡丹皮及其相關(guān)制劑的質(zhì)量[7-9]。

傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)鑒別根類藥材多以根條粗長者為佳，牡丹皮以根條粗長、皮厚、粉性足、香氣濃、結(jié)晶狀物多者為佳。《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》[10]將牡丹皮主流商品按長度和粗度分為一等、二等 、三等、四等共4個等級，目前市場上的牡丹皮雖未嚴(yán)格按此標(biāo)準(zhǔn)劃分等級，但根條粗長的牡丹皮價格相對較高。關(guān)于牡丹皮質(zhì)量的研究，目前主要集中于不同產(chǎn)地、不同年限、不同炮制方法的牡丹皮中活性成分的含量比較及根的不同部位中活性成分的含量比較等方面[11-15]。尚未見系統(tǒng)性的牡丹皮規(guī)格等級與活性成分積累量之間相關(guān)性的研究。

通信作者：方成武，cwfang1961@sina.com

本研究采集安徽亳州栽培的5年生鳳丹根系，以芍藥苷和丹皮酚為指標(biāo)，測定同一根系中不同規(guī)格等級的根以及同一根系中不同部位(主根、側(cè)根、支根)根中兩種成分的含量。同時，本研究還收集市場常見的不同規(guī)格的牡丹皮藥材商品，通過測定其中芍藥苷和丹皮酚的含量，探索牡丹皮中主要活性成分的積累與根的粗細(xì)、根的組織結(jié)構(gòu)之間的相關(guān)性，以期為科學(xué)評價牡丹皮質(zhì)量及牡丹皮藥材規(guī)格等級的劃分提供科學(xué)依據(jù)。

1　儀器與試藥

Agilent 1260高效液相色譜儀：Agilent公司；AUW220D電子天平：日本SHIMADZU公司；超聲波清洗儀：上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司；高速萬能粉碎機(jī)：天津市泰斯特儀器有限公司；一級色譜甲醇：天津市四友科技有限公司；分析甲醇：天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司；水為娃哈哈純凈水；丹皮酚和芍藥苷均購自中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110708-200506、110736-201438。

2　樣品制備

牡丹皮根系鮮品2014年10月采于安徽省亳州市十八里鎮(zhèn)，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定為芍藥科鳳丹(PaeoniaostiiT. Hong et J. X. Zhang)根系。將根系堆置發(fā)汗，抖凈泥土。取3株完整的根系，將每株根系中所有的根分別剝?nèi)「ぁ⒊ツ拘暮髸窀桑瑴y量這些根的長度和中部粗度，然后分別將每株根系中的根劃分為一等、二等、三等和四等4個等級(見表1)。另取3株完整的根系，分別將3株根系中的主根、側(cè)根和支根分開(見表2)，剝?nèi)「?、除去木心后曬干。將以上樣品打粉過60目篩備用。

牡丹皮藥材和飲片(見表3)購于安徽省亳州市藥材市場，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)方成武教授鑒定為芍藥科鳳丹(PaeoniaostiiT. Hong et J. X. Zhang).的干燥根皮。將樣品打粉過60目篩備用。

3　方法與結(jié)果

3.1對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷2.13 mg，置5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得芍藥苷對照品溶液。精密稱取丹皮酚6.58 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得丹皮酚對照品溶液。取以上兩種成分的對照品溶液各1 mL，混合均勻，得混合對照品溶液，其中芍藥苷和丹皮酚濃度分別為0.213、0.132 mg/mL。對照品溶液進(jìn)樣前用0.45 μm的微孔濾膜過濾。

3.2供試品溶液的制備精密稱取牡丹皮粉末0.5 g，加甲醇50 mL，稱質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，用甲醇補(bǔ)足質(zhì)量，取續(xù)濾液用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

3.3色譜條件Agilent HC-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相甲醇-水梯度洗脫：0～10 min，34%甲醇；10～12 min，34%～50%甲醇；12～32 min，50%甲醇；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長：0～20 min，230 nm；20～32 min，274 nm?；旌蠈φ掌啡芤杭肮┰嚻啡芤旱母咝б合嗌V圖見圖1，兩種物質(zhì)與其他物質(zhì)的分離度均大于1.5。

圖1對照品溶液(A)和供試品溶液(B)的高效液相色譜圖(1.芍藥苷；2.丹皮酚)

3.4線性關(guān)系考察精密吸取上述混合對照品溶液1.0、5.0、10.0、20.0、30.0 μL，分別注入液相色譜儀，測得峰面積積分值。分別以進(jìn)樣量(x)為橫坐標(biāo)，峰面積(y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得芍藥苷回歸方程：y=1 333.1x-12.198，r=0.999 8；丹皮酚回歸方程：y=3 836.8x+34.515，r=1.000。結(jié)果表明，芍藥苷在0.213～6.390 μg，丹皮酚在0.132～3.948 μg時均與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

3.5精密度試驗(yàn)精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定芍藥苷和丹皮酚的峰面積，并計算峰面積的RSD值，芍藥苷和丹皮酚的RSD值分別為1.61%、0.66%，表明儀器精密度良好。

3.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別在0、5、10、15、20 h檢測。結(jié)果芍藥苷和丹皮酚的峰面積RSD值分別為1.28%和1.08%，說明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一牡丹皮樣品粉末5份，按照樣品溶液制備方法制備，并按照上述色譜條件進(jìn)樣，測定芍藥苷和丹皮酚的含量，結(jié)果芍藥苷和丹皮酚峰面積的RSD值分別為1.70%和1.86%，說明重復(fù)性良好。

3.8加樣回收率試驗(yàn)平行稱取已知含量的牡丹皮粉末0.25 g，共5份，每份分別加入芍藥苷4.01、4.08、3.97、4.10、4.13 mg，丹皮酚4.00、3.98、4.03、3.91、4.12 mg，按“3.2”項下方法制備樣品溶液，進(jìn)樣測定。芍藥苷和丹皮酚的加樣回收率分別為102.02%、98.30%，加樣回收率的RSD值分別為1.61%、2.10%。

3.9樣品測定按“3.2”項下樣品溶液的制備方法操作，分別制成樣品溶液。準(zhǔn)確吸取樣品溶液10 μL，按照“3.3”項下色譜條件進(jìn)樣，計算各樣品中芍藥苷和丹皮酚的含量。樣品測定結(jié)果顯示，芍藥苷的含量在同一根系的一等品中含量最低，四等品中含量最高；而丹皮酚的含量在一等品中最高，四等品中最低。見表1。芍藥苷的含量在主根中較少，在支根中較多；而丹皮酚的含量在主根中略高于支根。見表2。連丹比刮丹中的芍藥苷含量高，刮丹比連丹中的丹皮酚含量高。見表3。

4　討論

本研究選擇相同年限(5年生)的鳳丹根系，參照《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》中牡丹皮的等級分類標(biāo)準(zhǔn)，將每一根系中的根分為4個等級；同時將根系中的根分為主根、側(cè)根和支根，分別測定其中芍藥苷和丹皮酚的含量。從結(jié)果中可以看出，隨著等級的降低，芍藥苷含量呈逐漸上升趨勢，而丹皮酚含量卻有逐漸降低的趨勢。從同一牡丹根系中不同部位的芍藥苷和丹皮酚含量結(jié)果可以看出，芍藥苷在主根中含量較少，在支根中含量較多；而主根中的丹皮酚含量略高于支根。

表1　鳳丹根系中不同等級牡丹皮中

表2　鳳丹根系中不同部位牡丹皮中

表3　市場上主要商品規(guī)格牡丹皮中

注：選貨，是指經(jīng)過挑選的，大小、長短或質(zhì)量相近的藥材；統(tǒng)貨，指沒經(jīng)過挑選的，大小、長短及質(zhì)量不同的藥材；刮丹是指刮去外皮的牡丹皮藥材；連丹是指不刮去外皮的牡丹皮藥材。

通過對藥材市場的牡丹皮進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)，牡丹皮商品規(guī)格主要有選貨、統(tǒng)貨、刮丹、連丹4種。選貨一般個頭較大，大小相近。統(tǒng)貨個頭有大有小，大小不一。從含量測定結(jié)果可以看出，連丹比刮丹中的芍藥苷含量高，刮丹比連丹中的丹皮酚含量高，由此認(rèn)為芍藥苷在周皮中的積累量較多，這與已有研究結(jié)果一致[16]。而丹皮酚在韌皮部中的積累量較多。

2010版《中華人民共和國藥典》中以丹皮酚作為牡丹皮的指標(biāo)性成分，如果僅從丹皮酚的角度考慮，越粗的牡丹皮中丹皮酚含量越高，質(zhì)量也就越好，這與當(dāng)前牡丹皮經(jīng)驗(yàn)鑒別一致。然而，芍藥苷同為牡丹皮中主要活性成分，但隨著粗度的增加，芍藥苷含量反而下降。由于芍藥苷和丹皮酚積累量的趨勢相反，因此牡丹皮質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待進(jìn)一步研究。只有芍藥苷和丹皮酚含量都相對較高，才是最佳品質(zhì)的牡丹皮。

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