炙桂枝與肉桂對普萘洛爾致心動過緩大鼠Na+-K+-ATP酶活性研究

羅 琳，陳一江

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江杭州310053）

炙桂枝與肉桂對普萘洛爾致心動過緩大鼠Na+-K+-ATP酶活性研究

羅 琳，陳一江

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江杭州310053）

目的：比較炙桂枝與肉桂對普萘洛爾所致心動過緩大鼠心率及Na+-K+-ATP酶活性的影響，分析炙桂枝與肉桂在抗心動過緩中的作用機(jī)制及兩者差異。方法：將70只大鼠隨機(jī)分為炙桂枝組、炙桂枝模型組、肉桂組、肉桂模型組、空白組、普萘洛爾模型對照組，每組10只。連續(xù)給藥7 d，以普萘洛爾造模，比較各組大鼠心率變化及Na+-K+-ATP酶活性。結(jié)果：炙桂枝組與肉桂組30 min心率減慢變化率較普萘洛爾模型對照組明顯升高（P<0.01）；炙桂枝模型組、肉桂模型組Na+-K+-ATP酶活性較普萘洛爾模型對照組高（P<0.01）。結(jié)論：炙桂枝與肉桂均能顯著提高普萘洛爾致心動過緩的大鼠的Na+-K+-ATP酶活性，以增加心率。

心動過緩；炙桂枝；肉桂；普萘洛爾；Na+-K+-ATP酶

心動過緩指有效心搏低于60次/min的各種心律失常，包括竇性緩慢性心律失常、房室交界性心律失常、心室自主心律失常、傳導(dǎo)阻滯等，以心率減慢為特征?；颊吲R床會出現(xiàn)與心排血量不足有關(guān)的心、腦等臟器供血不足的癥狀。桂枝是樟科常綠喬木植物肉桂的干燥嫩枝，中醫(yī)理論認(rèn)為桂枝味辛甘性溫，可發(fā)汗解肌、助陽化氣，現(xiàn)代研究認(rèn)為桂枝具有強(qiáng)心、擴(kuò)血管、抗氧化等方面的藥理活性，其調(diào)節(jié)作用呈雙向性［1］。肉桂與桂枝同生于桂樹，為肉桂的干皮和粗枝皮，性大熱，可補(bǔ)火助陽、引火歸元、活血通經(jīng)，藥理研究發(fā)現(xiàn)肉桂有擴(kuò)張血管、促進(jìn)腎上腺素分泌的作用，可抑制氧自由基誘導(dǎo)的自發(fā)性高血壓大鼠離體主動脈收縮［2］。桂枝與肉桂二者皆有溫營血、助氣化、散寒凝的功用。本實驗旨在通過比較炙桂枝與肉桂對普萘洛爾所致心動過緩大鼠的心率及Na+-K+-ATP酶活性的影響，分析炙桂枝與肉桂在抗心動過緩中的作用機(jī)制及兩者差異，為臨床用藥及抗心動過緩藥物的開發(fā)提供思路與實驗支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 清潔級SD健康大鼠70只，雌雄各半，體重（220±30）g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗研究中心提供。實驗環(huán)境下，雌雄大鼠分籠喂養(yǎng)。

1.1.2 實驗藥物 炙桂枝（生藥，購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬門診部中藥房）、肉桂（生藥，購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬門診部中藥房）、戊巴比妥鈉（粉劑，25 g/瓶，購自科研實驗室產(chǎn)品供應(yīng)店，批號：130426）、普萘洛

爾片（10 mg×100片，常州康普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，購自浙江省中醫(yī)院，批號：1207011）、硫酸阿托品注射液（1 mL：0.5 mg，10支/盒，浙江瑞新藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，購自浙江省中醫(yī)院，批號：20130114）、生理鹽水（500 mL/瓶，購自浙江省中醫(yī)院，批號：130112）。溶液配制：炙桂枝與肉桂煎湯提純濃縮至100 mL，4℃冷藏備用；取3 g戊巴比妥鈉定容到100 mL，生理鹽水配制3%的戊巴比妥鈉溶液，避光保存；取普萘洛爾片4片，研磨粉末狀，溶于20 mL生理鹽水，充分?jǐn)嚢钃u勻，配制2%的普萘洛爾懸濁液，于造模當(dāng)天配制。

1.1.3 實驗儀器 大鼠灌胃器、大鼠手術(shù)器械等由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，MedLab生物信號采集處理系統(tǒng)（南京美易公司），Na+－K+－ATP酶試劑盒（南京建成生物工程研究所），Universal32高速離心機(jī)（德國Hettich公司），721型可見光分光光度計（上海分析儀器廠）。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組及給藥 大鼠在實驗環(huán)境下適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，隨機(jī)分為炙桂枝組、炙桂枝模型組、肉桂組、肉桂模型組、空白組、普萘洛爾模型對照組，每組10只，雌雄各半。炙桂枝組SD大鼠以1.8 g炙桂枝生藥/kg灌胃（相當(dāng)于成人用藥劑量20 g），肉桂組SD大鼠以0.9 g肉桂生藥／kg灌胃（相當(dāng)于成人用藥劑量10 g），空白組與普萘洛爾模型對照組等體積生理鹽水灌胃，各組大鼠連續(xù)給藥7 d，1次/d。

1.2.2 取材及指標(biāo)檢測 實驗前大鼠禁食供飲2 h，末次灌胃后2 h稱重，大鼠腹腔注射3%戊巴比妥鈉50 mg/kg麻醉，仰臥位固定，四肢皮下連接針狀電極，藥物組及空白組待心率穩(wěn)定后，持續(xù)記錄大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖5 min，解剖大鼠，取大鼠心肌組織，－80℃保存?zhèn)溆靡灾苽湫募驖{。模型組大鼠腹腔注射普萘洛爾5 mg/kg造模，持續(xù)記錄大鼠Ⅱ?qū)?lián)心電圖30 min。解剖大鼠，取大鼠心肌組織，－80℃保存?zhèn)溆茫灾苽湫募驖{。

制備勻漿含量為10%，把制備好的勻漿放入高速離心機(jī)離心，取上層清液，棄下層沉淀，采用紫外分光光度法檢測Na+－K+－ATP酶活性。根據(jù)大鼠心電圖記錄分析心率變化，在造模前、造模后5 min、15 min、30 min的時間點(diǎn)取連續(xù) 6個心電周期平均值計算心率（次/min），計算30 min心率減慢變化率。

C=A/B（C代表30 min心率減慢變化率，A代表造模前心率，B代表造模后30 min心率）。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較用獨(dú)立樣本t檢驗及方差分析，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Na+－K+－ATP酶活性變化比較

炙桂枝模型組、肉桂模型組的Na+－K+－ATP酶活性較普萘洛爾模型對照組升高（P＜0.01）；炙桂枝模型組較肉桂模型組Na+－K+－ATP酶活性有升高趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。炙桂枝組、肉桂組的Na+－K+－ATP酶活性均較空白組高（P＜0.05，P＜0.01）；炙桂枝組的Na+－K+－ATP酶活性高于肉桂組，但經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果說明炙桂枝與肉桂均能顯著提高正常大鼠與普萘洛爾藥物造模下心動過緩大鼠的心肌Na+－K+－ATP酶活性，而兩者提高大鼠心肌Na+－K+－ATP酶活性效用相當(dāng)。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠心肌勻漿中Na+－K+－ATP酶活性比較 （±s）

表1 各組大鼠心肌勻漿中Na+－K+－ATP酶活性比較 （±s）

注：與普萘洛爾模型對照組比較，1）P＜0.01

組別 Na+－K+－ATP酶活性空白組 2.34±0.27普萘洛爾模型對照組 2.40±0.30炙桂枝組 2.69±0.26炙桂枝模型組 2.84±0.231）肉桂組 2.60±0.28肉桂模型組 2.82±0.471）

2.2 心率變化比較

造模后30 min，普萘洛爾模型對照組心率與造模前相比明顯減緩（P＜0.01），說明造模成功；炙桂枝組、肉桂組30 min心率減慢變化率較普萘洛爾模型對照組明顯升高（P＜0.01）；而炙桂枝組與肉桂組比較，30 min心率減緩變化率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。說明炙桂枝與肉桂均能顯著提高普萘洛爾藥物造模下心動過緩大鼠的心率，而且兩者提高大鼠心率的效用相當(dāng)。結(jié)果見表2。

3 討 論

3.1 心動過緩的中西醫(yī)理論機(jī)制與臨床診治

西醫(yī)理論認(rèn)為，心肌細(xì)胞自律性下降、各種傳導(dǎo)阻滯和心肌病變、自主神經(jīng)病變、心肌微環(huán)境惡化是心動過緩發(fā)病的主要機(jī)制［3］。心動過緩屬中醫(yī)學(xué)心悸范疇，可與心悸、胸痹、怔忡、眩暈等中醫(yī)病癥相關(guān)，常見遲脈、結(jié)脈等。臨床表現(xiàn)不僅有胸悶、心悸、氣短、疲乏等心氣虛弱證候，常同時伴有畏寒、眩暈等心腎陽虛等證候特點(diǎn)，心脾腎陽虛是本病的病理

基礎(chǔ)，心腎陽虛、寒凝氣滯、痰瘀阻絡(luò)是本病的主要病機(jī)。在治療方面，西醫(yī)除病因治療以外，主要依靠藥物治療以及安置心臟起搏器；中醫(yī)藥辨證論治相比西醫(yī)治療擁有療效較好、適應(yīng)癥全面、副作用較小、治療成本低等優(yōu)勢。研究發(fā)現(xiàn)，中藥及其組合確已具有多離子通道阻滯及非離子通道調(diào)節(jié)作用，可以使失調(diào)的最佳靶點(diǎn)功能恢復(fù)平衡，具有較好的遠(yuǎn)期療效和較低的致心律失常毒副作用［4］。

表2 各組造模前后大鼠心率及造模后30 min心率減慢變化率比較 （次/min，±s）

表2 各組造模前后大鼠心率及造模后30 min心率減慢變化率比較 （次/min，±s）

注：與本組造模前比較，1）P<0.01，與普萘洛爾模型對照組比較，2）P<0.01

組別 n 造模前 造模后5 min 造模后15 min 造模后30 min 30 min心率減慢變化率炙桂枝組 10 361.75±29.49 315.55±29.57 296.67±27.01 285.95±31.371） 0.79±0.042）肉桂組 10 374.73±26.60 331.32±30.73 311.37±31.34 288.80±29.00 0.77±0.042）普萘洛爾模型對照組 10 410.88±28.15 323.95±20.591） 293.12±19.901） 273.43±21.271） 0.67±0.21陽性藥物組 10 406.98±24.46 359.53±24.36 329.05±20.97 303.85±22.79 0.75±0.03

3.2 麻醉藥物選擇

戊巴比妥鈉是動物實驗常用的麻醉藥之一，是對心功能有一定抑制作用的麻醉藥物，有研究對戊巴比妥鈉和水合氯醛的比較發(fā)現(xiàn)，如達(dá)到相同的麻醉時間，戊巴比妥鈉對大鼠心功能的抑制作用明顯弱于水合氯醛，兩藥對動物麻醉狀態(tài)下的心率的影響相似，均能使心率減慢，但戊巴比妥鈉作用較弱［5］。本次實驗需使用心動過緩大鼠模型，考慮到麻醉藥對心功能、心率的干擾因素，故選擇對心功能抑制作用較弱的戊巴比妥鈉。

3.3 造模藥物選擇

普萘洛爾模型是常用建立與心動過緩有關(guān)的動物模型。普萘洛爾是β受體阻斷劑，能選擇性地與β腎上腺素受體結(jié)合，可阻止腺苷酸環(huán)化酶的激活，使鈣離子通道開放概率變小，以負(fù)性變時、負(fù)性變力、負(fù)性傳導(dǎo)作用而使心率減慢，心肌收縮力減弱，心排血量下降，血壓略降而導(dǎo)致心肌氧耗量降低，延緩竇房結(jié)和房室結(jié)的傳導(dǎo)，抑制心肌細(xì)胞的自律性。

3.4 觀測指標(biāo)

心率為相關(guān)研究最常用最直觀的指標(biāo)，Na+-K+-ATP酶是分布于動物細(xì)胞的質(zhì)膜Na+-K+離子驅(qū)動泵，通過參與心肌細(xì)胞膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)，維持低Na+高K+的細(xì)胞內(nèi)環(huán)境，對抗細(xì)胞膜兩側(cè)電-化學(xué)梯度，維持細(xì)胞的靜息電位。離子泵轉(zhuǎn)運(yùn)屬于主動轉(zhuǎn)運(yùn)，需水解ATP消耗能量，Na+-K+-ATP酶的活性可反映心肌細(xì)胞膜兩側(cè)離子轉(zhuǎn)運(yùn)能力，心肌細(xì)胞膜兩側(cè)離子轉(zhuǎn)運(yùn)是動作電位形成的基礎(chǔ)。

3.5 炙桂枝與肉桂對心動過緩大鼠心率與Na+-K+-ATP酶活性作用討論

在《神農(nóng)本草經(jīng)》中桂枝和肉桂不分。桂枝多應(yīng)用于風(fēng)寒感冒、寒凝血滯諸痛癥，同時也為治療胸痹心痛諸多方劑中的重要組成藥物，如《傷寒論》中麻黃細(xì)辛附子湯、桂枝龍骨牡蠣湯、桂枝加桂湯等經(jīng)方，為臨床中治療不同證型緩慢性心律失常的常用方［6］，其中均用桂枝為主要藥物組成。桂枝炙后，則減發(fā)汗解肌之力，而增其通心陽、溫經(jīng)散寒的功效。較之桂枝，肉桂熱性更大，可壯腎火，主里寒，《別錄》謂肉桂“主心痛，通脈，能通血脈”，多應(yīng)用于腎陽不足，命門火衰所致的畏寒肢冷、腹痛便溏、心悸怔忡等病癥，對于以心、脾、腎陽虛為主要病機(jī)的心動過緩，有溫陽壯火的作用。

本實驗結(jié)果證實，炙桂枝與肉桂均能顯著提高普萘洛爾致心動過緩大鼠的Na+-K+-ATP酶活性，其增加心率的作用機(jī)制可能與提高心肌細(xì)胞膜兩側(cè)離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶活性，增加心肌細(xì)胞離子轉(zhuǎn)運(yùn)的能量貯備有關(guān)。本次實驗顯示炙桂枝與肉桂在拮抗普萘洛爾所致大鼠心動過緩的能力方面，二者無明顯差異，考慮原因為炙桂枝與肉桂二味中藥在化學(xué)組成上基本相同，均以肉桂醛、肉桂酸等為主要成分。而肉桂與桂枝中具體提高心率的成分有待進(jìn)一步研究得出結(jié)論。

［1］秦彩玲，劉婷，張毅，等.桂枝湯對大鼠血壓雙向調(diào)節(jié)作用及其有效部位探討［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2001，7（4）：20-23.

［2］史青.肉桂和肉桂醛對氧自由基誘導(dǎo)的自發(fā)性高血壓大鼠離體主動脈收縮的抑制作用［J］.國外醫(yī)學(xué)·中醫(yī)中藥分冊，2003，19（6）：11-13.

［3］美·托普，高潤霖，楊躍進(jìn).TOPOL心血管病學(xué)［M］.濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，2008：1 302-1 319.

［4］徐貴成.心律失常治療的中醫(yī)優(yōu)勢［J］.中國醫(yī)院用藥評價與分析，2011，11（9）：770.

［5］李志勇，孫建寧.水合氯醛和戊巴比妥鈉對SD大鼠麻醉效果的比較［J］.四川動物，2008，27（2）：299-302.

［6］陳崢，陳敏.古方治療緩慢性心律失常的概況［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2011，30（10）：117-118.

（編輯：張世霞）

Effect of prepared cassia twigs and cassia on Na+-K+-ATPase activity in rats with bradycardia caused by propranolol

Luo Lin，Chen Yijiang
（Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou Zhejiang 310053）

Objective：To study effect of prepared cassia twigs and cassia on Na+-K+-ATPase activity in rats with bradycardia caused by propranolol.Methods：70 rats were randomly divided into prepared cassia twig group，prepared cassia twig model group，cassia group，cassia model group，blank group，propranolol group and atropine group（n=10）. Model rats were constructed by propranolol.7 d after treatment，heart rate and activity of Na+-K+-ATPase were observed.

bradycardia；prepared cassia twig；cassia；propranolol；Na+-K+-ATPase

R285.5

A

1671-0258（2015）04-0016-03

浙江中醫(yī)藥管理局科研課題（2009CB002）

羅琳，碩士研究生，E-mail：luolin20140101@163.com

陳一江，教授，主任中醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，E-mail：chenyijiang55@163.com

Results：Compared with propranolol group，the drop rate of 30 min heart rate was decreased in prepared cassia twig model group and cassia model group（P<0.01）.The activity of Na+-K+-ATPase in prepared cassia twig model group and cassia model group was higher than that in propranolol group（P<0.05，P<0.01）.Conclusion：Both prepared cassia twig and cassia can obviously increase the heart rate in bradycardia rats caused by propranolol through improving the activity of Na+-K+ATpase.