水產品中孔雀石綠和結晶紫及其代謝產物的快速測定

馮魁+艾佳俊

孔雀石綠、結晶紫是有毒的三苯甲烷類化學物，農業(yè)部將它們列為水產上的禁藥。然而由于其對魚體水霉病和魚卵的水霉病有特效，許多水產業(yè)養(yǎng)殖戶仍在違規(guī)使用。因此，農業(yè)部將孔雀石綠、結晶紫列為水產品檢測的重點項目。

本文依據農業(yè)部公告SNT 1768-2006《水產品中孔雀石綠和結晶紫及其代謝產物的快速測定方法》，采用智能化食品安全一體機進行前處理，經過固相萃取技術濃縮凈化，再用高效液相色譜儀檢測。大大減少檢測步驟和檢測時間，可用于水產品中孔雀石綠和結晶紫及其代謝產物的應急篩查和常規(guī)檢測。

試劑和材料

標準品：孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫純度大于98%，均來自中國水產科學研究院。

孔雀石綠、結晶紫快速檢測前處理試劑盒（北京六角體科技發(fā)展有限公司），其中包括提提取劑、液體提取劑、固相萃取柱、洗脫劑。

其余試劑均為色譜純。

儀器和設備

高效液相色譜儀：配紫外-可見光可變波長檢測器；檢測波長時間程序可控。

智能化食品安全一體機。

液相色譜條件和實驗步驟

色譜柱：C18柱，4.6mm×150mm （d.i），粒度5?m；

流動相：乙腈+乙酸鹽緩沖液（80+20，V/V）；

流速：1.0mL/min；

柱溫：室溫；

進樣量：20?L。

檢測波長時間程序：0min～5.0 min，618nm；5.0min～12min，588nm；12min～18min，267nm；孔雀石綠的檢測波長為618nm，結晶紫的檢測波長為588nm，隱色孔雀石綠和隱色結晶紫的檢測波長為267nm。

魚取肉質部分，蝦去殼。取樣品5.00g于通道1攪拌杯中，再加入一瓶固體提取劑，并連接底座和固相萃取柱。將攪拌杯置入儀器。設置各項參數(shù)為：攪拌時間1：1（s）、攪拌間歇1：30（s）、攪拌次數(shù)1：5、提取劑量1：10（mL）、攪拌時間2：1（s）、攪拌間歇2：30（s）、攪拌次數(shù)2：2、提取劑量2：20（mL）、萃取時間：60（s）、氣壓檔位：8。

取下固相萃取柱，加入1mL洗脫劑洗脫。旋轉蒸干后，加入1mL流動相復溶，進樣分析。

結果與討論

色譜測定

在上述色譜條件下，孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫的保留時間約為孔雀石綠4.0min、隱色孔雀石綠13.6min、結晶紫5.4min、和隱色結晶紫14.7min。

繪制標準工作曲線

移取孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫混合標準溶液，用流動相稀釋成0、2ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL標準工作溶液，用高效液相色譜儀測定，得出標準工作曲線。線性系數(shù)0.996，y=1088.2x+5843.3。

孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫的檢測限均為2.0μg/kg。

樣品檢測結果計算

取魚、蝦樣品，按實驗方法處理后，用色譜數(shù)據處理機或按式（1）分別計算供試樣品中的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫和隱色結晶紫殘留量。

2

ω= ci …… （1）

5

ω-水產品中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫和隱色結晶紫殘留量，μg/kg；

ci-標準曲線上查出試樣溶液中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫和隱色結晶紫標準工作溶液的濃度，μg/L；

2/5-換算常數(shù)。

實際檢測10個以上樣品，得出方法回收率為：85%～105%。