菊糖抗氧化活性及其機(jī)理

劉德萍，吳平

（江南大學(xué)直屬附屬醫(yī)院（無(wú)錫市第四人民醫(yī)院），江蘇無(wú)錫214062）

菊糖抗氧化活性及其機(jī)理

劉德萍，吳平*

（江南大學(xué)直屬附屬醫(yī)院（無(wú)錫市第四人民醫(yī)院），江蘇無(wú)錫214062）

通過(guò)測(cè)定菊糖的還原能力、Fe2+螯合能力，以及DPPH自由基清除能力等方法，評(píng)價(jià)菊糖的抗氧化能力，并采用Caco-2細(xì)胞模型探討其抗氧化機(jī)理。3種抗氧化活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菊糖具有良好的抗氧化活性。與陽(yáng)性對(duì)照組比較，菊糖對(duì)H2O2誘導(dǎo)的Caco-2細(xì)胞氧化損傷具有顯著的保護(hù)作用。當(dāng)菊糖質(zhì)量濃度為0.8 mg/mL時(shí)，Caco-2細(xì)胞中過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶，以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活力，分別提高了35.8%，47.6%和61.2%。菊糖主要通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的活力發(fā)揮其抗氧化作用。

菊糖；抗氧化活性；Caco-2細(xì)胞模型；機(jī)制

菊糖，又名菊粉、菊苣多糖，是D-果糖經(jīng)β（2→1）鍵連接的鏈狀果聚糖，末端常含有一個(gè)葡萄糖基，一般從菊苣或菊芋中提取獲得［1］。菊糖作為一種水溶性很好的膳食纖維，具有很多促進(jìn)人體健康的生理功能。例如，具有低熱量、非胰島素依賴性、非齲齒性等特點(diǎn)，適于糖尿病患者食用；菊糖還可降低血液中膽固醇和甘油三酯的含量，可用來(lái)減肥、預(yù)防心血管疾病和高膽固醇血癥；也可作為雙歧桿菌增殖因子，調(diào)節(jié)腸道功能，預(yù)防結(jié)腸癌等。此外，菊糖持水性高，可預(yù)防便秘，可廣泛應(yīng)用于開(kāi)發(fā)臨床營(yíng)養(yǎng)治療產(chǎn)品、功能性食品和保健品等［2］。

目前，大量研究結(jié)果顯示，部分植物多糖如黃芪多糖［3］、大蒜多糖［4-5］等具有清除自由基、抑制脂質(zhì)氧化及提高抗氧化酶活性的功能。目前，已有部分文獻(xiàn)報(bào)道菊糖具有抗氧化活性［6-7］，但對(duì)其抗氧化機(jī)理探討還鮮見(jiàn)報(bào)道。國(guó)內(nèi)外營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究表明，活性多糖的抗氧化作用主要是清除體內(nèi)自由基、提高抗氧化酶活性及抑制脂質(zhì)過(guò)氧化等，多數(shù)活性多糖的抗氧化機(jī)理可能是調(diào)控Nrf2-Keap1-ARE信號(hào)通路［8］。作者利用3種體外方法和Caco-2細(xì)胞模型對(duì)菊糖抗氧化功能進(jìn)行分析，并探討菊糖抗氧化活性作用機(jī)理，為今后菊糖在醫(yī)藥及保健品開(kāi)發(fā)方面的應(yīng)用提供依據(jù)。

1　實(shí)驗(yàn)器材

1.1材料與試劑

菊糖ORFTITMHP型，江南大學(xué)食品學(xué)院提供；磷酸緩沖液、無(wú)水乙醇、三氯乙酸、氯化高鐵（FeCl3· H2O）、七水合硫酸亞鐵、H2O2（體積分?jǐn)?shù)30%）、NaOH，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；鐵氰化鉀，上海試劑一廠產(chǎn)品；DPPH（1，1-二苯基苦基苯肼）、Ferrizine試劑，Sigma公司產(chǎn)品；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、鏈霉素、青霉素、非必需氨基酸，美國(guó)Gibco公司產(chǎn)品；質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.25%胰酶（含EDTA）、Triton X-100過(guò)氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽氧化酶（GSH-Px）、谷胱甘肽還原酶（GSH-Rx），碧云天生物技術(shù)研究所研制；其他各種分析純?cè)噭?，?guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。

1.2儀器與設(shè)備

722型可見(jiàn)分光光度計(jì)，上海精密儀器有限公司制造；UV-2100型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，尤尼柯儀器有限公司制造；AKTATM蛋白質(zhì)分析純化系統(tǒng)，瑞士Amersham Bioscences公司制造；J-26XPI型高效冷凍離心機(jī)，美國(guó)BECKMAN公司制造；細(xì)胞培養(yǎng)瓶及培養(yǎng)板，美國(guó)Corning公司制品；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、Nano drop 2000型分光光度儀，美國(guó)ThermoForma公司制造；細(xì)胞刮刀，上海耐思生物公司制品；BIOsafe12型生物安全柜，中國(guó)HealForce公司制造；恒溫水浴鍋，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司制造；MS3digital漩渦震蕩器、搖床，德國(guó)IKA公司制造；U410型超低溫冷凍冰箱，美國(guó)New Brunswick Scientific公司制造；4000 mini型Image Quant LAS，美國(guó)GE公司制造；倒置顯微鏡，日本OLY MPUS公司制造；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、PCR儀，德國(guó)Eppedorf公司制造。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1還原能力的測(cè)定

將菊糖樣品配制成質(zhì)量濃度分別為1、5、10、25、50 mg/mL的溶液，各取出2 mL作為樣品待測(cè)溶液，分別加入0.2 mol/L pH 6.6的磷酸鹽緩沖液2 mL，質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的鐵氰化鉀（K3Fe（CN）6）溶液2 mL混勻，50℃水浴中保溫20 min，接著加入體積分?jǐn)?shù)10%的三氯乙酸（TCA）溶液2 mL，振蕩混勻后離心（1 000 r/min）。再各取去沉淀后的上清液2 mL加入2 mL去離子水和0.4 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%的FeCl3溶液，振蕩混勻后在50℃水浴下保溫10 min，溶液慢慢由黃色變?yōu)樯钏{(lán)色，在波長(zhǎng)700 nm下進(jìn)行比色。樣品空白對(duì)照為去離子水。測(cè)定值取3次平行測(cè)定的平均值。

2.2螯合金屬離子能力的測(cè)定

Fe2+螯合能力測(cè)定［10］方法：配制質(zhì)量濃度分別為1、5、10、25、50 mg/mL的菊糖溶液，從中分別取出0.5 mL樣品液，以等體積去離子水代替樣品液作空白對(duì)照，吸光值為A，所有測(cè)定值為3次平均值。配制FeCl2溶液濃度為0.25、0.20、0.15 mmol/L，加入至各質(zhì)量濃度樣品測(cè)量吸光值。螯合率按公式（1）計(jì)算：

式（1）中，Ac為去離子水吸光值，Ay為加入FeCl2溶液的菊糖樣品液吸光值。

2.3DPPH自由基捕獲能力的測(cè)定

DPPH自由基捕獲能力的測(cè)定［11］方法：配置0.1 mmol/L DPPH溶液（溶于體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇），樣品組菊糖質(zhì)量濃度分別為1、5、10、25、50 mg/ mL，稱取不同質(zhì)量濃度的樣品溶于2 mL去離子水中，加入2 mL DPPH溶液，避光反應(yīng)25 min；陽(yáng)性對(duì)照組為2 mL DPPH溶液加入2 mL去離子水（代替樣品），空白組為等體積去離子水和體積分?jǐn)?shù)95%乙醇混合液。在波長(zhǎng)517 nm處分別測(cè)定吸光值A(chǔ)i、Aj、A0。清除率按公式（2）計(jì)算：

式（2）中，Ai為樣品組吸光值，Aj為空白組吸光值，A0為對(duì)照組吸光值。

2.4Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)

將Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)于含體積分?jǐn)?shù)20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度37℃，CO2體積分?jǐn)?shù)5%，隔天換一次培養(yǎng)液。本實(shí)驗(yàn)中所采用的細(xì)胞傳代數(shù)均為15～55代。Caco-2細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶底約85%面積時(shí)，吸去培養(yǎng)基，加入PBS清洗兩次，加入消化液1 mL，消化2～3 min后，吹打至細(xì)胞呈單個(gè)懸浮狀，以1×106個(gè)/孔的密度接種到培養(yǎng)板中，隔天換液。當(dāng)Caco-2細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)板底約85%面積時(shí)進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定。

2.5Caco-2細(xì)胞體外氧化損傷模型的建立

按照2.4中Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)方法，待細(xì)胞長(zhǎng)至培養(yǎng)板底面積85%左右時(shí)，吸去培養(yǎng)基，PBS清洗兩次，再加入不含血清的培養(yǎng)基。每孔加入濃度不同的H2O2，使終濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mmol/ L，作用4 h后檢測(cè)細(xì)胞存活率。每組實(shí)驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行，以無(wú)任何處理的Caco-2細(xì)胞的存活率作為100%。

2.6細(xì)胞存活率檢測(cè)

采用WST-1法檢測(cè)細(xì)胞存活率，當(dāng)48孔中Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入100 μL培養(yǎng)液，再加入10 μL WST-1試劑，培養(yǎng)30 min后于450 nm處測(cè)定每孔吸光值。以無(wú)任何處理的Caco-2細(xì)胞組為對(duì)照組，按公式（3）計(jì)算細(xì)胞存活率

式（3）中，A450為實(shí)驗(yàn)組的吸光值，A'450為對(duì)照組的吸光值。

2.7菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞的抗氧化保護(hù)作用

待Caco-2細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)板底85%左右面積時(shí)，吸去培養(yǎng)基，用PBS清洗兩次，加入不含血清的培養(yǎng)基，接著分為4組進(jìn)行處理比較。

1）陰性Caco-2細(xì)胞對(duì)照組（NEG）：只加入不含胎牛血清的培養(yǎng)基；

2）陽(yáng)性Caco-2細(xì)胞對(duì)照組（POS）：在培養(yǎng)基中加入H2O2，終濃度為1 mmol/L；

3）正常Caco-2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組：加入含有不同質(zhì)量濃度的菊糖培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2 h后，吸去舊培養(yǎng)基，接著用PBS清洗，最后加入含H2O2的培養(yǎng)基；

4）加入菊糖的Caco-2細(xì)胞對(duì)照組：加入含有不同質(zhì)量濃度菊糖的培養(yǎng)基，細(xì)胞孵育6 h，按照WST-1法檢測(cè)細(xì)胞存活率，陰性對(duì)照組的細(xì)胞存活率為100%。

2.8細(xì)胞內(nèi)氧化還原酶系指標(biāo)的測(cè)定

分別按紫外比色法檢測(cè)過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活力。

2.9數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)方法

采用GraphPad Prism○R5 package軟件制圖，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用t-test法比較兩組間差異。

3　結(jié)果與討論

3.1還原能力

如圖1所示，不同質(zhì)量濃度菊糖樣品溶液（1、5、10、25、50 mg/mL）的吸光值在可檢測(cè)范圍內(nèi)，而且其還原能力隨著菊糖質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。

圖1　不同質(zhì)量濃度菊糖還原能力Fig.1　Reduction ability of inulin with various concentrations

3.2螯合金屬離子能力

過(guò)渡金屬離子鐵離子是非常強(qiáng)的自由基發(fā)生劑，能夠催化各種自由基的生成，如羥基自由基和超氧陰離子自由基。金屬離子的存在使得捕捉自由基的抗氧劑消耗掉。如圖2所示，選取濃度分別為0.15、0.20、0.25 mmol/L的底物FeCl2溶液，在底物FeCl2溶液濃度為0.15 mmol/L時(shí)，F(xiàn)e2+螯合率大約在4.5%～10%；底物FeCl2溶液濃度為0.20 mmol/L時(shí)，F(xiàn)e2+螯合率大約在15.8%～17.8%；底物FeCl2溶液濃度為0.25 mmol/L時(shí)，F(xiàn)e2+螯合率約在16.8%～21.7%。隨著菊糖濃度增加，二價(jià)鐵離子的螯合能力逐漸增強(qiáng)，且隨著底物濃度的增加，同一質(zhì)量濃度菊糖的二價(jià)鐵離子的螯合能力也逐步增強(qiáng)。

3.3DPPH自由基的捕獲能力

DPPH·（1，1-二苯基苦基苯肼自由基）是一種合成的穩(wěn)定的有機(jī)自由基，主要用來(lái)測(cè)定酚類物質(zhì)和食品的抗氧化活性，多糖的抗氧化活性測(cè)定也可以采用此方法。此變化與抗氧化劑抗氧化能力及其數(shù)量呈定量關(guān)系。

圖2　不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)金屬離子的螯合能力Fig.2　Metal ions chelating activityof inulin with various concentrations

如圖3所示，伴隨著菊糖質(zhì)量濃度逐漸增加，DPPH自由基清除率逐步增加，提示隨著菊糖質(zhì)量濃度增加，菊糖抗氧化能力逐漸增強(qiáng)。當(dāng)菊糖質(zhì)量濃度達(dá)到60 mg/mL時(shí)，DPPH自由基清除率最高可達(dá)31.2%；當(dāng)質(zhì)量濃度為5 mg/mL時(shí)，清除率為4.9%。

圖3　不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)DPPH自由基的捕獲能力Fig.3　DPPH free radical scavenging activity of inulin with various concentrations

3.4H2O2誘導(dǎo)Caco-2細(xì)胞氧化損傷模型

Caco-2細(xì)胞模型是近20年來(lái)國(guó)內(nèi)外廣泛采用的研究藥物小腸吸收的體外模型。它具有培養(yǎng)相對(duì)簡(jiǎn)單、結(jié)果重復(fù)性好及應(yīng)用范圍較廣的優(yōu)點(diǎn)。Caco-2細(xì)胞來(lái)源于人體的直腸癌，結(jié)構(gòu)與功能與人小腸上皮細(xì)胞相似，含有與小腸刷狀緣上皮相關(guān)的酶類，且與人體正常小腸上皮轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)及酶類相似。由圖4可知，0.2～1.0 mmol/L濃度范圍的H2O2作用4 h后對(duì)Caco-2細(xì)胞具有顯著的毒性作用，導(dǎo)致Caco-2細(xì)胞存活率降低；也可以發(fā)現(xiàn)Caco-2細(xì)胞存活率與H2O2濃度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，在H2O2濃度為1.0 mmol/L時(shí)，Caco-2細(xì)胞存活率為51.5%，損傷程度較大。為突顯菊糖的抗氧化活性保護(hù)作用，選擇濃度為1.0 mmol/L的H2O2作用于Caco-2細(xì)胞的氧化損傷模型。如果用大于濃度1.0 mmol/L的H2O2作用于Caco-2細(xì)胞，導(dǎo)致Caco-2細(xì)胞存活率更低，作為一種抗氧化保護(hù)劑，抗氧化保護(hù)能力是有限的。

圖4　不同濃度H2O2對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響Fig.4　Effect of H2O2with different concentrations on the viability of Caco-2 cells

3.5菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)

為探討菊糖對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷的Caco-2細(xì)胞的保護(hù)作用，實(shí)驗(yàn)中菊糖與Caco-2細(xì)胞共同孵育6 h。由圖5可知，與對(duì)照組相比，經(jīng)過(guò)0.2～0.6 mg/mL菊糖處理的Caco-2細(xì)胞，細(xì)胞存活率均在86%左右，存活率雖有所下降但無(wú)顯著差異（p＞0.05）；但經(jīng)過(guò)0.8～1.2 mg/mL菊糖處理的Caco-2細(xì)胞存活率出現(xiàn)下降趨勢(shì)，隨著質(zhì)量濃度增加，存活率下降，表現(xiàn)出細(xì)胞毒性作用（p＜0.05）。菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞抗氧化保護(hù)作用的雙重性：低質(zhì)量濃度時(shí)，菊糖有一定的抗氧化活性，對(duì)細(xì)胞具有抗氧化保護(hù)作用，但質(zhì)量濃度超過(guò)一定的程度，可能也會(huì)使細(xì)胞機(jī)能和形態(tài)發(fā)生改變，從而導(dǎo)致Caco-2細(xì)胞死亡。在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)會(huì)隨著質(zhì)量濃度增加抗氧化保護(hù)能力逐漸增強(qiáng)，但達(dá)到頂峰時(shí)，繼續(xù)增加菊糖的質(zhì)量濃度，那將會(huì)導(dǎo)致對(duì)Caco-2細(xì)胞的致死作用強(qiáng)于抗氧化保護(hù)作用。故在研究菊糖的抗氧化機(jī)理時(shí)，選用0.2～0.8 mg/mL質(zhì)量濃度的菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞進(jìn)行抗氧化保護(hù)。

圖5　不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)Caco-2細(xì)胞存活率的影響Fig.5Effects of inulin with different concentrations onthe viability of Caco-2 cells

3.6菊糖對(duì)過(guò)氧化氫酶活力的調(diào)節(jié)

從圖6可知，與陰性對(duì)照組比較，只加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中，過(guò)氧化氫酶活力降低。與陽(yáng)性對(duì)照組比較，加入0.2～0.8 mg/mL的菊糖處理后再加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中，過(guò)氧化氫酶的活力分別提高了7.8%、15.9%、24.7%和35.8%。0.4～0.8 mg/ mL 3組與陽(yáng)性對(duì)照組比較，過(guò)氧化氫酶活力顯著提高（p＜0.05）；與陰性對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異；只接受0.8 mg/mL菊糖處理組，過(guò)氧化氫酶活力稍降低，無(wú)顯著性差異。

圖6　不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)過(guò)氧化氫酶活力的影響Fig.6　Effects of inulin with different concentrations oncatalase activity

3.7菊糖對(duì)谷胱甘肽還原酶活力的調(diào)節(jié)

從圖7可以得知，與陰性對(duì)照組比較，只加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中GSH-Rx酶活力降低。與陽(yáng)性對(duì)照組比較，加入0.2～0.8 mg/mL的菊糖處理后再加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中，GSH-Rx酶活力分別提高了10.5%、31.6%、33.5%及37.6%。0.4～0.8 mg/ mL 3組與陽(yáng)性對(duì)照組比較，過(guò)氧化氫酶活力顯著提高（2＜0.05）；與陰性對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異；只接受0.8 mg/mL菊糖處理組，GSH-Rx酶活力稍提高，無(wú)顯著性差異。

圖7　不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)谷胱甘肽還原酶活力的影響Fig.7Effects of inulin with different concentrations onglutathione reductase（GSH-Rx）activity

3.8菊糖對(duì)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的調(diào)節(jié)

從圖8可以得知，與陰性對(duì)照組比較，只加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中GSH-Px活力降低。與陽(yáng)性對(duì)照組比較，加入0.2～0.8 mg/mL的菊糖處理后再加入H2O2的Caco-2細(xì)胞中，GSH-Px酶活力分別提高了1.9%、8.4%、29.7%及100.1%。0.6～0.8 mg/mL兩組與陽(yáng)性對(duì)照組比較，過(guò)氧化氫酶活力顯著提高（p＜0.05）；與陰性對(duì)照組相比，無(wú)顯著性差異；只接受0.8 mg/mL菊糖處理組，無(wú)顯著性差異。

圖8　不同質(zhì)量濃度菊糖對(duì)谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力的影響Fig.8　Effects of inulin with different concentrations on glutathione peroxidase（GSH-Px）activity

4　結(jié)語(yǔ)

通過(guò)測(cè)定菊糖對(duì)鐵離子的還原能力、DPPH自由基清除能力及金屬離子螯合能力，證實(shí)了菊糖具有一定的抗氧化活性，而且隨著菊糖質(zhì)量濃度增大抗氧化活性逐漸增強(qiáng)。以Caco-2細(xì)胞為體外氧化損傷模型，探討菊糖對(duì)H2O2誘導(dǎo)損傷細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活力的調(diào)節(jié)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，菊糖可通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化氫酶、谷胱甘肽還原酶及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力，從而實(shí)現(xiàn)抗氧化保護(hù)作用。

菊糖是一種天然碳水化合物，對(duì)人體有特殊的生理功能，目前己被世界上多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)為食品營(yíng)養(yǎng)增補(bǔ)劑。日本厚生省批準(zhǔn)菊糖為特定保健食品，美國(guó)食品和藥物管理局批準(zhǔn)菊糖為公認(rèn)的安全級(jí)配料，歐洲則把它作為控制人血液膽固醇水平的功能性甜味劑廣泛應(yīng)用。我國(guó)對(duì)菊糖的研究始于20世紀(jì)90年代，在很長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)停留在實(shí)驗(yàn)室階段。因此，下一階段有必要開(kāi)展其生理活性與臨床應(yīng)用研究，如保護(hù)臟器氧化損傷、降低糞臭素、影響下丘腦神經(jīng)元以及菊糖過(guò)敏癥等，為其在消化、內(nèi)分泌、心血管疾病，以及腫瘤等的臨床防治提供理論依據(jù)。

［1］烏日娜，朱軼霞，于永奇，等.菊芋的研究性狀及開(kāi)發(fā)潛力［J］.草業(yè)科學(xué)，2013，30（8）：1295-1300.

WU Rina，ZHU Yixia，YU Yongqi，et al.Study on status and exploiting potential of helianthus tuberosus［J］.Pratacultural Science，2013，30（8）：1295-1300.（in Chinese）

［2］Reza K，Mohammad H，Mehran G，et al.Application of inulin in cheese as prebiotic，fat replacer and texturizer：A review［J］. Carbohydrate Polymers，2015，119：85-100.

［3］蘇蘭利，呂元，程波，等.黃芪多糖浸泡種蛋對(duì)雛雞免疫器官抗氧化性能的影響［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，42（12）：133-135.

SU Lanli，LV Yuan，CHENG Bo，et al.Effects of a stragalus polysaccharides on antioxidant activity of chicken by soaking fertilized eggs［J］.Journal of Henan Agriical Science，2013，42（12）：133-135.（in Chinese）

［4］葉雪芳，崔志英.大蒜多糖的作用功效［J］.廣東飼料，2012，21（1）：27-30.

YE Xuefang，CUI Zhiying.The effects of polysaccharides from Allium sativum L［J］.Guangdong Feed，2012，21（1）：27-30.（in Chinese）

［5］邵金華，李濤，楊佳.微波輔助大蒜多糖的提取及其抗氧化活性的研究［J］.浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2013，25（4）：868-872.

SHAO Jinghua，LI Tao，YANG Jia.Studyon microwave-assisted extraction ofgarlic polysaccharideand its antioxidantactivity［J］. Acta Agricuhurae Zhejiangensis，2013，25（4）：868-872.（in Chinese）

［6］楊振，楊富民.菊粉對(duì)油脂抗氧化研究［J］.食品工業(yè)科技，2009，30（6）：119-121.

YANG Zhen，YANG Fumin.Study on the antioxidant ability of inulin［J］.Science and Technology of Food industry，2009，30（6）：119-121.（in Chinese）

［7］仝瑛.菊芋菊糖的提取純化、抗氧化活性及菊糖復(fù)合飲料工藝研究［D］.西安：西北大學(xué)，2010：53-57.

［8］陳榮，王學(xué)亮，徐環(huán)環(huán)，等.抗氧劑抗氧化活性研究進(jìn)展［J］.菏澤學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，35（5）：44-49.

CHEN Rong，WANG Xueliang，XU Huanhuan，et al.A review on antioxidant activity of antioxidants［J］.Journal of Heze University，2013，35（5）：44-49.（in Chinese）

［10］Saiga A，Tanabe S，Nishimura T.Antioxidant activity of peptides obtained from porcine myofibrillar proteins by protease treatment［J］.Journal of Agriculture and Food Chemistry，2003，51（12）：3661-3667.

［11］Rivero-Perez M D，Perez-Magarino S，Gonzalez-San M L.Role of melanoidins in sweet wines［J］.Analytica Chimica Acta，2002，458（1）：169-175.

Studies on the Antioxidant Activity of Inulin and Its Mechanism

LIU Deping，WU Ping*
（Affiliated Hospital of Jiangnan University，Wuxi 214000，China）

The antioxidant activity of inulin was evaluated by the studies of the reduction ability，F(xiàn)e2+-chelating activity and DPPH free radical scavenging activity.The mechanism of its antioxidant activity was investigated using the Caco-2 cell monolayer model.Three different antioxidant activity assays showed that inulin exhibited good antioxidant activity.A significant protective effect of inulin on H2O2induced oxidative stress in Caco-2 cells was observed in comparison with the positive controls.With the treatment of 0.8 mg/mL insulin，the activities of superoxide dismutase，catalase and glutathione peroxidase were increased by 35.8%，47.6%，and 61.2%，respectively.The antioxidant activity of inulin takes effect mainly by activing the intracellular antioxidant enzymes.

Inulin，antioxidant activity，the Caco-2 cell monolayer model，mechanism

TS 201.4

A

1673—1689（2015）09—1002—06

2015-03-23

劉德萍（1962—），女，吉林長(zhǎng)春人，主管護(hù)師，主要從事?tīng)I(yíng)養(yǎng)護(hù)理及臨床實(shí)踐研究。E-mail：23368058@qq.com

吳平（1981—），女，江蘇南通人，工學(xué)碩士，主治醫(yī)師，主要從事臨床營(yíng)養(yǎng)治療及研究。E-mail：wuping_1981@163.com