窄譜中波紫外線對(duì)銀屑病患者白細(xì)胞介素17、22水平的影響

單秀娟 于亮 郭文臣

窄譜中波紫外線對(duì)銀屑病患者白細(xì)胞介素17、22水平的影響

單秀娟 于亮 郭文臣

目的 探討窄譜中波紫外線（NB-UVB）在銀屑病治療中的作用機(jī)制。方法 42例銀屑病患者僅用NB-UVB照射治療20次，治療前及治愈患者分別進(jìn)行標(biāo)本采集及皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測定患者治療前后外周血IL-17和IL-22水平的變化情況，并與20例健康對(duì)照比較，同時(shí)利用RT-PCR法檢測10例患者治療前后皮膚組織中IL-17和IL-22 mRNA表達(dá)水平的差異，并與10例健康對(duì)照進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果 銀屑病患者外周血中IL-17（34.26±10.05 ng/L）和IL-22（13.72±4.45 ng/L）水平明顯高于健康對(duì)照組（分別為16.34±4.73 ng/L和5.03±1.84 ng/L），均P<0.01?；颊咂pIL-17 mRNA（13.43±2.12）和IL-22 mRNA（16.53±2.65）表達(dá)水平明顯高于健康對(duì)照組（分別為5.26±0.87和7.72±2.13），均P<0.01。銀屑病患者PASI與外周血中IL-17和IL-22水平呈正相關(guān)（r值分別為0.76和0.70，均P<0.05），與皮損中IL-17和IL-22水平亦呈正相關(guān)（r值分別為0.65和0.68，均P<0.05）。42例銀屑病患者經(jīng)NB-UVB照射治療20次后，15例治愈，且治愈后外周血及皮損中IL-17和IL-22 mRNA及蛋白水平、PASI均明顯低于治療前組，均P<0.05。結(jié)論 NB-UVB照射治療銀屑病有效的機(jī)制之一可能與抑制患者外周血及皮損組織中IL-17及IL-22水平有關(guān)。

銀屑??；白細(xì)胞介素17；白細(xì)胞介素22；紫外線

研究表明，銀屑病是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫失衡性疾病。近年來，Th17、Th22及其白細(xì)胞介素17（IL-17）和IL-22相繼發(fā)現(xiàn)，并證實(shí)在銀屑病中顯著升高［1-2］。本研究觀察銀屑病患者窄譜中波紫外線（NB-UVB）治療前后外周血及皮損中IL-17和IL-22水平的變化，探討IL-17和IL-22參與銀屑病相關(guān)的發(fā)病機(jī)制及NB-UVB治療銀屑病的作用機(jī)制。

一、對(duì)象與方法

1.對(duì)象：2013年3-10月就診于我院皮膚科門診的42例尋常性銀屑病患者為銀屑病組，其中男24例，女18例；年齡18～52（32.20±10.30）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合尋常性銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］；皮損泛發(fā)全身，皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）≥10.0分及皮損面積＞10%的中、重度尋常性銀屑病患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者近1個(gè)月內(nèi)接受過系統(tǒng)性抗銀屑病治療或半個(gè)月內(nèi)局部應(yīng)用相關(guān)藥物治療者；妊娠期、哺乳期患者；伴有其他嚴(yán)重性系統(tǒng)性疾病或皮膚疾病；有紫外線照射禁忌證者。本院門診的健康體檢人員20例作為健康對(duì)照組，其中男13例，女 7例；年齡20～50（30.00±2.50）歲。兩組在性別、年齡等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究通過濰坊市人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象均簽署知情同意書。

2.光療方法：使用NB-UVB光療儀（德國沃曼公司，波長為310～315 nm、峰值311 nm）進(jìn)行治療。首次光療劑量為70%的最小紅斑量（MED），隔日1次；后續(xù)光療劑量在前次劑量基礎(chǔ)上按局部皮膚反應(yīng)依次遞增10%～20%，至光療區(qū)皮膚出現(xiàn)淡紅斑時(shí)則維持該劑量治療。治療過程中，若出現(xiàn)疼痛性紅斑或水皰時(shí)應(yīng)停止光照，至皮損恢復(fù)后再繼續(xù)照射，劑量為前次劑量的50%。規(guī)定光療20次為全療程，皮損提前緩解者繼續(xù)維持治療。20次治療結(jié)束前后抽血及采集皮損，所有患者20次光療期間不進(jìn)行其他治療。

3.PASI評(píng)定：根據(jù)皮損面積和紅斑、鱗屑、浸潤的嚴(yán)重程度，分別于光療前、光療結(jié)束后計(jì)算PASI，病情改善率（%）=［（治療前PASI評(píng)分 -治療后PASI評(píng)分）/治療前PASI評(píng)分］×100%。病情改善率≥90%為治愈，60%～89%為顯效，25%～59%為進(jìn)步，＜25%為無效。

4.外周血IL-17和IL-22的檢測：酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測患者治療前后及健康對(duì)照者血漿中IL-17和IL-22水平。操作步驟嚴(yán)格按照人IL-17 ELISA試劑盒和人IL-22 ELISA試劑盒（上海船夫生物科技有限公司）說明，用酶標(biāo)儀在450 nm處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度。

二、結(jié)果

1.NB-UVB治療結(jié)果：42例銀屑病患者經(jīng)20次光療后，治愈15例，顯效20例，進(jìn)步3例，無效2例，失訪2例，有效率87.5%。治療中未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，患者依從性好。15例治愈患者治療前PASI評(píng)分為13.83±1.64，治療后為2.82±1.75，治療前后評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.642，P＜0.01）。治愈者采集標(biāo)本后，繼續(xù)維持治療；皮損基本消退后，光療劑量逐漸減量，直至治療結(jié)束。20例顯效及3例進(jìn)步患者繼續(xù)光療或加用其他治療方法，而2例無效患者改用其他治療方法，以上患者均在門診進(jìn)行定期隨訪。

2.外周血IL-17和IL-22測定結(jié)果：銀屑病組治愈15例，治療前血漿水平IL-17及IL-22均明顯高于健康對(duì)照組（均P＜0.01）；治療后血漿IL-17及IL-22水平明顯低于治療前（均P＜0.05）。見表1。

3.皮損組織中IL-17和IL-22 mRNA表達(dá)檢測結(jié)果：銀屑病組治療前皮損組織中IL-17 mRNA及IL-22 mRNA表達(dá)量明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），治療后表達(dá)明顯低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表2。

4.治療前患者PASI評(píng)分與IL-17、IL-22水平的相關(guān)性：治療前患者PASI評(píng)分與血漿中IL-17及皮損中IL-17 mRNA 水平均呈正相關(guān)（r=0.76，P＜ 0.05；r=0.65，P ＜ 0.05）；與血漿中IL-22及皮損中IL-22 mRNA水平亦呈正相關(guān)

5.皮膚組織中IL-17和IL-22 mRNA表達(dá)水平檢測：分別采集10例患者治療前后的皮損組織及10例健康對(duì)照者皮膚組織，-80℃冷凍備用。以上皮膚組織經(jīng)勻漿裂解后，Trizol法提取mRNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，RT-PCR法檢測IL-17和IL-22 mRNA表達(dá)水平。反轉(zhuǎn)錄試劑盒為美國賽默飛世爾科技公司產(chǎn)品，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明。實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)所用的引物均由美國賽默飛世爾科技公司合成，引物序列為：IL-17 上游引物 5′-ACTCCTGGGAAGACCTCATTG-3′，下游引物 5′-GGCCACATGGTGGACAATCG-3′；IL-22 上游引物5′-CCAGGCTCAGCAACAGGCTAA-3′，下游引物 5′-TTTCAG CTTTGCTCTGGTCAAATG-3′。實(shí)驗(yàn)步驟參照SYBR green熒光定量PCR試劑盒說明書，擴(kuò)增條件為95℃50 s，65℃退火30 s，72℃延伸35 s，共45個(gè)循環(huán)，最后77℃延伸5 s。（r=0.70，P<0.05；r=0.68，P<0.05）。

表1 健康對(duì)照組和銀屑病組治療前、后血漿IL-17和IL-22水平比較（±s）

表1 健康對(duì)照組和銀屑病組治療前、后血漿IL-17和IL-22水平比較（±s）

注：t1值為銀屑病組治療前與健康對(duì)照組比較，均P<0.01；t2值為銀屑病組治療后與治療前比較，均P<0.05

組別 例數(shù) IL-17（ng/L） IL-22（ng/L）健康對(duì)照組 20 16.34±4.73 5.03±1.84銀屑病組治療前 15 34.26±10.05 13.72±4.45治療后 15 20.02±6.70 6.32±2.28 t1值 7.016 8.282 t2值 6.430 7.280

表2 健康對(duì)照組及銀屑病組治療前、后皮損組織IL-17和IL-22 mRNA表達(dá)比較（±s）

表2 健康對(duì)照組及銀屑病組治療前、后皮損組織IL-17和IL-22 mRNA表達(dá)比較（±s）

注：t1值為銀屑病治療前與健康對(duì)照組比較，均P<0.01；t2值為銀屑病組治療后與治療前比較，均P<0.05

組別 例數(shù) IL-17 IL-22健康對(duì)照組 10 5.26±0.87 7.72±2.13銀屑病組治療前 10 13.43±2.12 16.53±2.65治療后 10 7.28±1.68 10.84±1.32 t1值 6.312 6.823 t2值 5.145 5.956

三、討論

研究表明，IL-17可以誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)［4］。IL-17也參與中性粒細(xì)胞增生、成熟和趨化，表現(xiàn)為血管周圍炎癥細(xì)胞浸潤［5］。IL-22可增強(qiáng)角質(zhì)形成細(xì)胞分泌多種抗微生物肽，促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的固有免疫應(yīng)答水平，抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的分化并增強(qiáng)其遷移能力，還促使角質(zhì)形成細(xì)胞分泌多種與皮膚修復(fù)重建有關(guān)的蛋白酶。研究表明，IL-17及IL-22在銀屑病患者血清及皮損中明顯升高［6］，參與其中的細(xì)胞因子IL-22、IL-17、IL-23、IL-8、腫瘤壞死因子α等都有不同水平的表達(dá)改變［7］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NB-UVB治療尋常性銀屑病有效率達(dá)87.5%，治療中未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，患者依從性好。與既往的研究［8］相似，尋常性銀屑病患者外周血及皮損中IL-17和IL-22水平較健康對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.01），提示IL-17和IL-22可能參與了銀屑病的發(fā)病。經(jīng)NB-UVB治療后尋常性銀屑病患者外周血及皮損IL-17和IL-22水平較治療前明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05），提示NB-UVB可能通過調(diào)節(jié)銀屑病患者外周血及皮損中IL-17和IL-22水平來發(fā)揮作用。通過相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，銀屑病患者PASI評(píng)分與治療前血漿及皮損中IL-17和IL-22水平均呈正相關(guān)，可見銀屑病患者IL-17和IL-22水平與銀屑病的嚴(yán)重程度相關(guān)。目前多認(rèn)為NB-UVB作用機(jī)制包括免疫抑制、免疫調(diào)節(jié)及改變血中細(xì)胞成分及其活性，誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，抑制朗格漢斯細(xì)胞提呈抗原，抑制自然殺傷細(xì)胞的功能，從而減輕皮膚炎癥反應(yīng)。

［1］ 李家文,李東升,劉厚君.尋常性銀屑病患者皮損白介素17、干擾素γ及巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α mRNA的表達(dá)［J］.中華皮膚科雜志,2004,37（3）:150-152.

［2］ 蘇彤,陳宏,李璐,等.尋常性銀屑病患者外周血白介素17、白介素23 mRNA的表達(dá)及與病情相關(guān)性研究［J］.中華皮膚科雜志,2014,47（4）:278-281.

［3］ 趙辨.中國臨床皮膚病學(xué)［M］.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社,2010:1008-1025.

［4］ Ryu S,Lee JH,Kim SI.IL-17 increased the production of vascular endothelial growth factor in rheumatoid arthritis synoviocytes［J］.Clin Rheumatol,2006,25（1）:16-20.

［5］ Anderson EJ,McGrath MA,Thalhamer T,et al.Interleukin-12 to interleukin ′infinity′:the rationale for future therapeutic cytokine targeting［J］.Springer Semin Immunopathol,2006,27（4）:425-442.

［6］史玉玲,徐曉光,畢新嶺,等.白介素22及其相關(guān)因子在銀屑病患者血清及外周血單一核細(xì)胞中的表達(dá)［J］.中華皮膚科雜志,2011,44（4）:238-240.

［7］Coimbra S,Oliveira H,Reis F,et al.Interleukin （IL）-22,IL-17,IL-23,IL-8,vascular endothelial growth factor and tumour necrosis factor-α levels in patients with psoriasis before,during and after psoralen-ultraviolet A and narrowband ultraviolet B therapy［J］.Br J Dermatol,2010,163（6）:1282-1290．

［8］Lowes MA,Kikuchi T,Fuentes-Duculan J,et al.Psoriasis vulgaris lesions contain discrete populations of Th1 and Th17 T cells［J］．J Invest Dermatol,2008,128（5）:1207-1211．

2015年阿維A（方希）治療銀屑病等皮膚病的文章發(fā)表獲資助通知

為了提高皮膚科醫(yī)師的臨床科研水平，走一條“學(xué)術(shù)研究—參加學(xué)術(shù)會(huì)議—提升學(xué)術(shù)水平”的良性循環(huán)之路。重慶華邦制藥有限公司為此設(shè)立以下獎(jiǎng)項(xiàng)：①凡2015年1月1日至12月31日（含此期間審核通過待發(fā)表文章），在《中華皮膚科雜志》和《中國皮膚性病學(xué)雜志》上發(fā)表關(guān)于阿維A（方希）治療銀屑病和其他皮膚病的論文，第一作者可獲得2016年資助參加全國皮膚病學(xué)術(shù)會(huì)議1次（醫(yī)學(xué)會(huì)全國年會(huì)、醫(yī)師協(xié)會(huì)全國年會(huì)、銀屑病全國學(xué)習(xí)班任選其一）；②在其他雜志發(fā)表關(guān)于阿維A（方希）治療銀屑病和其他皮膚病的論文，經(jīng)專家評(píng)選，前10名論文第一作者可獲參加學(xué)術(shù)會(huì)議的費(fèi)用2 000元。符合資助條件的第一作者，可以將資助費(fèi)提前到2015年使用。聯(lián)系方式：請將已發(fā)表的文章電子郵件發(fā)至fangxihuabang@126.com，并附第一作者手機(jī)和郵箱地址，郵件主題：發(fā)表阿維A（方希）學(xué)術(shù)文章，獲資助參加學(xué)術(shù)會(huì)議機(jī)會(huì)。

重慶華邦制藥有限公司擁有此次活動(dòng)的解釋權(quán)。

Effects of narrow-band ultraviolet B on the levels of interleukin-17 and-22 in patients with psoriasis

Shan Xiujuan*,Yu Liang,Guo Wenchen.*Department of Dermatology,Weifang People′s Hospital,Weifang 261041,Shandong,China

ObjectiveTo explore the therapeutic mechanism of narrow-band ultraviolet B （NB-UVB）in psoriasis.MethodsForty-two patients with psoriasis vulgaris and 20 healthy controls were enrolled into this study.All the patients

20 sessions of NB-UVB radiation.Psoriasis area severity index （PASI）was used to evaluate the severity of psoriasis.Blood samples were collected from all the patients before and 15 cured patients after the treatment as well as from 20 healthy controls,and skin samples from 10 patients before and after the treatment as well as from 10 healthy controls.Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）was performed to determine the serum levels of IL-17 and IL-22,and real-time fluorescence-based quantitative PCR to measure the mRNA expressions of IL-17 and IL-22 in skin specimens.Statistical analysis was carried out by using the two-samplet-test,pairedt-test and Pearson correlation analysis.ResultsAfter 20 sessions of NB-UVB radiation,15 out of the 42 patients were cured with a significant decrease in PASI.Compared with the healthy controls,the 15 cured patients showed a significant elevation in the levels of IL-17and IL-22 proteins（IL-17:34.26±10.05 ng/L vs.16.34±4.73 ng/L,t=7.016,P＜0.01;IL-22:13.72±4.45 ng/L vs.5.03±1.84 ng/L,t=8.282,P＜0.01）and mRNAs（IL-17:13.43±2.12 vs.5.26±0.87,t=6.312,P＜0.01;IL-22:16.53±2.65 vs.7.72±2.13,t=6.823,P＜0.01）before the treatment.The PASI score was positively correlated with the levels of IL-17 and IL-22 proteins in sera（r=0.76,0.70,respectively,bothP＜0.05）and their mRNAs in skin lesions（r=0.65,0.68,respectively,bothP＜0.05）in these patients.The serum levels and mRNA expressions of IL-17 and IL-22 all significantly reduced in the cured patients after the treatment compared with those before the treatment（all P ＜ 0.05）.ConclusionNB-UVB may treat psoriasis by downregulating the levels of IL-17 and IL-22 in peripheral blood and skin lesions in patients with psoriasis.

Psoriasis;Interleukin-17;Interleukin-22;Ultraviolet rays

Guo Wenchen,Email:wfkw2008@126.com

作者單位：261041山東，濰坊市人民醫(yī)院皮膚科（單秀娟），檢驗(yàn)科（于亮、郭文臣）

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2015.08.014

濰坊市2012年科學(xué)技術(shù)發(fā)展計(jì)劃（20122001）

郭文臣，Email：wfkw2008@126.com

2014-10-29）

（本文編輯：吳曉初）