牛大力根脂溶性成分的GC-MS分析*

陳德力　弓　寶　劉洋洋　方　草　王德立　鄭希龍

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院﹠北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所海南分所(海口570311)

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·方藥縱橫·

牛大力根脂溶性成分的GC-MS分析*

陳德力弓寶劉洋洋方草▲王德立鄭希龍△

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院﹠北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，藥用植物研究所海南分所(?？?70311)

目的：研究牛大力根脂溶性成分。方法：采用溶解提取法、硅膠柱層析分離，獲得牛大力根脂溶性提取物F-1、F-2和F-3，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，對其化學(xué)成分進(jìn)行分離、鑒定及分析。結(jié)果：從F-1中鑒定出31個(gè)成分，主要為苯基衍生物(65.71%)和不飽和脂肪酸(18.71%)。從F-2中鑒定出57個(gè)成分，主要為苯基及其衍生物(52.36%)和不飽和脂肪酸(27.58%)。從F-3中共鑒定50個(gè)成分，主要為苯基及其衍生物(18.04%)、不飽和脂肪酸(14.58%)、飽和脂肪酸(16.57%)以及其他類(23.41%)。結(jié)論：該研究首次對牛大力根部的脂溶性成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分析，為進(jìn)一步開發(fā)利用牛大力根資源提供了科學(xué)依據(jù)。

牛大力(Millettia speciosa Champ.)為豆科崖豆藤屬植物美麗崖豆藤的根，別名豬腳笠、山蓮藕、大力薯、大力牛等，以根入藥，載于《陸川本草》，全年可采[1]。目前，國內(nèi)外學(xué)者對牛大力根及葉化學(xué)成分的研究表明，牛大力中含有三萜皂苷、異黃酮、查爾酮、多糖、香豆素、生物堿等類成分，具有抗氧化、增強(qiáng)免疫力、抗炎、抗腫瘤、祛痰平喘等活性，是一味具有多種藥理作用和良好保健功效的南藥材[2-3]。目前，對牛大力的藥用部位根的脂溶性成分未見報(bào)道，而牛大力根部脂溶性成分對于其藥效活性具有一定的相關(guān)性[4]。本項(xiàng)目組對牛大力根的脂溶性成分進(jìn)行了植化分析，為進(jìn)一步研究和開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1　儀器與試藥

1.1實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)用牛大力根，于2013年10月，采自海南省五指山市毛陽鎮(zhèn)，經(jīng)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所海南分所馮錦東研究員鑒定為Millettia speciosa Champ.的根。采后曬干粉碎，放置干燥暗處貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2儀器美國安捷倫公司GC-7890A，MS-5975C-MSD，氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，HP-5MS, 5% Phenyl Methyl Silox柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)。正己烷、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等均為國產(chǎn)AR。薄層色譜和柱色譜硅膠均為青島海洋化工廠產(chǎn)品。

2　方法與結(jié)果

2.1樣品制備牛大力根干燥粉末2.5 kg，用70%乙醇(10L× 3)室溫提取7d，減壓濃縮至無醇味浸膏250 g。將所得浸膏分散于水中成懸濁液，以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取后，減壓濃縮得石油醚萃取物10g。取石油醚萃取物，硅膠柱色譜(200～300 目，40 g)干法上柱，以石油醚-乙酸乙酯(99∶1)梯度洗脫，采用TLC 檢測合并相同餾分，得到12個(gè)部位，其中F-1(550 mg)和F-2(1.4728 g)為脂溶性成分，溶解于正己烷，過濾，備用。取200 g牛大力根干燥粉末，置于2 L燒瓶中，加入1000 mL石油醚，70oC加熱回流萃取4 h，取萃取液過濾，減壓濃縮，得到脂溶性成分F-3(2.5654 g)。

2.2GC-MS分析條件氣相色譜條件：石英毛細(xì)管柱HP-5MS 5% Phenyl Methyl Silox (30 m×0.25 mm×0.25 μm film thickness)，程序升溫：從50oC開始，保持4 min，以25oC /min 升溫到175oC，再以2oC /min 升溫到275oC，保持5 min，載氣為He，柱流量1. 0 mL /min，進(jìn)樣口溫度250oC，分流比為20:1。質(zhì)譜條件：EI 源，電離電壓70 eV，離子源溫度230oC，掃描范圍50～500 amu，進(jìn)樣量1. 0 μL。

2.3結(jié)果經(jīng)GC 數(shù)據(jù)處理機(jī)用面積歸一法測得各組分的相對質(zhì)量分?jǐn)?shù)，并用GC-MS 聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測，所得質(zhì)譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫NIST 11.L檢索，并按各峰的質(zhì)譜裂片圖與文獻(xiàn)資料和標(biāo)準(zhǔn)圖譜核對，從而確定了牛大力根部脂溶性提取物的化學(xué)成分，結(jié)果見表1。由表1可以看出，含量相對豐富的化合物主要分為5類，為烷烴烯烴、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、苯基及其衍生物等。除此之外，還含有醇類、維生素、酮類等化合物。從F-1中共鑒定31個(gè)成分，主要為苯基衍生物(65.71%)和不飽和脂肪酸(18.71%)。苯基及其衍生物主要為鄰苯二甲酸二異辛酯(30.13%)、鄰苯二甲酸二丁酯(25.03%)、1,2-苯二甲酸雙(苯甲基)酯(5.45%)和1,2-苯二羧酸異丁基酯(4.09%)；不飽和脂肪酸主要為亞油酸乙酯(12.78%)和(Z,Z,Z)- 9,12,15-十八碳三烯酸乙酯(4.48%)。從F-2中共鑒定57個(gè)成分，主要為苯基及其衍生物(52.36%)和不飽和脂肪酸(27.58%)。苯基及其衍生物主要為鄰苯二甲酸二異辛酯(43.35%)、鄰苯二甲酸二仲丁酯(4.89%)、1,2-苯二羧酸異丁基酯(1.64%)和鄰苯二甲酸二丁酯(1.55%)；不飽和脂肪酸主要為亞油酸乙酯(19.57%)和油酸乙酯(7.18%)。從F-3中共鑒定50個(gè)成分，主要為苯基及其衍生物(18.04%)、不飽和脂肪酸(14.58%)、飽和脂肪酸(16.57%)以及其他類(23.41%)。苯基及其衍生物主要為鄰苯二甲酸二丁酯(7.92%)和鄰苯二甲酸二異辛酯(8.62%)；不飽和脂肪酸主要為(Z,Z)-9,12-十八烷二烯酸(13.72%)；飽和脂肪酸主要為肉豆蔻酸(13.72%)；其他類主要為豆甾醇(11.87%)。

表1　牛大力脂溶性成分GC-MS分析

續(xù)表

66硬脂酸甲酯0.190.300.83SFAE67(Z,Z)-9,12-十八烷二烯酸13.72UFAE68亞油酸乙酯12.7819.57UFAE69(Z,Z,Z)-9,12,15-十八碳三烯酸乙酯4.48UFAE70(E)-9-十八碳烯酸乙酯0.230.37UFAE71油酸乙酯7.18UFAE722-甲基-Z,Z-3,13-十八烷二烯0.33OC739-二十炔1.72AA741-十八烷基磺酰氯0.38OC75硬脂酸乙酯1.362.07SFAE7610-甲基十九烷0.19AA77N-苯基-2-萘胺0.05PDC78二十二烯0.12AA79(E,E)-9,12-十八碳二烯酸甲酯0.11UFAE80(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸甲酯0.11UFAE81(Z)-9-十八碳烯酸甲酯0.92UFAE829-甲基硬脂酸乙酯0.09SFAE83(Z)-14-甲基-8-十六碳烯0.40OC848-甲基十七烷0.35AA85二十四烷0.340.27AA86苯氧基-2,2'-亞甲基[6-(1,1-二甲基乙基-4-甲基]0.17PDC87(6αR-cis)-6H-苯并呋喃[3,2-c]苯并吡喃-6α,11α-二羥基-3,9-二甲氧基6H-Benzofuro[3,2-c][1]0.60PDC88十八烷0.110.32AA89鄰苯二甲酸二異辛酯30.1343.358.62PDC90紫檀素1.92OC918-己基十五烷0.18AA922-乙基吖啶酮0.99OC9313-十四碳烯-1-醇醋酸酯0.08SFAE94二十七烷0.05AA95環(huán)己巴比妥0.75OC96二十八烷0.31AA97螺甾內(nèi)酯0.36OC986,8-二氟代-4-羥基-3-羧酸喹啉乙酯1.63OC99角鯊烯0.361.06UFAE100維生素E2.982.61OC101十九烷0.13AA1021,1,3,3,5,5,7,7,9,9,11,11,13,13,15,15-16甲基八硅氧烷Octasiloxane,0.560.165.41OC103O-甲基-(+)-γ-維生素E(+)-γ-Tocopherol,1.64OC104豆甾醇11.87OCAA0.125.055.11SFAE6.811.0416.57PDC65.7152.3618.04UFAE18.7127.5814.58OC7.443.6523.41總計(jì)98.7899.6877.71

注：AA為烷烴和烯烴；SFAE為飽和脂肪酸；PDC為苯基及其衍生物；UFAE為不飽和脂肪酸；OC為其他類化合物

3　討　論

本文首次對牛大力根部的脂溶性成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分析研究，采用GC-MS 檢出豐富多樣的化學(xué)成分，其分離得到的提取物F-1、F-2以及加熱回流提取的脂溶性部位F-3的化學(xué)組成相似，主要為苯基及其衍生物、不飽和脂肪酸和飽和脂肪酸酯以及維生素E等。牛大力根部脂溶性成分中含有大量的酯類化合物，其中，硬脂酸甲酯、硬脂酸乙酯適用于護(hù)膚、護(hù)發(fā)及美容化妝品中的增溶劑、保濕劑、軟化劑以及香料香精、化學(xué)驅(qū)蚊、滅蚊原料藥的溶劑。不飽和脂肪酸酯，如油酸甲酯、油酸乙酯、亞油酸甲酯、亞油酸乙酯、十八碳二烯酸甲酯和十八碳三烯酸乙酯等，具有降血脂、抗氧化、抗炎、抗衰老以及防止動(dòng)脈硬化等活性，廣泛用于醫(yī)藥保健產(chǎn)品等開發(fā)[5-6]。同時(shí)，牛大力根部脂溶性成分中含有3%左右的維生素E，是最主要的抗氧化劑之一，在防治心腦血管疾病、腫瘤、糖尿病及其他并發(fā)癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)疾病、皮膚疾病以及抗衰老等方面具有廣泛的作用。本次研究闡明了牛大力根部脂溶性成分的物質(zhì)基礎(chǔ)，為其藥理作用的深入研究開發(fā)提供了較好的理論基礎(chǔ)，同時(shí)，研究表明牛大力根部作為嶺南地區(qū)著名的藥食兩用植物，其藥效活性與其不飽和脂肪酸酯以及維生素E等具有一定的相關(guān)性，說明牛大力根部脂溶性成分具有較好的開發(fā)價(jià)值。

[1] 廣東中藥志編輯委員會(huì). 廣東中藥志[M]. 廣州:廣東科學(xué)技術(shù)出版社，1991.

[2] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì). 中華本草[M]. 上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999.

[3] 韋玉燕，巫繁菁，曾海生，等. 牛大力研究概況[J]. 廣西科學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，26(3)：380-382.

[4] 黎瑞汝，陳占科，高 珊，等. 中藥牛大力的研究進(jìn)展[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6(12)：165-167.

[5] 賴富麗，王祝年，王建榮，等. 牛大力藤葉脂溶性成分的GC-MS分析[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)，2009，30(5)：714-717.

[6] 張正祥，李寶莉，陳雅慧，等. 復(fù)方酸棗仁油梔子油軟膠囊脂肪酸成份測定[J]. 陜西醫(yī)學(xué)雜志，2009，38(7)：792-793.

(收稿2015-03-20；修回2015-04-30)

GC-MS analysis of liposoluble constituents from the radix of Millettia speciosa Hainan Branch Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical

Sciences & Peking Union Medical College (Haikou 570311)

Chen DeliGong BaoLiu Yangyanget al

Objective: To study the lipophilic chemical constituents of the radix of Millettia speciosa. Methods: Liposoluble extracts F-1, F-2 and F-3 were isolated from the radix of Millettia speciosa by solvent extraction method and silica column chromatography, and their chemical composition was identified and analyzed by GC-MS. Results：31 compounds were found in the extract F-1, mainly comprising phenyl derivatives and related compounds (65.71%) and unsaturated fatty acids and esters (18.71%). 57 compounds were found in the extract F-2, mainly comprising phenyl derivatives and related compounds (52.36%) and unsaturated fatty acids and esters (27.58%). 50 compounds were found in the extract F-3, mainly comprising phenyl derivatives and related compounds (18.04%), unsaturated fatty acids and esters (14.58%), saturated fatty acids and esters (16.57%) and other compounds (23.41%). Conclusion：The present study provides a chemical basis for Millettia speciosa.

Chemical Compositions (TCD)@ Millettia@GC-MS

R282

Adoi:10.3969/j.issn.1000-7369.2015.09.076

*中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)(2013HNB02)

海南省自然科學(xué)基金(813242)

▲海南省農(nóng)墾總醫(yī)院(?？?570311)

主題詞 中藥化學(xué)成分 @牛大力 @GC-MS分析