腦功肽口服液抗焦慮作用實(shí)驗(yàn)研究*

雷健，胡長(zhǎng)鵬，邢茂，向俊馬，張蓉

（中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院藥學(xué)部，重慶400037）

腦功肽口服液抗焦慮作用實(shí)驗(yàn)研究*

雷健，胡長(zhǎng)鵬，邢茂，向俊馬，張蓉

（中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院藥學(xué)部，重慶400037）

目的通過(guò)動(dòng)物行為學(xué)試驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯磕X功肽口服液的抗焦慮作用。方法采用小鼠高架十字迷宮試驗(yàn)（EPM）和大鼠敞箱試驗(yàn)（OFT），EPM試驗(yàn)選取開(kāi)臂時(shí)間百分比（OT%）、開(kāi)臂次數(shù)百分比（OE%）、總?cè)氡鄞螖?shù)、總?cè)氡蹠r(shí)間為觀察指標(biāo)；OFT試驗(yàn)選取總路程、中央?yún)^(qū)域路程、中央?yún)^(qū)域時(shí)間為觀察指標(biāo)。分別設(shè)空白對(duì)照組、地西泮組、腦功肽高劑量組與腦功肽中劑量組進(jìn)行觀察。結(jié)果在EPM試驗(yàn)中，OT%與OE%地西泮組分別為（51.23±17.47）%和（53.28±14.96）%，腦功肽高劑量組分別為（38.67±15.23）%和（57.43±8.16）%，均與空白對(duì)照組有顯著性差異（P＜0.05）；OFT試驗(yàn)中，地西泮能顯著增加中央?yún)^(qū)域時(shí)間（P＜0.05）。結(jié)論EPM試驗(yàn)顯示，腦功肽口服液具有抗焦慮作用。

腦功肽口服液；焦慮；高架十字迷宮試驗(yàn)；大鼠敞箱試驗(yàn)

腦功肽口服液為我院院內(nèi)制劑，由遠(yuǎn)志、酸棗仁、天麻、石菖蒲等14味中藥組方，具有調(diào)節(jié)腦功能、平衡大腦興奮與抑制過(guò)程、增強(qiáng)記憶力、促進(jìn)腦細(xì)胞代謝、改善腦循環(huán)和醒腦提神等作用［1-4］，能緩解睡眠障礙患者的焦慮癥狀。我科對(duì)該制劑分別進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和急性毒性研究［5］，但對(duì)其抗焦慮作用的機(jī)制未進(jìn)行研究。本研究中通過(guò)小鼠高架十字迷宮試驗(yàn)（EPM）與大鼠敞箱試驗(yàn)（OFT）［6］，研究腦功肽口服液對(duì)動(dòng)物行為學(xué)的影響，以考察其抗焦慮作用。

1　材料與方法

1.1儀器、動(dòng)物與試藥

ZH-DSG型高架十字迷宮試驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)，ZH-ZFT型自發(fā)活動(dòng)視頻分析系統(tǒng)（安徽淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司）；ME235S型電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）。清潔級(jí)健康雄性昆明種小鼠60只，初始體重18～22 g；清潔級(jí)健康雄性SD大鼠［許可證號(hào)：SCXK（渝）2012-0005］60只，初始體重160～180 g，由第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。所有動(dòng)物提前1周購(gòu)入，清潔級(jí)動(dòng)物［許可證號(hào)：SYXK（渝）2012-0011］常規(guī)飼養(yǎng)。地西泮片（湖北制藥有限公司，批號(hào)為20110604），試驗(yàn)時(shí)用雙蒸水配制成0.2 g/L的溶液；腦功肽原液（NGT）由第三軍醫(yī)大學(xué)新橋醫(yī)院藥劑科中藥制劑室提供（批號(hào)為20130114），高、中劑量組用雙蒸水分別配制每1mL含1.8，0.9 g生藥的藥液，雙蒸水為新橋醫(yī)院藥劑科普通制劑室制備。

1.2試驗(yàn)方法

分組與給藥：行為學(xué)試驗(yàn)前，將動(dòng)物飼養(yǎng)于正常晝夜循環(huán)的環(huán)境中。室溫控制在（20±2）℃，自由攝食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后，每天安撫動(dòng)物2min，持續(xù)3 d，減少無(wú)關(guān)刺激對(duì)試驗(yàn)的影響。給藥前將動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組（A組）、地西泮陽(yáng)性對(duì)照組（B組）、腦功肽高劑量組（C1組）、腦功肽中劑量組（C2組），各15只，各組每天8：00～21：00灌服給藥，灌胃量小鼠每20 g體重0.2mL，大鼠每200 g體重2 mL，連續(xù)7 d，末次給藥30min后進(jìn)行行為學(xué)試驗(yàn)，試驗(yàn)時(shí)間段為8：00～14：00。

EPM與OFT試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)室光線保持恒亮，以1.5m距離處能辨認(rèn)小鼠細(xì)微活動(dòng)的最低亮度為準(zhǔn)，室溫約15℃，保持實(shí)驗(yàn)室安靜。測(cè)試前將每只小鼠放于60 cm×60 cm×35 cm敞箱中，自由探究5 min，然后迅速置試驗(yàn)系統(tǒng)的中央平臺(tái)上，頭朝向一開(kāi)放臂，放開(kāi)后開(kāi)始計(jì)時(shí)，由儀器記錄5min內(nèi)的活動(dòng)指標(biāo)。觀察指標(biāo)包括，進(jìn)入開(kāi)放臂次數(shù)（OE）；進(jìn)入到任一開(kāi)放臂的次數(shù)，以小鼠4個(gè)爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn)，中途1個(gè)爪子從該臂中完全退出則為該次進(jìn)入活動(dòng)完成；進(jìn)入開(kāi)放臂時(shí)間（OT）；進(jìn)入封閉臂次數(shù)（CE），進(jìn)入到任一封閉臂的次數(shù)，以小鼠4個(gè)爪子均進(jìn)入到臂內(nèi)為準(zhǔn)；進(jìn)入封閉臂時(shí)間（CT）；開(kāi)臂時(shí)間百分率（OT%）=OT/（OT+CT）×100%；開(kāi)臂次數(shù)百分率（OE%）=OE/（OE+CE）× 100%；總?cè)氡鄞螖?shù)，OE+CE；總?cè)氡蹠r(shí)間，OT+CT。實(shí)驗(yàn)室保持安靜，大鼠迅速置于敞箱中央（尺寸為100 cm×100 cm×45 cm），釋放后記錄10min內(nèi)大鼠活動(dòng)指標(biāo)。每次完成記錄后，用5%醋酸水溶液擦拭箱底，清除糞便，繼續(xù)用干布擦凈，排除氣味對(duì)下一只大鼠的干擾。觀察指標(biāo)包括總路程（mm）、中央?yún)^(qū)域路程（mm）、中央?yún)^(qū)域時(shí)間（s）。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2　結(jié)果

2.1小鼠EPM試驗(yàn)

結(jié)果見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，地西泮組能明顯增加小鼠OT%和OE%（P＜0.05），而不增加總?cè)氡鄞螖?shù)和總?cè)氡蹠r(shí)間，顯示模型造模成功。與空白對(duì)照組相比，高劑量腦功肽口服液能增加OT%和OE%（P＜0.05），顯示具有一定的抗焦慮作用；與空白對(duì)照組相比，中劑量腦功肽口服液的OT%和OE%無(wú)顯著性差異。

表1　小鼠EPM試驗(yàn)結(jié)果（±s）

表1　小鼠EPM試驗(yàn)結(jié)果（±s）

注：與A組比較，*P＜0.05。

組別A組（n=9）B組（n=14）C1組（n=12）C2組（n=12）OT（%）13.91±6.67 51.23±17.47*38.67±15.23*18.28±11.51 OE（%）34.83±7.39 53.28±14.96*57.43±8.16*42.36±11.66 OE+CE（次）47.00±7.71 48.71±23.71 53.83±8.23 45.42±11.64 OT+CT（s）200.46±30.17 180.20±54.22 185.72±36.82 196.73±39.78

2.2大鼠OFT試驗(yàn)

結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn)，B組中央?yún)^(qū)域時(shí)間比A組明顯增加，但中央?yún)^(qū)域路程無(wú)顯著性差異。與A組相比，C1組及C2組總路程、中央?yún)^(qū)域時(shí)間、中央?yún)^(qū)域路程等指標(biāo)均無(wú)顯著性差異，提示在該模型上未發(fā)現(xiàn)明顯改善焦慮的作用。

表2　大鼠OFT試驗(yàn)結(jié)果（±s）

表2　大鼠OFT試驗(yàn)結(jié)果（±s）

注：與A組比較，*P＜0.05。

組別A組（n=9）B組（n=14）C1組（n=12）C2組（n=12）總路程（mm）4 295.90±515.06 4 107.36±746.34 4 716.15±1 501.40 4 302.91±1 019.25中央?yún)^(qū)域時(shí)間（s）2.85±1.81 5.52±2.73*4.73±3.46 2.34±0.62中央?yún)^(qū)域路程（mm）108.91±56.58 134.44±47.30 140.89±100.80 91.54±74.26

3　討論

本試驗(yàn)中采用了2種行為學(xué)效應(yīng)模型考察腦功肽口服液的抗焦慮作用，其中EPM試驗(yàn)是抗焦慮研究中公認(rèn)結(jié)果可靠的模型［7］，動(dòng)物具有探究性，放入迷宮后會(huì)主動(dòng)探究開(kāi)臂，但又懼怕開(kāi)臂中高懸敞開(kāi)的環(huán)境，抗焦慮藥能增加動(dòng)物在開(kāi)臂的探究活動(dòng)，而致焦慮劑則相反。動(dòng)物OE%與OT%是該模型的重要指標(biāo)，抗焦慮劑通常會(huì)增加動(dòng)物OE%值與OT%值，而不影響總?cè)氡鄞螖?shù)與時(shí)間。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，地西泮組與腦功肽高劑量組對(duì)小鼠OE%值與OT%值均有顯著升高作用，而總?cè)氡鄞螖?shù)與時(shí)間無(wú)顯著性差異，說(shuō)明兩者均有抗焦慮作用。

在OFT試驗(yàn)中，大鼠進(jìn)入敞箱后因其對(duì)新異環(huán)境的恐懼而主要在敞箱內(nèi)靠周邊的區(qū)域活動(dòng)，而抗焦慮藥能明顯增加大鼠進(jìn)入敞箱中央?yún)^(qū)的次數(shù)及在中央?yún)^(qū)停留的時(shí)間［8］。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，地西泮能顯著增加大鼠中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間，顯示地西泮具有一定的抗焦慮作用，而高劑量與中劑量腦功肽對(duì)大鼠的中央?yún)^(qū)域活動(dòng)時(shí)間與路程均無(wú)影響，說(shuō)明在此模型下高劑量與中劑量腦動(dòng)肽未能顯示出抗焦慮作用。但大鼠OFT試驗(yàn)應(yīng)用于焦慮模型時(shí)間不長(zhǎng)，其穩(wěn)定性及可靠性有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

EPM試驗(yàn)與臨床觀察結(jié)果均顯示，腦功肽口服液有一定的抗焦慮作用，在進(jìn)一步的研究中，將考察腦功肽口服液對(duì)動(dòng)物腦組織中單胺類和氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)的影響［9-11］，以揭示其抗焦慮作用的具體機(jī)制。

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Experimental Study of Anxiolytic Effects of Naogongtai Oral Liquid

Lei Jian，Hu Changpeng，Xing Mao，Xiang Junma，Zhang Rong
（Department of Pharmacy，Xinqiao Hospital，Third Military Medical University，Chongqing，China 400037）

Objective To assess the anxiolytic effects of Naogongtai Oral Liquid through animal behavior experimental model.M ethods The elevated plus maze（EPM）test and open field test（OFT）were adopted；in EPM test the observation indicators were open arm entry%（OT%），open arm time%（OE%），total entry and total entry time，in OFT the observation indicators were total path，central area time，central area path.These indicators were observed in blank control group，diazepam group，Naogongtai high dose group and Naogongtai medium dose group.Results In EPM test，OT%and OE%were（51.23±17.47）%and（53.28±14.96）%respectively in diazepam group，and（38.67±15.23）%and（57.43±8.16）%respectively in Naogongtai high dose group，both of them were significantly higher than the blank control group（P＜0.05）.In OFT，the central area time was significantly increased in diazepam group（P＜0.05）.Conclusion The EPM test shows that Naogongtai Oral Liquid has anti-anxiety effect.

Naogongtai Oral Liquid；anxiety；elevated plus maze test；open field test

R285.5；R286

A

1006-4931（2015）18-0019-02

雷健，男，碩士研究生，主管藥師，主要研究方向?yàn)樗幬锓治雠c質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，（電話）023-68774770（電子信箱）fengxiao218@163.com；張蓉，碩士研究生，副主任藥師，研究方向?yàn)榕R床合理用藥與分析，本文通訊作者，（電話）023-68755580。

2014-09-16；

2015-03-15）

*重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)藥科技項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：ZY20132151。