乳糜血液對第四代HIV試劑檢測結(jié)果的影響及檢驗對策

李永珍 張志紅

【摘要】目的：探討脂肪血標本對第四代HIV酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測HIV抗原/抗體的影響及檢驗對策。方法： 收集正常標本、輕度、中度、重度乳糜樣本各20例，在不同程度的乳糜血漿中加入一定濃度的HIV陽性血清，按保存時間順序，從不同血漿位置取樣檢測，對檢測靈敏度和OD值進行比較。結(jié)果：不同程度的乳糜血液隨放置時間的延長，不同位置的檢測結(jié)果有明顯差異，輕度乳糜血液上層標本在立即檢測時，就與正常標本檢測結(jié)果有顯著差異（P<0.05），中、重度乳糜標本上層血液在立即檢測時，與正常標本有極顯著差異（P<0.01）；輕度乳糜血液中、下層標本在立即檢測和1d時，與正常標本檢測結(jié)果無差異，從第3d時，與正常標本檢測結(jié)果出現(xiàn)顯著差異（P<0.05）；中、重度乳糜標本中、下層血液在立即檢測時，與正常標本無明顯差異，從第1d起，分別出現(xiàn)顯著和極顯著差異。結(jié)論：乳糜標本的乳糜程度對ELISA法4代HIV試劑有明顯影響，檢測乳糜血液時，加樣應(yīng)避開乳糜層，盡量從血漿中下部分取樣，且輕度乳糜血液檢測時間不超過3 d，中度檢測時間不超過1d，重度的必須立即檢測。

【關(guān)鍵詞】乳糜；ELISA；HIV

【中圖分類號】R722.12 【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2015）03-0580-01

人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV），反轉(zhuǎn)錄病毒科，慢病毒屬（Lentivirus）。該病毒主要破壞人體的免疫能力，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)失去抵抗力，而導(dǎo)致各種疾病及癌癥并得以在人體內(nèi)生存，發(fā)展到最后，導(dǎo)致艾滋?。ǐ@得性免疫缺陷綜合癥），主要經(jīng)輸血，針刺，吸毒等傳播。因敏感、特異、操作簡便、重復(fù)性好等優(yōu)點，已在疾病診斷、科研等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中得到廣泛應(yīng)用[1]。ELISA方法檢測對標本的要求是：空腹抽血，標本不能乳糜。但是在血站日常工作中，無償獻血一般都在餐后進行，所以經(jīng)常會遇到乳糜的標本，為了了解乳糜標本對第四代國產(chǎn)HIV檢測試劑的影響，我們對新型HIV試劑進行了乳糜因素對試劑檢測結(jié)果影響的評估，并針對乳糜標本的特點，提出一種檢驗對策，現(xiàn)將結(jié)果報告如下：

1材料與方法

1.1 一般資料

臨床收集2012年1～12月我單位檢測的無償獻血者標本，以淡黃色透明血漿標準管進行清晰度比較，與標準管清晰度一致的稀釋倍數(shù)為該血漿的乳糜指數(shù)，乳糜指數(shù)≤2為輕度乳糜血液，3～5為中度乳糜血液，>5為重度乳糜血液[3-5]。收集正常標本、輕度、中度、重度乳糜樣本各20例，經(jīng)HIV檢測結(jié)果均為陰性。陽性血液為OD值約2.5的陽性樣本，經(jīng)WB法確認為陽性。

1.2 儀器與試劑 德國西門子公司BEPIII型全自動酶免分析儀；RSP全自動加樣儀；Tecan公司Sunrise酶標儀。北京萬泰HIV四代試劑，批號H201211048。

1.3 方法：

靈敏度及不精密度測定：分別向正常血液、輕度、中度乳糜血液和重度乳糜血液加入同樣濃度、同樣量的HIV強陽性血清，使血液的檢測結(jié)果在2-4倍Cutoff值之間，按立即、4℃靜置1d、3d、7d，分別進行檢測，每天1次。實驗由同一個操作人完成，嚴格按照試劑說明書進行操作，計算 、CV及靈敏度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行方差分析，比較脂血對丙肝試劑檢測OD值的影響。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

不同程度乳糜血液與放置時間的檢測結(jié)果比較見表1。

表1 不同程度的乳糜血液與放置時間的檢測結(jié)果比較

討論

乳糜血液，對于實驗室生化及免疫檢測，都有許多不利的影響[2，3]，故此，一般體檢均要求空腹采血，因空腹采血可有效避免乳糜血液的產(chǎn)生。但是，由于血站工作的特殊性，獻血者多數(shù)是在餐后捐獻血液，故乳糜血液標本在血站檢測標本中占有很大比例，并且，由于獻血者個人因素的影響，基本不可能重新采集標本進行檢測。為此，就要求血站檢驗部門，對乳糜血液對檢測結(jié)果的影響進行系統(tǒng)、全面的評估，只有這樣，才可以在兼顧血液檢測質(zhì)量的同時，最大程度的保護珍貴的血液資源。

乳糜對于酶免檢測結(jié)果的影響，主要有兩個方面：一方面，在反應(yīng)過程中，乳糜微?？尚纬扇槊訉?，覆蓋在與游離酶標記物與結(jié)合酶標記物之上干擾洗板，導(dǎo)致最后顯色反應(yīng)加強；另一方面，由于乳糜微粒體積大、比重輕，放置一段時間后會形成厚薄不等的乳糜上層，而儀器是從上至下根據(jù)液體高度加樣，當(dāng)乳糜層較高時，加入的乳糜血液量多，則血清加入量相對減少，同時乳糜微粒的大小對加樣也有影響，乳糜微粒大，加樣的液體體積就減少，且大小不一致，使測定結(jié)果偏低，誤差增大，CV偏大。

萬泰第四代HIV試劑的加樣量為100ul，在檢測過程中，乳糜標本對HIV試劑兩方面的影響可能都會有，但是從表1結(jié)果的顯示來看，第二方面的影響是主要的；并且與正常血液組比較，不同程度的乳糜血液上層標本，其檢測結(jié)果的平均OD值與放置時間成反比例關(guān)系，乳糜血液程度越嚴重，放置時間越長，OD值下降幅度越大；而乳糜血液中、下層標本，其檢測結(jié)果的OD值與放置時間的關(guān)系與上層標本相比，下降幅度較小。輕度乳糜血液上層標本在立即檢測時，就與正常標本檢測結(jié)果有顯著差異，中、重度乳糜標本上層血液在立即檢測時，與正常標本有極顯著差異；輕度乳糜血液中、下層標本在立即檢測和1d時，與正常標本檢測結(jié)果無差異，從第3d時，與正常標本檢測結(jié)果出現(xiàn)顯著差異；中、重度乳糜標本中、下層血液在立即檢測時，與正常標本無明顯差異，從第1d起，分別出現(xiàn)顯著和極顯著差異。

通過以上實驗，乳糜標本對第四代HIV-Elisa試劑的檢測結(jié)果仍然有很大的影響。要控制乳糜標本的影響，首先，要在獻血招募時加大宣傳力度，宣傳乳糜血液對輸血的影響，讓更多的人知道獻血前應(yīng)合理飲食，并且在體檢醫(yī)師對獻血者的問診中增加飲食內(nèi)容，對有明顯高脂肪飲食者進行適當(dāng)?shù)膭褡杌蚋募s。其次，在實驗室檢測環(huán)節(jié)，從標本接收步驟起，就應(yīng)加強標本核查，對乳糜標本進行特殊標記，并對乳糜程度進行檢查，輕度乳糜血液放置時間不超過3d，中度乳糜血液不應(yīng)超過1 d，重度乳糜血液應(yīng)立即檢測。第三，針對乳糜標本CV值較大的特點，對乳糜標本的檢測結(jié)果應(yīng)采用較大的灰區(qū)范圍，這樣可有效提高乳糜血液的陽性檢出率，防止重度乳糜血液的漏檢，確保輸血安全。

參考文獻

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