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    雷公藤涂膜劑的制備及其體外透皮試驗(yàn)

    2015-10-18 05:58:19徐曉勇馬鳳森
    中成藥 2015年3期
    關(guān)鍵詞:透皮去甲成膜

    周 密, 徐曉勇, 馬鳳森,*, 梁 宜

    (1.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院,浙江 杭州 310014;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院,浙江 杭州 310009)

    雷公藤涂膜劑的制備及其體外透皮試驗(yàn)

    周 密1, 徐曉勇1, 馬鳳森1,2*, 梁 宜2

    (1.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院,浙江杭州310014;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院,浙江杭州310009)

    目的 對(duì)雷公藤涂膜劑進(jìn)行處方工藝篩選及體外透皮性能研究。方法 采用正交試驗(yàn)篩選優(yōu)化處方,并對(duì)涂膜劑的制劑流動(dòng)性,成膜時(shí)間,外觀質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià);以去甲澤拉木醛為指標(biāo),采用Franz擴(kuò)散池考察其透皮吸收行為。結(jié)果 雷公藤涂膜劑的最佳處方為1.5%雷公藤浸膏粉,5%聚乙烯醇(PVA)-124,4%丙二醇,30%無水乙醇。12 h透皮試驗(yàn)平均累積透過率為73.09%,平均累積透過量為55.19μg/cm2。結(jié)論 所制備的雷公藤涂膜劑的成膜時(shí)間短且成膜質(zhì)量好,滲透穩(wěn)定持久,釋放率高。

    雷公藤;去甲澤拉木醛;涂膜劑;體外透皮

    雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.有祛風(fēng)活絡(luò)、破淤止痛等功效,臨床常用于風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的治療[1]。其中二萜類、三萜類為其主要活性成分[2]。二萜類成分中的雷公藤甲素是雷公藤治療風(fēng)濕性和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的主要有效成分,但也是雷公藤引起毒副作用的主要成分[3]。去甲澤拉木醛(demethylzeylasteral,DMZ)在三萜中含有量最高,具有一定的免疫抑制作用和抗炎作用,且毒性顯著低于甲素[4]。目前已上市的雷公藤制劑主要有雷公藤多苷片、雷公藤片、雷公藤雙層片和雷公藤總萜片等[5],均為口服給藥劑型。雷公藤經(jīng)皮給藥制劑具有安全性高、順應(yīng)性好的特點(diǎn),可以滿足臨床選擇需要,有較好的研究前景。

    涂膜劑是藥物與成膜材料制成的供外用涂抹,能形成薄膜的局部液體制劑[6]。涂膜劑不僅制備工藝簡單,且使用后在用藥部位形成藥膜可保護(hù)創(chuàng)面,具有使用舒適和刺激性小等優(yōu)點(diǎn),同時(shí)膜的形成減少了皮膚表面水分的蒸發(fā),促進(jìn)了水合作用和溶解角質(zhì)作用,使藥物透過角質(zhì)逐漸釋放藥物,延長藥效維持時(shí)間[7],是一種很有發(fā)展前途的劑型。

    1 儀器與材料

    Waters(515-717-486)高效液相色譜儀(美國Waters公司);RYJ-12B型藥物透皮試驗(yàn)儀(上海黃海藥檢儀器有限公司);雷公藤浸膏粉(自制,批號(hào)為20130502,含DMZ 69.89 mg/g);聚乙烯醇(PVA)-124(日本可樂麗);DMZ純品(南通飛宇生物技術(shù)有限公司,批號(hào)為FY18540803,純度為99.35%);高效液相所用試劑為色譜純,其他試劑為分析純。ICR小鼠(浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院,SCXK(浙)-20140001)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1涂膜劑基質(zhì)的制備 按處方量稱取PVA-124,蒸餾水配成10%濃度,密封,冷水浸潤12 h,水浴80℃溶脹2 h后,取出放涼備用[8]。在攪拌下向PVA-124溶液加入處方量丙二醇溶液。緩慢加入處方量乙醇,攪拌使之分散均勻。最后加純化水至足量[9],稀NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9,得黏稠狀涂膜劑基質(zhì)。

    2.2涂膜劑基質(zhì)質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo) 以基質(zhì)的流動(dòng)性、成膜質(zhì)量、外觀和成膜時(shí)間[10-11]作為指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。涂膜劑制備時(shí)攪動(dòng)順暢,基質(zhì)細(xì)膩,色澤一致,分散均勻,使用時(shí)薄膜完整、有韌性為6分;攪動(dòng)較順暢,使用時(shí)薄膜連續(xù)為4分;攪動(dòng)困難,基質(zhì)有微量沉淀,使用時(shí)薄膜有破裂為2分。成膜時(shí)間:取涂膜劑1 mL均勻涂于皮膚上,每30 s考察1次,觀察并記錄成膜時(shí)間。綜合上述評(píng)價(jià)指標(biāo)以總分確定最終基質(zhì)處方(表1)[12]。

    表1 涂膜劑基質(zhì)質(zhì)量評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Tab.1 Criteria for matrix of pellicle

    2.3正交試驗(yàn)優(yōu)化基質(zhì)處方及其結(jié)果 經(jīng)過預(yù)實(shí)驗(yàn),處方中PVA-124體積分?jǐn)?shù)(A),丙二醇體積分?jǐn)?shù)(B)和乙醇體積分?jǐn)?shù)(C)三個(gè)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響較大,本實(shí)驗(yàn)選擇L9(34)正交表優(yōu)化涂膜劑基質(zhì)處方,觀察試驗(yàn)樣品并取等量涂布于受試者的手背皮膚,采用“2.2”項(xiàng)下涂膜劑質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)其質(zhì)量,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2[12],方差分析見表3。

    表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果(n=3)Tab.2 Results of L9(34)orthogonal test(n=3)

    表3 方差分析Tab.3 Variance analysis

    根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析,以綜合評(píng)分為指標(biāo),實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示因素影響的大小為A>B>C,其中因素A、B具有顯著影響(P<0.05);最佳工藝組合為A2B1C1。由于在正交水平范圍內(nèi)乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)涂膜劑制備沒有顯著影響,且發(fā)現(xiàn)乙醇的體積分?jǐn)?shù)與載藥量成正相關(guān),為了增大涂膜劑的載藥量,并保證涂膜劑的質(zhì)量,本實(shí)驗(yàn)選用A2B1C2組合。

    2.4雷公藤涂膜劑的制備 稱取適量的雷公藤浸膏粉溶于處方量的無水乙醇中。按“2.1”項(xiàng)制備方法,在正交試驗(yàn)優(yōu)選的基質(zhì)處方基礎(chǔ)上制備雷公藤涂膜劑。

    2.5涂膜劑中去甲澤拉木醛的測(cè)定 稱取雷公藤涂膜劑0.5 g,置于錐形瓶中,使充分涂展,加入3 mL甲醇,震蕩并超聲處理5 min。多次提取至甲醇溶液無色澄清,涂膜劑殘留固體呈白色。提取液合并,定容至25 mL,過濾,按“3.1.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定去甲澤拉木醛的量。

    2.6雷公藤涂膜劑的載藥量研究 制備含雷公藤浸膏粉(10、15、20、25 mg/mL)的涂膜劑,按“2.2”項(xiàng)下評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),優(yōu)選雷公藤涂膜劑的載藥量。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示含雷公藤浸膏粉15 mg/mL的雷公藤涂膜劑呈褐色稠狀溶液,體系分散均勻。平行制備3組進(jìn)行評(píng)價(jià),觀察其外觀、流動(dòng)性,結(jié)果顯示其成膜時(shí)間1 min以內(nèi),成膜完整連續(xù),涂布容易,均勻無沉淀??偡?2分,滿足質(zhì)量要求。

    按“2.5”項(xiàng)下測(cè)定雷公藤涂膜劑中去甲澤拉木醛的的最大載藥量為(1.152±0.007)mg/g。

    優(yōu)化后的處方工藝為稱取2.5 g PVA-124,蒸餾水配成10%濃度,密封,冷水浸潤12 h,水浴80℃溶脹2 h后,取出放涼備用。在攪拌下向PVA-124溶液加入2mL丙二醇溶液。緩慢加入15mL無水乙醇溶液(含0.75 g雷公藤浸膏粉),攪拌使之分散均勻。最后加純化水至足量,稀NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至9,得稠狀雷公藤涂膜劑溶液。

    3 雷公藤涂膜劑的透皮實(shí)驗(yàn)研究

    3.1去甲澤拉木醛在接受液中的分析方法學(xué)研究結(jié)合參考文獻(xiàn)[13]與課題組預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果建立HPLC法測(cè)定去甲澤拉木醛在接受液中的含量分析方法學(xué)。

    3.1.1溶液的制備

    3.1.1.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取去甲澤拉木醛對(duì)照品1.77 mg,加甲醇制成含去甲澤拉木醛28.32μg/mL的溶液,即得。

    3.1.1.2供試品溶液的制備 取透皮接受液5 mL,過0.45μm濾膜,即得。

    3.1.2接受液中去甲澤拉木醛的色譜條件 Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液(55∶45);檢測(cè)波長245 nm;柱溫室溫;體積流量1.000 mL/min。

    3.1.3專屬性 取去甲澤拉木醛對(duì)照品,空白接收液及含藥接受液進(jìn)高效液相色譜,結(jié)果顯示去甲澤拉木醛的分離度大于1.5,理論塔板數(shù)大于10 000。對(duì)照品、空白接受液和含藥接受液色譜圖見圖1。

    圖1 去甲澤拉木醛對(duì)照品(A)、空白接受液(B)和含雷公藤接受液(C)的HPLC圖Fig.1 HPLC fingerprints of standard reference of DMZ(A),blank solution(B),and test solution w ith TWH(C)

    3.1.4線性關(guān)系 精密稱取去甲澤拉木醛對(duì)照品,用接受液(PEG-400-無水乙醇-生理鹽水為1∶4∶5)[14]溶解并搖勻,得到28.32μg/mL的對(duì)照品接受液溶液。分別將不同體積的去甲澤拉木醛對(duì)照品接受液溶液進(jìn)樣,在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。以進(jìn)入液相色譜儀的對(duì)照品質(zhì)量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)作圖,得回歸方程為Y=1.22×106X-26 636,r=0.999 9。線性范圍為0.028 4~2.84μg。

    3.1.5回收率試驗(yàn) 精密吸取6份等量透皮實(shí)驗(yàn)透過液(含去甲澤拉木醛0.86μg),每份加入含去甲澤拉木醛1.09μg的對(duì)照品溶液,混合均勻。HPLC法分別進(jìn)樣,測(cè)定并計(jì)算,去甲澤拉木醛在上述接受液中的平均回收率為99.8%,RSD為1.6%。

    3.2雷公藤涂膜劑體外透皮性能研究

    3.2.1離體鼠皮制備 取6只健康雄性小鼠(20± 2)g,用7%硫化鈉溶液(含5%甘油)活體脫去其背部毛發(fā)后用生理鹽水洗凈皮膚,擦干后飼養(yǎng)12 h。處死后剝離背部皮膚,剔除皮下脂肪和黏連物,用生理鹽水洗凈,使用前檢查皮膚有無破損[15]。

    3.2.2體外透皮試驗(yàn) 體外透皮試驗(yàn)采用改良的Franz擴(kuò)散池,上室為擴(kuò)散室,下室為接收室,接收室的容積為7 mL,有效擴(kuò)散面積為2.3 cm2,(37.0±1.0)℃恒溫水浴加熱,并以600 r/min磁力恒速攪拌。試驗(yàn)時(shí),在接收室內(nèi)加滿接受液,將鼠皮固定在兩室之間,角質(zhì)層朝上,使真皮層與接受液充分接觸,排除氣泡,由于涂膜劑使用的成薄膜的特殊性,所以雷公藤涂膜劑的加樣量為0.15 mL(含去甲澤拉木醛173μg)均勻涂布于皮膚上。分別于時(shí)間點(diǎn)2、4、6、8、10、12、24 h取5 mL接受液,并同時(shí)補(bǔ)加同樣體積的同溫新鮮接受液。接受液30 s內(nèi)用0.45μm濾膜過濾,用HPLC測(cè)定去甲澤拉木醛的含量并計(jì)算累積滲透量Qn與累積透過率P。

    累積滲透量Qn的計(jì)算公式為:

    累積透過率P=[累積滲透量Qn/(雷公藤涂膜劑中去甲澤拉木醛質(zhì)量濃度×加樣量))]100%

    Qn為第n個(gè)取樣點(diǎn)的累積滲透量(μg),Cn、Ci為第n個(gè)和第i(i≤n-1)個(gè)取樣點(diǎn)的去甲澤拉木醛質(zhì)量濃度(μg/mL),V0為接受液的體積(mL),V為取樣的體積(mL)。V0=7 mL,V=5 mL。結(jié)果見表4和圖2。

    透皮實(shí)驗(yàn)表明在10 h內(nèi)涂膜劑呈零級(jí)釋放,釋放曲線為Qn=13.42t-18.84,r=0.995 5。滯后時(shí)間為1.4 h,滲透速率為4.86μg/h·cm2,累積透過率達(dá)64.32%。10 h之后去甲澤拉木醛的滲透速率逐漸下降,在24 h內(nèi)去甲澤拉木醛釋放曲線符合Higuchi方程(Qn=43.70t1/2-42.60,r= 0.910 6),累積透過率達(dá)86.49%。

    表4 透皮試驗(yàn)結(jié)果(±s,n=3)Tab.4 Results of in vitro transdermal experiment(±s,n=3)

    表4 透皮試驗(yàn)結(jié)果(±s,n=3)Tab.4 Results of in vitro transdermal experiment(±s,n=3)

    t/h Qn平均/μg平均累積透過率/% 2 5.79±1.24 3.33 4 34.78±8.40 20.02 6 64.92±10.70 37.38 8 90.85±11.08 52.31 10 111.89±11.17 64.43 12 126.93±9.78 73.08 24 154.21±9.20 86.49

    圖2 雷公藤涂膜劑透皮累積滲透曲線(n=3)Fig.2 Transdermal cumulative distribution of Trigetrygium Wilfordii Hook.f extract pellicle(n=3)

    4 討論

    本實(shí)驗(yàn)制備的涂膜劑以雷公藤浸膏粉為主藥,去甲澤拉木醛為指標(biāo)物質(zhì),通過正交試驗(yàn)對(duì)雷公藤涂膜劑的基質(zhì)進(jìn)行篩選,并建立涂膜劑質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),得到最優(yōu)處方工藝,制得質(zhì)量較好的涂膜劑,同時(shí)對(duì)雷公藤涂膜劑進(jìn)行了初步的透皮實(shí)驗(yàn)研究。

    PVA-124作為涂膜劑常用的成膜材料,具有極強(qiáng)的親水性與較好的生物相容性,能形成柔韌連續(xù)的薄膜;丙二醇作為增塑劑可使膜的柔成膜性能和抗拉強(qiáng)度增加,同時(shí)具有透皮促滲作用;乙醇為涂膜劑的重要成分,作用之一是溶解浸膏粉使之均勻分散在涂膜劑中,乙醇的量決定了涂膜劑的載藥量,但過量的乙醇會(huì)使PVA-124析出,另一方面作用是涂膜劑涂布于皮膚之后,乙醇的揮發(fā)使膜迅速生成。在試驗(yàn)過程中必須注意的是將含雷公藤浸膏粉的乙醇溶液加入基質(zhì)時(shí),需不斷攪拌至混合均勻,防止PVA析出[12]。

    為了科學(xué)客觀地評(píng)價(jià)涂膜劑的質(zhì)量,需要建立更為完善與客觀的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。涂膜劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)均采用直觀評(píng)價(jià),以涂膜劑外觀、流動(dòng)性、成膜時(shí)間與成膜質(zhì)量為指標(biāo)。涂膜劑外觀用于考察涂膜劑的均勻程度,流動(dòng)性為涂膜劑使用時(shí)的涂布性能,成膜時(shí)間評(píng)價(jià)涂布后成膜的時(shí)間,反映了患者使用的順應(yīng)性,成膜質(zhì)量為藥膜涂布于皮膚后觀察成膜完整性、均勻度、有無氣泡及膜的柔韌性等。

    透皮實(shí)驗(yàn)研究時(shí),發(fā)現(xiàn)去甲澤拉木醛在堿性環(huán)境下有更好的滲透性能。通過對(duì)涂膜劑進(jìn)行初步透皮性能研究,結(jié)果顯示10 h內(nèi)藥物呈零級(jí)釋放。24 h的滲透曲線符合Higuchi方程,表明去甲澤拉木醛從涂膜劑中釋放到被皮膚吸收的滲透曲線趨近于穩(wěn)態(tài)。雷公藤涂膜劑的24 h的透過率達(dá)86.49%,綜上所述,雷公藤涂膜劑的滲透穩(wěn)定持久、釋放率高,值得作為一種有臨床應(yīng)用價(jià)值的新劑型而繼續(xù)深入研究。

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    Preparation and in vitro transdermal behavior of Tripterygium Wilfordii Hook.f extract pellicle

    ZHOU Mi1, XU Xiao-yong1, MA Feng-sen1,2*, LIANG Yi2
    (1.School of Pharmacy,Zhejiang Uniυersity of Technology,Hangzhou 310014,China;2.The Third Hospital Affiliated to Zhejiang Chinese Medical Uniυersity,Hangzhou 310009,China)

    Tripterygium Wifordii Hook.f(TWH);demethylzeylasteral;pellicle;inυitro skin permeation

    R944

    A

    1001-1528(2015)03-0526-04

    10.3969/j.issn.1001-1528.2015.03.014

    2014-05-12

    浙江省重大科技專項(xiàng)重點(diǎn)社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目(2010C13014),浙江省“重中之重”學(xué)科(針灸推拿學(xué))開放基金項(xiàng)目(ZTK2010A13)

    周 密(1991—),女,從事藥物制劑新技術(shù)研究。Tel:15068856908,E-mail:zhoumi0930@126.com

    馬鳳森(1962—),男,教授,從事藥物新劑型研究。Tel:(0571)88871500,E-mail:merrigen@126.com

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