自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對腦出血患者神經(jīng)功能及血漿Hcy的影響

王萬宏，王亞林，盧慶韜

（1.唐山市豐南區(qū)醫(yī)院 神經(jīng)外科；2.唐山鐵路中心醫(yī)院 外科，河北 唐山063300）

腦出血是臨床神經(jīng)科常見危急重癥，而且發(fā)病率、致死率、致殘率都非常高，腦出血發(fā)作時，輕者會存留后遺癥，病情嚴(yán)重會使患者喪命［1］。腦出血通常在冬春季節(jié)，患者活動或情緒激動時易發(fā)生，大部分患者在發(fā)病時都有劇烈頭痛和嘔吐癥狀，出現(xiàn)上述癥狀時，應(yīng)及早采取預(yù)防措施，防止出現(xiàn)神經(jīng)功能嚴(yán)重?fù)p害等并發(fā)癥［2，3］。隨著醫(yī)療水平進(jìn)步，腦出血的死亡率逐漸下降趨勢，但發(fā)病后的后遺癥嚴(yán)重影響患者的生活，探尋防治腦出血后遺癥仍是當(dāng)前研究的熱點。為了更好地探究自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）移植對腦出血患者神經(jīng)功能及血漿Hcy的影響［4，5］，本研究選取我院近兩年腦出血患者90例，將資料收集后加以分析，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年9月－2013年9月我院收治的腦出血患者90例為研究對象，分為對照組和實驗組，每組45例。對照組：男30例，女15例；年齡38歲－68歲，平均年齡為（57.1±5.9）歲，出血量10.6－69.5ml，平均（37.1±15.9）ml。實驗組：男29例，女16例，年齡39歲－69歲，平均（56.1±6.7）歲，出血量9.6－70.5ml，平均（39.1±14.9）。兩組患者在性別、年齡、出血量等方面差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 常規(guī)干預(yù)

根據(jù)對照組患者情況選取保守或手術(shù)干預(yù)，首先用甘露醇等脫水藥物降低顱內(nèi)壓，然后給予降壓藥控制血壓平穩(wěn)，促進(jìn)腦細(xì)胞代謝和預(yù)防感染，防止出現(xiàn)神經(jīng)功能損傷障礙并發(fā)癥；對于符合手術(shù)指征患者，立即做好術(shù)前準(zhǔn)備，行微創(chuàng)鉆孔引流手術(shù)。

1.3 MSCs移植

1.3.1 骨髓采集 在百層級手術(shù)室，局部麻醉下行骨髓穿刺術(shù)，以30號骨髓穿刺針于髂后上棘進(jìn)行穿刺，20ml干燥無菌注射器抽取120－180ml骨髓，轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)液中，立即轉(zhuǎn)移至細(xì)胞培養(yǎng)室。術(shù)中密切觀察患者狀況，必要時停止手術(shù)。術(shù)后送患者入重癥監(jiān)護(hù)室［6］。

1.3.2 MSCs的分離與培養(yǎng) 采集抗凝骨髓120－180ml；采血袋壁及輸液管消毒后，將試劑A、B加至骨髓液靜置；吸取上層液至離心管，離心10min棄上清，將適量C液加入離心管，制成細(xì)胞懸液后離心；將細(xì)胞層移至另一離心管，加入適量A液，離心5min后棄上清，離心5min；吸取少量細(xì)胞懸液于計數(shù)板，顯微鏡下計數(shù)。將密度為1.0×107/ml細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶，置細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)4d，棄懸浮死細(xì)胞，加細(xì)胞培養(yǎng)液；每3d換液1次，細(xì)胞生長融合滿意后加消化液，置培養(yǎng)箱消化1min后取出，觀察細(xì)胞，加入中和胰蛋白酶以防過度消化。完全培養(yǎng)液反復(fù)吹打，離心棄上清，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為5×105/ml，移至培養(yǎng)瓶中，5－7d后傳代，制成單細(xì)胞懸液。

1.3.3 MSCs的移植 患者躺于平板床上，同骨髓穿刺體位。選擇3－4腰椎棘突間隙，消毒、鋪巾，以2%利多卡因局部浸潤麻醉至椎間韌帶，穿刺針以垂直背部方向刺入約5 cm，針尖抵抗感消失后緩慢拔出針芯，見腦脊液流出為穿刺成功，將MSCs細(xì)胞懸液5ml緩慢注入蛛網(wǎng)膜下腔，插回針芯后拔穿刺針，覆蓋、固定后去枕平臥6h。

1.4 觀察指標(biāo)

采用神經(jīng)功能缺損程度（NIHSS）和日常生活能力評分（Barthel）分別評價患者的生活能力和神經(jīng)功能。血漿Hcy檢測：采血前禁食12h，次日早晨采靜脈血，采用美國貝克曼公司CX4型全自動分析儀檢測各組患者血漿Hcy水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)均為計量資料，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者Barthel和NIHSS評分比較

實驗組患者Barthel值（53.70±9.10）明顯高于對照組（39.78±9.20）；NIHSS值明顯低于對照組；差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者Barthel和NIHSS評分比較（±s，n＝45）

表1 兩組患者Barthel和NIHSS評分比較（±s，n＝45）

注：與對照組比較 ，＊P0.05

Barthel NIHSS組別 n 干預(yù)前 干預(yù)后實驗組 45 28.84±8.25 53.70±9.10＊ 23.84±5.25 17.70±1.10干預(yù)前 干預(yù)后＊對照組 45 29.85±8.24 39.78±9.20 23.85±5.24 22.78±1.02

2.2 自體MSCs移植對腦出血患者血漿Hcy的影響

對照組患者血漿Hcy干預(yù)后1－7d稍有降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；實驗組患者干預(yù)后4、7d血漿 Hcy明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 自體MSCs移植對腦出血患者血漿Hcy的影響（n＝45，μmol/L）

3 討論

近幾年來，隨著人們生活水平的提高，高血壓病患者越來越多，其最嚴(yán)重的并發(fā)癥就是腦出血。腦出血又被稱為腦溢血，非外傷性腦實質(zhì)內(nèi)的自發(fā)性出血，主要由于血壓升高，小動脈硬化血管破裂引起［7］。腦出血后形成的血腫易壓迫周圍腦組織，腦組織缺血缺氧，患者出現(xiàn)呼吸困難等癥狀，嚴(yán)重威脅患者的生命。腦出血后大多數(shù)患者都有不同程度的神經(jīng)功能損傷，如失語、身體失去平衡、大小便障礙等［8］。

根據(jù)近年的臨床研究，MSCs移植通過降低腦出血患者血清S100β、GFAP水平，促進(jìn)腦出血患者神經(jīng)細(xì)胞損傷的修復(fù)［9］。大多數(shù)的腦出血患者都存在腦組織和神經(jīng)功能損傷，對于出血患者修復(fù)腦組織是促進(jìn)患者恢復(fù)正常生活最重要的一步。通過MSCs移植，能夠提高患者動脈血氧分壓，血氧的彌散范圍加大，促使缺血區(qū)損傷細(xì)胞功能逐漸恢復(fù)；腦血管收縮，腦內(nèi)血流量減少，改善了腦水腫和腦缺氧癥狀，顱內(nèi)壓降低，患者頭痛嘔吐癥狀緩解；骨髓間充質(zhì)一些非造血干細(xì)胞，也能有效促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。通過自體移植，避免出現(xiàn)免疫排斥反應(yīng)，而且取材方便，腦組織缺氧狀態(tài)改善，損傷神經(jīng)功能明顯恢復(fù)［10］。本研究結(jié)果顯示：①實驗組患者的Barthel值明顯高于對照組，神經(jīng)功能缺損程度（NIHSS）（17.70±4.10）明顯低于對照組。②對照組患者血漿Hcy干預(yù)后1－7d稍有降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組患者干預(yù)后4、7d血漿Hcy明顯低于對照組。提示MSCs移植能改善神經(jīng)功能，可能與其降低腦出血患者血漿Hcy水平有關(guān)，機(jī)制可能為：MSCs通過降低血漿Hcy水平，減少氧自由基生成，發(fā)揮對小血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用；削弱了低密度脂蛋白的氧化，減少泡沫細(xì)胞的產(chǎn)生，從而發(fā)揮一定的神經(jīng)保護(hù)作用。

綜上所述，對于腦出血患者，采用MSCs移植，患者的神經(jīng)功能逐漸恢復(fù)，自理生活能力明顯提高，但其與血漿Hcy的關(guān)系仍需進(jìn)一步深入研究。

［1］祝春燕，周 濤.辛伐他汀對腦出血患者神經(jīng)功能恢復(fù)的作用［J］.腦與神經(jīng)疾病雜志，，2014，22（1）：54.

［2］越麗霞，鄺又新，李作凌.自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療顱腦創(chuàng)傷后神經(jīng)功能障礙的護(hù)理［J］.中國實用神經(jīng)疾病雜志，2014，17（20）：125.

［3］胡澤斌，王立生，崔春萍，等.干細(xì)胞臨床應(yīng)用安全性評估報告［J］.中國醫(yī)藥生物技術(shù)，2013，8（5）：349.

［4］肖以磊，朱建新，李忠民，等.兩種不同途徑移植自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療早期脊髓損傷療效觀察［J］.中國醫(yī)師進(jìn)修雜志，2012，35（14）：24.

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［8］Fukunaga A，Uchida K，Hare K，et al.Whether autologous bone marrow mesenchymal stem cell transplantation is safe，feasible，and effective to the treatment of intracerebral hemorrhage：A 32－case analysis［J］.Joumal of Clinical Rehabilitative Tissue Engmeedng Research，2010，14（6）：1097.

［9］王萬宏，王亞林，盧慶韜.自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對腦出血患者血清S100β、GFAP的影響［J］.中國實驗診斷學(xué)雜志，2014，18（12）：2011.