香芍膠囊揮發(fā)油中桉油精的HPLC含量測(cè)定方法研究

張林　朱麗萍　張愛(ài)軍

[摘要] 目的 建立桉油精的HPLC測(cè)定方法。 方法 以桉油精為對(duì)照品，采用Dikma Diamonsil C18（2）（250nm×4.6nm，5?m）色譜柱；流動(dòng)相為水-乙腈（53∶47）；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min。 結(jié)果 香芍膠囊揮發(fā)油中桉油精得到良好的分離，桉油精在1.319～39.570?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為103.60%。 結(jié)論 本法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，為HPLC評(píng)價(jià)香芍膠囊揮發(fā)油質(zhì)量提供了可靠的分析方法。

[關(guān)鍵詞] HPLC；桉油精；揮發(fā)油；香芍膠囊

[中圖分類號(hào)] R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2015）15-45-03

[Abstract] Objective To establish a HPLC determination of eucalyptol in the volatile oils of xiangshao capsule. Methods The separation was performed on the Dikma Diamonsil C18（2） （250nm×4.6nm， 5?m） with water-acetonitrile （53∶47） as the mobile phase. The detection wavelength was at 203nm， and the flow rate was 1.0mL/min. The column temperature was 30℃. Results The eucalyptol in the volatile oils of Xiangshao capsule were well separated. The linear response of eucalyptol ranged from 1.319?g to 39.570?g. The recovery was 103.60% for eucalyptol. Conclution This method is simple， accurate and reproducible， which can be used for the quality control of the volatile oils in Xiangshao capsule.

[Key words] HPLC； Eucalyptol； Volatile oils； Xiangshao capsule

香芍膠囊方中的川芎、香附、豆蔻等6味藥含有藥用揮發(fā)油，其中豆蔻揮發(fā)油含桉油精且豆蔻用量較大。桉油精作為處方中揮發(fā)油的有效成分，提取中對(duì)桉油精的合理控制，在一定程度上間接控制了揮發(fā)油的質(zhì)量。但桉油精屬于小分子揮發(fā)性化合物，有關(guān)桉油精的含量測(cè)定大多采用GC法，但色譜條件差異較大[1-12]。HPLC有更好的普適性[13]，HPLC法也應(yīng)用于多種揮發(fā)性成分的含量測(cè)定[14-15]。故擬建立HPLC法測(cè)定桉油精含量，為控制香芍膠囊揮發(fā)油質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與材料

AUW200D分析天平（日本島津SHIMADZU），高效液相色譜分析儀（Agilent 1200 series），桉油精對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，110788-201105，99.9%），所用藥材由揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)四川海蓉藥業(yè)有限公司提供并鑒定，均符合藥典規(guī)定；除乙腈為色譜純，其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 揮發(fā)油的提取

取處方中6味含有藥用揮發(fā)油藥材，加5倍于藥材量的水，揮發(fā)油提取器加熱回流提取5h，靜置1h，取油層，即得。

2.2 含量測(cè)定方法

2.2.1 溶液配制 對(duì)照品溶液制備：取桉油精標(biāo)準(zhǔn)品約5mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，即得。供試品溶液的制備：取揮發(fā)油約10mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，加乙腈至刻度，搖勻，微孔濾膜過(guò)濾（0.45?m），取續(xù)濾液，即得。陰性溶液制備：處方中缺豆蔻藥材，其余藥材量不變，按2.1項(xiàng)下方法提取揮發(fā)油，按供試品溶液制備方法制成陰性溶液，即得。

2.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性研究 色譜柱：Diamonsil C18（2）（250nm×4.6nm，5?m）；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；流動(dòng)相：水-乙腈（53：47）；柱溫：30℃；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：10?L。在此色譜條件下，供試品圖譜中干擾峰對(duì)桉油精峰無(wú)干擾，并與桉油精峰達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)大于20000，峰型尖銳，基線平穩(wěn)。色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取桉油精對(duì)照品適量，加乙腈制成0.6595 mg/mL溶液，分別吸取1、3、5、7、10、15、20、25、30?L，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以桉油精進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=118.48X+4.0292，r=0.9999，表明進(jìn)樣量在1.319～39.570?g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取10?L對(duì)照品溶液，重復(fù)測(cè)定6次，以桉油精峰面積計(jì)算，RSD為0.35%，表明儀器精密度好。

2.2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12、24h進(jìn)樣，每次10?L，同法測(cè)定，以桉油精峰面積計(jì)算，RSD為0.48%，結(jié)果表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批揮發(fā)油，按2.2.1項(xiàng)下制備6份供試品溶液，分別測(cè)定，每次10?L，測(cè)定含量RSD為1.27%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱取已知含量的揮發(fā)油6份，每份約5mg，精密稱定，置10mL容量瓶中，分別精密加入含桉油精約8.313mg/mL的對(duì)照品溶液1mL，按2.2.1項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備，即得。按2.2.2項(xiàng)下方法測(cè)定含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果桉油精的平均加樣回收率（n=6）為103.60%，RSD為1.11%。endprint

2.3 樣品測(cè)定

按2.1項(xiàng)下方法提取3批揮發(fā)油。每批測(cè)定2份。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

本實(shí)驗(yàn)考察了在相同色譜條件下，不同色譜柱的分離效果?？疾炝藀henomenex luna C18（2）（150mm×4.6mm，5?m），Dikma Diamonsil C18（2）（250mm×4.6mm，5?m），luna色譜柱不能分離，Diamonsil色譜柱分離效果好，柱長(zhǎng)對(duì)其影響較大。

3.2 洗脫條件的選擇

同時(shí)使用供試品和陰性供試品，以保證即能達(dá)到分離效果，又能確保陰性無(wú)干擾，考察了乙腈-水（70∶30）；乙腈-水（64∶36）；乙腈-水（60∶40）；乙腈-水（48∶52）；乙腈-水（47∶53）；乙腈-水（46∶54）；乙腈-水（45∶55）；乙腈-水（40∶60）；乙腈-水（25∶75），結(jié)果顯示乙腈-水（47∶53）能夠基線分離，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便可行。

3.3 波長(zhǎng)選擇

采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)桉油精標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行200～800nm掃描，桉油精為末端吸收，200～350nm有一定紫外吸收，350nm后幾乎無(wú)吸收，且在吸收區(qū)間內(nèi)為波長(zhǎng)與吸光度的單調(diào)遞減函數(shù)。文獻(xiàn)在建立桉油精HPLC分析時(shí)使用203nm下分析，干擾小，結(jié)果可行[13，16]。本研究參考文獻(xiàn)值203nm，桉油精分離效果好，干擾小。

3.4 氣相色譜法

按中國(guó)藥典2010版豆蔻項(xiàng)下含量測(cè)定法[17]對(duì)20140804、20140805、20140806批揮發(fā)油測(cè)定，桉油精平均含量645.76mg/mL，RSD為1.07%。故認(rèn)為本研究中HPLC法可以代替氣相色譜控制揮發(fā)油質(zhì)量。

本研究品種具有平肝理氣、除脹止痛、疏肝和胃之功效，用于治療婦女經(jīng)期綜合征。方中揮發(fā)油是該品種發(fā)揮藥效的重要組成部分，本實(shí)驗(yàn)建立揮發(fā)油質(zhì)量控制方法，是成品質(zhì)量得到保證的依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張志蘭，包金榮，劉衛(wèi)東.氣相色譜法測(cè)定蒙藥白豆蔻中桉油精的含量[J].中國(guó)民族醫(yī)藥雜志，2013，9（1）：38-39

[2] 任世禾，朱劍平，許偉英.氣相色譜法測(cè)定安神香袋中桉油精的含量[J].中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析，2010，10（6）：530-531.

[3] 姜平川，李嘉，陳鋒.復(fù)方千黃凝膠的鑒別及芳樟醇和桉油精的含量測(cè)定[J].藥物分析雜志，2010，30（6）：987-990.

[4] 劉元媛，于世海，胡佳.氣相色譜測(cè)定十滴水中樟腦和桉油精方法的改進(jìn)[J].遼寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，35（5）：5-6.

[5] 王希，陳優(yōu)生.軟膏中桉油精和α-蒎烯的含量測(cè)定[J].安徽醫(yī)藥，2014，18（7）：1233-1236.

[6] 馮義廷.GC法測(cè)定暖宮七味散中桉油精的含量[J].河南中醫(yī)，2009，29（7）：708-709.

[7] 鄧祖磊，馬洪怡，崔田.氣相色譜法測(cè)定感冒咳嗽顆粒中桉油精含量[J].藥物鑒定，2010，19（24）：31-32.

[8] 黃建明，徐惠南，翁偉宇.氣相色譜法測(cè)定川芎嗪貼劑中桉油精的含量[J].中國(guó)新藥與臨床雜志，2005，24（2）：96-98.

[9] 沈勇，吳靜，熊嬌.GC法測(cè)定草果揮發(fā)油中α-蒎烯、桉油精和香葉醇的含量[J].中國(guó)藥師，2014，17（8）：1426-1428.

[10] 張啟明，姜平川，劉剛.氣相色譜法測(cè)定崗松油中芳樟醇和按油精的含量[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2004，39（4）：298-300.

[11] 鄭亞玉，靳鳳云，孫宜春.氣相色譜法測(cè)定米槁心樂(lè)滴丸中桉油精的含量[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，31（4）：19-20.

[12] 楊天壽，張宇欣，嚴(yán)華.艾葉的質(zhì)量檢測(cè)方法改進(jìn)及桉油精含量變化分析[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，37（2）：138-141.

[13] 何兵，田吉，劉艷，等.HPLC測(cè)定11種中藥揮發(fā)油中桉油精的含量[J].藥物分析雜志，2012，32（5）：769-771.

[14] 閻克里，朱秀卿，趙麗.白術(shù)揮發(fā)油的HPLC 定量質(zhì)控和特征圖譜研究[J].藥物分析雜志，2011，31（4）：758-763.

[15] 王世宇，李文兵，盧君蓉.HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地香附藥材中香附烯酮、圓柚酮和α-香附酮[J].中成藥，2015，37（3）：588- 591.

[16] 李慧，張翠欣，張少芳.HPLC-DAD法同時(shí)測(cè)定桉檸蒎腸溶軟膠囊中桉油精、檸檬烯和α-蒎烯的含量[J].中國(guó)藥房，2015，26（3）：411-413.

[17] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：156.

（收稿日期：2015-05-14）endprint