兩種方法診斷慢性子宮內(nèi)膜炎的比較

馮燕翀 孫文霞

長治醫(yī)學院附屬和平醫(yī)院婦產(chǎn)科，山西長治046000

子宮內(nèi)膜炎是婦科常見病，發(fā)病率逐年上升。子宮內(nèi)膜炎具有臨床表現(xiàn)無特異性、診斷較困難、病情易反復、為導致不孕和流產(chǎn)的重要原因等特點。因其診斷較困難，漏診和誤診在臨床工作中時有發(fā)生，嚴重時將導致不可估計的后果。因此找到切實有效的診斷方法是婦產(chǎn)科醫(yī)生的迫切愿望。

該病診斷的必備條件是在大量梭形的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞中辨認出可能含有的漿細胞[1]，但此法對漿細胞的分辨仍較困難。國外有研究表明，CD38、CD138特異的表達在漿細胞胞膜或胞質(zhì)內(nèi)。為此本研究通過比較HE染色法與免疫組織化學染色聯(lián)合檢測CD38、CD138方法診斷子宮內(nèi)膜炎的差異性，以期找到更有效的診斷方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料

200例患者為2013年1月～2013年9月間因子宮異常出血、月經(jīng)失調(diào)、不孕癥、反復流產(chǎn)、陰道異常排液等情況在山西長治醫(yī)學院附屬和平醫(yī)院婦科門診就診的患者，考慮可能患有慢性子宮內(nèi)膜炎而需行診斷性刮宮術(shù)明確診斷。研究方案經(jīng)長治醫(yī)學院附屬和平醫(yī)院倫理委員會批準?；颊咭淹晟票匾妮o助檢查，并簽署知情同意書，清醒狀態(tài)下在門診行診斷性刮宮術(shù)。

1.2 標本滿意標準及取材結(jié)果

組織病理學標本滿意標準為：術(shù)者判定組織獲取量可做出組織病理學診斷。200例患者中168例取材滿意。168例患者年齡24～76歲，平均（43.3±4.2）歲，患者年齡及癥狀等差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.3 實驗分組

將168名患者的子宮內(nèi)膜組織均分別制成三份標本并分為兩組，一組為采用HE染色法組，另一組為采用免疫組織化學染色組分別兩份標本檢測CD38、CD138。

1.4 診斷標準

（1）臨床表現(xiàn)下腹墜脹，子宮不規(guī)則出血，白帶多，檢查子宮稍大有觸痛，約20%無癥狀。（2）輔助檢查診斷性刮宮：先刮宮頸管，再進宮腔刮取組織送病理檢查。內(nèi)膜中有大量漿細胞及淋巴細胞，即可明確診斷。

1.5 實驗方法

1.5.1 CD38、CD138采用免疫組化兩步法檢測步驟 洗載玻片備用、石蠟切片、脫蠟、抗原修復、加一抗、加二抗、加SABC試劑、加顯色劑（DAB顯色試劑）、蘇木精復染、脫水、封片、顯微鏡下觀察。

1.5.2 HE染色法步驟 將切片脫蠟、依次于蘇木素染液、稀鹽酸酒精、氨水、伊紅染液、75%酒精、90%乙醇、無水酒精、二甲苯中浸入并清洗，再使用中性樹膠封片，鏡下觀察。

1.6 統(tǒng)計學方法

資料采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析，采用配對四格表資料的x2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 實驗結(jié)果判定標準

CD38、CD138表達陽性鏡下顯示漿細胞的細胞膜出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒視為CD38表達陽性。CD138以細胞膜/胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色為陽性。圖1～2分別顯示CD38、CD138陽性表達。兩者均陽性方可診斷慢性子宮內(nèi)膜炎。

HE染色在鏡下以子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞中見到典型的漿細胞視為慢性子宮內(nèi)膜炎確診。見圖3。

圖1 CD38（+）免疫組化染色（×40）

圖2 CD138（+）免疫組化染色（×40）

圖3 HE染色圖（×40）

2.2 兩種方法診斷慢性子宮內(nèi)膜炎陽性率比較

168名患者的子宮內(nèi)膜細胞取材器組所獲標本分兩份。免疫組織化學染色法聯(lián)合檢測CD38、CD138組診斷陽性率（26.19%）與HE染色組診斷陽性率（3.57%）比較，差異有統(tǒng)計學意義（x2=36，P＜0.05），HE組診斷陽性率低于CD38、CD138聯(lián)合組?？梢哉J為CD38、CD138聯(lián)合檢測診斷較HE染色方法更正確率更高。見表1。

表1 兩種方法診斷慢性子宮內(nèi)膜炎陽性率比較

3 討論

子宮內(nèi)膜炎是婦科常見疾病，發(fā)病率國內(nèi)外報道不一，國內(nèi)鄭益紅等[2]報道的子宮內(nèi)膜活檢標本中，慢性子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率占3%～11%，國外Ekanem等[3]對140例子宮內(nèi)膜活檢病例進行分析，結(jié)果顯示慢性子宮內(nèi)膜炎占16.4%。

子宮內(nèi)膜炎分為急性子宮內(nèi)膜炎和慢性子宮內(nèi)膜炎兩種。急性子宮內(nèi)膜炎通常癥狀比較明顯，進展較快，可蔓延至周圍組織和臟器，甚至可發(fā)展為敗血癥、感染性休克、中毒性休克綜合征等，危及生命。慢性子宮內(nèi)膜炎大多癥狀輕微，全身癥狀不明顯，但病程較長，治療不徹底容易復發(fā)，影響女性生活質(zhì)量。無論是急性子宮內(nèi)膜炎，還是慢性子宮內(nèi)膜炎，如果治療不及時、不徹底，嚴重時影響子宮肌層，同時還可出現(xiàn)盆腔痛及反復發(fā)作。該病還可導致女性生殖疾病和影響產(chǎn)后子宮恢復。同時一旦形成慢性子宮內(nèi)膜炎對身體危害較大且治療較為困難。

慢性子宮內(nèi)膜炎還與女性生殖疾病密切相關(guān)。有研究表明，行體外授精-胚胎移植術(shù)反復胚胎著床后失敗、不明原因的不孕不育及不明原因反復流產(chǎn)等均與慢性子宮內(nèi)膜炎有關(guān)[4-7]。Sukhikh等[8]發(fā)現(xiàn)存在慢性子宮內(nèi)膜炎時內(nèi)膜發(fā)生的變化將會影響妊娠早期胚胎的發(fā)育。

慢性子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率較高，對女性生殖健康的影響較大、范圍較廣，因此，慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷及早期發(fā)現(xiàn)和早期治療對防治女性疾病進展和提高女性生活質(zhì)量有著極其重要的意義，具有一定的臨床研究價值。

慢性子宮內(nèi)膜炎臨床表現(xiàn)為：不規(guī)則陰道出血或月經(jīng)不規(guī)則，有時有輕微下腹痛及白帶增多，不孕癥。其癥狀不具有特異性。該疾病常因?qū)m腔內(nèi)的分泌物通過子宮頸口流出體外，而癥狀不明顯。且本病約有20%無癥狀，易忽略診斷，多數(shù)是由婦科其他疾病如做診斷性刮子宮術(shù)時發(fā)現(xiàn)的 。即使有癥狀的CE也可能會被忽略，因為受子宮內(nèi)膜取樣滿意度和病理組織學檢測方法所限。

慢性子宮內(nèi)膜炎確定診斷的可靠方法落腳在診斷性刮宮術(shù)聯(lián)合組織內(nèi)膜病理檢查。趙健[9]在子宮內(nèi)膜細胞學診斷系統(tǒng)中指出：慢性子宮內(nèi)膜炎病理改變：在子宮內(nèi)膜細胞之間，有散在淋巴細胞及漿細胞、吞噬細胞、細胞碎片等，子宮內(nèi)膜細胞少見。漿細胞并不是正常子宮內(nèi)膜的組成細胞，因而，漿細胞的出現(xiàn)是慢性子宮內(nèi)膜炎的重要診斷指標[10]，但是，人們對識別子宮內(nèi)膜中的漿細胞還存有一定的難度[11]。而且，常規(guī)的組織染色技術(shù)很難檢測子宮內(nèi)膜間質(zhì)中的漿細胞[12]。

傳統(tǒng)HE法存在對漿細胞分辨困難的情況，如月經(jīng)后期、早期增生的內(nèi)膜、大量有絲分裂的基質(zhì)細胞、以及呈漿細胞樣的基質(zhì)細胞。研究表明辨認漿細胞可通過切片的免疫染色法檢測CD38、CD138、免疫球蛋白、VS38。而在1997年，Anthony等[13]用VS38單克隆抗體檢測子宮內(nèi)膜的漿細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)VS38不僅使?jié){細胞著色，而且上皮和基質(zhì)細胞也呈顆粒狀著色，故而降低了VS38檢測漿細胞的特異性。

目前國內(nèi)外的研究表明，正常漿細胞的主要免疫表型為：CD38、CD138等[14]。有研究顯示漿細胞最特異的指標是CD138[15-16]。CD138的免疫組化適合用于檢測石蠟包埋標本中的子宮內(nèi)膜間質(zhì)漿細胞，并改善了慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷率[17-19]。Kitaya等[17-20]也證實了CD138對子宮內(nèi)膜炎中漿細胞的檢測率較其他方法高，而且準確率也高，在慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷中發(fā)揮著必不可少的作用。Bhan[21]在實驗中，對B細胞各個發(fā)育階段進行了分析，發(fā)現(xiàn)漿細胞表面的CD38分子著色很強。1997年，Anthony等[13]使用CD38對慢性子宮內(nèi)膜炎的組織中漿細胞的檢測達100%。綜上所述，可見CD38、CD138均對漿細胞的檢測具有較高特異性。

但鑒于CD38、CD138均在人體內(nèi)表達、分布廣泛，而各自對子宮內(nèi)膜中漿細胞的檢測所具有的高敏感性、特異性無定論，且目前國內(nèi)外對于CD38、CD138均為單項檢測的研究，故本實驗將免疫組織化學染色法聯(lián)合檢測CD38、CD138，并與傳統(tǒng)HE染色法用于辨別漿細胞是否存在的病理結(jié)果比較，旨在提高兩者聯(lián)合檢測對慢性子宮內(nèi)膜炎中診斷的特異性，并得出結(jié)論：采用免疫組織化學方法聯(lián)合檢測CD38、CD138較傳統(tǒng)HE染色法診斷慢性子宮內(nèi)膜炎價值更高。

本實驗研究對象選擇范圍界定為因癥需行診斷性刮宮術(shù)并考慮病因為慢性子宮內(nèi)膜炎，故范圍有限，其結(jié)論仍需要大宗臨床資料的研究論證。也為本實驗的不足之處。

[1]Bayer GIB，Korourian S.Plasma cells in chronic endometritis are easily identified when stained with syndecan-1[J].Mod Pathol，2001，14（9）：877-879．

[2]鄭益紅，雷英.CD38和CD138在慢性子宮內(nèi)膜炎病理診斷中的應用及臨床意義[J].實用心腦血管病雜志，2013，12（21）：45-46.

[3]Ekanem IA，Ekanem AD.Endom etrial pathology associated with in fertilityamong Nigerian women [J].Niger Postgrad Med，2006，13（4）：344-347.

[4]Johnston MEB，Hartnett J，Engmann LL，et al.Chronic endometritis is a frequent finding in women with recurrent implantation failure after in vitro fertilization[J]. Fertil Steril，2010，5（93）：437-441.

[5]Kitaya K，Yasuo T.Aberrant expression of selectin E，CXCL1，and CXCL13 in chronic endometritis[J].Mod Pathol，2010，4（23）：1136-1146.

[6]Kitaya K. Prevalence of chronic endometritis in recurrent miscarriages[J].Fertil Steril，2011，8（95）：1156-1158.

[7]Kitaya K，Tada Y，Taguchi S，et al.Local mononuclear cell infiltrates in infertile patients with endometrial macropolyps versus micropolyps[J].Hum Reprod. 2012，9（27）：3474-3480.

[8]Sukhikh GT，Shursha AV，Veryasov VN.Immunomorpho logical characteristics of endom etrium in women with chronic endom etrit is[J].BullExp BiolMed，2006，141（1）：104-106.

[9]趙健.子宮內(nèi)膜細胞學診斷系統(tǒng)[J].中國生育健康雜志，2006，17（1）：6-8.

[10]Heatley MK.The association between clinical and pathological features in histologically identified chronic endometritis[J].J Obstet Gynaecol，2004，24（7）：801-803.

[11]Mount SP，Mead K. Cooper，Chlamydia trachomatis in the endometrium： can surgical pathologists identify plasma cells?[J].Adv Anat Pathol，2001，8（6）：327-329.

[12]回允中.外科病理學[M].第9版.北京：北京大學醫(yī)學出版社，2006：573.

[13]Anthony SY, Leong SV. Anti-CD38 and VS38 antibodies for the detection of plasma cells in the diagnosis of chronic endometritis, in applied immunohistochemistry& molecular morphology[J].Appl Immunohistochem Mol Morp，1997，13：189-193.

[14]陳葆國，鄭瑞.多發(fā)性骨髓瘤流式細胞術(shù)免疫表型及微量殘留病研究[A].2011浙江省血液病學術(shù)年會暨浙江省醫(yī)學會血液病學分會成立50周年慶典論文匯編，2011-07-15.

[15]Cornie E.The Pipelle：a disposable device for endometrial biopsy[J].Am J Obstet Gynecol，1984，8（149）：109-110.

[16]Silver M，Miles P，Rosa C.Comparison of Novak and Pipelle endometrial biopsy instrument[J].Obstet Gynecol，1991，78（5）：828-830.

[17]Kitaya K，Tada Y，Hayashi T，et al.Diverse functions of uterine proteoglycans in human reproduction （review）[J].Mol Med Rep，2012，5：1375-1381.

[18]Vicetti MRD，Chivukula M，Krishnamurti U，et al.Limitations of the criteria used to diagnose histologic endometritis in epidemiologic pelvic inflammatory disease research[J]. Pathol Res Pract，2011，10（207）：680-685.

[19]Vicetti MR.Limitations of the criteria used to diagnose histologic endometritis in epidemiologic pelvic inflammatory disease research[J].Pathol Res Pract，2011，207（11）：680-685.

[20]Kitaya KT.Inter-observer and intra-observer variability in immunohistochemical detection of endometrial stromal plasmacytes in chronic endometritis[J].Exp Ther Med，2013，5（2）：485-488.

[21]Bhan AK.Stages of B cell differentiation in human lymphoid tissue[J].J Exp Med，1981，154（3）：737-749.