桑蠶雌蛾10 ℃冷藏適宜時間的篩選

胡仕葉+韓世玉+楊勝特+張安臣+王太興+王賢玉+黃禮平

摘 要：為了篩選出桑蠶雌蛾在10 ℃溫度條件下的適宜冷藏時間，以貴蠶1號、兩廣二號、洞庭×碧波等原蠶雌雄蛾為試驗材料，進(jìn)行不同時間冷藏后的交配產(chǎn)卵試驗，調(diào)查桑蠶雌蛾的耐冷藏性和冷藏后的交配產(chǎn)卵效果。結(jié)果表明，在溫度10 ℃和相對濕度75%條件下冷藏，桑蠶雌蛾的耐冷藏性因品種不同有差異，從交配能力看，參試的6個原蠶品種的交配能力排序為：826>827>洞庭>湘·7>芙·9>碧波。產(chǎn)卵效果因品種和時間不同也有差異，在10 ℃溫度、相對濕度75%條件下，中系原蠶雌蛾827、芙·9、洞庭的適宜冷藏時間為24 h；日系原蠶雌蛾826、湘·7的適宜冷藏時間為24～96 h，碧波原蠶雌蛾的適宜冷藏時間為24～48 h。

關(guān)鍵詞：桑蠶雌蛾；10 ℃冷藏；產(chǎn)卵量；良卵率；不良卵率

中圖分類號：S881.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.08.006

在原蠶基地繁育一代雜交種過程中，常因原蠶飼養(yǎng)戶的飼育環(huán)境、飼養(yǎng)技術(shù)、桑葉質(zhì)量的不同，而導(dǎo)致原蠶發(fā)育經(jīng)過受到影響，時常發(fā)生對交品種上蔟結(jié)繭時間與發(fā)蛾調(diào)節(jié)預(yù)定日差不相吻合的問題[1]，從而造成制種過程中雌雄對交不平衡的現(xiàn)象時有發(fā)生，給蠶種繁育生產(chǎn)帶來了不同程度的損失。因此，為了解決這一實際問題，蠶種生產(chǎn)中常采用冷藏雌、雄蛾的方式來進(jìn)行彌補(bǔ)，以達(dá)到減少蠶種損失的目的。在沒有冷藏設(shè)施的繁種基地，發(fā)生類似對交不平衡問題后，通常采用不捉不動的方法靜置雌蛾等待次日交配，但如遇到自然溫度較高（20 ℃以上）的季節(jié)，雌蛾一般會在未交排尿后自行產(chǎn)卵，造成蠶卵損失，減少制種量。近年來，桑蠶雌雄蛾的冷藏技術(shù)在蠶種繁育生產(chǎn)中越來越受到關(guān)注[2-9]，逐漸成為桑蠶良種繁育技術(shù)體系中的重要研究課題之一。為了系統(tǒng)掌握桑蠶雌蛾的冷藏溫度標(biāo)準(zhǔn)和適宜冷藏時間，筆者已進(jìn)行了5 ℃[10]和7.5 ℃[11]冷藏雌蛾試驗，本文旨在研究篩選出10 ℃溫度條件下桑蠶雌蛾的適宜冷藏時間，以期為蠶種繁育生產(chǎn)提供參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

在貴州省蠶業(yè)研究所蠶種專用冷庫，采用貴蠶1號[12-13]原蠶827、826，兩廣二號[14-15]原蠶芙·9、湘·7，洞庭×碧波[16-17]原蠶洞庭、碧波的雌蛾進(jìn)行冷藏試驗。

1.2 試驗設(shè)計

在10 ℃溫度和相對濕度75%條件下設(shè)置冷藏時間24，48，72，96 h，以不冷藏為對照（0 h），各品種各冷藏時間分別冷藏雌蛾300頭；冷藏后，827、826、芙·9、湘·7、洞庭、碧波等6個品種的原蠶雌蛾分別按貴蠶1號、兩廣二號、洞庭×碧波的固定對交組合進(jìn)行交配。

1.3 試驗方法

將各原蠶品種同日羽化雌蛾待正常展翅后放入恒溫10 ℃，相對濕度75%的冷庫中冷藏。雌蛾冷藏前后均在中間溫度16～18 ℃過渡15 min[5]左右（對照除外），按試驗設(shè)計各品種原蠶雌蛾在冷庫冷藏達(dá)到規(guī)定時間后，與指定對交組合新鮮雄蛾交配，交配環(huán)境溫度24～25 ℃，相對濕度70%～80%，交配時各處理設(shè)3個重復(fù)，1個重復(fù)100蛾，交配時間均為4 h，交配期間指定專人進(jìn)行巡散對工作，對不交配蛾和散對及時拾除并計數(shù)，計算冷藏后的交配能力，散對雌蛾不參加產(chǎn)卵試驗，待交配時間達(dá)4 h后，將未散對雌蛾拆對產(chǎn)卵（產(chǎn)卵環(huán)境溫度25～26 ℃，相對濕度75%左右），每個重復(fù)選用56蛾進(jìn)行產(chǎn)卵試驗，采取單蛾圈方式制種，投蛾20 h后袋蛾收種，按照桑蠶一代雜交種繁育技術(shù)規(guī)程[18]將蠶種保護(hù)呈固有色后[19]，調(diào)查各重復(fù)小區(qū)的單蛾產(chǎn)卵數(shù)、良卵數(shù)、良卵率、不良卵數(shù)、不良卵率等。數(shù)據(jù)采用Excel2003軟件和DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計分析。根據(jù)各品種雌蛾在10 ℃冷藏后的耐冷藏性、交配能力、單蛾產(chǎn)卵量、單蛾良卵數(shù)、良卵率、不良卵率等綜合指標(biāo)，篩選出各個品種原蠶雌蛾的適宜冷藏時間。

2 結(jié)果與分析

2.1 10 ℃冷藏對桑蠶雌蛾交配性能的影響

從表1可以看出，桑蠶雌蛾在10 ℃條件下進(jìn)行冷藏，其交配性能因蠶品種、品系不同而有差異。

參試的6個原蠶品種雌蛾中，貴蠶1號原蠶827、826在冷藏時間達(dá)72 h后，交配能力依然很強(qiáng)，不交配蛾比例僅在0.3%以內(nèi)；含多化性血統(tǒng)的兩廣二號原蠶芙·9、湘·7在冷藏72 h后，不交配蛾比例在1.3%以內(nèi)，交配能力仍然較強(qiáng)；從洞庭×碧波2原蠶的交配性能看，洞庭原蠶在冷藏72 h內(nèi)，交配能力依然很強(qiáng)，不交配蛾比例在0.3%以內(nèi)，碧波原蠶冷藏時間超過48 h后，交配能力有所下降，不交配蛾比例達(dá)3.3%左右，冷藏時間達(dá)96 h后不交配蛾比例超過8.7%。從交配能力看，在10 ℃溫度條件下冷藏桑蠶雌蛾，參試的6個原蠶品種的交配能力排序為：826>827>洞庭>湘·7>芙·9>碧波。冷藏時間在72 h內(nèi)，交配3 h后，826、827等原蠶基本沒有散對發(fā)生，而芙·9、洞庭、湘·7、碧波等原蠶的散對率分別達(dá)到2.0%，2.0%，6.0%和8.0%。

2.2 10 ℃冷藏不同時間對桑蠶雌蛾耐冷藏性的影響

從表2可以看出，在10 ℃溫度及75%相對濕度條件下冷藏桑蠶雌蛾，桑蠶雌蛾的耐冷藏性與原蠶品種有關(guān)，各品種間存在明顯的差異，其中827品種雌蛾冷藏48 h后，未交配自行產(chǎn)卵的雌蛾比例達(dá)到2.0%，冷藏72 h和96 h后，未交自產(chǎn)卵雌蛾比例分別達(dá)到15.0%和25.0%；芙·9和洞庭原蠶雌蛾冷藏24 h后，未交自產(chǎn)卵的雌蛾比例分別達(dá)到3.0%和2.0%，冷藏48 h后，自產(chǎn)卵的雌蛾比例均達(dá)到了5.0%，由此可以判斷，中系原蠶雌蛾在10 ℃溫度條件下進(jìn)行冷藏，冷藏時間在24 h內(nèi)較為合適，超過48 h后，蠶卵的損失量將會大大提高。而826、湘·7、碧波等品種的原蠶雌蛾在冷藏72 h后均沒有未交自產(chǎn)卵蛾發(fā)生，冷藏時間達(dá)96 h后，自產(chǎn)卵的雌蛾比例也在3.0%以內(nèi)，說明日系原蠶雌蛾在10 ℃溫度和75%相對濕度條件下較耐冷藏。

2.3 10 ℃冷藏對桑蠶雌蛾單蛾產(chǎn)卵數(shù)、良卵數(shù)和不良卵數(shù)的影響

（1）原蠶827。從表3可以看出，827原蠶單蛾產(chǎn)卵數(shù)、單蛾良卵數(shù)均以冷藏24 h為最高，分別是611.5粒和605.2粒，以冷藏96 h最低，分別為554.6粒和547.1粒，通過方差分析和F測驗，F(xiàn)單蛾產(chǎn)卵數(shù)=100.87>F0.01（4，10）=5.99，F(xiàn)單蛾良卵數(shù)=85.75>F0.01（4，10）=5.99，采用Duncan，s新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較，24 h、0 h與48 h、72 h、96 h之間，48 h、72 h與96 h之間存在極顯著差異；48 h與72 h之間存在顯著差異；0 h與24 h之間差異不顯著。

不受精卵數(shù)以0 h最低（2.0粒），96 h最高（5.6粒），死卵數(shù)以96 h最低（1.9粒），0 h最高（4.5粒），其中F不受精卵數(shù)=1.84

（2）原蠶826。826原蠶單蛾產(chǎn)卵數(shù)以冷藏24 h最高，為527.4粒，以0 h處理區(qū)最低，為522.7粒，單蛾良卵數(shù)以冷藏48 h最高，為520.1粒，以0 h處理區(qū)最低，為510.6粒，不受精卵數(shù)以冷藏24 h最低，為2.0粒，以冷藏72 h最高，為3.2粒，通過方差分析和F測驗，F(xiàn)單蛾產(chǎn)卵數(shù)=0.60<1，F(xiàn)單蛾良卵數(shù)=3.28F0.01（4，10）=5.99，進(jìn)行多重比較，0 h與48 h、96 h之間差異極顯著，0 h與24 h、72 h之間，24 h、72 h與96 h之間差異顯著，其余各處理間差異不顯著（表3）。所以，從產(chǎn)卵成績看，在10 ℃溫度條件下，826原蠶雌蛾的冷藏時間在96 h范圍內(nèi)均可選用。

（3）原蠶芙·9。從表3看出，芙·9原蠶單蛾產(chǎn)卵數(shù)以冷藏24 h最高（459.3粒），冷藏72 h最低（408.3粒），經(jīng)F測驗，F(xiàn)單蛾產(chǎn)卵數(shù)=39.50>F0.01（4，10）=5.99，多重比較發(fā)現(xiàn)，24 h與48 h、72 h、96 h之間，0 h、48 h與72 h、96 h之間，存在極顯著差異，24 h與0 h之間存在顯著差異，其它各處理間差異不顯著；單蛾良卵數(shù)以冷藏24 h最高，為456.9粒，冷藏96 h最低，為403.7粒，F(xiàn)單蛾良卵數(shù)=47.83>F0.01（4，10）=5.99，24 h與0 h、48 h、72 h、96 h之間，0 h、48 h與72 h、96 h之間，存在極顯著差異，其它各處理間差異不顯著。不受精卵數(shù)各處理間差異不顯著；死卵數(shù)以0 h最高（10.0粒），72 h最低（1.0粒），F(xiàn)死卵數(shù)=49.84>F0.01（4，10）=5.99，其中0 h與24 h、48 h、72 h、96 h之間差異極顯著，其它各處理間差異不顯著。從芙·9原蠶的產(chǎn)卵綜合成績看，該品種雌蛾在10 ℃溫度條件下冷藏時間在24 h以內(nèi)適用。

（4）原蠶湘·7。從表3可以看出，湘·7原蠶雌蛾的單蛾產(chǎn)卵數(shù)和單蛾良卵數(shù)均以96 h處理區(qū)最高，分別為496.7粒和491.3粒，0 h處理區(qū)最低，分別為476.3粒和470.8粒，2項指標(biāo)均是96 h、72 h與0 h之間存在極顯著差異，48 h、24 h與0 h之間存在顯著差異，其余各處理間差異不顯著；該品種不受精卵數(shù)各處理間均不存在顯著差異；死卵數(shù)以0 h處理區(qū)最高（3.6粒），以24 h、48 h、72 h處理區(qū)最低，均為1.7粒，其中0 h與24 h、48 h、72 h之間存在極顯著差異，其它各處理間不存在顯著差異。所以，從湘·7原蠶的產(chǎn)卵綜合成績看，該品種雌蛾在10 ℃溫度條件下的適宜冷藏時間為96 h以內(nèi)。

（5）原蠶洞庭。從表3看出，洞庭原蠶的單蛾產(chǎn)卵數(shù)和單蛾良卵數(shù)均以24 h處理區(qū)最高，分別為497.0粒和488.1粒，以96 h處理區(qū)最低，分別是437.3粒和425.3粒，通過方差分析和F測驗，F(xiàn)單蛾產(chǎn)卵數(shù)=109.22>F0.01（4，10）=5.99，F(xiàn)單蛾良卵數(shù)=109.65>F0.01（4，10）=5.99，經(jīng)多重比較，0 h、24 h與48 h、72 h、96 h之間，48 h與72 h、96 h之間，72 h與96 h之間存在顯著以上差異，0 h與24 h之間差異不顯著。不受精卵數(shù)以冷藏72 h最高（9.9粒），0 h最低（1.6粒），F(xiàn)不受精卵數(shù)=10.69>F0.01（4，10）=5.99，進(jìn)行多重比較，72 h與48 h、24 h、0 h之間，96 h與0 h之間存在極顯著差異，96 h與24 h之間存在顯著差異，其它各處理間差異不顯著；死卵數(shù)以冷藏24 h最高（5.3粒），0 h最低（2.9粒），但各處理之間沒有顯著差異。因此，從洞庭原蠶的產(chǎn)卵綜合成績看，該品種雌蛾在10 ℃溫度條件下冷藏時間在24 h以內(nèi)適用。

（6）原蠶碧波。從表3可以看出，碧波原蠶單蛾產(chǎn)卵數(shù)以冷藏24 h最高（536.5粒），冷藏72 h最低（484.4粒），單蛾良卵數(shù)以冷藏24 h最高（528.2粒），96 h最低（471.0粒），通過方差分析和F測驗，F(xiàn)單蛾產(chǎn)卵數(shù)=42.00>F0.01（4，10）=5.99，F(xiàn)單蛾良卵數(shù)=57.38>F0.01（4，10）=5.99，經(jīng)多重比較，2項指標(biāo)均為24 h與0 h、48 h、72 h、96 h之間，0 h、48 h與72 h、96 h之間存在顯著以上差異，其余各處理間差異不顯著。不受精卵數(shù)、死卵數(shù)均是96 h最高，分別為6.3粒和8.1粒，但不受精卵數(shù)、死卵數(shù)2項指標(biāo)各處理之間不存在顯著差異。因此，從碧波原蠶的產(chǎn)卵成績看，該品種雌蛾在10 ℃溫度條件下的適用冷藏時間在48 h以內(nèi)。

2.4 10 ℃冷藏對桑蠶雌蛾產(chǎn)卵質(zhì)量的影響

（1）對良卵率的影響。從圖1可以看出，各品種原蠶雌蛾經(jīng)10 ℃不同時間冷藏后，良卵率有一定差異。貴蠶1號原蠶827良卵率以24 h處理區(qū)最高（98.97%），96 h處理區(qū)最低（98.65%），在96 h范圍內(nèi)，各冷藏時間的良卵率沒有明顯差異；826原蠶雌蛾冷藏96 h良卵率最高（98.88%），冷藏0 h最低（97.68%），在96 h范圍內(nèi)，良卵率隨冷藏時間的延長呈逐漸增加趨勢。兩廣二號原蠶芙·9良卵率最高為72 h處理區(qū)（99.54%），最低為0 h處理區(qū)（97.48%），結(jié)果表明，在96 h范圍內(nèi)，芙·9原蠶經(jīng)冷藏處理后的良卵率均達(dá)到99.0%左右，明顯高于不冷藏處理區(qū)；湘·7原蠶雌蛾經(jīng)冷藏后的良卵率均約高于不冷藏處理區(qū)（0 h），最高為48 h（99.32%），最低為0 h（98.85%），說明在96 h范圍內(nèi)，10 ℃冷藏對湘·7品種的良卵率沒有不良影響。洞庭原蠶的良卵率以不冷藏處理區(qū)（0 h）最高，為99.08%，72 h處理區(qū)最低，為96.91%，在96 h范圍內(nèi)，該品種良卵率隨冷藏時間的延長呈逐漸下降趨勢；碧波原蠶良卵率在冷藏72 h內(nèi)，差異不明顯，達(dá)到96 h后，良卵率明顯降低。

（2）對不受精卵率的影響。從圖2可以看出，在10 ℃溫度條件下冷藏桑蠶雌蛾，其產(chǎn)卵不受精卵率因品種不同而有差異。冷藏時間在96 h范圍內(nèi)，貴蠶1號827原蠶的不受精卵率隨冷藏時間的延長呈逐漸增加趨勢，最低為0 h（0.33%），最高為96 h（1.01%）；826原蠶的不受精卵率各處理區(qū)差異不明顯，以冷藏24 h最低（0.38%），72 h最高（0.61%）。兩廣二號芙·9原蠶的不受精卵率與冷藏時間沒有明顯的相關(guān)性，0～72 h均在0.30%以內(nèi)，超過96 h后有所上升；湘·7原蠶的不受精卵率各處理之間差異不明顯，最低為48 h（0.33%），最高為72 h（0.57%）。洞庭原蠶的不受精卵率隨冷藏時間的延長呈逐漸增加趨勢，最低為0 h（0.33%），最高為72 h（2.20%），與冷藏時間有明顯的相關(guān)性；碧波原蠶的不受精卵率與冷藏時間沒有明顯的相關(guān)性，最低為24 h（0.65%），最高為96 h（1.30%）。

（3）對死卵率的影響。從圖3可以看出，在10 ℃溫度條件下、96 h范圍內(nèi)冷藏桑蠶雌蛾，貴蠶1號827原蠶的死卵率隨冷藏時間的延長呈逐漸下降趨勢，最高為0 h（0.73%），最低為96 h（0.34%），但相關(guān)性不明顯；826原蠶的死卵率與冷藏時間有明顯的相關(guān)性，冷藏時間越長，死卵率逐漸降低，最高為0 h（1.82%），最低為96 h（0.59%）。兩廣二號芙·9原蠶的死卵率0 h處理區(qū)（2.25%）明顯高于各冷藏區(qū)（24～96 h）；湘·7原蠶各處理區(qū)的差異不明顯，但各冷藏區(qū)（24～96 h）均低于不冷藏區(qū)（0 h）。這說明10 ℃溫度冷藏桑蠶雌蛾，對827、826、芙·9、湘·7等品種（品系）的死卵率無不良影響。洞庭原蠶和碧波原蠶雌蛾經(jīng)10 ℃溫度冷藏后，死卵率均有所上升，但與冷藏時間長短沒有明顯的相關(guān)性。

3 討 論

在10 ℃溫度和75%的相對濕度條件下冷藏，桑蠶雌蛾的交配性能、耐冷藏性、產(chǎn)卵效果因品種（品系）和冷藏時間不同存在差異。

（1）桑蠶雌蛾的交配性能有差異，從交配能力看，參試的6個原蠶品種的排序為826>827>洞庭>湘·7>芙·9>碧波。冷藏時間在72 h內(nèi)，交配3 h后，826、827等原蠶基本沒有散對發(fā)生，而芙·9、洞庭、湘·7、碧波等原蠶的散對率分別達(dá)到2.0%，2.0%，6.0%和8.0%。

（2）桑蠶雌蛾的耐冷藏性與原蠶品系有關(guān)，827、芙·9、洞庭原蠶雌蛾在冷藏24 h后，未交自產(chǎn)卵雌蛾比例分別達(dá)到1.0%，3.0%和2.0%；而826、湘·7、碧波等品種的原蠶雌蛾在冷藏72 h后均沒有未交自產(chǎn)卵蛾發(fā)生，冷藏時間達(dá)96 h后，自產(chǎn)卵的雌蛾比例也在0.3%～3.0%之間。這說明在10 ℃溫度和75%相對濕度條件下，中系原蠶雌蛾只適宜較短時間冷藏，而日系原蠶雌蛾可進(jìn)行較長時間冷藏。

（3）產(chǎn)卵效果因品種和時間不同存在差異。貴蠶1號827原蠶的單蛾產(chǎn)卵數(shù)、單蛾良卵數(shù)和良卵率均是冷藏24 h達(dá)到最好水平；826原蠶各冷藏處理間的單蛾產(chǎn)卵數(shù)差異不顯著、單蛾良卵數(shù)差異不顯著、不受精卵數(shù)差異不顯著，且良卵率以96 h處理區(qū)最高，對照區(qū)（0 h）最低。兩廣二號芙·9原蠶的單蛾產(chǎn)卵數(shù)、單蛾良卵數(shù)均是冷藏24 h達(dá)到最好水平，且與其它各處理間均達(dá)到顯著以上差異，良卵率各冷藏處理區(qū)均達(dá)到99.0%左右，明顯高于對照（0 h）；湘·7原蠶的單蛾產(chǎn)卵數(shù)和單蛾良卵數(shù)各冷藏處理區(qū)（24～96 h）均顯著高于對照（0 h），以冷藏96 h最高，良卵率各冷藏區(qū)均約高于對照（0 h），最高為48 h（99.32%），在96 h范圍內(nèi)，10 ℃冷藏對湘·7品種的良卵率沒有不良影響。洞庭原蠶的單蛾產(chǎn)卵數(shù)和單蛾良卵數(shù)均以24 h處理區(qū)最高，且極顯著高于48～96 h處理區(qū)，良卵率是對照區(qū)最高（99.08%），72 h處理區(qū)最低（96.91%），在96 h范圍內(nèi)，該品種良卵率隨冷藏時間的延長呈逐漸下降趨勢；碧波原蠶的單蛾產(chǎn)卵數(shù)和單蛾良卵數(shù)以24 h處理區(qū)最高，均極顯著高于其它各處理，但48 h冷藏區(qū)與對照區(qū)（0 h）差異不顯著，不受精卵數(shù)和死卵數(shù)各處理間差異不顯著，良卵率在冷藏72 h內(nèi)，差異不明顯，達(dá)到96 h后，良卵率明顯降低。

（4）各品種原蠶雌蛾經(jīng)10 ℃冷藏后，在出庫感溫過程中，多數(shù)會自行產(chǎn)卵。因此，在雌蛾出庫前要準(zhǔn)備好對交雄蛾，雌蛾經(jīng)18 ℃中間溫度15 min左右應(yīng)及時投雄蛾交配。

（5）試驗表明，10 ℃是冷藏日系桑蠶雌蛾的可用溫度標(biāo)準(zhǔn)。例如，湘·7原蠶雌蛾經(jīng)10 ℃溫度冷藏一定時間后，存在蠶卵產(chǎn)出量增加的趨勢，說明湘·7原蠶雌蛾用10 ℃溫度冷藏，對提高蠶卵的產(chǎn)出率有促進(jìn)作用。10 ℃冷藏桑蠶雌蛾，對于中系品種應(yīng)慎重選用，冷藏時間以不超過24 h為宜。

4 結(jié) 論

根據(jù)各品種原蠶雌蛾在10 ℃冷藏后的耐冷藏性、交配能力、單蛾產(chǎn)卵量、單蛾良卵數(shù)、良卵率、不良卵率等綜合指標(biāo)看，在10 ℃溫度、相對濕度75%條件下，中系原蠶雌蛾827、芙·9、洞庭的適宜冷藏時間為24 h；日系原蠶雌蛾826、湘·7的適宜冷藏時間為24～96 h，碧波原蠶雌蛾的適宜冷藏時間為24～48 h。

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