DAPK基因甲基化與腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展△

李水琴 黃義德 林堯

福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福州350000

DAPK基因甲基化與腫瘤相關(guān)性的研究進(jìn)展△

李水琴 黃義德 林堯#

福建師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福州350000

死亡相關(guān)蛋白激酶（death-associated protein kinase，DAPK）基因啟動子區(qū)域高甲基化可使其表達(dá)沉默，從而抑制細(xì)胞凋亡，誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。在不同腫瘤類型或關(guān)于同一類腫瘤的不同報道中，DAPK基因甲基化數(shù)據(jù)相差很大。此外，大多數(shù)DAPK基因甲基化研究缺乏相應(yīng)mRNA或蛋白表達(dá)數(shù)據(jù)。因此，規(guī)范DAPK甲基化及表達(dá)檢測手段，明確其作用機(jī)制，對腫瘤中的DAPK研究至關(guān)重要。

腫瘤；惡性腫瘤；啟動子甲基化；死亡相關(guān)蛋白激酶

據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病之一。2012年腫瘤造成820萬人死亡，其中肺癌、肝癌和胃癌位據(jù)前三。在未來20年中，估計每年腫瘤病例將上升到2200萬。研究腫瘤致病機(jī)制，尋找有效的腫瘤治療方法，是生物學(xué)與醫(yī)學(xué)界的重要研究課題。表觀遺傳學(xué)是指在基因的DNA序列沒有發(fā)生改變的情況下，基因發(fā)生可遺傳的遺傳信息變化，并最終導(dǎo)致可遺傳的表型變化，且這種改變在發(fā)育和細(xì)胞增殖過程中能穩(wěn)定傳遞并具有可逆潛能[1]。在腫瘤中，如DNA甲基化等表觀遺傳學(xué)修飾可以通過調(diào)節(jié)基因的表達(dá)影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。DAPK基因高甲基化常導(dǎo)致其表達(dá)量下降，且在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)了DAPK基因的甲基化現(xiàn)象（圖1）[2]，因而備受關(guān)注，吸引了大量的研究者們對DAPK基因甲基化和腫瘤之間的關(guān)系進(jìn)行研究。

1 DAPK的生物學(xué)功能與腫瘤

DAPK是一種鈣調(diào)蛋白（CaM）調(diào)節(jié)的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，基因定位于人類染色體9q34.1，轉(zhuǎn)錄成熟的mRNA全長為5.9 kb，編碼蛋白分子質(zhì)量為160 kDa。DAPK可參與調(diào)控多種細(xì)胞生理過程，如細(xì)胞凋亡、自噬、遷移及細(xì)胞膜起泡等[3]，與惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]。例如，將DAPK引入到具有高轉(zhuǎn)移能力的老鼠肺癌細(xì)胞中可以延緩惡性腫瘤細(xì)胞的生長并降低其轉(zhuǎn)移潛能[5]。同時，DAPK可以通過磷酸化抑癌基因p19ARF激活抑癌基因p53，上調(diào)p53下游凋亡相關(guān)基因如Bcl相關(guān)X蛋白（Bcl-associated X protein，Bax）、凋亡蛋白酶激活因子-1（apoptosis protease activating factor 1，Apaf-1）等的表達(dá)，從而抑制原癌基因cmyc和轉(zhuǎn)錄因子E2F1誘導(dǎo)的致癌性轉(zhuǎn)化[6]。此外，DAPK還可以通過調(diào)控整合素-細(xì)胞分化調(diào)控蛋白42（cell division control protein 42，Cdc42）信號軸抑制細(xì)胞隨機(jī)遷移，因此即使是在對DAPK誘導(dǎo)的凋亡耐受的惡性腫瘤中，DAPK也有可能抑制惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，從而起到抑癌基因的作用[7]。

2 DAPK基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控

DAPK基因序列缺乏TATA盒，但其翻譯起始位點上游1500 bp的序列包含了多種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點，如轉(zhuǎn)錄因子1（transcription factor，Sp1）結(jié)合位點、激活蛋白2（activator protein 2，AP2）結(jié)合位點、E盒、CAAT盒及可與核因子-激活的B細(xì)胞的增強(qiáng)子κ輕鏈（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells，NF-kB）、激活蛋白1（activator protein 1，AP1）、E2F1等結(jié)合的共有序列結(jié)合位點[8]。

此外，在DAPK基因-172 bp到+489 bp之間（包括外顯子1）運(yùn)用亞硫酸氫鈉測序，還發(fā)現(xiàn)在肺癌和乳腺癌細(xì)胞中存在一個額外的啟動子[8]，即由雙啟動子調(diào)控DAPK基因表達(dá)（圖2），而占主導(dǎo)作用的啟動子1（-1294 bp到+214 bp）比啟動子2（+272 bp到+612 bp）的活性高40%～50%。目前DAPK基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制仍未完全研究清楚，但已知在不同的外部信號刺激下，細(xì)胞中DAPK基因的表達(dá)受到了不同機(jī)制的調(diào)控。

2.1 DAPK基因轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控因子

Martoriati等[9]通過EMSA和CHIP技術(shù)研究證明，在細(xì)胞受到DNA損傷（紫外照射、γ射線及多西環(huán)素處理等）時，p53作為正調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子被招募到DAPK基因的外顯子1上游或內(nèi)含子1上（圖2），誘導(dǎo)DAPK基因的轉(zhuǎn)錄。原癌基因c-Myc、轉(zhuǎn)錄因子E2F1過表達(dá)時，也可引起p53蛋白與DAPK基因啟動子序列結(jié)合，從而上調(diào)DAPK的轉(zhuǎn)錄[9]。Benderska等[10]結(jié)合運(yùn)用熒光顯微技術(shù)等與電腦軟件模擬DAPK-HSF1熱休克蛋白因子1（heat shock factor protein 1，HSF1）蛋白間的相互作用，發(fā)現(xiàn)在腫瘤壞死因子（TNF）刺激結(jié)腸癌腫瘤細(xì)胞時，DAPK可以磷酸化HSF1蛋白的S230位點，pHSF1S230由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核，與DAPK基因啟動子區(qū)域HSE序列（核心序列TTCCGGAA）結(jié)合，使DAPK的mRNA表達(dá)量約增加2倍[11]。此外，在細(xì)胞凋亡初期，轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming grow th factor beta，TGF-β）下游的SMAD蛋白家族（如Smad2、Smad3、Smad4）可與急性骨髓性白血病（AML）家族中的轉(zhuǎn)錄因子相互作用，通過與DAPK基因啟動子（-705至-352）的結(jié)合，上調(diào)DAPK的mRNA表達(dá)量[12-13]。C/EBP-β是另一個可正調(diào)節(jié)DAPK轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄因子[14]，C/EBP亞家族包括C/EBP-α、C/EBP-β、C/EBP-γ、C/EBP-δ、C/EBP-ε、C/EBP-ζ[15-16]。C/EBP-β可直接與DAPK啟動子近端環(huán)腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）應(yīng)答元件CRE/ATF位點（核心序列GACG）結(jié)合，但是與啟動子遠(yuǎn)端CBS位點（核心序列TGGG）的結(jié)合需要干擾素γ（interferon gamma，IFN-γ）的誘導(dǎo)（圖2）[14]。此外，Gade等[17]研究發(fā)現(xiàn)在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)下，處于前體狀態(tài)的激活轉(zhuǎn)錄因子6（activating transcription factor 6，ATF6）與免疫球蛋白結(jié)合蛋白（binding immunoglobulin protein，BiP）分離，進(jìn)入高爾基體。在高爾基體中，前體ATF6經(jīng)IFN-γ的誘導(dǎo)后，通過細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1（ASK1-MKK3）途徑中的p38促分裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）磷酸化ATF6的T166位點[18]，使之發(fā)生蛋白水解變成活性狀態(tài)，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與C/EBP-β蛋白結(jié)合后共同與DAPK啟動子近端cAMP應(yīng)答元件CRE/ATF位點結(jié)合，誘導(dǎo)DAPK基因的表達(dá)[14]。

2.2 DAPK基因轉(zhuǎn)錄的負(fù)調(diào)控因子

促炎因子IL-6/STAT3可與DAPK基因啟動子區(qū)域（-1471至-1821、-351至-631）結(jié)合，抑制DAPK基因的轉(zhuǎn)錄[13，19]，而DAPK也可通過蛋白間的相互作用改變信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的核定位信號，進(jìn)而減弱STAT3的活性[13]。因此，二者形成了一個雙向負(fù)調(diào)控關(guān)系。此外，Hayakawa等[20]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1（MAP3K7）激活p52NF-KB的同時可與DAPK的CRE及NF-kB位點結(jié)合，招募轉(zhuǎn)錄因子如組蛋白去乙?；?（histone deacetylases2，HDAC2）、HDAC6等以抑制DAPK基因表達(dá)[13]。除開轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合外，DAPK基因啟動子區(qū)域CpG島的異常甲基化在調(diào)節(jié)DAPK基因的表達(dá)中亦發(fā)揮重要作用。Nakatsuka等[21]在甲狀腺癌（TL）中研究發(fā)現(xiàn)，DAPK基因的5'非翻譯區(qū)（5'UTR）的CpG島是一個超甲基化的潛在靶點。而據(jù)在線軟件分析推測，在DAPK基因翻譯起始位點上游6237 bp中，共含有3個可能的CpG島（圖3）。另外，DNA甲基轉(zhuǎn)移酶可以異常募集致癌蛋白到DAPK啟動子上，最后使DAPK啟動子區(qū)域出現(xiàn)DNA異常甲基化現(xiàn)象[7，22-24]，但詳細(xì)調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步探索。

3 腫瘤中DAPK基因的甲基化

DAPK作為一種抑癌基因，其啟動子在多種惡性腫瘤細(xì)胞中存在不同程度的高甲基化[25-27]。體內(nèi)研究顯示，DAPK基因在正常組織中均有表達(dá)，在多種原發(fā)性惡性腫瘤組織中表達(dá)低下或缺失，如食管癌[28]、肺癌[5]、大腸癌[29]、乳腺癌[30]、卵巢癌[24]、頭頸部鱗癌（HNSCC）[31]等。Raveh等[7]研究指出，在原發(fā)性結(jié)腸癌患者中，DAPK基因的甲基化約占20%。在許多情況下，采用甲基化特異性PCR檢測DAPK基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)因DAPK基因甲基化導(dǎo)致其轉(zhuǎn)錄后的mRNA表達(dá)量明顯降低，并且在肺癌、胃癌、乳腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤患者的組織和患者的體液標(biāo)本中都已檢測到DAPK基因的異常甲基化現(xiàn)象[5，32]，但其甲基化頻率不盡相同（圖1）。Edgar等[33]指出，抑癌基因SFRP1和DAPK異常甲基化率在32個慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL）樣品中分別占68.8%和50%。Bodoor等[34]也檢測出DAPK基因在CLL樣品中甲基化率約占36%，比抑癌基因p53甲基化率高出2倍之多。Bing等[35]發(fā)現(xiàn)DAPK啟動子區(qū)域甲基化頻率在正常胃組織和胃癌組織樣品中分別約為17.7%、54.8%。Takeuchi等[36]檢測研究95位幼年急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）患者得出，DAPK基因甲基化率占13%，并且相對T型患者，B型DAPK基因甲基化更常見。Harder等[37]揭示，DAPK基因啟動子甲基化在34個肝癌樣品中約占68%，但在16個正常肝組織中，其甲基化約占31%，表明DAPK啟動子甲基化在肝癌患者中時常發(fā)生。此外，F(xiàn)latley等[38]在研究宮頸癌細(xì)胞樣本時得出，DAPK基因受甲基化的細(xì)胞可能更易感染人乳頭瘤病毒（HPV）。

啟動子異常甲基化在細(xì)胞癌變過程中是個早期、頻發(fā)事件，可以作為腫瘤發(fā)生的敏感生物學(xué)標(biāo)志物。Bing等[35]指出，胃癌組織樣品比正常胃組織中DAPK啟動子區(qū)域甲基化頻率高3倍，即伴隨胃致癌的過程，抑癌基因DAPK啟動子甲基化率會上升，故可推測DAPK可作為胃致癌的標(biāo)志。Krajnovic等[39]指出，在32個濾泡性淋巴瘤（FL）樣本中，78%的樣本檢測到DAPK基因異常甲基化，而O-6甲基鳥嘌呤DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（MGMT）基因甲基化占59%，且這兩種基因協(xié)同甲基化可以作為FL疾病復(fù)發(fā)和對藥物抗性的標(biāo)志。同時，Ogawa等[40]研究得出，在非小細(xì)胞性肺癌（NSCLC）和頭頸部鱗狀細(xì)胞癌（HNSCC）細(xì)胞系中，主要因啟動子甲基化導(dǎo)致DAPK基因沉默，使癌細(xì)胞獲得抗表皮生長因子受體（epidermal grow th factor receptor，EGFR）治療藥物如埃羅替尼（erlotinib）、西妥昔單抗（cetuximab）的抗性，故可猜想，在抗EGFR治療藥物的耐受性研究中，DAPK基因可能作為一個新的靶基因研究目標(biāo)。在DAPK完全甲基化且不表達(dá)DAPK的Burkitt淋巴瘤Raji細(xì)胞株中，用5-氮雜胞苷（5-Aza-dc）處理后可導(dǎo)致其去甲基化，從而使Raji細(xì)胞對IFN-γ的凋亡敏感性恢復(fù)。Sato等[41]在犬B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞中也檢測到類似結(jié)果，即用5-氮雜胞苷處理GL-1細(xì)胞后，DAPK基因表達(dá)的mRNA量及IFN-γ誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡均有增加。

Chung等[42]研究中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤時發(fā)現(xiàn)，中樞神經(jīng)細(xì)胞瘤中DAPK基因啟動子甲基化頻率遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤，但DAPK蛋白表達(dá)情況相反。這一研究突出了基因甲基化與蛋白表達(dá)之間存在的差異性。雖然在多個患者樣品中檢測DAPK啟動子區(qū)域甲基化頻率已有很多相關(guān)報道，但可能因研究者得到的患者信息及樣本數(shù)量有限，在同一患者樣品中，同時檢測分析DAPK基因的DNA序列位點突變情況、轉(zhuǎn)錄表達(dá)的mRNA量及運(yùn)用蛋白印跡、免疫組化方法檢測DAPK蛋白量的研究寥寥無幾，有必要在合適的樣本中對這三個層面同時進(jìn)行檢測，從而進(jìn)一步深入了解腫瘤中DAPK基因甲基化的生物學(xué)功能及臨床意義。此外，DAPK甲基化檢測在作為腫瘤標(biāo)志物時，也應(yīng)多考慮是否能夠與其他基因的甲基化聯(lián)合檢測，從而能夠更準(zhǔn)確地為腫瘤診斷服務(wù)。例如，Ahmed等[43]抽取乳腺癌和良性乳腺疾病患者血液提取DNA分析，發(fā)現(xiàn)DAPK和Ras相關(guān)域含蛋白1（ras association domain-containing protein 1，RASSF1）抑癌基因都呈現(xiàn)不同程度的高甲基化現(xiàn)象，是否可以運(yùn)用這2種基因甲基化頻率協(xié)同上升作為乳腺癌早期診斷的標(biāo)志有待更多的研究。對DAPK基因甲基化的研究，可能不僅為早期治療診斷提供服務(wù)，如Kristensen等[44]指出，在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）中，DAPK基因的甲基化和p53突變也有重要的預(yù)后價值。

4 展望

隨著對DNA甲基化研究的不斷深入，各種各樣甲基化檢測方法被開發(fā)出來以滿足不同類型研究的要求，這些方法可分為3類：基因組整體水平的甲基化檢測、基因特異位點甲基化的檢測和利用測序?qū)ふ倚碌募谆稽c[45]。但在DAPK甲基化的研究中，大多運(yùn)用前兩者的研究方法，并且處理方式各異，包括基于PCR的甲基化分析、基于限制性內(nèi)切酶的甲基化分析、基于重亞硫酸鹽的甲基化分析和柱層法等。研究顯示[2]，DAPK在各種腫瘤中甲基化情況的研究方法中，甲基化特異性PCR（methylation-specific PCR，MSP）方法是應(yīng)用最廣泛的，約占72%，這種方法是利用可區(qū)別甲基化和非甲基化的引物通過PCR檢測基因甲基化，其關(guān)鍵是引物設(shè)計。其次是巢式-MSP和RTMSP方法的運(yùn)用，約占15%[2]，因基因檢測或處理方法的不一致，有可能導(dǎo)致結(jié)果的差異性。例如在膽管癌中，運(yùn)用MSP方法檢測DAPK基因啟動子甲基化情況，Yang等[46]發(fā)現(xiàn)其甲基化約占3%，但 Xiaofang等[47]運(yùn)用巢式PCR方式檢測到的DAPK基因啟動子甲基化約占30.6%。因此DAPK基因的甲基化研究亟須在方法上建立一個統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，以便于不同研究數(shù)據(jù)之間的橫向比較。此外，在DAPK基因的甲基化研究中，新甲基化位點的發(fā)現(xiàn)較少，大部分的研究只集中在一個甲基化位點上，是否還有其他甲基化位點，這些位點的功能在不同腫瘤中是否有不同，有待進(jìn)一步探索。

對于導(dǎo)致DAPK基因甲基化的分子機(jī)制，其中一種可能是因為某些未知原因?qū)е碌腄APK基因表達(dá)下降本來作為一種誘因?qū)е氯旧|(zhì)凝聚和組蛋白尾部修飾，進(jìn)而使DAPK啟動子甲基化，最后導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄沉默[48]。這種基因甲基化機(jī)制在乳腺癌細(xì)胞雌激素受體信號通路[49]和前列腺癌細(xì)胞的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶[50]中已被證實。還有一種可能性是如Pulling等[8]指出，DAPK在轉(zhuǎn)錄沉默時存在組織特異性差異。在乳腺癌細(xì)胞中，啟動子2的甲基化頻率較高，但在肺癌細(xì)胞中，受甲基化影響較大的是啟動子1，其甲基化機(jī)制需在不同的細(xì)胞中分別研究，可能存在較大的差異性。

DAPK啟動子甲基化可能作為腫瘤早期診斷、治療、轉(zhuǎn)移和預(yù)后的分子標(biāo)志物[51]，并為未來腫瘤的藥物治療提供分子生物學(xué)機(jī)制。雖然去甲基化藥物在細(xì)胞水平已被證實且取得一定療效，但在臨床應(yīng)用及其作用機(jī)制還有待深入研究。目前，DAPK抗腫瘤和抗炎癥[52]作用也已成為研究的熱點。

［1］Rakyan V,Whitelaw E.Transgenerational epigenetic inheritance[J].Curr Biol,2003,13(1):R6.

［2］Huang Y,Chen L,Guo L,et al.Evaluating DAPK as a therapeutic target[J].Apoptosis,2014,19(2):371-386.

［3］Bialik S,Kimchi A.The death-associated protein kinases:structure,function,and beyond[J].Annu Rev Biochem,2006,75:189-210.

［4］Anjum R,Roux PP,Ballif BA,et al.The tumor suppressor DAP kinase is a target of RSK-mediated survival signaling[J].Curr Biol,2005,15(19):1762-1767.

［5］Inbal B,Cohen O,Polak-Charcon S et al.DAP kinase links the control of apoptosis to metastasis[J].Nature, 1997,390(13):180-184.

［6］Raveh T,Droguett G,Horw itz MS,et al.DAP kinase activates a p19ARF/p53-mediated apoptotic checkpoint to suppress oncogenic transformation[J]. Nat Cell Biol, 2001,3(1):1-7.

［7］Raveh T,Kimchi A.DAP kinase-a proapoptotic gene that functions as a tumor suppressor[J].Exp Cell Res, 2001,264(1):185-192.

［8］Pulling LC,Grimes MJ,Damiani LA,et al.Dual promoter regulation of death-associated protein kinase gene leads to differentially silenced transcripts by methylation in cancer[J].Carcinogenesis,2009,30(12):2023-2030.

［9］Martoriati A,Doumont G,A lcalay M,et al.dapk1,encoding an activator of a p19ARF-p53-mediated apoptotic checkpoint,is a transcription target of p53[J].Oncogene,2005,24(8):1461-1466.

［10］Benderska N,Ivanovska J,Rau TT,et al.DAPK-HSF1 interaction as a positive-feedback mechanism stimulating TNF-induced apoptosis in colorectal cancer cells[J]. J Cell Sci,2014,127(24):5273-5287.

［11］Bajbouj K,Poehlmann A,Kuester D,et al.Identification of phosphorylated p38 as a novel DAPK-interacting partner during TNFalpha-induced apoptosis in colorectal tumor cells[J].Am J Pathol,2009,175(2): 557-570.

［12］Jang CW,Chen CH,Chen CC,et al.TGF-beta induces apoptosis through Smad-mediated expression of DAP-kinase[J].Nat Cell Biol,2002,4(1):51-58.

［13］Benderska N,Schneider-Stock R.Transcription control of DAPK[J].Apoptosis,2014,19(2):298-305.

［14］Gade P,Roy SK,Li H,et al.Critical role for transcription factor C/EBP-beta in regulating the expression of death-associated protein kinase 1[J].Mol Cell Biol,, 2008,28(8):2528-2548.

［15］Kalvakolanu DV.Alternate interferon signaling pathways[J].Pharmacol Ther,2003,100(1):1-29.

［16］Lekstrom-Himes J,Xanthopoulos KG.Biological role of the CCAAT/enhancer-binding protein family of transcription factors[J].JBiol Chem,1998,273(44):28545-28548.

［17］Gade P,Ramachandran G,Maachani UB,et al.An IFN-gamma-stimulated ATF6-C/EBP-beta-signaling pathway critical for the expression of Death Associated Protein Kinase 1 and induction of autophagy[J].Proc Natl Acad Sci U SA,2012,109(26):10316-10321.

［18］Gade P,Manjegowda SB,Nallar SC,et al.Regulation of the death-associated protein kinase 1 expression and autophagy via ATF6 requires apoptosis signal-regulating kinase 1[J].Mol Cell Biol,2014,34(21):4033-4048.

［19］Chakilam S,Gandesiri M,Rau TT,et al.Death-associated protein kinase controls STAT3 activity in intestinal epithelial cells[J].Am J Pathol,2013,182(3):1005-1020.

［20］Hayakawa J,M ittal S,Wang Y,et al.Identification of promoters bound by c-Jun/ATF2 during rapid largescale gene activation follow ing genotoxic stress[J].Mol Cell,2004,16(4):521-535.

［21］Nakatsuka S,Takakuwa T,Tom ita Y,et al.Role of hypermethylation of DAP-kinase CpG island in the development of thyroid lymphoma[J].Lab Invest,2000,80 (11):1651-1655.

［22］Di Croce L,Raker VA,Corsaro M,et al.Methyltransferase recruitment and DNA hypermethylation of target promoters by an oncogenic transcription factor[J].Science,2002,295(5557):1079-1082.

［23］Brenner C,Deplus R,Didelot C,et al.Myc represses transcription through recruitment of DNA methyl transferase corepressor[J].The EMBO J,2005,24(2):336-346.

［24］Collins Y,Dicioccio R,Keitz B,et al.Methylation of death-associated protein kinase in ovarian carcinomas [J].Int JGynecol Cancer.2006,16(Suppl 1):195-199.

［25］Shames DS,M inna JD,Gazdar AF.DNA methylation in health,disease,and cancer[J].Current molecular medicine,2007,7(1):85-102.

［26］M ittag F,Kuester D,Vieth M,et al.DAPK promotor methylation is an early event in colorectal carcinogenesis[J].Cancer Lett,2006,240(1):69-75.

［27］Schneider-Stock R,Kuester D,Ullrich O,et al.Close localization of DAP-kinase positive tumour-associated macrophages and apoptotic colorectal cancer cells[J].J Pathol,2006,209(1):95-105.

［28］Wan Y,Wu XY.[Expression and clinical significance of DAPK1 and CD147 in esophageal squamous cell carcinoma][J].Zhonghua Zhong Liu Za Zhi,2012,34 (1):44-48.

［29］Kim JC,Choi JS,Roh SA,et al.Promoter methylation of specific genes is associated w ith the phenotype and progression of colorectal adenocarcinomas[J].Ann Surg Oncol,2010,17(7):1767-1776.

［30］Lehmann U,Celikkaya G,Hasemeier B，et al.Promoter hypermethylation of the death-associated protein kinase gene in breast cancer is associated w ith the invasive lobular subtype[J].Cancer Res,2002,62(22): 6634-6638.

［31］Rettori MM,de Carvalho AC,Longo AL,et al.TIMP3 and CCNA1 hypermethylation in HNSCC is associated w ith an increased incidence of second primary tumors [J].JTransl Med,2013,11:316.

［32］Tang X,Wu W,Sun SY,et al.Hypermethylation of the death-associated protein kinase promoter attenuates the sensitivity to TRAIL-induced apoptosis in human nonsmall cell lung cancer cells[J].Mol Cancer Res,2004, 2(12):685-691.

［33］Seeliger B,Wilop S,Osieka R,et al.CpG island methylation patterns in chronic lymphocytic leukemia[J]. Leuk Lymphoma,2009,50(3):419-426.

［34］Bodoor K,Haddad Y,A lkhateeb A,et al.DNA hypermethylation of cell cycle(p15 and p16)and apoptotic (p14,p53,DAPK and TMS1)genes in peripheral blood of leukem ia patients[J]. Asian Pac J Cancer Prev,2014,15(1):75-84.

［35］Ye M,Li D,Zhou F,et al.Epigenetic regulation of death-associated protein kinase expression in primary gastric cancers from Chinese patients[J].Eur J Cancer Prev,2012,21(3):241-246.

［36］Takeuchi S,Matsushita M,Zimmermann M,et al.Clinical significance of aberrant DNA methylation in childhood acute lymphoblastic leukemia[J].Leuk Res,2011, 35(10):1345-1349.

［37］Harder J,Opitz OG,Brabender J,et al.Quantitative promotermethylation analysis of hepatocellular carcinoma,cirrhotic and normal liver[J].Int J Cancer,2008, 122(12):2800-2804.

［38］Flatley JE,Sargent A,Kitchener HC,et al.Tumour suppressor gene methylation and cervical cell folate concentration are determ inants of high-risk human papillomavirus persistence:a nested case control study[J]. BMC Cancer,2014,14:803.

［39］Krajnovi?M,Radojkovi?M,Davidovi?R,et al.Prognostic significance of epigenetic inactivation of p16, p15,MGMT and DAPK genes in follicular lymphoma [J].Med Oncol,2013,30(1):441.

［40］Ogawa T,Liggett TE,Melnikov AA,et al.Methylation of death-associated protein kinase is associated w ith cetuximab and erlotinib resistance[J].Cell Cycle,2012, 11(8):1656-1663.

［41］Sato M,Mochizuki H,Goto-Koshino Y,et al.Hypermethylation of the death-associated protein kinase CpG island in canine B-cell lymphoid tumors[J].Vet Immunol Immunopathol,2014,161(3-4):222-231.

［42］Chung CL,Tsai HP,Tsai CY,et al.Differential hypermethylation of death-associated protein kinase promoter in central neurocytoma and oligodendroglioma[J]. Biomed Res Int,2014,2014:506458.

［43］Ahmed IA,Pusch CM,Hamed T,et al.Epigenetic alterations by methylation of RASSF1A and DAPK1 promoter sequences in mammary carcinoma detected in extracellular tumor DNA[J].Cancer Genet Cytogenet, 2010,199(2):96-100.

［44］Kristensen LS,Asmar F,Dimopoulos K,et al.Hypermethylation of DAPK1 is an independent prognostic factor predicting survival in diffuse large B-cell lymphoma[J].Oncotarget,2014,5(20):9798-9810.

［45］顧婷婷,張忠明,鄭鵬生.DNA甲基化研究方法的回顧與評價[J].中國婦幼健康研究,2006,17(6): 555-560.

［46］Yang B,House MG,Guo M,et al.Promoter methylation profiles of tumor suppressor genes in intrahepatic and extrahepatic cholangiocarcinoma[J].Mod Pathol, 2005,18(3):412-420.

［47］Xiaofang L,Kun T,Shaoping Y,et al.Correlation between promoter methylation of p14(ARF),TMS1/ASC, and DAPK,and p53mutation w ith prognosis in cholangiocarcinoma[J].World JSurg Oncol,2012,10:5.

［48］Raval A,Tanner SM,Byrd JC,et al.Downregulation of death-associated protein kinase 1(DAPK1)in chronic lymphocytic leukem ia[J].Cell,2007,129(5):879-890.

［49］Leu YW,Yan PS,Fan M,et al.Loss of estrogen receptor signaling triggers epigenetic silencing of downstream targets in breast cancer[J].Cancer Res,2004,64 (22):8184-8192.

［50］Stirzaker C,Song JZ,Davidson B,et al.Transcriptional gene silencing promoter DNA hypermethylation through a sequential change in chromatin modifications in cancer cells[J].Cancer Res,2004,64(11):3871-3877.

［51］Kalantari M,Osann K,Calleja-Macias IE,et al.Methylation of human papillomavirus 16,18,31,and 45 L2 and L1 genes and the cellular DAPK gene:Considerations for use as biomarkers of the progression of cervical neoplasia[J].Virology,2014,448:314-321.

［52］Lai MZ,Chen RH.Regulation of inflammation by DAPK[J].Apoptosis,2014,19(2):357-363.

R730.2

A

10.11877/j.issn.1672-1535.2015.13.06.04

國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金（31301172）；福建省自然科學(xué)基金（2014J01122）#

（corresponding author），e-mail：yaolinfjfz@gmail.com

2015-03-22）