黃秋葵提取物的抗疲勞活性研究

溫春秀，賈東升，謝曉亮，崔施展，李榮喬，劉靈娣，劉銘（河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

黃秋葵提取物的抗疲勞活性研究

溫春秀，賈東升，謝曉亮*，崔施展，李榮喬，劉靈娣，劉銘
（河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

摘要：研究不同提取溶劑的黃秋葵提取物抗疲勞活性。制備水、乙醇、乙酸乙酯、正丁醇部位黃秋葵提取物，通過(guò)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、測(cè)定血清尿素氮、肝糖原和血乳酸含量，比較不同提取溶劑的黃秋葵提取物抗疲勞活性。水提物及醇提物均可延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，提高肝糖原水平，減少運(yùn)動(dòng)過(guò)后小鼠血乳酸、血清尿素氮的積累，不同提取溶劑的黃秋葵提取物抗疲勞活性強(qiáng)弱順序?yàn)椋核疽掖迹疽宜嵋阴ィ菊〈?。秋葵水提物及醇提物均有明顯抗疲勞活性。

關(guān)鍵詞：黃秋葵；活性部位；抗疲勞

黃秋葵屬于錦葵科秋葵屬一年生草本植物，具有食用價(jià)值同時(shí)具有極高的藥用保健價(jià)值。黃秋葵的根、莖、葉、花、果實(shí)均可食用，黃秋葵含有多糖、黃酮、氨基酸等多種生物活性物質(zhì)及微量元素，具有明顯的補(bǔ)腎益氣，強(qiáng)肝健脾，增強(qiáng)免疫力，抗氧化，抗疲勞活性[1-3]。黃秋葵具有的食用及藥用價(jià)值使其成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。對(duì)于黃秋葵的抗疲勞活性已有進(jìn)行了初步研究，研究表明黃秋葵水提液具有抗疲勞作用[4]，黃秋葵的其他溶劑提取物是否具有抗疲勞活性并未闡述。為了深入研究黃秋葵抗疲勞物質(zhì)的活性成分，本試驗(yàn)比較了不同提取溶劑的黃秋葵提取物抗疲勞活性，探討黃秋葵抗疲勞部位及可能的抗疲勞物質(zhì)，為黃秋葵的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

黃秋葵（河北農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所提供，經(jīng)謝曉亮鑒定為黃秋葵）；C57/BL6小鼠（雄性，體重20 g～25 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（京）2015-0011）；氯仿、正丁醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯（北京化工廠(chǎng)，分析純）；乳酸（LA）測(cè)試盒、尿素氮（BUN）測(cè)試盒、糖原測(cè)試盒（南京建成生物工程研究所）；水為高純水。

755型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海精密儀器有限公司；S2359體育專(zhuān)用秒表：伊商信電子深圳有限公司。

1.2方法

1.2.1黃秋葵提取物的制備

取黃秋葵100 g以50%乙醇進(jìn)行提取，回收乙醇，濃縮，浸膏先后以正丁醇、乙酸乙酯、乙醇進(jìn)行萃取，分別收集正丁醇、乙酸乙酯、乙醇和水部分進(jìn)行濃縮，得各部位提取物[5]。

1.2.2動(dòng)物分組與給藥

取健康小鼠，隨機(jī)分成5組：不同溶劑提取液進(jìn)行灌胃，每種提取液設(shè)置5個(gè)不同濃度分別為20、30、40、50、60 mg/kg及空白組使用生理鹽水，連續(xù)灌胃給藥25 d，建模期間自由飲食和飲水。

1.2.3負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

小鼠末次灌胃60 min后，在小鼠尾根部負(fù)以小鼠體體重5%的鉛皮，放入水深30 cm的游泳箱中游泳，水溫（30±1）℃。當(dāng)小鼠頭部沉入水中經(jīng)10 s后仍不能返回水面視為力竭，用秒表記錄從游泳開(kāi)始至力竭的時(shí)間作為小鼠力竭游泳時(shí)間[6]。

1.2.4血乳酸測(cè)定

小鼠末次灌胃30 min后，于小鼠尾部系一小鼠體重5%的鉛塊，水中游泳10 min，水溫（25±0.5）℃，運(yùn)動(dòng)后休息20 min，眼眶后靜脈叢取血，肝素抗凝，按照試劑盒方法測(cè)定血乳酸濃度[8]。

1.2.5血清尿素氮測(cè)定

小鼠末次灌胃30 min后，將小鼠置于水深30 cm的游泳箱中，水中游泳90 min，水溫（25±0.5）℃，運(yùn)動(dòng)后休息60 min，眼眶后靜脈叢采血，肝素抗凝，2 500 r/min離心15 min，取血漿按照試劑盒方法測(cè)定血尿素氮濃度[9]。

1.2.6肝糖原測(cè)定

小鼠末次灌胃30 min后，脫頸處死，稱(chēng)取肝臟約50 mg，按照試劑盒方法測(cè)定肝臟糖原含量[10]。

1.2.7統(tǒng)計(jì)分析

2　結(jié)果與分析

2.1黃秋葵提取物對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響

黃秋葵提取物對(duì)小鼠游泳時(shí)間的影響見(jiàn)表1。

小鼠負(fù)重游泳時(shí)間可以直接反應(yīng)小鼠運(yùn)動(dòng)耐力，在負(fù)重游泳是需要消耗大量能量，造成體內(nèi)糖原的減少，血乳酸及血尿素氮的積累增加，從而造成機(jī)體的肌肉及中樞系統(tǒng)性疲勞[7]，負(fù)重游泳時(shí)間越長(zhǎng)，表明抗疲勞活性越高。由表1可知，黃秋葵提取物可延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，其中水部位及乙醇部位中高劑量的延長(zhǎng)效果與對(duì)照組比較存在顯著性差異（P＜0.05），說(shuō)明黃秋葵的水部位及乙醇部位具有較好的抗疲勞作用。

表1　不同溶劑提取物對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（±S，min）Table 1　Effect of different extracts on the time of load swimming in mice（±S，min）

表1　不同溶劑提取物對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響（±S，min）Table 1　Effect of different extracts on the time of load swimming in mice（±S，min）

注：*表示與對(duì)照組比較P＜0.05；**表示與對(duì)照組比較P＜0.01。

劑量/ （mg/kg）　空白組　　水組　　乙醇組　　乙酸乙酯組正丁醇組20　12.4±2.4　18.7±3.2*　18.5±3.3*　13.1±2.4　13.2±2.1 30　12.6±1.8 25.3±4.2**23.2±4.5**　14.4±3.1　14.4±1.8 40　11.8±1.6 27.7±6.1**26.8±6.2**　15.3±2.5　14.2±1.5 50　12.7±2.3 30.6±4.4**28.7±5.3**　15.2±3.4　15.5±2.3 60　13.2±2.1 33.7±5.8**32.4±5.7**　15.5±3.2　15.4±2.5

2.2黃秋葵提取物對(duì)血乳酸含量的影響

黃秋葵提取物對(duì)血乳酸含量的影響見(jiàn)表2。

表2　不同溶劑提取物對(duì)小鼠血乳酸含量的影響（±S，mmol/L）Table 2　Effects of different extracts on blood lactic acid content in mice（±S，mmol/L）

表2　不同溶劑提取物對(duì)小鼠血乳酸含量的影響（±S，mmol/L）Table 2　Effects of different extracts on blood lactic acid content in mice（±S，mmol/L）

注：*表示與對(duì)照組比較P＜0.05；**表示與對(duì)照組比較P＜0.01。

劑量/ （mg/kg） 空白組　　水組　　乙醇組　　乙酸乙酯組　正丁醇組20　25.2±2.1　21.7±5.8　22.4±5.7　24.5±3.2　24.9±4.5 30　25.7±2.3　19.6±4.4　17.7±2.3*　24.2±3.4　24.6±2.3 40　25.6±1.8 19.3±2.2*　16.9±2.5**　23.8±3.1　24.5±3.8 50　25.4±2.4 18.7±3.2*　16.5±3.3**　23.4±2.4　24.4±2.1 60　25.8±1.6 18.5±4.1*　16.3±6.2**　22.9±2.5　24.4±3.5

在機(jī)體運(yùn)動(dòng)過(guò)程中由于供氧量不足，造成機(jī)體進(jìn)行無(wú)氧呼吸產(chǎn)生乳酸，乳酸的大量積累會(huì)導(dǎo)致肌肉疲勞，降低運(yùn)動(dòng)過(guò)程中血乳酸濃度可延緩機(jī)體疲勞的發(fā)生，運(yùn)動(dòng)后乳酸含量越低，表明抗疲勞活性越高。由表2可知，黃秋葵水部位及乙醇部位具有明顯的乳酸清除能力，其中水及乙醇中劑量與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05），高劑量與對(duì)照組差異極顯著（P＜0.01），對(duì)血乳酸的清除能力存在明顯的劑量效應(yīng)，具有較強(qiáng)的抗疲勞活性。

2.3黃秋葵提取物對(duì)血清尿素氮的影響

黃秋葵提取物對(duì)血清尿素氮的影響見(jiàn)表3。

血清尿素氮是運(yùn)動(dòng)過(guò)程中氨基酸的代謝產(chǎn)物，血清尿素氮的積累可引起肌肉組織的損傷，造成肌肉疲勞。清除運(yùn)動(dòng)過(guò)程中產(chǎn)生的血清尿素氮，可降低肌肉損傷緩解疲勞。由表3可知，黃秋葵水部位及乙醇部位具有明顯的血清尿素氮清除能力（P＜0.05），具有劑量效應(yīng)。

表3　不同溶劑提取物對(duì)小鼠尿清素氮含量的影響（±S，mmol/L）Table 3　Effect of different extracts on the urea nitrogen content in mice（±S，mmol/L）

表3　不同溶劑提取物對(duì)小鼠尿清素氮含量的影響（±S，mmol/L）Table 3　Effect of different extracts on the urea nitrogen content in mice（±S，mmol/L）

注：*表示與對(duì)照組比較P＜0.05；**表示與對(duì)照組比較P＜0.01。

劑量/ （mg/kg）　空白組　　水組　　乙醇組　　乙酸乙酯組　正丁醇組20　25.2±2.1　21.7±2.8　23.4±3.7　24.5±3.2　25.1±2.5 30　25.7±2.3　20.9±2.1*　21.7±2.3　24.2±3.4　24.9±4.3 40　25.6±1.8　20.1±3.2*　20.2±1.5*　23.9±3.1　24.7±2.8 50　25.4±2.4　19.7±2.8*　19.5±3.3*　23.5±2.4　24.4±3.1 60　25.8±1.6 18.2±2.5**18.8±2.2**　23.3±2.5　24.2±4.5

2.3黃秋葵提取物對(duì)肝糖原的影響

黃秋葵提取物對(duì)肝糖原的影響見(jiàn)表4。

表4　不同溶劑提取物對(duì)小鼠肌糖原含量的影響（±S，mg/g）Table 4　Effects of different extracts on muscle glycogen content in mice（±S，mg/g）

表4　不同溶劑提取物對(duì)小鼠肌糖原含量的影響（±S，mg/g）Table 4　Effects of different extracts on muscle glycogen content in mice（±S，mg/g）

注：*表示與對(duì)照組比較P＜0.05；**表示與對(duì)照組比較P＜0.01。

劑量/ （mg/kg） 空白組　　水組　　乙醇組　　乙酸乙酯組正丁醇組20　10.4±2.4　12.7±3.2　13.5±3.3　10.1±4.4　9.8±2.1 30　9.6±1.8　15.3±4.2**　17.2±4.5*　10.4±3.1　10.1±2.8 40　9.8±1.6　18.7±3.1**19.8±6.2**　10.8±2.5　10.3±2.5 50　9.7±2.3　19.6±4.4**20.7±5.3**　11.2±3.4　10.5±3.3 60　10.2±2.1 21.7±5.8**22.4±5.7**　11.5±3.2　10.9±4.5

在機(jī)體運(yùn)動(dòng)是需消耗大量糖原來(lái)提供能量，黃秋葵提取物可以維持機(jī)體較高的肝糖原水平，減少因供能不足引起的肌肉組織氨基酸水平降低而造成的肌肉疲勞。由圖4可知，不同提取溶劑的黃秋葵提取物在小鼠運(yùn)動(dòng)后肝糖原水平均高于對(duì)照組，其中水部位及乙醇部位的肝糖原水平較高（P＜0.05），乙酸乙酯及正丁醇部位的肝糖原水平與生理鹽水差異不大。

3　結(jié)論與討論

本研究比較了黃秋葵不同提取部位的抗疲勞活性，同過(guò)比較小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，血乳酸、血清尿素氮含量及肝糖原水平，結(jié)果顯示，黃秋葵水部位及乙醇部位延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，清除血乳酸、血清尿素氮及維持較高的肝糖原水平方面均有較強(qiáng)生理活性，表明黃秋葵的水及乙醇部位均有較強(qiáng)的抗疲勞活性，乙酸乙酯及正丁醇部位抗疲勞活性較差?？蛊诨钚暂^好的部位主要集中在水及乙醇部位，推測(cè)黃秋葵中抗疲勞物質(zhì)可能極性較大的物質(zhì)如：多糖、黃酮、多酚類(lèi)物質(zhì)。黃秋葵的抗疲勞作用究竟是單一物質(zhì)還是多種化合物的綜合作用結(jié)果有待進(jìn)一步研究。

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DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.23.043

收稿日期：2015-10-22

基金項(xiàng)目：河北省農(nóng)林科學(xué)院青年基金項(xiàng)目（A2015050101）；河北太行山區(qū)特色功能保健食品的開(kāi)發(fā)研究（11231005D）；河北省中藥材產(chǎn)業(yè)體系項(xiàng)目（11232025D）

作者簡(jiǎn)介：溫春秀（1965—），女（漢），研究員，碩士研究生，主要從事中藥資源、中藥加工研究。

*通信作者：謝曉亮（1962—），男，研究員，博士，主要從事中藥資源、中藥加工研究。

Study on the Anti-fatigue Activity of Extracts from Okra

WEN Chun-xiu，JIA Dong-sheng，XIE Xiao-liang*，CUI Shi-zhan，LI Rong-qiao，LIU Ling-di，LIU Ming
（Institute of Cash Crops of Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Centre of Medicinal Plant Research，Shijiazhuang 050051，Hebei，China）

Abstract：To study the anti-fatigue activity of different extracts from Okra.Preparation of water，ethanol，ethyl acetate，is butanol okra extract，the loaded swimming time of mice and determination of serum urea nitrogen，liver glycogen and blood lactic acid content determine the anti-fatigue activity of different extracts from okra. Water provided material and alcohol extract could prolong the swimming time of the mice，enhance the liver glycogen level，reduce the movement after the mice blood lactic acid，serum urea nitrogen accumulation，the anti-fatigue activity of different extracts from Okra intensity sequence：water＞ethanol＞ethyl acetate＞nbutanol.Okra water extract and ethanol extract had obvious anti fatigue activity.

Key words：okra；active site；anti fatigue