PET無菌線培養(yǎng)基灌裝測試綜述

通常，為了保持飲料的原始風味以及滿足生產中PET瓶滅菌的需要，飲料在灌裝時必須避免過長時間的受熱以及包材輸送、灌裝等暴露作業(yè)時受到微生物污染的機會，企業(yè)一般會選擇適用范圍廣的無菌工藝進行生產。然而無菌生產工藝引入的變量很多，諸如生產區(qū)的設計及其設備布局、生產時的環(huán)境狀況、所有與生產相關的設備及物料的污染狀況、人員操作和衛(wèi)生狀況等，每一個環(huán)節(jié)對最終產品的質量都至關重要。

為確保無菌生產工藝系統(tǒng)中無菌的可靠性和適應性，各項國內外法規(guī)及指導文件均要求通過一定的驗證方法對其進行驗證。目前，多數廠家采用培養(yǎng)基灌裝試驗來證明其無菌工藝的可靠性。培養(yǎng)基灌裝又稱無菌工藝模擬試驗，使用培養(yǎng)基替代產品進行無菌灌裝，從而對無菌工藝、設備、環(huán)境、操作、人員等進行驗證。培養(yǎng)基灌裝在某種意義上是一種挑戰(zhàn)性試驗，甚至比最差情況下的挑戰(zhàn)還要嚴格，幾乎任何情況下微生物在培養(yǎng)基中的增殖都要比在實際產品中更加容易。

1?培養(yǎng)基灌裝測試的前提條件

1.1?管理方面

檢驗室可以驗證包括檢驗室環(huán)境、儀器設備及人員操作等方面。生產線上所有的樣品最終都會送至檢驗室檢驗并進行結果判定，如果檢驗室給出的結果有誤，就會使整個驗證進度停滯不前，甚至走向錯誤的檢查方向。

制定詳細的驗證方案、操作要點。一份實施性強的驗證計劃才能保證所有的人、事向既定方向邁進，保證驗證的最終結果。配置培養(yǎng)基的數量是否足以灌裝足夠的瓶數、灌裝頻率、測試過程中灌裝環(huán)境的殺菌周期、成品的培養(yǎng)條件及培養(yǎng)方式等均關系到培養(yǎng)基灌裝測試的結果。

提前制定并詳細列出有效的、切實可行的可接受標準。

品控、檢驗及操作人員通過無菌工藝及無菌驗證相關培訓灌裝。

1.2?人員方面

具有資質合格的無菌檢查、分析人員。檢驗人員的無菌意識及操作技能需要通過考核，并且考慮一定的檢驗誤差（一般要求考慮1%）。

單機操作人員能夠熟練操作單機，并能解決生產運行過程中的常見問題。

相關人員掌握無菌啟動程序及步驟。

1.3?設備方面

生產線各單機工況正常。

生產線運行流暢（吹瓶機、風送道、灌裝機聯線運行效率達到80%以上）。

各無菌線單機通過無菌檢測及驗證實驗。

聯線無菌水包測試通過。

2?培養(yǎng)基的選擇

PET瓶飲料無菌灌裝工藝驗證選擇LG培養(yǎng)基（Linden?Grain?Medium），因為它可以給潛在的污染源，如酵母、霉菌、病毒等各種微生物提供一個敏感、養(yǎng)分充足的溫床;PH可調節(jié)至與生產線所產飲料的PH一致。LG培養(yǎng)基是澄清透明的淡黃色液體，很容易目視檢查;而且它反映迅速，變化程度高，幾乎所有微生物污染均可被發(fā)現。使用前，建議在檢驗室進行模擬測試，以檢查培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。

3?培養(yǎng)基的滅菌

LG培養(yǎng)基在線滅菌條件需足夠安全以保證其無菌性。一般行業(yè)內對中性LG培養(yǎng)基使用的殺菌溫度均為135℃～142℃，時間均不低于30s。

4?培養(yǎng)基的灌封操作

按照既定生產程序需獲得至少30000瓶培養(yǎng)基。這些瓶子將在30℃或環(huán)境溫度下儲存14天。然后，儲存的瓶子將在光源下作視覺檢驗，以驗證微生物影響（混濁、菌絲生長）。灌封過程要求按照既定程序進行，詳細記錄生產過程，完整進行取樣及分析。

任何灌裝的產品都應該在培養(yǎng)前進行檢查，發(fā)現任何不合格品（如容器密封性存在問題或完整性不好）時，都應該被剔除并記錄（還包括檢查后被損壞的，如向培養(yǎng)箱中轉移的過程中出現的）。在下游輸送鏈上倒瓶或掉下輸送鏈的產品也應被剔除。

儲存培養(yǎng)用的產品須完整裝箱，避免放在框內嚴重擠壓;瓶子須垂直擺放，最多堆放兩層;保溫室須臨近車間。結果檢查時，必須由有經驗的QC人員負責檢查每瓶培養(yǎng)基是否被污染。培養(yǎng)期間定期對灌裝培養(yǎng)基進行目檢，記錄下每次檢出的污染瓶數及出現污染菌的相應跺板號。培養(yǎng)結束，逐瓶檢查有無微生物生長或變渾濁，記錄出現污染的瓶數和被檢查的總瓶數。檢查時將每瓶培養(yǎng)基在明亮光源下仔細目測，透明、澄清、無渾濁的培養(yǎng)基判為無微生物生長;如培養(yǎng)基渾濁或有懸浮的菌絲或菌落，則需作進一步的微生物生長檢查，以確定培養(yǎng)基是否正在染菌。

培養(yǎng)基灌裝測試指標遠遠高于飲料生產要求，屬于絕對無菌的標準，而飲料生產只需達到商業(yè)無菌。培養(yǎng)基灌裝合格標準為通常約定的在95%的置信度下中性LG培養(yǎng)基實際污染率不高于萬分之一。

5?破損產品的排除

瓶、蓋密封不良導致的污染最為普遍，這類培養(yǎng)基不列入污染瓶數。如何排除密封不良導致的污染是培養(yǎng)基灌裝測試成功的要素之一。目前普遍使用的是加壓法檢測（圖1所示）及導電法檢測（圖2所示）。導電法用燒杯配置濃鹽水并將樣品瓶半腰割開，保留瓶子的上半部分，倒掉里面液體，裝入適量（不要過滿）鹽水，并將其倒置，使瓶口浸沒于鹽水中;萬用表調到歐姆檔，將一個表頭置于樣品瓶的鹽水中，另一個置于燒杯的鹽水中讀數;72h后再測一次;若密封不良，萬用表即會測出電阻。由于加壓法為破壞性測試，一般先用導電法檢測后再用加壓法，且前者更為靈敏。

6?小結

培養(yǎng)基灌裝測試驗證一個無菌工藝，全面反映整個生產過程采用無菌工藝生產無菌產品的能力，包括對無菌工藝過程、無菌保證水平的綜合評估（設備、人員、操作、滅菌過程、環(huán)境等等），對無菌操作人員進行資格確認，確認進行重大變更后對無菌工藝的影響，作為問題調查的手段。由于無菌工藝本身的多樣性和復雜性，很難對其中的每個細節(jié)面面俱到，文中僅對培養(yǎng)基灌裝試驗中常見的共性問題作了闡述，愿與同行們商榷，以達共識。