維吾爾藥材驅(qū)蟲斑鳩菊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究△

阿不都瓦爾·阿布拉克 沙拉麥提·艾力 王亞麗

(1.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830049;2.新疆維吾爾自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，新疆 烏魯木齊 830004)

驅(qū)蟲斑鳩菊為維吾爾醫(yī)常用藥材，維吾爾語名為“Kali zire ”，譯音即“卡力 孜然”。其植物基源均為菊科植物驅(qū)蟲斑鳩菊Vernonia anthelmintica Willd. 的成熟果實(shí)［1-3］。我國分布于云南西部。國外分布于印度、巴基斯坦、斯里蘭卡、尼泊爾、阿富汗、緬甸、老撾、馬來西亞等。生于宅旁荒地或路旁，新疆和田縣、阿克蘇地區(qū)有栽培。性質(zhì)為三級末干熱，具有清除過盛黏液質(zhì)，促進(jìn)色素沉著，恢復(fù)皮膚顏色，祛濕消腫，散寒止痛，驅(qū)蟲等功效。臨床用于白癜風(fēng)，濕寒性炎腫，濕痹疼痛，腸道寄生蟲等癥。目前以其為主藥研制的單味和復(fù)方制劑有注射劑、軟膏、擦劑、丸劑、片劑等［4-6］。衛(wèi)生部藥典會(huì)編《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-維吾爾藥分冊》(1998 年)收載了驅(qū)蟲斑鳩菊，只有性狀和顯微鑒別項(xiàng)。本標(biāo)準(zhǔn)修訂了基源、性狀項(xiàng)，增加了薄層色譜鑒別、水分、總灰分、酸不溶性灰分、含量測定等項(xiàng)，使質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)得到了全面提高。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：島津LC- 20AT 高效液相色譜儀，SPD-M10AVP 二極管陣列檢測器，Lab solution 色譜工作站(日本島津);CPA 225D 型電子分析天平(德國sartorius 公司)中草藥粉碎機(jī)(德國IKA)，定量毛細(xì)管(美國Drummond Scientific Company)，OLYMPUS BX- 51 生物顯微照相系統(tǒng)(日本)，CAMAG REPROSTAR3 薄層色譜成像系統(tǒng)(瑞士卡瑪柯公司);KLZ-UP 超純水儀(臺灣艾柯成都康寧實(shí)驗(yàn)專用純水設(shè)備廠)。KUDOS SK7210LHC 型超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)

1.2 試藥：乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。對照品：綠原酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110753-200413，供含量測定用)。樣品：驅(qū)蟲斑鳩菊樣品11 批，經(jīng)自治區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所蘇來曼·哈力克主任藥師鑒定均為菊科植物驅(qū)蟲斑鳩菊Vernonia nthelmintica Willd.的成熟果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀：本品呈倒圓錐形，長4 ～6mm，直徑1 ～2mm，表面棕色至墨綠色，頂端平截，下端稍細(xì)。具10 條縱向突起棱肋，用放大鏡觀察，棱肋處被短柔毛。氣特異，味極苦。

2.2 顯微鑒別：橫切面：外果皮細(xì)胞l 列，方形，在棱脊處可見棕色單細(xì)胞和叉狀非腺毛，在肋間凹陷處有棕黃色卵形或乳頭狀單細(xì)胞腺毛。中果皮細(xì)胞多層，棱脊處中央有維管束，木質(zhì)部內(nèi)側(cè)有石細(xì)胞群和纖維群散在，最內(nèi)側(cè)有石細(xì)胞帶，從棱脊一直延伸與另一棱脊石細(xì)胞帶相連，在每個(gè)棱脊處斷開，呈V 字形。薄壁細(xì)胞中含眾多草酸鈣方晶和柱晶。內(nèi)果皮細(xì)胞黃棕色。種皮細(xì)胞2 層，黃棕色。胚乳不發(fā)達(dá)，為2 ～3 層薄壁細(xì)胞，中央有子葉2 枚，子葉為長圓形，外側(cè)有1 層方形細(xì)胞，內(nèi)有長方形細(xì)胞，其間有維管束。(見圖1)

粉末：粉末棕黃色，石細(xì)胞為類圓形、橢圓形或紡錘形，成群或單個(gè)散在，棕黃色，細(xì)胞壁厚，直徑20 ～35μm，長120μm，孔溝明顯。腺毛為單細(xì)胞卵形，長23 ～25μm。非腺毛單一或呈叉狀，長達(dá)160μm。螺紋導(dǎo)管直徑15 ～25μm。果皮細(xì)胞含有方晶和柱晶。種皮細(xì)胞黃棕色，細(xì)胞壁形狀特異，呈網(wǎng)紋狀。胚乳細(xì)胞多角形，內(nèi)含眾多油滴。

圖1

2.3 薄層色譜鑒別 取本品粉末2g，加甲醇20mL，超聲提取20min，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL 使溶解，作為供試品溶液。另取綠原酸對照品適量，加甲醇制成每1mL 含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典2010年版一部》附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液20μL，對照品溶液5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7：2.5：2.5)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見圖2。

圖2

2.4 雜質(zhì)：按(《中國藥典2010 年版一部》附錄ⅨA)規(guī)定測定樣品，雜質(zhì)量為0.5% ～12.3%，平均值為4.6%(n =11)。

2.5 水分：按(《中國藥典2010 年版一部》附錄ⅨH)第一法規(guī)定測定，結(jié)果水分含量為5.5% ～6.7%，平均值為6.3% (n=11)。

2.6 總灰分：按(《中國藥典2010 年版一部》附錄ⅨK)規(guī)定測定，結(jié)果總灰分為5.2% ～11.4%，平均值為7.7% (n=11)。

2.7 酸不溶性灰分：按(《中國藥典2010 年版一部》附錄ⅨK)規(guī)定，結(jié)果酸不溶性灰分為0.2% ～6.1%，平均值為2.5% (n=11)。

2.8 重金屬及有害元素：按(《中國藥典2010 年版一部》附錄ⅨB)(原子吸收分光光度法)規(guī)定測定樣品。重金屬及有害元素均未超出藥典規(guī)定限度。

2.9 含量測定

2.9.1 色譜條件：色譜柱為Agilent TC-C18 (4.6mm ×150mm ，5μm);流動(dòng)相以乙腈為A，以0.2%磷酸溶液為B按表1 梯度洗脫;檢測波長：280nm;流速：1.0mL/min ，柱溫：30℃。

表1 梯度洗脫流動(dòng)相比例

2.9.2 對照品溶液的制備：精密稱取綠原酸對照品適量，加75%甲醇制成每1mL 含30μg 的溶液，作為對照品溶液。

2.9.3 供試品溶液制備 取本品粉末(過三號篩)約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理(功率350W，頻率59kHz)60min，放冷，再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。

2.9.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：精密稱取綠原酸對照品適量，加75%甲醇適量溶解，搖勻，制成每mL 含綠原酸1.218μg、5.22μg、15.225μg、30.45μg、60.9μg、91.35μg 的系列濃度對照品溶液，分別進(jìn)樣10μL，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y =30454X-5743.7，r2 =0.9999。綠原酸在1.218μg ～91.35μg 范圍內(nèi)，有良好的線性關(guān)系。

2.9.5 精密度試驗(yàn)：精密吸取供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6 次測定綠原酸的峰面積值，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果綠原酸的RSD=0.0709%，顯示精密度良好。

2.9.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，室溫下放置，每隔2h，連續(xù)測定綠原酸的峰面積值，計(jì)算RSD 為0.15%，表明供試品溶液室溫下36h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.9.7 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品6 份，照前述方法測定，結(jié)果綠原酸的峰面積的RSD 為0.41%，表明重復(fù)性良好。

2.9.8 回收率試驗(yàn)：取已測定量1.0g，共9 份，精密綠原酸對照品溶液(0.0816mg·mL-1)4mL、5mL、6mL，按上述色譜條件下測定，計(jì)算回收率。綠原酸平均回收率為102.5%，RSD 為1.25%。

2.9.9 樣品的測定 分別精密稱取11 批不同產(chǎn)地、不同采集期驅(qū)蟲斑鳩菊藥材粉末各1g，按正文方法測定，記錄HPLC 圖譜，外標(biāo)法計(jì)算含量，結(jié)果綠原酸含量為0.074%～0.184%，平均0.110%(n=11)。

3 討論

3.1 雜質(zhì)、水分、總灰分和酸不溶性灰分是平價(jià)藥材質(zhì)量的主要參數(shù)。相應(yīng)的限度是水分必要的。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，規(guī)定其雜質(zhì)不得過6%，水分不得過8.0%，總灰分不得過10.0%，酸不溶性灰分不得過3.0%。重金屬及有害元素均未超過百萬分之十，暫不在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中設(shè)置此項(xiàng)目。

3.2 本試驗(yàn)中多次探索流動(dòng)相，最終選擇梯度洗脫以確保峰形較好、基線平穩(wěn)、保留時(shí)間穩(wěn)定，雜質(zhì)峰較少。

3.3 上述研究項(xiàng)目內(nèi)容全面，方法簡便快速，能有效控制維藥材驅(qū)蟲斑鳩菊的質(zhì)量。

［1］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)-維吾爾藥分冊［S］. 烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1998，47.

［2］國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草-維吾爾藥卷［M］.上海：上?？萍汲霭嫔?，2005：164-165.

［3］中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志［M］.第74 卷.北京，科學(xué)出版社，1979：08.

［4］中國藥品生物制品檢定所等.中國民族藥志［M］.第1卷.人民衛(wèi)生出版社，1990;249-252.

［5］新疆植物志編委會(huì). 新疆植物志［M］. 第5 卷. 新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：473.

［6］劉勇民，沙吾提. 衣克木. 維吾爾藥藥志［M］. 烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1993;207.