獼猴桃抗?jié)儾』蜻B鎖SSR分子標(biāo)記初步研究

易盼盼，樊紅科,雷玉山,王 飛

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 園藝學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2 陜西省農(nóng)村科技開發(fā)中心，陜西 西安 710054)

獼猴桃抗?jié)儾』蜻B鎖SSR分子標(biāo)記初步研究

易盼盼1，樊紅科2,雷玉山2,王 飛1

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 園藝學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2 陜西省農(nóng)村科技開發(fā)中心，陜西 西安 710054)

【目的】 研究與獼猴桃抗?jié)儾』蜻B鎖的SSR分子標(biāo)記，為獼猴桃抗病育種提供早期分子篩選標(biāo)記。【方法】 以易感病的雌株西選二號(hào)和抗病的雄株SX45872雜交F1代的198株群體以及40份獼猴桃材料為試材，利用離體接種法進(jìn)行抗性鑒定。利用SSR(Simple sequence repeat)技術(shù)，結(jié)合集群分類分析法 (Bulked segregation analysis，BSA)進(jìn)行獼猴桃抗?jié)儾』?PR)分子標(biāo)記篩選。【結(jié)果】 抗性鑒定結(jié)果表明，獼猴桃潰瘍病抗/感病分離比符合由1對(duì)主效基因控制的1∶1分離比例。通過對(duì)51對(duì)SSR引物的篩選，獲得了與抗?jié)儾』蜻B鎖的SSR分子標(biāo)記UDK97-428116；將獲得的SSR標(biāo)記在40份獼猴桃材料中進(jìn)行驗(yàn)證，分子標(biāo)記結(jié)果與離體枝條接種結(jié)果一致率達(dá)95.5%，從而驗(yàn)證了該標(biāo)記的可靠性?！窘Y(jié)論】 SSR標(biāo)記UDK97-428116可用于獼猴桃材料潰瘍病抗性鑒定和分子標(biāo)記輔助育種。

獼猴桃；潰瘍病；抗性基因；SSR標(biāo)記；離體接種

獼猴桃潰瘍病是一種由丁香假單胞桿菌(Pseudomonassyringaepv.actinidae)引起的全球性細(xì)菌性病害，該病害易造成獼猴桃大面積死亡[1-7]。目前控制獼猴桃潰瘍病的主要措施是化學(xué)防治,然而由于病原菌的抗藥性以及環(huán)境污染等問題,化學(xué)防治的局限性日益突出。因此選育和利用抗病品種是控制潰瘍病最根本、有效的手段[8]。鑒定獼猴桃種質(zhì)資源對(duì)細(xì)菌性潰瘍病的抗性是抗病育種的關(guān)鍵。

目前，對(duì)于獼猴桃潰瘍病的研究多集中在病原分類、病害防治、抗病生理機(jī)制等方面。王忠肅等[9]、朱曉湘等[10]、承河元等[11]、Scortichini等[12]、Gallelli等[13]、Kerry等[14]對(duì)獼猴桃潰瘍病病原菌的分類鑒定進(jìn)行了研究。趙利娜等[15]對(duì)來源于不同地區(qū)的獼猴桃潰瘍病菌菌種進(jìn)行了分子鑒定和致病力分析，結(jié)果表明不同菌種致病力有差異，中國(guó)獼猴桃潰瘍病致病菌為丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種。申哲等[16]對(duì)陜西關(guān)中地區(qū)獼猴桃潰瘍病進(jìn)行了初步調(diào)查。李淼等[17-18]通過田間定點(diǎn)抗病性調(diào)查與生理研究,報(bào)道了不同獼猴桃品種對(duì)細(xì)菌性潰瘍病的抗病性及生理機(jī)制。綜觀現(xiàn)有的相關(guān)研究，尚未見關(guān)于獼猴桃抗?jié)儾』騍SR分子標(biāo)記的研究報(bào)道。為此，本研究利用西選二號(hào)與SX45872雄株雜交的F1代群體，對(duì)獼猴桃抗?jié)儾』?PR)進(jìn)行了SSR標(biāo)記，以期為進(jìn)一步開展獼猴桃抗?jié)儾》肿訕?biāo)記輔助選擇育種提供參考。

1 材料與方法

1.1 獼猴桃雜交F1代潰瘍病抗性鑒定

雜交F1代潰瘍病抗性鑒定材料為16年生的抗病雄株SX45872和感病雌株西選二號(hào)于2002年雜交授粉的198株F1代實(shí)生苗，材料取自陜西省西安市獼猴桃試驗(yàn)站。供試菌株為2012-04從試驗(yàn)站感病紅陽(yáng)獼猴桃病枝上分離出的致病菌，該病原為丁香假單胞桿菌獼猴桃致病變種(菌種的16S rDNA序列已上傳GenBank，登錄號(hào)JX282390.1)。致病性潰瘍病菌的培養(yǎng)參照方中達(dá)[19]的方法進(jìn)行。

采集F1代獼猴桃材料1年生健康枝條，取中部20～30 cm枝段，兩端用封剪油處理防止失水，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行離體接種鑒定。參照任欣正[20]的方法進(jìn)行接種，每份材料接種15根枝條，3次重復(fù)，接種前先用體積分?jǐn)?shù)70%酒精表面消毒,而后用消毒打孔器(打孔器直徑8 mm，面積為50.2 mm2)造成等體積傷口，用一次性注射器于傷口處接種3×108CFU/mL孢子菌液100 μL，接種后的枝條置于20 ℃下恒溫保濕，24 h后逐日觀察發(fā)病情況，連續(xù)觀察至20 d，統(tǒng)計(jì)感病率(接種20 d 時(shí)感病枝條數(shù)占總枝條數(shù)的百分比)。獼猴桃離體枝條潰瘍病分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0 級(jí)，枝條感病率≤3.3%；1級(jí)，3.3%<枝條感病率≤10%；2級(jí)，10%<枝條感病率≤40%；3級(jí)，40%<枝條感病率≤70%；4級(jí)，枝條感病率>70%。計(jì)算病情指數(shù)：病情指數(shù)=∑(各級(jí)病枝數(shù)×該級(jí)代表值)/(接種總枝數(shù)×發(fā)病最高一級(jí)的代表數(shù)值)×100[21]。獼猴桃病情指數(shù)≤1.67，判為高抗材料；1.67<病情指數(shù)≤6.7，判為抗病材料；6.7<病情指數(shù)≤20，判為中間型材料；20<病情指數(shù)≤73.3，判為感病材料；病情指數(shù)>73.3，判為高感材料。將病情指數(shù)≤20的獼猴桃材料(包括高抗、抗病及中間型材料)記為抗病材料，病情指數(shù)>20的(包括感病和高感獼猴桃材料)記為感病材料。

1.2 40份獼猴桃材料潰瘍病抗性鑒定

從2002年感病雌株西選二號(hào)和抗病雄株SX45872雜交開始到2012年，期間在198株獼猴桃雜交后代雄株上進(jìn)行開花多、花期長(zhǎng)、花粉量大的株系選擇，在雌株上進(jìn)行果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)與外觀性狀優(yōu)良的株系選擇，同時(shí)淘汰感染潰瘍病嚴(yán)重的材料，最終選擇出有利用價(jià)值的YZ31012、1號(hào)雄株、3號(hào)雄株、QM91136、LF31023、1號(hào)雌株、2號(hào)雌株、4號(hào)雌株共8種材料用于試驗(yàn)。同時(shí)選用野生獼猴桃材料軟棗獼猴桃、毛花獼猴桃、藍(lán)天實(shí)生、野生雄株、商縣中華、太白美味、1號(hào)雄株、3號(hào)雄株及生產(chǎn)上常用的秦美、金農(nóng)、金鎖、海沃德、華優(yōu)、徐香、秋明、晨光、金早、金桃、豫黃一號(hào)、金霞、金陽(yáng)、豫黃二號(hào)、黃金果雄株、臍紅、晚紅、西選二號(hào)、紅陽(yáng)雄株、翠香、楚紅、紅陽(yáng)、金艷、黃金果用于鑒定。

對(duì)上述40份獼猴桃材料進(jìn)行離體枝條潰瘍病抗性鑒定，鑒定方法同1.1.1節(jié)。

1.3 獼猴桃抗?jié)儾』騍SR標(biāo)記的篩選及驗(yàn)證

1.3.1 抗?jié)儾』騍SR引物的篩選 利用集群分類分析法(BSA法)篩選特異標(biāo)記。

(1)基因組DNA提取和基因池構(gòu)建。2011年春季取1年生枝條上的健康嫩葉，采用簡(jiǎn)易CTAB法[22]提取基因組DNA，經(jīng)RNase A消化處理，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)，將檢測(cè)合格樣品的質(zhì)量濃度調(diào)至50 ng/μL,-20 ℃保存?zhèn)溆?。參照Michelmore等[23]的方法，從雜交F1代中取抗病(感病率小于10%)和感病(感病率大于40%)材料的DNA各8份，將其分別等量混合，組成高抗基因池和高感基因池。

(2)SSR引物的篩選。選用Huang等[24]的40對(duì)獼猴桃微衛(wèi)星引物(UDK96-001、UDK96-009、UDK96-013、UDK96-015～UDK96-020、UDK96-022、UDK96-023、UDK96-026、UDK96-028、UDK96-030、UDK96-033～UDK96-035、UDK96-037、UDK96-39、UDK96-40、UDK97-401～UDK97-409、UDK97-411～UDK97-416、UDK97-419～UDK97-422、UDK97-424)及作者根據(jù)CNBI數(shù)據(jù)庫(kù)中已報(bào)道的獼猴桃序列，利用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)的11對(duì)引物(UDK97-426～UDK97-436)作為供篩選引物。引物由上海Sangon公司合成。

提取親本西選二號(hào)和SX45872DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，初步篩選出能從兩者中擴(kuò)增出多態(tài)性DNA片段的引物。PCR反應(yīng)體系為20 μL，包括10×PCR Buffer 2.0 μL，25 mmol/L MgCl21.2 μL，2 mmol/L dNTPs 2.0 μL，10 μmol/L引物1 μL，5 U/μLTaq聚合酶 0.2 μL，20 ng模板DNA，用雙蒸水補(bǔ)足體系到20 μL。PCR反應(yīng)程序：94 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性1 min，48.5～52 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，35個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，經(jīng)硝酸銀染色后觀察、照相[25]。

用西選二號(hào)和SX45872DNA、F1代高抗和高感基因池及其組成材料的DNA為模板，用所選引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，試驗(yàn)方法同上，以篩選與獼猴桃抗?jié)儾』蜻B鎖的SSR標(biāo)記，試驗(yàn)重復(fù)2～3次。

1.3.2 抗?jié)儾』騍SR標(biāo)記的驗(yàn)證 提取40份獼猴桃材料的DNA作為模板，用所選SSR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，試驗(yàn)方法同1.3.1節(jié)。將試驗(yàn)結(jié)果與40份獼猴桃材料的離體枝條潰瘍病抗性鑒定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，以驗(yàn)證SSR標(biāo)記是否與獼猴桃抗?jié)儾』蛳嚓P(guān)，試驗(yàn)重復(fù)2～3次。

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行方差分析及數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 獼猴桃雜交F1潰瘍病抗性鑒定

2.2 40份獼猴桃的潰瘍病抗性鑒定

對(duì)40份獼猴桃材料進(jìn)行潰瘍病抗性鑒定，結(jié)果見表1。由表1可以看出，軟棗、毛花，完全不感病，屬于高抗資源；QM91136、啞特、金魁、LF31023、YZ31012、藍(lán)田實(shí)生、野生雄株、太白美味、1號(hào)雄株和3號(hào)雄株抗病，為抗病資源；秦美、華優(yōu)、徐香、金農(nóng)、金鎖、海沃德、晨光、金早、秋明和2號(hào)雌株，不同氣候環(huán)境、海拔、樹勢(shì)等會(huì)對(duì)其造成影響，有感病情況發(fā)生但不嚴(yán)重，屬于中間型；金桃、豫黃一號(hào)、商縣中華、金霞、金陽(yáng)、4號(hào)雌株、豫黃二號(hào)、黃金果雄株感病；而臍紅、晚紅、西選二號(hào)、紅陽(yáng)雄株、翠香、1號(hào)雌株、楚紅、紅陽(yáng)、金艷、黃金果感病嚴(yán)重，有菌膿溢出，屬于高感類型。

表1 40份獼猴桃材料潰瘍病抗性鑒定結(jié)果Table 1 Identification of resistance against canker resistance of 40 kiwifruit materials

續(xù)表1 Continued table 1

注：HR.高抗；R.抗病；M.中間型；S.感??；HS.高感。

Note:HR.High-resistance;R.Resistance;M.Middle-susceptibility;S.Susceptibility;HS.High-susceptibility.

2.3 獼猴桃抗?jié)儾』騍SR標(biāo)記的篩選

以感病親本西選二號(hào)和抗病親本SX45872DNA為模板，通過PCR擴(kuò)增，對(duì)引物進(jìn)行初步篩選，結(jié)果表明，在51對(duì)引物中能夠擴(kuò)增出具有多態(tài)性條帶的引物有7對(duì)(占13.7%)，其中引物UDK97-428 SSR (正向序列：5′-ACAGTCGAGTTGGCAATATG-3′，反向序列：5′-AGGAATCACCTGTGTTAGTG-3′)能夠在親本間擴(kuò)增出差異條帶，抗病雄株SX45872DNA可擴(kuò)增出116 bp位點(diǎn)條帶，而感病雌株西選二號(hào)DNA未擴(kuò)增出該條帶(圖1)。

采用BSA法，用UDK97-428引物篩選差異條帶，結(jié)果在116 bp處高抗池和高感池有1個(gè)明顯的差異條帶(圖2)。初步判斷這個(gè)位點(diǎn)與PR基因連鎖。

圖1 部分引物對(duì)獼猴桃感病雌株西選二號(hào)和抗病雄株SX45872的擴(kuò)增結(jié)果M.20 bp DNA Marker；1,3,5,7,9,11,13,15,17,19.依次為引物UDK97-427～UDK97-433、UDK96-013、UDK97-434和UDK97-435對(duì)感病雌株西選二號(hào)擴(kuò)增結(jié)果；2,4,6,8,10,12,14,16,18,20.依次為引物UDK97-427～UDK97-433、UDK96-013、UDK97-434和UDK97-435對(duì)抗病雄株SX45872擴(kuò)增結(jié)果；箭頭所指為抗病基因標(biāo)記片段位點(diǎn)Fig.1 Amplification of Xixuan No.2 and SX45872 by some pair primersM.20 bp DNA marker;1,3,5,7,9,11,13,15,17,19 are amplification of resistance male Xixuan No.2 by those pair primers, in the order are UDK97-427-UDK97-433,UDK96-013,UDK97-434 and UDK97-435;2,4,6,8,10,12,14,16,18,20 are amplification of disease female SX45872 by those pair primers,in the order are UDK97-427-UDK97-433,UDK96-013,UDK97-434 and UDK97-435.Arrow indicates the site of resistance marker fragment

2.4 獼猴桃抗?jié)儾』騍SR標(biāo)記的驗(yàn)證

利用引物UDK97-428對(duì)40份獼猴桃材料的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果(圖3及表1)表明，毛花、軟棗、QM91136、啞特、金魁、LF31023、YZ31012、藍(lán)天實(shí)生、野生雄株、1號(hào)雄株、太白美味、3號(hào)雄株、華優(yōu)、徐香、秦美、金農(nóng)、金鎖、海沃德、晨光、金早、秋明等21份獼猴桃材料中存在UDK97-428116(暫命名)標(biāo)記片段，而晚紅、金艷、楚紅、紅陽(yáng)、金陽(yáng)、臍紅、金桃、紅陽(yáng)雄株、金霞、西選二號(hào)、黃金果雄株、黃金果、豫黃一號(hào)、商縣中華、翠香、1號(hào)雌株、4號(hào)雌株、2號(hào)雌株、豫黃二號(hào)等19份獼猴桃材料不存在該標(biāo)記。將引物UDK97-428對(duì)40個(gè)獼猴桃材料擴(kuò)增結(jié)果(表2)與離體枝條接種結(jié)果(表1)進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在高抗、抗病和中間型獼猴桃材料中，除2號(hào)雌株外都存在UDK97-428116標(biāo)記位點(diǎn)，而感病及高感獼猴桃材料都不存在該標(biāo)記位點(diǎn)(圖3)，2種方法鑒定結(jié)果的一致率達(dá)95.5%。表明分子標(biāo)記結(jié)果與人工離體枝條鑒定結(jié)果基本一致，證明UDK97-428116可以作為獼猴桃抗?jié)儾』虻腟SR標(biāo)記。

圖2 引物UDK97-428對(duì)獼猴桃F1分離群體(部分個(gè)體)及其父母本的擴(kuò)增結(jié)果M.20 bp DNA Marker；♂.抗病雄株SX45872；♀.感病雌株西選二號(hào)；R.高抗基因池；S.高感基因池；1～8.抗病個(gè)體；9～16.感病個(gè)體；箭頭所指為抗病基因標(biāo)記片段位點(diǎn)Fig.2 Amplification of individuals from the F1 population of Xixuan No.2 and SX45872 with UDK97-428M.20 bp DNA Marker;♂.Resistant male (SX45872);♀.Diseased female (Xixuan No.2); R.DNA pool of resistance;S.DNA pool of susceptible;1-8.Individuals with resistance; 9-16.Individuals with susceptibility.Arrow indicates the site of resistance marker fragment

表2 40份獼猴桃材料SSR標(biāo)記結(jié)果統(tǒng)計(jì)Table 2 Statistical results of SSR markers of 40 kiwifruit germplasm resources

續(xù)表2 Continued table 2

注：+.有條帶；-.無條帶。

Note:+.Has band;-.No band.

圖3 UDK97-428對(duì)40份獼猴桃材料的擴(kuò)增結(jié)果M.20 bp DNA Marker;1～40.品種編號(hào),同表1；箭頭所指為抗病的標(biāo)記片段Fig.3 Amplification of 40 kiwifruit germplasm resources with UDK97-428M.20 bp DNA Marker;1-40.Numbers of germplasm resources are same to Table 1;Arrow indicates the site of disease-resistance marker fragment

3 討 論

陜西秦嶺北麓是我國(guó)獼猴桃主產(chǎn)區(qū)，近年來，潰瘍病成為獼猴桃栽培中的毀滅性病害，已嚴(yán)重影響到獼猴桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[16]。王振榮等[8]認(rèn)為，栽培抗病品種是防治潰瘍病的最有效手段，抗病種質(zhì)資源的篩選、研究與利用是獼猴桃抗?jié)儾∮N的基礎(chǔ)。因此，獼猴桃潰瘍病的鑒定和抗性資源的系統(tǒng)篩選對(duì)獼猴桃產(chǎn)業(yè)的發(fā)展非常重要。本研究通過對(duì)獼猴桃雜交后代進(jìn)行潰瘍病抗性表型遺傳分析，初步統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)獼猴桃潰瘍病抗/感病分離比符合由1 對(duì)主效基因控制的1∶1的分離比例。

分子標(biāo)記用于輔助選擇育種可提高選擇的準(zhǔn)確性和效率，縮短育種年限。前人研究表明，分子標(biāo)記技術(shù)結(jié)合BSA 法是篩選與目的基因緊密連鎖的分子標(biāo)記的一個(gè)有效方法[25]。王剛剛等[26]利用SSR 技術(shù)，結(jié)合BSA 法，獲得了與果實(shí)酸/低酸性狀緊密連鎖的SSR Hi01e10標(biāo)記。在獼猴桃抗?jié)儾』虻难芯可?，李淼等[27]對(duì)6種獼猴桃種質(zhì)資源進(jìn)行RAPD分析發(fā)現(xiàn)，在引物S1053擴(kuò)增的圖譜中，抗病資源可擴(kuò)增出1 458 bp DNA片段，而感病資源未擴(kuò)增出該片段，由此推斷該片段與獼猴桃抗?jié)儾∠嚓P(guān)。本研究利用SSR技術(shù)結(jié)合BSA法，從51對(duì)隨機(jī)引物中篩選出了1對(duì)可以擴(kuò)增出特異性DNA片段的引物，獲得了與獼猴桃抗?jié)儾』蛳嚓P(guān)的SSR標(biāo)記UDK97-428116。

為了進(jìn)一步證實(shí)SSR標(biāo)記UDK97-428116與獼猴桃抗?jié)儾』蛴嘘P(guān)，本研究利用UDK97-428引物對(duì)40份獼猴桃材料的DNA進(jìn)行SSR擴(kuò)增，并將擴(kuò)增結(jié)果與人工接種鑒定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在高抗和抗病獼猴桃材料中均含有UDK97-428116標(biāo)記片段；而感病和高感獼猴桃材料不存在該標(biāo)記片段；中間型獼猴桃材料中除了2號(hào)雌株，其他9份中間型材料均含有UDK97-428116標(biāo)記片段。說明該片段與獼猴桃潰瘍病抗性有關(guān)。應(yīng)用SSR技術(shù)和離體枝條接種法進(jìn)行獼猴桃潰瘍病抗性目標(biāo)基因研究存在主觀上的誤差，不可能準(zhǔn)確分析出特征片段與抗病基因的相關(guān)程度，因此獼猴桃抗?jié)儾』虻难芯咳孕柽M(jìn)一步深入。下一步應(yīng)對(duì)SSR特異片段進(jìn)行克隆、測(cè)序，然后用轉(zhuǎn)基因方法轉(zhuǎn)入潰瘍病感病植株內(nèi)，再用離體枝條接種法對(duì)轉(zhuǎn)基因獼猴桃進(jìn)行抗性驗(yàn)證。

本研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)秦巴山區(qū)野生獼猴桃資源潰瘍病抗性較好， 如野生雄株、太白美味；雜交后代中有潰瘍病抗性較強(qiáng)但果實(shí)品質(zhì)一般的材料，如YZ31012；也有潰瘍病抗性強(qiáng)且果實(shí)品質(zhì)優(yōu)良的材料，如QM91136和LF31023；而一些栽培品種潰瘍病抗性較低，如紅陽(yáng)、黃金果、西選二號(hào)、金艷等。因此，要實(shí)現(xiàn)抗病育種，對(duì)野生獼猴桃資源和雜交后代綜合性狀優(yōu)良株系的篩選與利用不容忽視，如對(duì)本試驗(yàn)抗性良好的QM91136、LF31023、YZ31012，可進(jìn)一步研究其抗?jié)儾∵z傳機(jī)制以及品質(zhì)特性，并在潰瘍病抗性育種以及優(yōu)良品種選育中加以利用。

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Priliminary study on SSR marker of gene linkage againstPseudomonassyringaepv.actinidae

YI Pan-pan1,FAN Hong-ke2,LEI Yu-shan2,WANG Fei1

(1CollegeofHorticulture,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China;2ShaanxiRuralScienceandTechnologyDevelopmentCenter,Xi’an,Shaanxi710054,China)

【Objective】 The study investigated SSR marker of gene linkage against kiwifuit canker disease to provide molecular marker for breeding of kiwifruit with resistance. 【Method】 198 progenies in F1generation of the susceptible female Xixuan No.2 and the disease resistance male plant SX45872and 40 kiwifruit materials were selected for identification of resistance usinginvitroinoculation method.Then simple sequence repeat (SSR) technique combined with bulk segregation analysis (BSA) was used to conduct marker screening of canker disease resistance gene (PR) in kiwifruit.【Result】 The identification of resistance showed that the separation of kiwifruit canker disease resistance was in accordance with the 1∶1 segregation ratio controlled by a pair of main effect genes.A total of 51 primer pairs were screened,and an SSR marker (UDK97-428116) closely linked toPRgene was identified.The validity of this SSR marker was verified in 40 kiwifruit materials with the consistent rate of 95.5% compared to SSRinvitroinoculation branches.【Conclusion】 The SSR marker UDK97-428116can be used as molecular marker to assist selection of resistance to kiwifruit canker.

kiwifruit;canker;resistance gene;SSR marker;invitroinoculation

2013-12-06

陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程項(xiàng)目(2011KTCL02-06)；陜西省農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新項(xiàng)目(2012NKC01-05)；陜西省獼猴桃產(chǎn)業(yè)提升關(guān)鍵技術(shù)研究與產(chǎn)業(yè)基地建設(shè)項(xiàng)目(2012GB2G000438)

易盼盼(1987-)，女，河南正陽(yáng)人，在讀碩士，主要從事果樹生理生化研究。

王 飛(1954-)，女，河南孟津人，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事園藝植物種質(zhì)資源評(píng)價(jià)與利用研究。

時(shí)間:2015-03-12 14:17

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.04.025

S663.4

A

1671-9387(2015)04-0091-08

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20150312.1417.025.html