• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    川翠3號黃瓜SSR指紋圖譜的構(gòu)建及種子純度鑒定

    2015-07-10 13:25:21楊宏等
    長江蔬菜·學(xué)術(shù)版 2015年1期
    關(guān)鍵詞:黃瓜

    楊宏等

    摘 要:為了建立雜交黃瓜品種川翠3號的快速純度鑒定體系,用164對全基因組覆蓋的SSR引物對川翠3號及其親本進(jìn)行了多態(tài)性篩選及純度鑒定。其中4對引物表現(xiàn)出穩(wěn)定的共顯性,電泳圖譜清晰、易分辨,特異性強(qiáng),對川翠3號種子鑒定純度為99.0%,真、假雜種編號與田間鑒定結(jié)果一致,可以用來區(qū)別其中混雜的母本、父本及其他種子,說明這4對引物組成的指紋圖譜能為川翠3號雜交種的真?zhèn)舞b定、純度檢測及親本提純等提供準(zhǔn)確的技術(shù)指導(dǎo)。

    關(guān)鍵詞:黃瓜;川翠3號;SSR指紋圖譜;純度鑒定

    種子純度鑒定是保證種子質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的種子形態(tài)學(xué)鑒定、幼苗鑒定法不適用于黃瓜種子純度鑒定。田間小區(qū)種植鑒定法,周期長、費用高,無法滿足種子貿(mào)易中快速鑒定的要求,且受環(huán)境影響大,結(jié)果不夠準(zhǔn)確。DNA電泳鑒定技術(shù)為種子的純度鑒定提供了一種更為快速、高效的方法,可以彌補(bǔ)其他純度鑒定技術(shù)中的許多缺陷,具有以下優(yōu)點:在植物任何組織的任何發(fā)育時期均可用于分析;多態(tài)性位點分布廣,遺傳穩(wěn)定;不受任何環(huán)境因素的影響。

    SSR引物共顯性的特點在雜交種純度鑒定具有獨特優(yōu)勢,已在水稻[1~4]、玉米[5]、棉花[6,7]、油菜[8,9]、茄子[10]、大白菜[11]、花椰菜[12]、黃瓜[13]等多種作物上應(yīng)用。SSR的位點特異性和日益豐富的標(biāo)記群體使SSR成為基因精細(xì)定位及作圖的有力工具。目前黃瓜已開發(fā)的SSR標(biāo)記已有2 000多對[14~16],位點多,分布均勻,檢測區(qū)域覆蓋黃瓜7條染色體。利用SSR分子標(biāo)記,黃瓜葉片苦味、矮化、果實網(wǎng)紋等重要基因都能夠被定位,為克隆奠定了基礎(chǔ)[16~18]。同時,SSR分子標(biāo)記也是黃瓜種質(zhì)資源多樣性分析的重要方法之一[19,20]??傊?, SSR標(biāo)記具有共顯性、位點特異性、位點豐富、穩(wěn)定、易操作等特點,因此成為構(gòu)建分子指紋圖譜的重要標(biāo)記。

    隨著品種保護(hù)的需求增加,加之親本退化等問題嚴(yán)重,需要建立信息更豐富的骨干材料分子指紋圖譜。川翠3號是高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)華北型黃瓜新品種,對黃瓜霜霉病、白粉病等主要病害有較強(qiáng)抗性,具有較大的推廣應(yīng)用前景。本文利用SSR 分子標(biāo)記技術(shù),構(gòu)建了川翠3號及其親本的DNA指紋圖譜,以期為該品種的權(quán)益保護(hù)、真?zhèn)舞b別、雜種純度鑒定和親本提純等提供理論依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    黃瓜品種川翠3號單株100株及其親本各20株,由四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所黃瓜課題組提供。供試材料于2013年7月中旬播種,7月23日定植于四川省農(nóng)科院園藝所黃瓜課題組雙流基地,露地常規(guī)栽培管理。小區(qū)種植F1植株350株,田間種植按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計,3次重復(fù)。隨機(jī)選取100株掛牌標(biāo)記編號,用于SSR分析和田間性狀調(diào)查。

    1.2 試驗方法

    ①基因組DNA的提取 父本、母本各20株,幼嫩葉片等量混合后用CTAB法小量提取DNA。100株F1植株分單株取幼嫩葉片,分別提取DNA,且DNA試管標(biāo)記號與植株田間掛牌號一致。在1%瓊脂糖凝膠上檢測DNA質(zhì)量,并稀釋到適當(dāng)濃度,-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    ②PCR擴(kuò)增和電泳檢測 164對全基因組覆蓋的SSR引物來自Ren等[14]、Miao等[15]公開發(fā)表信息,由上海生工生化公司合成。SSR反應(yīng)體系,總

    共25 μL,包括:20 ng模板DNA,前后引物各

    1.0 μmol/L,10×PCR Buffer 2.5 μL,1.0 U Taq酶,

    0.2 mmol/L dNTPs。SSR擴(kuò)增體系為:94℃預(yù)變性

    5 min;94℃變性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸30 s,30次循環(huán);最后72℃延伸10 min。采用8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠,180 V電泳2.5 h后檢測PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,獲得親本和雜交種的擴(kuò)增條帶,銀染顯色后記錄結(jié)果。SSR標(biāo)記的數(shù)據(jù)記錄根據(jù)電泳結(jié)果采用0、1系統(tǒng)描述條帶的相對位置,條帶清晰的記為1,缺失的則記為0,依據(jù)分子量從小到大的順序讀帶,不具多態(tài)性的條帶不予統(tǒng)計。

    ③田間純度鑒定 9月中旬對100株標(biāo)記單株進(jìn)行田間純度鑒定。田間純度鑒定方法為主要差異表型性狀比對,調(diào)查性狀有:株型、株高、葉形、節(jié)間長度、瓜形、瓜色、果實表面蠟粉、瓜把、瓜長等。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 雜交種共顯性標(biāo)記的篩選

    用164對SSR引物對親本DNA進(jìn)行擴(kuò)增,每對引物擴(kuò)增的位點為1~2個,片段大小介于100~500 bp。擴(kuò)增后電泳檢測顯示12對引物親本間有多態(tài)性,多態(tài)性比例為7.31%。其中4對引物(ssr17922、ssr07220、ssr18718、ssr02385)在F1中呈共顯性(表1),條帶清晰,親本特征片段分子量差異大于10 bp,分別位于1號、3號和6號染色體。這4對SSR引物擴(kuò)增出的條帶可以明確區(qū)分雜交種F1和親本(圖1)。這4對引物組成了川翠3號及其親本的DNA指紋圖譜(表2)。

    2.2 雜交種SSR純度鑒定

    利用ssr17922、ssr07220、ssr18718、ssr02385 4對引物對100株F1進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示,這4對引物在99株單株中均擴(kuò)增出含雙親條帶的雜合帶型,1株為母本基因型(圖2、3)。因此,分子標(biāo)記鑒定結(jié)果表明,該100株單株中有真雜種99株,純度為99.0%,1株假雜種為母本。

    2.3 雜交種田間鑒定

    盛果期對100株標(biāo)記單株進(jìn)行田間鑒定,其中99株表現(xiàn)一致,所有農(nóng)藝性狀均符合川翠3號黃瓜植物學(xué)性狀描述,顯示為真雜種,1株雜株的植物學(xué)性狀與母本一致。因此,田間鑒定結(jié)果表明,該100株單株的純度為99.0%,1株假雜種為母本混雜。

    3 討論與結(jié)論

    本試驗結(jié)果表明,田間鑒定與分子標(biāo)記鑒定結(jié)果均顯示該100株雜種群體的純度為99.0%,且假雜種田間編號與分子標(biāo)記純度鑒定的編號一致。因此,分子標(biāo)記純度鑒定方法準(zhǔn)確、有效,可代替田間純度鑒定。

    研究發(fā)現(xiàn)的4對引物ssr17922、ssr07220、ssr18718、ssr02385在川翠3號黃瓜及其親本中呈共顯性,條帶清晰、穩(wěn)定、易識別,這些特殊SSR 條帶構(gòu)成了該品種及其親本的指紋圖譜。使用ssr17922、ssr07220、ssr18718、ssr02385中的任何一組引物都能準(zhǔn)確迅速地鑒定川翠3號及其親本,4組引物可以鑒別川翠3號和其他品種。川翠3號指紋圖譜的構(gòu)建不僅能為該品種真?zhèn)舞b別和材料提純提供技術(shù)支持,為黃瓜新品種的審定和保護(hù)提供重要依據(jù),并在新品種的DUS測試和品種資源遺傳多樣性的評價等方面具有重要的應(yīng)用價值。此外,該指紋圖譜還能為川翠3號相關(guān)表型性狀基因的定位分析提供信息,縮小引物篩選范圍,同時為同類型華北型黃瓜純度鑒定提供可供選擇的標(biāo)記。

    使用分子標(biāo)記開展純度鑒定迅速、準(zhǔn)確,可節(jié)省大量人力和時間。雜交種純度低不僅損害經(jīng)營企業(yè)的聲譽(yù)和利益,縮短品種的推廣年限,還會導(dǎo)致產(chǎn)量下降,影響農(nóng)民收益。目前,種子公司經(jīng)常采用的鑒定方法是將當(dāng)年生產(chǎn)的雜交種抽樣到海南南繁基地進(jìn)行田間純度檢測,形態(tài)性狀易受氣候條件和栽培措施等方面的影響,準(zhǔn)確性較差,而且成本高、時間長。本試驗中,田間純度鑒定從播種到盛果期進(jìn)行植物學(xué)性狀調(diào)查,耗時2個月,且催芽、育苗、整地、定植、田間管理、植物學(xué)性狀調(diào)查等需要大量人工,而應(yīng)用分子標(biāo)記進(jìn)行純度鑒定需要催芽、提取DNA、PCR和凝膠電泳,選取1對引物進(jìn)行分析鑒定,整個周期約1周,且鑒定結(jié)果準(zhǔn)確,不受環(huán)境影響。

    本研究中,親本間多態(tài)性引物僅占164對引物的7.31%,表明川翠3號黃瓜親本間遺傳背景較窄。性狀調(diào)查表明,該品種親本間差異僅能通過瓜色、瓜形的差異來判斷,容易誤判并且在無瓜情況下很難判斷品種真實性。使用SSR分子標(biāo)記能大大提高純度鑒定的準(zhǔn)確性,是窄遺傳背景雜交種子純度鑒定的有效方法。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 彭鎖堂,莊杰云,顏啟傳,等.我國主要雜交水稻組合及其親本SSR標(biāo)記和純度鑒定[J].中國水稻科學(xué),2003,17(1):1-5.

    [2] 徐艷芳,向殉朝,張艷麗,等.SSR技術(shù)對雜交稻種岡優(yōu)

    188的純度鑒定[J].種子,2012,31(7):126-128.

    [3] 趙虹,徐國華,廖芳麗.SSR分子標(biāo)記技術(shù)在雜交水稻種子純度鑒定中的作用[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,50(17):

    3 490-3 491.

    [4] 趙虹,張宇飛,林梅,等.SSR鑒定水稻兩系雜交種純度的運用與探討Ⅳ.不同品種同一引物檢測試驗[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,51(21):4 720-4 721.

    [5] 李曉輝,李新海,李文華,等.SSR標(biāo)記技術(shù)在玉米雜交種種子純度測定中的應(yīng)用[J].作物學(xué)報,2003,29(1):63-68.

    [6] 郎需勇,吳建功,楊亮,等.SSR分子標(biāo)記技術(shù)在雜交棉純度鑒定中的應(yīng)用[J].中國棉花,2012,39(9):17-20.

    [7] 葛瑞華,田東洋,袁小玲,等.湘農(nóng)大棉1號的SSR數(shù)字指紋圖譜構(gòu)建及純度鑒定[J].中國農(nóng)學(xué)通報,2012,28(6):79-83.

    [8] 張寧潔,陳麗,朱文秀,等.SSR標(biāo)記在油菜隱性核不育雜交種的純度鑒定研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2012,40(11):

    6 376-6 377.

    [9] 曲亮,陳衛(wèi)江,李莓,等.SSR標(biāo)記技術(shù)在甘藍(lán)型油菜雜交種純度鑒定中的應(yīng)用[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2009,35(3):229-232.

    [10] 王利英,喬軍,石瑤,等.茄子SSR多態(tài)性引物的篩選及品種純度鑒定[J].華北農(nóng)學(xué)報,2012,27(4):98-101.

    [11] 管志坤,羅雙霞,李艷霞,等.利用SSR標(biāo)記鑒定油綠3號大白菜品種純度[J].種子,2011,30(9):34-35.

    [12] 趙新,文正華,王永,等.花椰菜雜交種科潤F1代種子純度的EST-SSR鑒定[J].種子,2012,31(5):119-122.

    [13] 張桂華,李家旺,張文珠,等.利用SSR 技術(shù)對黃瓜新品種津優(yōu)35 號進(jìn)行種子純度鑒定[J].北方園藝,2010(12):140-141.

    [14] Ren Y, Zhang Z H, Lui J H, et al. An integrated genetic and cytogenetic map of the cucumber genome[J]. PLoS One, 2009(6): 1-8.

    [15] Miao H, Zhang S P, Wang X W, et al. A linkage map of cultivated cucumber (Cucumis sativus L.) with 248 microsatellite marker loci and seven genes for horticulturally important traits[J]. Euphytica, 2011, 182:167-176.

    [16] Zhang W W, Pan J S, He H L, et al. Construction of a high density integrated genetic map for cucumber (Cucumis sativus L.)[J]. Theor Appl Genet, 2012, 124:249-259.

    [17] Li Y H, Yang L M, Pathak M, et al. Fine genetic mapping of cp: a recessive gene for compact (dwarf) plant architecture in cucumber, Cucumis sativus L.[J]. Theor Appl Genet, 2011, 123: 973-983.

    [18] Zhang S P, Miao H, Yang Y H, et al. A major quantitative trait locus conferring resistance to fusarium wilt was detected in cucumber by using recombinant inbred lines[J]. Mol Breeding, 2014, 34(4): 1 805-1 815.

    [19] Hu J, Wang L, Li J. Comparison of genomic SSR and EST-SSR markers for estimating genetic diversity in cucumber[J]. Biologia Plantarum, 2011, 55: 577-580.

    [20] Pandey S, Ansari W A, Mishra V K, et al. Genetic diversity in Indian cucumber based on microsatellite and morphological markers[J]. Biochemical Systematics and Ecology, 2013, 51: 19-27.

    Abstract: In order to establish fast purity identification system for hybrid cucumber cultivar Chuancui No.3 seed, we used 164 pairs SSR primers which covered whole genome for purity identification and polymorphic analysis of cucumber cultivar Chuancui No.3 and its parents. The results showed that, four primers were stably codominant, their electrophoretogram were clear, easy to distinguish, and had high specialty, its molecular marker identification purity was 99.0% by detecting some cucumber cultivar Chuancui No.3 seeds, which was the same as the field identification result,they could be used to distinguish medley female parent, male parent and other seeds. So, the fingerprint with these four pairs primers could provide more accurate technical guidance for authenticity identification, purity test and parents purification of hybrids.

    Key words: Cucumber; Chuancui No.3; SSR fingerprint; Purity identification

    猜你喜歡
    黃瓜
    摘黃瓜
    黃瓜靶斑病咋防治
    清新脆嫩的黃瓜
    中老年保健(2021年5期)2021-08-24 07:08:02
    黃瓜留瓜要注意兩點
    我喜歡黃瓜
    黃瓜
    摘黃瓜
    黃瓜黃瓜你是不是菜
    孩子(2016年7期)2016-07-11 19:25:26
    涼拌黃瓜
    黃瓜小鎮(zhèn)之歌
    陶山(2016年3期)2016-03-04 05:43:15
    在线观看午夜福利视频| 成年av动漫网址| 日本与韩国留学比较| 欧美区成人在线视频| 99久久精品一区二区三区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 免费黄网站久久成人精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av不卡在线观看| 99热6这里只有精品| 99久国产av精品国产电影| 91久久精品国产一区二区成人| 22中文网久久字幕| 国产探花在线观看一区二区| 日本av手机在线免费观看| 人体艺术视频欧美日本| 久久久国产成人精品二区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产精品,欧美在线| 久久99蜜桃精品久久| 看免费成人av毛片| 亚洲精品456在线播放app| 日本av手机在线免费观看| 日本色播在线视频| 最好的美女福利视频网| 国产老妇女一区| 在线观看免费视频日本深夜| 国产成人freesex在线| 色综合色国产| 欧美日本视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 免费无遮挡裸体视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产精品野战在线观看| 国产av一区在线观看免费| 别揉我奶头 嗯啊视频| 麻豆乱淫一区二区| 插阴视频在线观看视频| 久久九九热精品免费| 岛国在线免费视频观看| 听说在线观看完整版免费高清| 青春草亚洲视频在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲精品色激情综合| 国国产精品蜜臀av免费| 丝袜美腿在线中文| 久久精品综合一区二区三区| 有码 亚洲区| 亚洲av.av天堂| 久久精品人妻少妇| 男人舔奶头视频| 国产高潮美女av| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产精品.久久久| 国产伦一二天堂av在线观看| 麻豆成人av视频| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲久久久久久中文字幕| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 春色校园在线视频观看| 久久韩国三级中文字幕| 嫩草影院入口| 日韩av在线大香蕉| 国产精华一区二区三区| 最近的中文字幕免费完整| 91久久精品国产一区二区成人| 狠狠狠狠99中文字幕| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产精品久久久久久久久免| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产精品久久男人天堂| 中文字幕制服av| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产片特级美女逼逼视频| 欧美成人a在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久久精品94久久精品| 国产私拍福利视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产乱人视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲中文字幕日韩| 22中文网久久字幕| 色综合站精品国产| 老司机福利观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| avwww免费| 欧美在线一区亚洲| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av不卡在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| 国产成人a区在线观看| 永久网站在线| 观看美女的网站| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲av二区三区四区| 一区福利在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| av专区在线播放| 欧美又色又爽又黄视频| 日韩av在线大香蕉| 免费人成在线观看视频色| 久久热精品热| 嫩草影院新地址| 免费黄网站久久成人精品| 九九在线视频观看精品| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲精品亚洲一区二区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费看av在线观看网站| 插逼视频在线观看| 国产一区二区激情短视频| 人妻系列 视频| 国产成人freesex在线| 国产高清激情床上av| 最近手机中文字幕大全| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| www.色视频.com| 欧美成人一区二区免费高清观看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲av中文字字幕乱码综合| 可以在线观看毛片的网站| 黄色配什么色好看| 天堂中文最新版在线下载 | 中文字幕制服av| 日本黄色片子视频| 婷婷色av中文字幕| av在线老鸭窝| 久久久欧美国产精品| 丝袜喷水一区| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲在线观看片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 插逼视频在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 晚上一个人看的免费电影| 赤兔流量卡办理| av福利片在线观看| 国产老妇女一区| 成年女人看的毛片在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 草草在线视频免费看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 高清毛片免费观看视频网站| 乱系列少妇在线播放| 极品教师在线视频| 18+在线观看网站| 日韩大尺度精品在线看网址| 麻豆一二三区av精品| av天堂中文字幕网| 亚洲真实伦在线观看| 91av网一区二区| 黑人高潮一二区| 久久韩国三级中文字幕| 一进一出抽搐动态| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 麻豆一二三区av精品| 免费观看精品视频网站| 国产综合懂色| 成人永久免费在线观看视频| 婷婷亚洲欧美| 在线天堂最新版资源| 蜜臀久久99精品久久宅男| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲精品成人久久久久久| 久久99精品国语久久久| 国产亚洲91精品色在线| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久久网色| 中文字幕制服av| 天堂网av新在线| 亚洲在久久综合| 日韩人妻高清精品专区| 夫妻性生交免费视频一级片| 日本免费一区二区三区高清不卡| 日本色播在线视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 1000部很黄的大片| 亚洲国产欧美在线一区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲va在线va天堂va国产| 午夜激情欧美在线| 青春草国产在线视频 | 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 免费大片18禁| 春色校园在线视频观看| 久久久国产成人精品二区| 免费无遮挡裸体视频| 在线观看一区二区三区| 18禁在线播放成人免费| 欧美一区二区亚洲| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 免费观看的影片在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲国产色片| 色尼玛亚洲综合影院| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久成人免费电影| 舔av片在线| 国产人妻一区二区三区在| 热99re8久久精品国产| 青春草国产在线视频 | 99久国产av精品国产电影| 在线播放国产精品三级| 国内精品一区二区在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 在线观看午夜福利视频| 国产色爽女视频免费观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 插逼视频在线观看| 深夜精品福利| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲成人久久爱视频| 一级黄片播放器| 欧美丝袜亚洲另类| 久久精品夜色国产| 天堂影院成人在线观看| 伦理电影大哥的女人| 男的添女的下面高潮视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久精品国产清高在天天线| 舔av片在线| 国产真实乱freesex| 黄色欧美视频在线观看| 在线a可以看的网站| 精品国产三级普通话版| 亚洲国产精品成人综合色| 99热这里只有是精品在线观看| av专区在线播放| 久久精品91蜜桃| 搡女人真爽免费视频火全软件| 最新中文字幕久久久久| 激情 狠狠 欧美| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久久久久久久久丰满| 国产毛片a区久久久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 1000部很黄的大片| 久久久久久伊人网av| 一夜夜www| 国产成人a区在线观看| 国产精品无大码| 国产淫片久久久久久久久| 欧美+日韩+精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费大片18禁| a级毛色黄片| 99久久成人亚洲精品观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久久久免费精品人妻一区二区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲欧美精品自产自拍| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 日本五十路高清| 九九热线精品视视频播放| 美女 人体艺术 gogo| 可以在线观看毛片的网站| 波多野结衣高清无吗| 免费看美女性在线毛片视频| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 18禁在线无遮挡免费观看视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产精品三级大全| 日韩亚洲欧美综合| 日本三级黄在线观看| 国产午夜精品论理片| 2022亚洲国产成人精品| 午夜亚洲福利在线播放| 热99re8久久精品国产| 久久久久久久久久久丰满| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产av在哪里看| 一边亲一边摸免费视频| 麻豆成人午夜福利视频| 特级一级黄色大片| 青春草亚洲视频在线观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 黄片wwwwww| 99久国产av精品国产电影| 午夜免费男女啪啪视频观看| 男人舔奶头视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 少妇熟女欧美另类| 婷婷亚洲欧美| 亚洲av成人av| 干丝袜人妻中文字幕| 岛国毛片在线播放| 黑人高潮一二区| 亚洲人与动物交配视频| 大香蕉久久网| 亚洲内射少妇av| 色视频www国产| h日本视频在线播放| 久久精品影院6| 一进一出抽搐动态| 国产成人freesex在线| 色噜噜av男人的天堂激情| 两个人视频免费观看高清| 国产中年淑女户外野战色| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| avwww免费| 国内精品宾馆在线| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 美女国产视频在线观看| 亚洲国产色片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久久成人免费电影| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩视频在线欧美| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲av男天堂| 国产单亲对白刺激| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 我要搜黄色片| 性插视频无遮挡在线免费观看| 免费看美女性在线毛片视频| 99热这里只有精品一区| 伦精品一区二区三区| 色噜噜av男人的天堂激情| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲经典国产精华液单| а√天堂www在线а√下载| 亚洲在线观看片| 久久欧美精品欧美久久欧美| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 国产精品.久久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲人成网站在线播| 夫妻性生交免费视频一级片| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 午夜久久久久精精品| 在线观看免费视频日本深夜| 国产亚洲5aaaaa淫片| 综合色av麻豆| a级毛色黄片| 亚洲在线自拍视频| 美女国产视频在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲精品自拍成人| 午夜福利在线观看吧| 又爽又黄a免费视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久久久免费精品人妻一区二区| 只有这里有精品99| 精品久久久久久久末码| a级一级毛片免费在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 黄色视频,在线免费观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 色综合色国产| 亚洲自偷自拍三级| 在线免费观看不下载黄p国产| 99久久精品一区二区三区| 欧美精品一区二区大全| 青春草亚洲视频在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产亚洲5aaaaa淫片| 秋霞在线观看毛片| 国产一区二区三区av在线 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 免费在线观看成人毛片| 日本熟妇午夜| 免费观看a级毛片全部| 99久久无色码亚洲精品果冻| 在线免费观看不下载黄p国产| 搞女人的毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 一夜夜www| 国产大屁股一区二区在线视频| 搞女人的毛片| 丰满的人妻完整版| 在线观看午夜福利视频| 日韩欧美在线乱码| 亚洲精品日韩av片在线观看| 99久国产av精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲久久久久久中文字幕| 成人三级黄色视频| 国产精华一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲av成人av| 中文在线观看免费www的网站| 91精品国产九色| 久久久久久久久久久丰满| av在线观看视频网站免费| 美女 人体艺术 gogo| 久久久久久九九精品二区国产| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久人人爽人人片av| 22中文网久久字幕| 国产精品精品国产色婷婷| 99riav亚洲国产免费| 亚洲经典国产精华液单| 精品免费久久久久久久清纯| 人人妻人人看人人澡| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 最近2019中文字幕mv第一页| 人体艺术视频欧美日本| 亚洲av熟女| 内射极品少妇av片p| 亚洲精品色激情综合| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲国产精品成人久久小说 | 长腿黑丝高跟| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美最新免费一区二区三区| 天美传媒精品一区二区| 欧美潮喷喷水| 最新中文字幕久久久久| 一级av片app| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲av成人精品一区久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 春色校园在线视频观看| 毛片女人毛片| 日韩欧美在线乱码| 亚洲av男天堂| 人妻久久中文字幕网| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| av卡一久久| 午夜视频国产福利| 男女边吃奶边做爰视频| 精品久久久久久久久久久久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 老司机影院成人| 九草在线视频观看| 久久久久久大精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日韩人妻高清精品专区| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲最大成人中文| 国产高清视频在线观看网站| 欧美3d第一页| 12—13女人毛片做爰片一| 久久综合国产亚洲精品| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产精品一及| 秋霞在线观看毛片| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 六月丁香七月| 91狼人影院| 变态另类丝袜制服| 中文在线观看免费www的网站| 国产三级在线视频| 国产精品一区www在线观看| 国产免费男女视频| 久久久久久久久久黄片| 女人被狂操c到高潮| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产片特级美女逼逼视频| 日韩欧美 国产精品| 国产日本99.免费观看| 午夜a级毛片| 午夜精品一区二区三区免费看| 激情 狠狠 欧美| 少妇高潮的动态图| 精品一区二区三区视频在线| 国产 一区精品| 99久久精品国产国产毛片| 神马国产精品三级电影在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 亚州av有码| 99精品在免费线老司机午夜| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产午夜精品论理片| 欧美一区二区亚洲| 国产伦一二天堂av在线观看| 日本免费a在线| 亚洲性久久影院| 一级毛片久久久久久久久女| 久久久久久久久中文| 99国产精品一区二区蜜桃av| 寂寞人妻少妇视频99o| 桃色一区二区三区在线观看| 久久久久久伊人网av| 成人午夜精彩视频在线观看| 色哟哟·www| 欧美潮喷喷水| 国产成人福利小说| 日本三级黄在线观看| 亚洲在线观看片| 午夜福利高清视频| 老司机影院成人| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲av一区综合| 91狼人影院| 午夜a级毛片| 男人舔奶头视频| 国产片特级美女逼逼视频| 国产精品一区二区在线观看99 | 热99在线观看视频| 日韩高清综合在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产精品,欧美在线| 99久久成人亚洲精品观看| 黄片wwwwww| 免费在线观看成人毛片| 不卡一级毛片| 亚洲高清免费不卡视频| 亚洲欧美日韩东京热| a级毛片a级免费在线| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国产 一区 欧美 日韩| 国产av不卡久久| 国产精品人妻久久久久久| 深爱激情五月婷婷| 麻豆成人av视频| 欧美性感艳星| 少妇的逼水好多| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 免费看a级黄色片| 最近2019中文字幕mv第一页| 91久久精品电影网| 男人和女人高潮做爰伦理| 一级黄色大片毛片| 男女视频在线观看网站免费| 婷婷亚洲欧美| 亚洲高清免费不卡视频| 国产老妇女一区| 色哟哟·www| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲成人久久性| 日本欧美国产在线视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产亚洲精品久久久com| 婷婷精品国产亚洲av| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久鲁丝午夜福利片| 两个人视频免费观看高清| 国产成人一区二区在线| 国产精品精品国产色婷婷| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久精品影院6| av在线老鸭窝| 久久久成人免费电影| 亚洲不卡免费看| 国产私拍福利视频在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 午夜福利在线在线| 国产精品伦人一区二区| 国产高清激情床上av| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 午夜福利在线观看吧| 亚洲经典国产精华液单| 岛国在线免费视频观看| 99久久九九国产精品国产免费| 色播亚洲综合网| 国产伦一二天堂av在线观看| 中国国产av一级| 亚洲性久久影院| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲国产精品成人综合色| 三级经典国产精品| 国产成人影院久久av| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 国产人妻一区二区三区在| 2022亚洲国产成人精品| 最近的中文字幕免费完整| 日本五十路高清| 中出人妻视频一区二区| 久久精品国产自在天天线| 国产av一区在线观看免费| 长腿黑丝高跟| 欧美高清成人免费视频www| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 午夜免费男女啪啪视频观看| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 老熟妇乱子伦视频在线观看| av卡一久久| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲成人久久爱视频| 男的添女的下面高潮视频| 可以在线观看的亚洲视频| 日韩一本色道免费dvd| 桃色一区二区三区在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 如何舔出高潮| 久久久久久久久久黄片| 欧美最黄视频在线播放免费| a级毛片a级免费在线| 国产精品99久久久久久久久| 毛片一级片免费看久久久久|