PiC在阿霉素所致SD大鼠心肌損傷中的表達(dá)情況及姜黃素的保護(hù)作用

盧均坤，王燕琴，初而復(fù)，李欣，張明亮，Sudeep，齊向前

(1.天津醫(yī)科大學(xué)，天津 300070；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 心內(nèi)二科，黑龍江 佳木斯 154003；3.佳木斯大學(xué)校醫(yī)院 超聲科，黑龍江 佳木斯 154003；4.天津泰達(dá)國(guó)際心血管病醫(yī)院 內(nèi)二科，天津 300457)

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PiC在阿霉素所致SD大鼠心肌損傷中的表達(dá)情況及姜黃素的保護(hù)作用

盧均坤1,2，王燕琴3，初而復(fù)2，李欣2，張明亮2，Sudeep2，齊向前4Δ

(1.天津醫(yī)科大學(xué)，天津 300070；2.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 心內(nèi)二科，黑龍江 佳木斯 154003；3.佳木斯大學(xué)校醫(yī)院 超聲科，黑龍江 佳木斯 154003；4.天津泰達(dá)國(guó)際心血管病醫(yī)院 內(nèi)二科，天津 300457)

目的 探討線粒體磷酸載體(PiC)在阿霉素所致SD大鼠心肌損傷中的表達(dá)情況，及姜黃素對(duì)阿霉素所致SD大鼠心肌損傷的保護(hù)作用。方法 60只成年SD大鼠隨機(jī)分為3組：對(duì)照組、阿霉素組、姜黃素+阿霉素組。正常對(duì)照組：按2.5 mL/kg尾靜脈注射0.9%氯化鈉注射液，1周1次，連續(xù)注射6周；阿霉素組：按1.25 mg/kg鼠尾靜注射0.5 mg/mL阿霉素(0.9%氯化鈉注射液稀釋，約0.5 mL)，1周1次，共注射6周；阿霉素+姜黃素組：阿霉素使用同上，大鼠從每次注射完阿霉素，同時(shí)應(yīng)用12 mg/mL姜黃素注射液，以30 mg/kg藥液(約0.5 mL)經(jīng)尾靜脈緩慢注射，共注射6周。應(yīng)用谷胱甘肽過氧化物酶檢測(cè)試劑盒(Gpx)、超氧化物歧化酶(SOD)檢測(cè)試劑盒、丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)SD大鼠心肌細(xì)胞凋亡水平；應(yīng)用Western blot技術(shù)和Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)PiC的表達(dá)情況。結(jié)果 阿霉素組大鼠心肌細(xì)胞凋亡顯著增加(P<0.05)，而阿霉素+姜黃素組較阿霉素組大鼠心肌細(xì)胞凋亡顯著降低(P<0.05)；阿霉素+姜黃素組大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)Gpx活性、SOD活力均明顯高于阿霉素組(P<0.05)，而低于對(duì)照組(P<0.05)；阿霉素+姜黃素組大鼠Slc25a3基因表達(dá)量、MDA含量及PiC蛋白表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)，而低于阿霉素組(P<0.05)。結(jié)論 阿霉素可以使心肌線粒體中PiC的表達(dá)及氧化應(yīng)激水平顯著升高，心肌細(xì)胞凋亡增加；而姜黃素可以有效拮抗阿霉素所引起的這種損傷作用。

阿霉素；姜黃素；線粒體磷酸載體；氧化應(yīng)激；Slc25a3基因

惡性腫瘤患者化療后可引起一系列不良反應(yīng)，包括心臟毒性、腎臟毒性、肝臟毒性、神經(jīng)系統(tǒng)毒性、免疫功能低下等各系統(tǒng)損害，其中以心臟毒性對(duì)人體的危害最大[1-3]。阿霉素(doxorubicin，DOX)也稱為14-羥基柔紅霉素，是目前臨床應(yīng)用中蒽環(huán)類藥物的代表藥物之一。線粒體是細(xì)胞物質(zhì)與能量代謝的重要場(chǎng)所，它能通過電子傳遞鏈的氧化磷酸化反應(yīng)為有機(jī)體提供90%的ATP能源，維持機(jī)體的各項(xiàng)生理機(jī)能[4]。線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeability transition pore，MPTP)大量開放是導(dǎo)致線粒體功能障礙的關(guān)鍵，與多種心臟疾病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切[5]。研究發(fā)現(xiàn)[6]，蒽環(huán)類藥物可以導(dǎo)致MPTP開放，引起一系列心肌細(xì)胞凋亡、壞死。PiC是位于線粒體內(nèi)膜上的一種重要的功能蛋白，其功能主要是使重要的代謝底物：無機(jī)磷酸(Pi)通過線粒體內(nèi)膜，從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到線粒體基質(zhì)。PiC可能是MPTP和細(xì)胞死亡潛在的始動(dòng)監(jiān)視者[7]。研究表明[8]，PiC可以在MPTP開放中發(fā)揮重要作用。PiC由多種編碼基因共同調(diào)控，其中Slc25a3基因是編碼PiC基因的重要組成部分，研究發(fā)現(xiàn)PiC的表達(dá)量與Slc25a3的表達(dá)情況密切相關(guān)[9]。但目前關(guān)于阿霉素對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)PiC表達(dá)的影響及其分子機(jī)制，國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。

姜黃素(curcumin，CUR)有廣泛的藥理活性，其發(fā)展前景日益引起人們的重視。目前的研究主要集中在抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗纖維化、抗艾滋病等[10-13]，但對(duì)姜黃素保護(hù)心肌細(xì)胞具體機(jī)制的研究相對(duì)較少，姜黃素保護(hù)心肌細(xì)胞的途徑和機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建阿霉素所致心肌損傷的體內(nèi)模型，并使用姜黃素對(duì)已發(fā)生心肌損傷的體內(nèi)模型進(jìn)行干預(yù)，進(jìn)一步研究PiC在姜黃素干預(yù)阿霉素所致心肌損傷中的表達(dá)情況及深入探討姜黃素對(duì)阿霉素所致心肌損傷的保護(hù)作用的具體機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼料 成年健康的SD大鼠，體質(zhì)量在180～220 g之間，雄雌不限，共60只，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)為SCXK(京)2012-0001；正常飼養(yǎng)，購(gòu)自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑 實(shí)驗(yàn)儀器：高速低溫離心機(jī)(Sigma，美國(guó))，F(xiàn)A2004電子分析天平(上海衡平電子儀器公司，中國(guó))，全自動(dòng)酶標(biāo)儀(BioTek)，制冰機(jī)(ZIEGRA-EISMASCHINEN)，勻速搖床(北京六一儀器廠)，F(xiàn)ACSCalibur 流式細(xì)胞儀(BD)，PCR反應(yīng)擴(kuò)增儀(ABI)；SW-CJ-1D潔凈工作臺(tái)(江蘇蘇潔凈化設(shè)備廠)；H6-1微型電泳槽(上海精益有機(jī)玻璃制品儀器廠)；DYY-8型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(上海琪特分析儀器有限公司)；YXJ-2離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；凝膠成像系統(tǒng)(上海復(fù)日科技有限公司)；TU-1901紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)；移液器(范圍100～1000μL，20～200μL，0.5～10μL)(BBI)；StepOne型熒光定量PCR儀(ABI)。

實(shí)驗(yàn)試劑：谷胱甘肽過氧化物酶檢測(cè)試劑盒、超氧化物歧化酶檢測(cè)試劑盒、丙二醛檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞蛋白裂解液(RIPA)、BCA蛋白定量試劑盒、Western blot化學(xué)發(fā)光試劑盒均為南京碧云天產(chǎn)品，Annexin V流式細(xì)胞試劑盒(BD)，Trizol(Invitrogen)，DEPC(SIGMA)，ABI SybrGreen PCR Master Mix(ABI)，引物(上海生工公司)，抗體(Santa)。

1.3 動(dòng)物模型建立 所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均在清潔級(jí)動(dòng)物室中進(jìn)行飼養(yǎng)。60只SD大鼠隨機(jī)分為3組：對(duì)照組(con)、阿霉素組(dox)、姜黃素+阿霉素組(cur)。正常對(duì)照組：0.9%氯化鈉注射液2.5 mL/kg，以尾靜脈注射的方式，每周1次注射到大鼠體內(nèi)，連續(xù)注射6周；阿霉素組：將阿霉素用0.9%氯化鈉注射液稀釋為0.5 mg/mL，以1.25 mg/kg的劑量，以鼠尾靜脈緩慢靜推(約0.5 mL)入大鼠體內(nèi)，每周1次，共注射6周；阿霉素+姜黃素組：阿霉素使用同上，大鼠從每次注射完阿霉素，同時(shí)應(yīng)用12 mg/mL姜黃素注射液，以30 mg/kg藥液(約0.5 mL)經(jīng)尾靜脈緩慢注射，共注射6周。11周后，全部大鼠采用脊髓離斷的方法處死，取心臟組織進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格遵循《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)條例》。

1.4 心肌組織內(nèi)氧化應(yīng)激水平檢測(cè) 取0.5 g心肌冰組織在浴下用勻漿器勻漿，用生理鹽水制成10%的組織勻漿，4 ℃ 3000 r/min離心10 min，取上清液檢測(cè)。嚴(yán)格按照試劑盒說明，檢測(cè)心肌組織內(nèi)Gpx活性、SOD活力及MDA含量。

1.5 應(yīng)用Annexin V法檢測(cè)SD大鼠心肌細(xì)胞的凋亡情況 使用10%水合氯醛300 μg/kg麻醉大鼠，于劍突下作切口取出心臟，立即放入4 ℃灌流液中，于液面下行主動(dòng)脈插管，采用Langendorff離體心臟灌流裝置，并在灌流液中加入膠原酶(濃度為0.2 g/L)，用剪刀取心室肌組織，浸入高鉀KB液中，輕輕吹打，過300 μm的不銹鋼篩網(wǎng)，室溫穩(wěn)定1 h后，室溫放置6～7 h備用[14-16]。

1.6 應(yīng)用Western blot檢測(cè)PiC蛋白的表達(dá) 取心肌組織0.5 g后剪切成細(xì)小的碎片，加入含有1%PMSF的RIPA裂解液1 mL，用勻漿器勻漿，至充分裂解后，4 ℃ 13 500 r/min離心15 min，取上清液。使用BCA試劑盒測(cè)量蛋白樣本濃度，分別為：對(duì)照組7.0145 μg/μL，阿霉素組13.57 μg/μL，姜黃素+阿霉素組12.83 μg/μL；蛋白上樣量分別為：對(duì)照組3.6 μL，阿霉素組1.9 μL，姜黃素+阿霉素組2.0 μL。以小鼠Slc25a3單克隆抗體作為一抗(1:1000)，4 ℃過夜，以HRP標(biāo)記的羊抗鼠酶標(biāo)抗體作為二抗(1:10000)進(jìn)行Western blot檢測(cè)。

1.7 應(yīng)用Real-time PCR檢測(cè)PiC基因的表達(dá) 心臟組織RNA提取采用Trizol試劑提取方法。采用AMV First Strand cDNA Synthesis Kit試劑盒于PCR反應(yīng)擴(kuò)增儀(ABI)上將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。cDNA產(chǎn)物保存在-20 ℃。Real-time PCR采用ABI SybrGreen PCR試劑盒說明書在20 μL反應(yīng)體系中進(jìn)行PCR擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)體系：SYBR Green Taq Ready Mix 10 μL，正向和反向引物1.0 μL，水6.0 μL和cDNA2.0 μL(約100 ng)，上述實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。每個(gè)樣本的溶解曲線只有1個(gè)溶解峰即表明產(chǎn)物是唯一的，沒有非特異擴(kuò)增。采用Livak法即2-(ΔΔCt)法對(duì)PCR的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。本實(shí)驗(yàn)引物設(shè)計(jì)均采用Primer 6.0軟件，Slc25a3基因上游引物為5′-GTGGTTTGG-CTAAAGGATGG-3′，下游引物為5′-GGGCAATGTCAGCGAAGAA-3′，β-actin上游引物為5′-CGTAAAGACCTCTATGCCAACA-3′，下游引物為5′-AGCCACCAATCCACA-CAGAG-3′，本實(shí)驗(yàn)中的引物序列均由上海生工生物工程有限公司合成。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心肌組織內(nèi)氧化應(yīng)激水平檢測(cè)結(jié)果 結(jié)果顯示，阿霉素組SD大鼠體內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶活性及SOD活力均明顯低于對(duì)照組及阿霉素+姜黃素組(P<0.05)，MDA含量明顯高于對(duì)照組及阿霉素+姜黃素組(P<0.05)；同時(shí)阿霉素+姜黃素組SD大鼠體內(nèi)谷胱甘肽過氧化物酶活性及SOD活力均高于阿霉素組且低于對(duì)照組(P<0.05)，MDA含量低于阿霉素組且高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。表明姜黃素可以減低阿霉素所導(dǎo)致SD大鼠機(jī)體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平，從而起到保護(hù)作用。

表1 各組SD大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)GSH活性、SOD活力及MDA含量Tab.1 GSH activity, SOD activity and MDA content in the cardiac muscle cells of SD ±s)

*P<0.05，與阿霉素組相比較，compared with doxorubicin group

2.2 Annexin V法檢測(cè)SD大鼠心肌細(xì)胞的凋亡情況 結(jié)果顯示，阿霉素組SD大鼠心肌細(xì)胞的凋亡率(23.55±1.47)%明顯高于對(duì)照組(8.43±1.97)%及阿霉素+姜黃素組(16.01±2.85)%，同時(shí)阿霉素+姜黃素組SD大鼠心肌細(xì)胞的凋亡率明顯高于對(duì)照組，但低于阿霉素組(P<0.05)，見圖1。這表明阿霉素可以引起SD大鼠心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡，而姜黃素可以通過對(duì)抗阿霉素的作用，起到保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。

圖1 動(dòng)物模型心肌細(xì)胞凋亡情況Fig.1 Apoptosis of myocardial cells in animal models

2.3 Western blot技術(shù)檢測(cè)線粒體磷酸載體(PiC)蛋白的表達(dá)情況 結(jié)果顯示，阿霉素組的線粒體磷酸載體蛋白表達(dá)情況明顯高于對(duì)照組及阿霉素+姜黃素組，阿霉素+姜黃素組的PiC蛋白的表達(dá)情況低于阿霉素組，而高于對(duì)照組(P<0.05)，見圖2。這表明阿霉素可以明顯促進(jìn)SD大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)PiC蛋白的表達(dá)，而姜黃素可以有效對(duì)抗阿霉素在心肌細(xì)胞內(nèi)對(duì)PiC蛋白表達(dá)的促進(jìn)作用。

圖2 PiC蛋白在阿霉素所致SD大鼠心肌細(xì)胞損傷中及姜黃素干預(yù)后的表達(dá)情況(n=20)*P<0.05，與對(duì)照組比較；△P<0.05，與阿霉素組比較Fig.2 Expression of PiC protein in SD rats with myocardial cell injury induced by doxorubicin and the effect of curcumin(n=20)*P<0.05, compared with control group;△P<0.05, compared with doxorubicin group

2.4 Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)Slc25a3基因的表達(dá)情況 結(jié)果顯示，阿霉素組的Slc25a3基因的mRNA表達(dá)情況明顯高于對(duì)照組及姜黃素干預(yù)組，而姜黃素干預(yù)組的Slc25a3基因的mRNA表達(dá)高于對(duì)照組、低于阿霉素組(P<0.05)，見圖3。這表明阿霉素可以促進(jìn)SD大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)Slc25a3基因的表達(dá)，而姜黃素可以明顯下調(diào)阿霉素對(duì)心肌細(xì)胞內(nèi)Slc25a3基因的表達(dá)作用。

圖3 各組Slc25a3基因表達(dá)比較(n=20)*P<0.05，與對(duì)照組比較；△P<0.05，與阿霉素組比較Fig.3 Comparison of Slc25a3 mRNA expression in each group(n=20)*P<0.05, compared with control group；△P<0.05, compared with doxorubicin group

3 討論

阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，可抑制細(xì)胞RNA和DNA的合成，對(duì)RNA的抑制作用最強(qiáng)，抗瘤譜較廣，對(duì)多種腫瘤均有作用，對(duì)各種生長(zhǎng)周期的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用[17-18]。研究發(fā)現(xiàn)[19]，長(zhǎng)期使用阿霉素的患者可出現(xiàn)可引起遲發(fā)性嚴(yán)重心力衰竭，有時(shí)可在停藥半年后發(fā)生。線粒體是細(xì)胞物質(zhì)與能量代謝的重要場(chǎng)所，由于線粒體是外來化合物誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的敏感細(xì)胞器，因此線粒體在細(xì)胞凋亡機(jī)制中越來越受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn)，阿霉素心肌損傷與線粒體在亞細(xì)胞水平廣泛性、進(jìn)展性的損傷有關(guān)，線粒體作為心肌細(xì)胞的死亡與存活的門戶，在心肌缺血性疾病中尤為重要[20]。MPTP大量開放是導(dǎo)致線粒體功能障礙的關(guān)鍵，而PiC是構(gòu)成MPTP的關(guān)鍵性線粒體內(nèi)膜成分。研究表明[21]，SLc25的2個(gè)外顯子3A與3B，3A主要存在于肌肉、心臟、甲狀腺組織，而3B存在于肌體所有組織中。Slc25a3基因的純合子突變患者顯示運(yùn)動(dòng)不耐受，近端肌肉無力和心肌病等[22]。多個(gè)研究證實(shí)線粒體ATP合成下降與Slc25a3減少有關(guān)，凸顯出線粒體磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)在能量產(chǎn)生中的重要作用，值得注意的是，患者線粒體PiC缺陷時(shí)在肌肉組織線粒體的ATP合成減少，與肥厚型心肌病和心輸出量減少相關(guān)[23]。在對(duì)1型糖尿病患者的研究中發(fā)現(xiàn)肌間纖維線粒體Slc25a3合成顯著減少，ATP合成也顯著減少，隨著線粒體蛋白組學(xué)異常，心臟功能失調(diào)[24]。在本研究中發(fā)現(xiàn)阿霉素組大鼠Slc25a3上調(diào)，可能引起線粒體大量增生，本課題組早期的研究證實(shí)，阿霉素引起大鼠心肌損傷后的早期，線粒體大量增生，排列紊亂、腫脹、畸形，峭減少[25]，線粒體增生可能為代償性，為保證心肌細(xì)胞提供ATP。姜黃素干預(yù)組大鼠Slc25a3下調(diào)，可能與線粒體功能部分恢復(fù)有關(guān)。

姜黃素(curcuma，CUR)為姜黃屬植物，具有保護(hù)缺血心肌，預(yù)防心肌梗死的作用。研究證實(shí)，姜黃素對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用，其作用與增加腦血流量，抗脂質(zhì)過氧化和防止鈣超載有關(guān)[26]。同時(shí)，姜黃素對(duì)大鼠心肌的缺血性損傷具有保護(hù)作用，且這種保護(hù)作用呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系，可能有隨著劑量的增大作用增強(qiáng)的趨勢(shì)。此外，姜黃素還可以拮抗多種理化因素對(duì)DNA的損傷增加體內(nèi)SOD水平，清除超氧陰離子。研究表明活性氧(ROS)的產(chǎn)生與線粒體密切相關(guān)，產(chǎn)生氧化應(yīng)激，參與細(xì)胞損傷與凋亡[27]。

本實(shí)驗(yàn)通過使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡情況，及GSH、SOD、MDA 3種試劑盒檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激水平，鑒定動(dòng)物模型建立情況。結(jié)果顯示，阿霉素?fù)p傷組心肌細(xì)胞凋亡率明顯高于對(duì)照組及姜黃素干預(yù)組，GSH活性及SOD活力均明顯低于對(duì)照組及姜黃素干預(yù)組，而MDA含量明顯高于對(duì)照組及姜黃素干預(yù)組(均P<0.05)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在體內(nèi)模型中，阿霉素對(duì)心肌細(xì)胞所造成的損傷存在，并且這種損傷會(huì)隨作用時(shí)間的推移不斷增加。通過對(duì)動(dòng)物模型心肌細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平的檢測(cè)，本研究發(fā)現(xiàn)GSH活性、SOD活力及MDA含量均隨阿霉素作用時(shí)間延長(zhǎng)而發(fā)生相應(yīng)改變，但當(dāng)加入一定濃度的姜黃素后，會(huì)出現(xiàn)氧化應(yīng)激水平下降的表現(xiàn)，這表明姜黃素對(duì)阿霉素所引起的心肌細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)作用。

本實(shí)驗(yàn)還通過Western blot及Real-time PCR對(duì)阿霉素所致SD大鼠心肌損傷模型及姜黃素干預(yù)后的PiC表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，阿霉素?fù)p傷后的SD大鼠心肌細(xì)胞內(nèi)PiC表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.05)，但使用姜黃素進(jìn)行干預(yù)后，PiC表達(dá)情況明顯下降，但仍高于對(duì)照組(P<0.05)。這表明姜黃素在對(duì)抗阿霉素所引起的心肌損傷中，可以通過調(diào)節(jié)蛋白和基因的表達(dá)對(duì)心肌細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用，同時(shí)也說明雖然姜黃素具有明確的保護(hù)作用，但其并不能將受損的心肌細(xì)胞完全恢復(fù)至正常，這可能也會(huì)受到姜黃素濃度及阿霉素作用時(shí)間的制約。

本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建阿霉素所致心肌損傷的體內(nèi)模型，并使用姜黃素對(duì)已發(fā)生心肌損傷的動(dòng)物模型進(jìn)行干預(yù)。結(jié)果表明姜黃素對(duì)阿霉素所引起的SD大鼠心肌細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)作用，這種保護(hù)作用是否是通過調(diào)節(jié)動(dòng)物模型體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平和PiC在蛋白和基因水平的表達(dá)情況來發(fā)揮作用還有待進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)揭示了阿霉素在機(jī)體內(nèi)對(duì)心肌細(xì)胞造成損傷的機(jī)制及姜黃素在體內(nèi)對(duì)抗阿霉素所引起心肌細(xì)胞損傷的主要途徑，為進(jìn)一步研究PiC在姜黃素干預(yù)阿霉素所致心肌損傷中的表達(dá)情況及深入探討姜黃素對(duì)阿霉素所致心肌損傷的保護(hù)作用的具體機(jī)制提供了新的科研思路，為今后的靶基因治療提供理論依據(jù)。

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(編校：吳茜)

Expression of PiC in SD rats with myocardial damage induced by adriamycin and protective effect of curcumin

LU Jun-kun1,2, WANG Yan-qin3, CHU Er-xia2, LI Xin2, ZHANG Ming-liang2, Sudeep2, QI Xiang-qian4Δ

(1. Medical University of Tianjin, Tianjin 300070, China; 2. Department of Cardiology Division II, 1stAffiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 3. Department of Ultrasonographt, Hospital of Jiamusi University, Jiamusi 154003, China; 4. Department of Internal Medicine II, TEDA International Cardiovascular Hospital, Tianjin 300457, China)

ObjectiveTo discuss the expression of mitochondrial phosphate carrier (PiC) in myocardial injury caused by doxorubicin, and the protective mechanism of curcumin in myocardial injury caused by doxorubicin.Methods60 adult SD rats were randomly divided into three groups: control group, doxorubicin group, curcumin+doxorubicin group. Control group was injected 0.9% sodium chloride injection (2.5 mL/kg) by rat tail vein injection, one times per week, 6 times in total.Doxorubicin group was injected with 0.5 mg/mL doxorubicin which diluted with 0.9% sodium chloride injection by rat tail vein injection, and the dosage was 1.25 mg/kg(about 0.5 mL). Curcumin+doxorubicin group was injected the same dose doxorubicin as doxorubicin group. After that, 12 mg/mL curcumin injection was added with 30mg/kg by rat tail vein injection. one times per week, 6 times in total. The glutathione peroxidase (Gpx) assay kit, superoxide dismutase (SOD) assay kit and malondialdehyde (MDA) detection kits were used to test the oxidative stress levels in myocardial cells of SD rats. Flow cytometry is used to test the SD rat cardiomyocytes transferred level. Application of Western blot and Real-time PCR technology were used to detect expression of PiC.ResultsThe Gpx activity and SOD vitality in myocardial cells of SD rats in curcumin with doxorubicin group all significantly increased compare with those of doxorubicin group, and all decreased compare with those of control group.But the rate of myocardial apoptosis, content of malondialdehyde and expression of Slc25a3 gene and PiC protein from myocardial cells of SD rats from curcumin with doxorubicin group all significantly increased compare with those of control group, and all decreased compare with those of doxorubicin group.ConclusionDoxorubicin could increase the expression of PiC in myocardial mitochondria, the levels of oxidative stress, and the apoptosis of myocardial cells, and the effect of curcumin could be effective against the injury induced by doxorubicin.

doxorubicin; curcumin; MPTP; oxidative stress; Slc25a3 gene

黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(H201365);佳木斯大學(xué)重點(diǎn)項(xiàng)目(Sz2013-004)

盧均坤，男，博士在讀，副主任醫(yī)師，研究方向：冠心病的介入治療，心血管疾病介入診治，E-mail：ralilve@163.com；齊向前，通訊作者，男，主任醫(yī)師、教授、博士生導(dǎo)師，研究方向： E-mail：ljkuuu@163.com。

R541.9, Q505

A

1005-1678(2015)08-0058-05