灰氈毛忍冬葉醇提物的抗氧化活性研究

唐娟，向樂，胡佑帆，陳玉保，劉欣，熊芳琪，彭國平

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院中草藥與天然產(chǎn)物研究室，湖南長沙 410128）

灰氈毛忍冬葉醇提物的抗氧化活性研究

唐娟，向樂，胡佑帆，陳玉保，劉欣，熊芳琪，彭國平

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院中草藥與天然產(chǎn)物研究室，湖南長沙 410128）

以灰氈毛忍冬葉為材料，研究不同提取溫度醇提物對DPPH自由基清除率的影響，以及灰氈毛忍冬老葉、嫩葉的醇提物對DPPH自由基清除率的差異。結(jié)果表明：在40℃、50℃、60℃三個(gè)提取溫度下，灰氈毛忍冬老葉醇提物的DPPH自由基清除率高低順序?yàn)椋?0℃＞50℃＞60℃；三種溫度下灰氈毛忍冬嫩葉醇提物的DPPH自由基清除率相近，50℃時(shí)略高，說明提取溫度對灰氈毛忍冬老葉醇提物的DPPH自由基清除率影響更大；在40℃、50℃、60℃三個(gè)提取溫度下，灰氈毛忍冬嫩葉醇提物DPPH自由基的清除率均大于老葉，說明嫩葉醇提物DPPH自由基清除能力更強(qiáng)，抗氧化物質(zhì)含量更多或者高抗氧化活性物質(zhì)更多。

灰毛氈忍冬葉；醇提物；DPPH自由基清除率；抗氧化活性

金銀花葉是生產(chǎn)金銀花的副產(chǎn)品，其產(chǎn)量約為花的10倍左右。研究表明，金銀花葉所含有的藥理活性物質(zhì)與花相近或高于花，其中綠原酸和黃酮類物質(zhì)都有一定的抗菌消炎作用，而且具有抗氧化活性，是很好的抗氧化活性材料。迄今為止，對金銀花葉采集時(shí)間、有效成分提取方法及其與功效之間的關(guān)系方面的研究鮮有報(bào)道。故應(yīng)對金銀花葉中的活性成分做進(jìn)一步研究，以充分利用這一資源［1］。作者選取金銀花中的灰氈毛忍冬葉為材料，對灰氈毛忍冬老葉、嫩葉醇提物的抗氧化活性進(jìn)行了考察，為后期開發(fā)、利用灰氈毛忍冬葉提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料與試劑

灰氈毛忍冬葉；95%乙醇；DPPH，梯希愛上海化成工業(yè)發(fā)展有限公司；Vc，分析純。

1.2 方法

1.2.1 灰氈毛忍冬葉的醇提取

將灰氈毛忍冬葉于烘箱中干燥后用粉碎機(jī)打成粉末過40目篩。稱取3份5 g灰氈毛忍冬老葉、嫩葉，用95%的乙醇按固液比1∶10（g∶mL，下同）分別在40℃、50℃、60℃提取10 h，真空抽濾，將濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)到一定體積后倒入已干燥稱重的培養(yǎng)皿中，放入烘箱中干燥蒸發(fā)，最后得到醇提物［2］。

1.2.2 樣品溶液的配制

稱取0.024 g提取物或Vc溶于95%乙醇，定容至100 mL得到24μg·mL－1的溶液，分別稀釋1、2、4、6、8倍，備用。

1.2.3 DPPH溶液的配制

準(zhǔn)確稱取DPPH試劑0.0644 g，用95%乙醇溶解定容至1 000 mL容量瓶中，得到64.425 mg·L－1的DPPH貯備液，搖勻，置于冰箱中冷藏備用［3］。

1.2.4 清除DPPH自由基能力的測定

1）在10 mL試管中依次加入4.0 mL的64.425 mg·L－1DPPH溶液和1.0 mL 95%乙醇，混勻，反應(yīng)穩(wěn)定后，以95%乙醇為參比，在516 nm處測吸光度，記為A0。

2）在10 mL試管中依次加入4.0 mL的64.425 mg·L－1DPPH溶液和1.0 mL樣品溶液，混勻，反應(yīng)穩(wěn)定后，以95%乙醇為參比，在516 nm處測吸光度，記為As。

3）在10 mL試管中依次加入4.0 mL的樣品溶液和1.0 mL 95%乙醇，混勻，反應(yīng)穩(wěn)定后，以95%乙醇為參比，在516 nm處測吸光度，記為Ar。

4）DPPH自由基清除率（Y）按下式計(jì)算［4］：

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溫度對DPPH自由基清除率的影響（圖1）

圖1 提取溫度對灰氈毛忍冬老葉（a）、嫩葉（b）醇提物的DPPH自由基清除率的影響Fig.1 The effect of extraction temperature on scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract from L.macrathoides Hands M azz old leaves（a）and seeding leaves（b）

由圖1a可知，灰氈毛忍冬老葉的醇提物有較好的DPPH自由基清除能力，但較Vc弱。在40℃、50℃、60℃三個(gè)提取溫度下，灰氈毛忍冬老葉醇提物的DPPH自由基清除能力差別較大，高低順序?yàn)?0℃＞50℃＞60℃。說明提取溫度對灰氈毛忍冬老葉醇提物的DPPH自由基清除能力有較大影響，上述三個(gè)溫度中，溫度越高醇提物的DPPH自由基清除能力越弱。由圖1b可知，灰氈毛忍冬嫩葉醇提物有較好的DPPH自由基清除能力，但較Vc弱。在40℃、50℃、60℃三個(gè)提取溫度下，灰氈毛忍冬嫩葉醇提物的DPPH自由基清除能力相近，50℃時(shí)略高。說明提取溫度對灰氈毛忍冬嫩葉醇提物的DPPH自由基清除能力影響不大。

2.2 灰氈毛忍冬老葉、嫩葉醇提物的DPPH自由基清除率比較

2.2.1 40℃醇提物的DPPH自由基清除率比較（圖2）

圖2 灰氈毛忍冬老葉、嫩葉40℃醇提物的DPPH自由基清除率的比較Fig.2 Com parison of scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract from L.macrathoides Hands M azz old leaves and seeding leaves at 40℃

由圖2可知，灰氈毛忍冬老葉、嫩葉在40℃醇提物的DPPH自由基清除能力有差異。濃度從1.5μg· mL－1升至3μg·mL－1時(shí)，清除率上升較緩慢，且老葉、嫩葉提取物的DPPH自由基清除率相近。濃度從3μg·mL－1升至24μg·mL－1時(shí)，清除率上升較快，灰氈毛忍冬的老葉和嫩葉有明顯的差別，嫩葉醇提物的DPPH自由基清除率大于老葉。

2.2.2 50℃醇提物的DPPH自由基清除率的比較（圖3）

圖3 灰氈毛忍冬老葉、嫩葉50℃醇提物的DPPH自由基清除率的比較Fig.3 Com parison of scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract from L.macrathoides Hands M azz old leaves and seeding leaves at 50℃

由圖3可知，灰氈毛忍冬老葉、嫩葉在50℃醇提物的DPPH自由基清除能力有差異。濃度從1.5μg· mL－1升至24μg·mL－1時(shí)，灰氈毛忍冬嫩葉醇提物的DPPH自由基清除率均大于老葉。

2.2.3 60℃醇提物的DPPH自由基清除率的比較（圖4）

圖4 灰氈毛忍冬老葉、嫩葉60℃醇提物的DPPH自由基清除率的比較Fig.4 Comparison of scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract from L.macrathoides Hands M azz old leaves and seeding leaves at 60℃

由圖4可知，灰氈毛忍冬老葉、嫩葉在60℃醇提物的DPPH自由基清除能力有差異。濃度從1.5μg· mL－1升至3μg·mL－1時(shí)，清除率上升較緩慢，且老葉、嫩葉醇提物的DPPH自由基清除率相近。濃度從3μg·mL－1升至24μg·mL－1時(shí)，清除率上升較快，灰氈毛忍冬的老葉與嫩葉有差別，嫩葉醇提物的DPPH自由基清除率均大于老葉。

3 結(jié)論

（1）提取溫度對灰氈毛忍冬葉醇提物的DPPH自由基清除能力有影響，在40℃、50℃、60℃三個(gè)提取溫度下，灰氈毛忍冬老葉醇提物的DPPH自由基清除率高低順序?yàn)椋?0℃＞50℃＞60℃；在三個(gè)溫度下，灰氈毛忍冬嫩葉醇提物的DPPH自由基清除率相近，50℃時(shí)略高。說明提取溫度對灰氈毛忍冬老葉醇提物的DPPH自由基清除能力影響較大，對嫩葉影響較小。

（2）在40℃、50℃、60℃三個(gè)提取溫度下，灰氈毛忍冬嫩葉醇提物的DPPH自由基清除率均大于老葉。說明同一提取溫度下灰氈毛忍冬嫩葉提取物的DPPH自由基清除能力比老葉強(qiáng)，嫩葉中抗氧化物質(zhì)含量比老葉高。

（3）植物葉片中含有很多成分，其功效往往不是一種成分的作用效果，而是多種具有相同功效的成分協(xié)同作用的結(jié)果，因此，對中草藥的臨床效果評價(jià)更為重要。對于中草藥的應(yīng)用，采集時(shí)間、提取方法，甚至使用方法對于其效果的發(fā)揮均有很大的影響。

［1］李玉賢，楊懷霞，武雪努.金銀花莖葉藥用價(jià)值概述［J］.河南中醫(yī)藥學(xué)刊，2000，15（3）：23-24.

［2］吳擁軍，石杰，屈凌波，等.流動注射化學(xué)發(fā)光法及光度法用于巴戟天提取液抗氧化活性的研究［J］.光譜學(xué)與光譜分析，2006，26 （9）：1688-1691.

［3］宋懷恩，聞韌.抗氧化劑篩選方法的研究進(jìn)展［J］.中國藥物化學(xué)雜志，2003，13（2）：119.

［4］鄭晶泉.抗氧化劑抗氧化實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué)（衛(wèi)生學(xué)分冊），2000，27（1）：37-40.

Study on Antioxidant Activity of Ethanol Extract from L.Macrathoides Hands M azz Leaves

TANG Juan，XIANG Le，HU You-fan，CHEN Yu-bao，LIU Xin，XIONG Fang-qi，PENG Guo-ping
（Herb Medicines＆Natural Products Research Section of College of Bioscience and Biotechnology，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，China）

Using L.macrathoides Hands Mazz leaves asmaterial，the effect of extraction temperature on scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract，and the difference of scavenging rates of DPPH free radical of ethanol extract from old leaves or seeding leaves of L.macrathoides Hands Mazzwere studied.The results showed that，at40℃，50℃，60℃，the order of scavenging rates of DPPH free radical of ethanol extract from old leaveswas：40℃＞50℃＞60℃，scavenging rates of DPPH free radical of ethanol extract from seeding leaves were similar，and scavenging rate of DPPH free radical was slightly higher than the otherswhen the temperature was 50℃.This indicated that extraction temperature had greater impact on scavenging rate of DPPH free radical of the ethanol extract from old leaves at40℃，50℃，60℃，the scavenging rates of DPPH free radical of the ethanol extract from seeding leaveswere higher than the old leaves.This indicated that the capacity of scavenging DPPH free radical of ethanol extract from the seeding leaves of L.macrathoides Hands Mazzwas greater than the old leaves，the contentof antioxidant substances or high antioxidant active substances weremore in seeding leaves of L.macrathoides Hands Mazz.

L.macrathoides Hands Mazz leaf；ethanol extract；scavenging rate of DPPH free radical；antioxidant activity

TQ 461 R 284

A

1672-5425（2015）07-0044-03

10.3969/j.issn.1672－5425.2015.07.012

2015-03-12

唐娟（1991－），女，湖南永州人，碩士研究生，研究方向：生物活性功能成分分離純化，E-mail：37940713@qq.com；通訊作者：彭國平，副教授，E-mail：pgphh@163.com。