不同強(qiáng)度運(yùn)動大鼠心肌解偶聯(lián)蛋白2表達(dá)及能量代謝變化研究

李曉燕，孟可，張紅明，紀(jì)麗麗，張國明，晉群，陳英劍

不同強(qiáng)度運(yùn)動大鼠心肌解偶聯(lián)蛋白2表達(dá)及能量代謝變化研究

李曉燕，孟可，張紅明，紀(jì)麗麗，張國明，晉群，陳英劍

目的探討不同強(qiáng)度運(yùn)動對大鼠心肌線粒體解偶聯(lián)蛋白2(UCP2)表達(dá)的影響及其與心肌能量變化的關(guān)系。方法雄性Wistar大鼠45只，隨機(jī)分為安靜對照組，漸進(jìn)訓(xùn)練組、漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組，每組15只。4周后，測定血清游離脂肪酸(FFA)濃度及心肌線粒體三磷酸腺苷(ATP)含量，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及Western blotting測定心肌線粒體UCP2的表達(dá)變化。結(jié)果漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組ATP含量明顯低于安靜對照組與漸進(jìn)訓(xùn)練組(P<0.01)；漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組血清FFA濃度明顯升高，分別是安靜對照組和漸進(jìn)訓(xùn)練組的2.0倍和1.7倍(P<0.01)。RT-PCR及Western blotting結(jié)果顯示，與安靜對照組及漸進(jìn)訓(xùn)練組相比，漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組心肌線粒體UCP2 mRNA和蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)。相關(guān)性分析顯示，心肌線粒體UCP2的表達(dá)與血清FFA濃度呈正相關(guān)(r=0.795，P<0.01)，而與ATP含量呈負(fù)相關(guān)(r=－0.843，P<0.01)。結(jié)論力竭運(yùn)動訓(xùn)練可引起大鼠血清FFA濃度升高及心肌線粒體ATP含量降低，同時可誘導(dǎo)心肌線粒體UCP2表達(dá)。UCP2的表達(dá)與FFA濃度呈正相關(guān)，而與ATP含量呈負(fù)相關(guān)，提示UCP2可能參與了力竭運(yùn)動中心的肌能量代謝。

運(yùn)動；解偶聯(lián)蛋白2；線粒體，心臟；能量代謝

近年來，運(yùn)動性猝死在運(yùn)動及訓(xùn)練中的發(fā)生率呈逐年上升趨勢，特別是在長跑、足球、高強(qiáng)度軍事訓(xùn)練等大強(qiáng)度運(yùn)動中，但其發(fā)生機(jī)制尚不清楚。線粒體是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和形成三磷酸腺苷(ATP)的主要場所，細(xì)胞生命活動95%的能量來源于線粒體。研究表明，高強(qiáng)度運(yùn)動后心肌細(xì)胞出現(xiàn)一系列病理性變化，如大量線粒體發(fā)生腫脹，膜結(jié)構(gòu)不清，嵴結(jié)構(gòu)紊亂、消失，基質(zhì)顆粒消失，有的出現(xiàn)多個亮區(qū)或空泡，上述結(jié)構(gòu)改變伴隨線粒體功能的明顯減退，能量產(chǎn)生減少，收縮功能減弱，膜兩側(cè)生物電失去平衡，可導(dǎo)致心肌細(xì)胞死亡[1]。解偶聯(lián)蛋白2(uncoupling protein 2，UCP2)是線粒體內(nèi)膜上的一種蛋白質(zhì)，是心肌生物能量代謝及功能調(diào)節(jié)的重要分子[2]，可作為質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)體將H+從線粒體內(nèi)膜滲漏到基質(zhì)中，降低線粒體內(nèi)膜的電化學(xué)梯度，減少ATP的產(chǎn)生[3]。目前，不同強(qiáng)度運(yùn)動對UCP2表達(dá)變化的影響尚不明了，本研究觀察不同運(yùn)動強(qiáng)度下大鼠心肌線粒體UCP2的表達(dá)變化及心肌能量代謝的改變，探討UCP2在心肌能量代謝中的意義。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 Trizol(美國Invitrogen公司)，兩步法反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)試劑盒(美國Bio-Rad公司)，PCR引物及內(nèi)參(大連寶生物工程有限公司)；亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)線粒體提取試劑盒(武漢博士德生物公司)；BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒(武漢博士德生物公司)；UCP2抗體(美國 Millipore公司)；SDSPAGE蛋白上樣緩沖液、SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(江蘇碧云天生物公司)；抗β-actin兔多克隆抗體(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)；山羊抗兔IgG(H+L)、HRP(北京康為世紀(jì)生物科技有限公司)。大鼠ATP酶聯(lián)免疫分析試劑盒。

1.2 模型建立及分組 雄性健康Wistar大鼠45只，3月齡，體重200±50g，國家標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物干燥飼料喂養(yǎng)，自由飲食，由山東大學(xué)齊魯醫(yī)院心血管研究中心動物房提供。動物室溫度18～23℃，濕度40%～60%。泳池體積為100cm×70cm×80cm，水深50cm，水溫控制在28～32℃。所有大鼠先適應(yīng)性喂養(yǎng)3d，并進(jìn)行適應(yīng)性游泳3次，每次10min。第4天進(jìn)行完全隨機(jī)分組，每組給予不同處理。①安靜對照組：平時不運(yùn)動，飼養(yǎng)條件與其他組相同，每當(dāng)其他組小鼠訓(xùn)練時，此組小鼠也放入溫度相同的淺水中相同時間。②漸進(jìn)訓(xùn)練組：每周訓(xùn)練6d，每天訓(xùn)練1次。第一次下水10min，此后逐日累加，每日增加15min，到第一周末時游泳時間達(dá)到85min/ d，以后維持這一運(yùn)動強(qiáng)度直至第4周。③漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組：每周訓(xùn)練6d，每天訓(xùn)練1次。第一次下水10min，此后逐日累加，每日增加15min，到第一周末時游泳時間達(dá)到85min/d，以后維持這一運(yùn)動強(qiáng)度直至第4周。在運(yùn)動的最后1d進(jìn)行一次力竭運(yùn)動。按Thomas等[4]報道的力竭標(biāo)準(zhǔn)：沉入水底超過10s或游泳動作明顯不協(xié)調(diào)，撈出后無逃避反應(yīng)且無法完成翻正反射。3組大鼠做完實(shí)驗(yàn)后均立即斷頭取血，取心臟。

1.3 血清游離脂肪酸(free fatty acid，F(xiàn)FA)、心肌ATP含量測定 取樣本前大鼠禁食12h，取血液樣本，分離血清，置于–70℃保存。采用全自動生化分析儀測定FFA濃度。采用大鼠ATP酶聯(lián)免疫分析試劑盒，用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(A)值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中ATP濃度，具體操作見試劑盒說明。

1.4 RT-PCR檢測心肌線粒體UCP2表達(dá) 取大鼠新鮮心肌組織100mg，液氮下研磨，加入1ml Trizol試劑，反復(fù)吹打裂解心肌細(xì)胞，加入0.2ml氯仿劇烈震蕩15s，于4℃下，12 000×g離心15min后取上清，加入0.5ml異丙醇，于15～30℃靜置10min，于4℃下，12 000×g離心10min后棄上清，可見管底出現(xiàn)膠狀沉淀，加入1ml 75%乙醇，輕輕混勻，于4℃下，7500×g離心5min后棄上清，得到心肌組織總RNA。根據(jù)cDNA反轉(zhuǎn)錄操作說明進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)體系均為20μl，反應(yīng)條件：25℃ 5min，42℃ 30min，85℃ 5min，4℃ 10min，得到心肌組織cDNA。以β-actin為內(nèi)參，根據(jù)SYBR Green熒光定量測定目的基因表達(dá)操作說明進(jìn)行分析，反應(yīng)條件：94℃ 20s、58℃30s、72℃20s，40個循環(huán)。結(jié)果以2–ΔΔCt表示。PCR引物：上游5'-CAAGACCATTGCACGAGAGG-3'，下游5'-CCCGAAGGCAGAAGTGAAG-3'，退火溫度為59℃，共40個循環(huán)。內(nèi)參β-actin熒光定量PCR引物序列：上游5'-TGGCACCCAGCACAATGAA-3'，下游5'-CTAAGTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3'，退火溫度為59℃，共40個循環(huán)。所有引物均由大連寶生物工程有限公司合成。

1.5 Western blotting檢測心肌線粒體UCP2表達(dá)取大鼠新鮮心肌組織100～200mg，加入線粒體提取試劑A液，充分勻漿后采用低溫差速離心法提取線粒體，加入預(yù)混的線粒體提取試劑B+C液，充分漩渦震蕩后10 000×g離心15min，得到線粒體蛋白，冷凍保存。將提取的線粒體蛋白解凍后按BCA蛋白濃度測定試劑盒說明，應(yīng)用酶標(biāo)儀測定595nm波長處A值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和A值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算線粒體總蛋白濃度。取50μg蛋白，加入5×上樣緩沖液，100℃煮沸5min，使蛋白質(zhì)變性后上樣，80V作用30min后，120V作用90min，電泳至溴酚藍(lán)完全跑出，轉(zhuǎn)膜90min，5%脫脂奶粉封閉90min，然后加入1:1000 UCP2抗體，4℃封閉過夜，第2天將膜取出用TBST洗3次，每次12min，然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的1:10 000山羊抗兔IgG，37℃孵育90min，TBST洗膜3次，每次12min，進(jìn)行化學(xué)發(fā)光顯影。采用凝膠分析系統(tǒng)Quantity One計算條帶光密度值。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 18.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。所有數(shù)據(jù)以表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，對血清FFA濃度及心肌組織ATP含量與UCP2表達(dá)的關(guān)系分別行簡單直線回歸擬合及相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠血清FFA濃度及心肌組織ATP含量變化4周后，漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組大鼠血清FFA濃度明顯升高，較安靜對照組和漸進(jìn)訓(xùn)練組分別增加約2.0倍和1.7倍，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，漸進(jìn)訓(xùn)練組血清FFA濃度與安靜對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組大鼠心肌線粒體ATP含量明顯低于安靜對照組和漸進(jìn)訓(xùn)練組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，安靜對照組與漸進(jìn)訓(xùn)練組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，表1)。

表1 大鼠血清FFA濃度及心肌線粒體ATP含量變化(±s，n=15)Tab.1 Changes of serum FFA and myocardial mitochondria ATP in rats(±s, n=15)

表1 大鼠血清FFA濃度及心肌線粒體ATP含量變化(±s，n=15)Tab.1 Changes of serum FFA and myocardial mitochondria ATP in rats(±s, n=15)

(1)P<0.01 compared with control group; (2)P<0.01 compared with endurance exercise group

Group FFA(μmol/L) ATP(ng/ml) Control 215.00±49.49 14.54±0.11 Endurance exercise 265.00±17.32 14.03±0.27 Exhaustive exercise 433.33±28.87(1)(2) 10.89±0.36(1)(2)

2.2 各組大鼠心肌線粒體UCP2 mRNA表達(dá)量比較 漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組大鼠UCP2 mRNA表達(dá)(0.562±0.051)較漸進(jìn)訓(xùn)練組(0.332±0.006)高69.28%，較安靜對照組(0.390±0.013)高44.10%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，安靜對照組UCP2 mRNA表達(dá)水平與漸進(jìn)訓(xùn)練組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05，圖1)。

2.3 各組大鼠心肌線粒體UCP2蛋白表達(dá)比較漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組UCP2蛋白表達(dá)較安靜對照組升高41.52%(P<0.01)，較漸進(jìn)訓(xùn)練組升高82.68%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01，圖2)。

2.4 血清FFA濃度及心肌組織ATP含量與UCP2的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，大鼠心肌線粒體UCP2與血清FFA濃度呈顯著正相關(guān)(r=0.795，P<0.01)，與心肌組織ATP含量呈顯著負(fù)相關(guān)(r= –0.843，P<0.01，圖3)。

圖1 RT-PCR分析各組大鼠心肌線粒體UCP2 mRNA表達(dá)結(jié)果Fig.1 Expression of UCP2 mRNA in myocardial mitochondria of rats in each group (RT-PCR)A. Control group; B. Endurance exercise group; C. Exhaustive exercise group. (1)P<0.01 compared with exhaustive exercise group

圖2 Western blotting分析各組大鼠心肌線粒體UCP2蛋白表達(dá)Fig.2 Protein expression of UCP2 in myocardial mitochondria of rats in each group (Western blotting)A. Control group; B. Endurance exercise group; C. Exhaustive exercise group. (1)P<0.01 compared with exhaustive exercise group

圖3 FFA濃度及ATP含量與UCP2表達(dá)量的相關(guān)性分析Fig.3 Correlation analysis of FFA, ATP and the expression of UCP2

3 討 論

UCP2基因位于人類染色體的11q13，長6.5kB，含有7個內(nèi)含子和8個外顯子，編碼308個氨基酸，相對分子質(zhì)量為33 218[5]。線粒體通過氧化呼吸F0-F1ATP合酶將氫離子(H+)從線粒體基質(zhì)轉(zhuǎn)移到內(nèi)膜，形成跨內(nèi)膜質(zhì)子的電化學(xué)梯度，釋放的能量能促進(jìn)二磷酸腺苷(ADP)與磷酸結(jié)合生成ATP，此過程即為氧化磷酸化偶聯(lián)。然而，H+也可不通過F0-F1ATP合酶，而是跨膜擴(kuò)散流入線粒體基質(zhì)中，不生成ATP而釋放熱能，此現(xiàn)象稱為“質(zhì)子漏”[6]。UCP2具有“質(zhì)子漏”功能，可使呼吸鏈傳遞電子過程中產(chǎn)生的H+不經(jīng)過氧化磷酸化偶聯(lián)，而是作為質(zhì)子轉(zhuǎn)運(yùn)體直接將H+從內(nèi)膜轉(zhuǎn)運(yùn)到線粒體的基質(zhì)中，使ATP生成減少，并釋放熱量[7]。

本研究發(fā)現(xiàn)，漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組大鼠心肌線粒體UCP2 mRNA表達(dá)明顯增高，較漸進(jìn)訓(xùn)練組高69.28%，較安靜對照組高44.10%，而安靜對照組與漸進(jìn)訓(xùn)練組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示劇烈運(yùn)動能明顯增加UCP2的表達(dá)，而一般有氧運(yùn)動時UCP2增加不明顯。研究表明，一般強(qiáng)度有氧訓(xùn)練時，消耗的ATP及產(chǎn)生的自由基量不大，且生成的自由基在短時間內(nèi)被清除，所致細(xì)胞和細(xì)胞器的損傷較輕，隨著運(yùn)動強(qiáng)度增加，ATP消耗增加，自由基的產(chǎn)生增多且不易被消除，細(xì)胞的損害也更趨嚴(yán)重且無法修復(fù)。急性疲勞運(yùn)動時，心肌代謝耗能增加，可超出線粒體的承受能力，從而引起細(xì)胞功能障礙甚至死亡[8]，線粒體功能障礙主要表現(xiàn)為能量產(chǎn)生減少、收縮力減弱、膜兩側(cè)生物電失去平衡，最終導(dǎo)致心肌細(xì)胞死亡。UCP2蛋白在劇烈運(yùn)動時表達(dá)增高，其質(zhì)子漏功能使勢能以熱量形式無端消耗，而非轉(zhuǎn)化成ATP，導(dǎo)致ATP生成減少，線粒體能量代謝降低，進(jìn)一步惡化心臟功能，UCP2蛋白過量表達(dá)還能引起酸中毒，加重心力衰竭[9]。因此控制合理的運(yùn)動強(qiáng)度，適當(dāng)抑制UCP2表達(dá)可能是減少心肌損害的有效方法。

UCP2還可能參與調(diào)節(jié)運(yùn)動機(jī)體脂肪酸的代謝過程[10]。FFA是機(jī)體主要的供能物質(zhì)之一，正常心肌以FFA為主要能源。在心衰時心肌的有氧氧化過程發(fā)生障礙，對脂肪酸的氧化和乳酸的再利用減少，血中FFA濃度明顯升高，F(xiàn)FA濃度過高會造成心肌損害，增加心肌的耗氧量，加重心肌缺血[11]。本研究結(jié)果顯示，力竭運(yùn)動后，漸進(jìn)訓(xùn)練力竭組血清FFA濃度升高，較安靜對照組與漸進(jìn)訓(xùn)練組分別增加約2.0倍和1.7倍；相關(guān)分析證實(shí)，心肌線粒體UCP2表達(dá)與血清FFA濃度呈顯著正相關(guān)，提示FFA濃度與UCP2表達(dá)密切相關(guān)。研究表明，高血清FFA水平與心源性猝死顯著相關(guān)，抑制FFA進(jìn)入線粒體可改善心肌損傷缺血狀態(tài)[12]。

綜上所述，不同運(yùn)動負(fù)荷對線粒體UCP2表達(dá)及心肌能量代謝的影響不同：漸進(jìn)訓(xùn)練時，UCP2表達(dá)及心肌組織ATP、FFA濃度與對照組相比無明顯改變；力竭運(yùn)動后，該結(jié)果表明，UCP2表達(dá)增高，ATP生成減少，F(xiàn)FA濃度增高。UCP2表達(dá)改變在急性力竭運(yùn)動后心肌損傷發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用，調(diào)控UCP2表達(dá)可能對改善急性損傷心肌線粒體功能紊亂有益。

[1]Levinger I, Shaw CS, Stepto NK,et al. What doesn't kill you makes you fitter: a systematic review of high-intensity interval exercise for patients with cardiovascular and metabolic diseases[J]. Clin Med Insights Cardiol, 2015, 9: 53-63.

[2]Kang DD, Tang JM. Expression of uncoupling protein-2 and induced nitric oxide synthase in enalapril preprocessing rat myocardium[J]. J Zhengzhou Univ (Med Sci), 2014, 49(5): 675-678. [康丹丹, 湯建民. 依那普利預(yù)處理對大鼠心肌組織解偶聯(lián)蛋白2和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響[J]. 鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2014, 49(5): 675-678.]

[3]Ji XB, Li XR, Hao-Ding,et al. Inhibition of uncoupling protein 2 attenuates cardiac hypertrophy induced by transverse aortic constriction in mice[J]. Cell Physiol Biochem, 2015, 36(5): 1688-1698.

[4]Thomas DP, Marshall KI. Effects of repeated exhaustive exercise on myocardial subcellular membrane structures[J]. Int J Sports Med, 1988, 9(4): 257-260.

[5]Toda C, Diano S. Mitochondrial UCP2 in the central regulation of metabolism[J]. Best Pract Res Clin Endocrinol Metab, 2014, 28(5): 757-764.

[6]Turner JD, Gaspers LD, Wang G,et al. Uncoupling protein-2 modulates myocardial excitation-contraction coupling[J]. Circ Res, 2010, 106(4): 730-738.

[7]Donadelli M, Dando I, Fiorini C,et al. UCP2, a mitochondrial protein regulated at multiple levels[J]. Cell Mol Life Sci, 2014, 71(7): 1171-1190.

[8]Murray AJ, Anderson RE, Watson GC,et al. Uncoupling proteins in human heart[J]. Lancet, 2004, 364(9447): 1786-1788.

[9]Wang X, Liu D, Chai W,et al. The role of uncoupling protein 2 during myocardial dysfunction in a canine model of endotoxin shock[J]. Shock, 2015, 43(3): 292-297.

[10] Zhou H, Zhao J, Zhang X. Inhibition of uncoupling protein2 by genipin reduces insulin-stimulated glucose uptake in 3T3 -L1 adipocytes[J]. Arch Biochem Biophys, 2009, 486(1): 88-93.

[11] Ruiz-Ramírez A, Chávez-Salgado M, Pe?eda-Flores JA,et al. High-sucrose diet increases ROS generation, FFA accumulation, UCP2 level, and proton leak in liver mitochondria[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2011, 301(6): 1198-1207.

[12] Fragasso G, Palloshi A, Puccetti P,et al. A randomized clinical trial of trimetazidine, a partial free fatty acid oxidation inhibitor, in patients with heart failure[J]. J Am Coll Cardiol, 2006, 48(5): 992-998.

Effect of exercise intensity on the expression of UCP2 and energy metabolism in rat myocardium

LI Xiao-yan1, MENG Ke2, ZHANG Hong-ming1, JI Li-li3, ZHANG Guo-ming1, JIN Qun1, CHEN Ying-jian31Department of Cardiology,3Department of Medical Laboratory, General Hospital of Jinan Command, Jinan 250031, China
2Graduated School of Liaoning Medical University, Jinzhou, Liaoning 121001, China
This work was supported by the 2014 Major Projects of PLA Logistics Research (AWS13C008)

ObjectiveTo study the effect of different exercise intensity on the expression of uncoupling protein 2 (UCP2) in mitochondria of rat myocardium, and investigate the correlation and significance between energy metabolism and UCP2.MethodsForty five male Wistar rats were randomly divided into 3 groups (15 each): normal control (NC) group, endurance exercise (EnE) group and exhaustive exercise (ExE) group. Four weeks later, both the serum concentration of free fatty acid (FFA) and the content of ATP in myocardial mitochondria were measured. The expression of UCP2 in myocardial mitochondria was assessed with RT-PCR and Western blotting.ResultsThe content of ATP was lower in ExE group than that in NC and EnE group (P<0.01). The serum FFA concentration in ExE group was 2.0 folds and 1.7 folds higher than in that of NC group and EnE group, respectively (P<0.01). The results of RT-PCR and Western blotting indicated that the expression of UCP2 in myocardial mitochondria was significantly up-regulated in ExE group as compared with that of NC and EnE groups (P<0.01). Correlation analysis showed a positive correlation between expression of UCP2 and serum FFA concentration (r=0.795,P<0.01), while a negative correlation was found between expression of UCP2 and ATP content (r=–0.843,P<0.01).ConclusionsExhaustive exercise may increase serum FFA concentration and decrease myocardial mitochondria ATP content, and it may induce myocardial mitochondria UCP2 expression at the same time. UCP2 expression is positively correlated with FFA concentration, but it was negatively correlated with the ATP content, implying that UCP2 may participate in the process of myocardial energy metabolism during exhaustion exercise.

exercise; uncoupling protein 2; mitochondria, heart; energy metabolism

R339.4

A

0577-7402(2015)10-0794-04

10.11855/j.issn.0577-7402.2015.10.05

2015-03-27；

2015-06-25)

(責(zé)任編輯：張小利)

2014全軍后勤科研重大項(xiàng)目(AWS13C008)

李曉燕，醫(yī)學(xué)碩士，主任醫(yī)師。主要從事心血管內(nèi)科疾病的基礎(chǔ)與臨床研究

250031 濟(jì)南 濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院心內(nèi)科(李曉燕、張紅明、張國明、晉群)，檢驗(yàn)科(陳英劍)；121001 遼寧錦州遼寧醫(yī)學(xué)院研究生院(孟可、紀(jì)麗麗)