• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    靛藍(lán)在虹鱒魚(yú)體內(nèi)定位分布的放射自顯影研究

    2015-06-27 02:37:49何若竹檀翠玲羅彥鶴MarianssonIngvarBrandt周啟星
    天津科技 2015年9期
    關(guān)鍵詞:魚(yú)鰓虹鱒魚(yú)誘導(dǎo)劑

    高 鍇,何若竹,檀翠玲,羅彥鶴,閆 佩,Maria E. J?nsson,Ingvar Brandt,周啟星

    (1. 天津市環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究院 天津300191;2. 南開(kāi)大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院 天津300071;3. 瑞典烏普薩拉大學(xué)進(jìn)化生物學(xué)中心環(huán)境毒理學(xué)系 瑞典SE-75236)

    靛藍(lán)在虹鱒魚(yú)體內(nèi)定位分布的放射自顯影研究

    高 鍇1,2,3,何若竹2,檀翠玲1*,羅彥鶴1,閆 佩1,Maria E. J?nsson3,Ingvar Brandt3,周啟星2

    (1. 天津市環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究院 天津300191;2. 南開(kāi)大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院 天津300071;3. 瑞典烏普薩拉大學(xué)進(jìn)化生物學(xué)中心環(huán)境毒理學(xué)系 瑞典SE-75236)

    以虹鱒魚(yú)為實(shí)驗(yàn)魚(yú)類(lèi),通過(guò)水浴實(shí)驗(yàn),以CYP1誘導(dǎo)劑(PCB126)為研究對(duì)象,分析了靛藍(lán)在魚(yú)全身代謝的動(dòng)力學(xué)情況。通過(guò)放射自顯影方法并利用放射性14,C標(biāo)記的靛藍(lán)(18,nM)進(jìn)行水浴暴露實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明:實(shí)驗(yàn)開(kāi)始20,min后靛藍(lán)消化于膽液中;在隨后的實(shí)驗(yàn)中(暴露 3~24,h),在膽汁的排泄途徑中發(fā)現(xiàn)高濃度的標(biāo)記物。在魚(yú)鰓中也存在高濃度的標(biāo)記物;換水后,其放射性濃度逐漸降低。同時(shí)觀察到嗅覺(jué)器官中有選擇性的標(biāo)記,腎臟和肝臟中吸收的放射性物質(zhì)濃度低于鰓。比較暴露于二甲基亞砜(DMSO)和CYP1誘導(dǎo)物PCB126的魚(yú),其14,C-靛藍(lán)總體布局模式相似。CYP1抑制劑玫瑰樹(shù)堿可以阻攔14,C-靛藍(lán)在魚(yú)鰓中的積蓄。

    靛藍(lán) 放射自顯影 虹鱒魚(yú)

    靛藍(lán)(Indigo)是一類(lèi)吲哚衍生物,其色素廣泛應(yīng)用于印染業(yè)。據(jù)統(tǒng)計(jì),全球每年消耗 50,000,t靛藍(lán)用于牛仔面料的生產(chǎn)。[1]靛藍(lán)存在兩種氧化還原狀態(tài)(見(jiàn)圖1),一種是中性的且呈深藍(lán)色的氧化態(tài),由于酮基與 NH結(jié)構(gòu)中的分子間氫鍵作用而形成的平面形狀的高度穩(wěn)定結(jié)構(gòu);[2]另一種是無(wú)色的還原狀態(tài)(也稱為“白靛藍(lán)”),是染色過(guò)程中的一種溶于水的物質(zhì)。浸泡在白靛藍(lán)的面料經(jīng)風(fēng)干后,空氣中的氧會(huì)將白靛藍(lán)氧化成穩(wěn)定的、深藍(lán)色的酮基態(tài)。[3]

    由于靛藍(lán)被認(rèn)為是一種極為穩(wěn)定的物質(zhì),其在紡織業(yè)的廣泛應(yīng)用對(duì)環(huán)境造成的影響引起了研究人員的關(guān)注。[4]Campos等曾做過(guò)調(diào)研,認(rèn)為在牛仔布料的生產(chǎn)加工過(guò)程中,白靛藍(lán)會(huì)隨著廢水被排放到自然界中。[5]另外,日常生活中對(duì)經(jīng)靛藍(lán)染色衣物的清洗會(huì)使面料褪色,而使靛藍(lán)隨污水排放到污水處理廠。由于其溶解性較低,靛藍(lán)通常會(huì)被吸收在底泥中,但截至目前還沒(méi)有相關(guān)報(bào)道證實(shí)這一點(diǎn)。

    圖1 靛藍(lán)和白靛藍(lán)分子結(jié)構(gòu)Fig.1 Molecular structures of indigo and white indigo (leuco form)

    雖然目前關(guān)于人類(lèi)對(duì)于靛藍(lán)的環(huán)境暴露問(wèn)題以及日常生活中皮膚吸收藍(lán)色牛仔褲面料中的靛藍(lán)狀況等相關(guān)信息并不清楚,但是在中醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中,靛藍(lán)早已被用于治療各種皮膚病(如牛皮癬等)及慢性粒細(xì)胞白血病。[6-8]在治療牛皮癬的研究中發(fā)現(xiàn),青黛(從板藍(lán)的莖和葉中提取)和靛玉紅(靛藍(lán)異構(gòu)體)可以抑制表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的活性、表皮生長(zhǎng)因子誘發(fā)CDC25B基因表達(dá)和人類(lèi)表皮角質(zhì)細(xì)胞的增殖。[9]

    關(guān)于靛藍(lán)對(duì)人類(lèi)的影響,Adachi等[10]最先在人體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了靛藍(lán),通過(guò)對(duì)非患病人類(lèi)尿液水解等方法提取了靛藍(lán)與其異構(gòu)體青黛,從而證明人體能通過(guò)正常的代謝途徑形成靛藍(lán)類(lèi)物質(zhì);此外,還通過(guò)基于酵母系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn),證明在人類(lèi)芳烴受體(AhR)和芳香烴受體核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ARNT)基因協(xié)同表達(dá)中,靛藍(lán)和靛紅均是芳烴受體(AhR)強(qiáng)力的誘導(dǎo)劑。[10-11]另外,還有研究表明,嚙齒動(dòng)物通過(guò)腹腔內(nèi)注射或者口腔暴露靛藍(lán)后,在肝臟中沒(méi)有產(chǎn)生明顯CYP1A1的誘導(dǎo)效果,有可能是由于靛藍(lán)的快速代謝造成的。[11-12]

    當(dāng)前,國(guó)外開(kāi)展了靛藍(lán)作為內(nèi)源性 CYP1誘導(dǎo)劑的相關(guān)研究,但是靛藍(lán)在魚(yú)中的吸收、代謝及動(dòng)力學(xué)研究還鮮有報(bào)道。鑒于此,本研究選取虹鱒魚(yú)為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,嘗試應(yīng)用核素顯像手段分析放射性14,C標(biāo)記的靛藍(lán)(14,C-靛藍(lán))在虹鱒魚(yú)體內(nèi)的吸收、組織定位和排出路徑,評(píng)價(jià)利用14,C-靛藍(lán)在檢測(cè)CYP1內(nèi)源性激動(dòng)劑應(yīng)用的可行性,為此類(lèi)化學(xué)物的毒理學(xué)分析提供依據(jù)。

    1 原料與方法

    1.1 動(dòng)物與化學(xué)物質(zhì)

    虹鱒魚(yú)[(68±7),g;(18±1),cm;Mean±SD]購(gòu)于 N?s fiskod-ling公司(瑞典),養(yǎng)于烏普薩拉大學(xué)進(jìn)化生物學(xué)中心(EBC)水生動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,水溫保持在 11,°C。3,3’,4,4’,5-五氯聯(lián)苯(PCB 126;化學(xué)文摘號(hào):57465-28-8)購(gòu)于Larodan(Malm?,Sweden);靛藍(lán)(CAS:482-89-3)購(gòu)于 Sigma公司(St Louis,MO,USA)。14,C-靛藍(lán)(比活性:55,mCi/mmol;放射化學(xué)物純度:98 %,)由 OncoTargeting 公司(Uppsala,Sweden)提供。二甲基亞砜(DMSO)用作PCB126與Indigo的載體溶劑。

    1.2 暴露實(shí)驗(yàn)

    實(shí)驗(yàn)在透明的聚乙烯袋子(45×90,cm;Gibbon公司,瑞典)中進(jìn)行。將袋子放在箱子(35×20×19,cm)里后,注入20,L水并持續(xù)曝氣。實(shí)驗(yàn)步驟及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取樣方案如表1所示。在第 1組(實(shí)驗(yàn)對(duì)照組)中,7條魚(yú)用二甲基亞砜(DMSO,2.5,μg/mL)預(yù)處理24,h后,在含14,C-靛藍(lán)(18,nM)水體中暴露24,h,在處理 20,min、2,h、6,h、12,h、24,h、24,h+1,d(換水后)及24,h+2,d后取樣。第2組的7條魚(yú)經(jīng)PCB126(10,nM)預(yù)處理后暴露 24,h后,在含14,C-靛藍(lán)(18,nM)水體中暴露 24,h。第3組用于檢驗(yàn)14,C-靛藍(lán)在魚(yú)體內(nèi)吸收是否受到CYP1抑制劑玫瑰樹(shù)堿的影響。和第2組相似,3條經(jīng)過(guò)PCB126預(yù)處理的魚(yú)在暴露于14,C-靛藍(lán)之前,在玫瑰樹(shù)堿里暴露30,min。分別在暴露于14,C-靛藍(lán)12,h、24,h及24,h+2,d后取樣。使用乙酸作為溶劑配置玫瑰樹(shù)堿溶液母液,加入玫瑰樹(shù)堿溶液于水后,形成1,μmol的玫瑰樹(shù)堿和10,μg/mL的乙酸溶液,使暴露環(huán)境pH值從8.0降至7.8。按Ullberg[13]放線自顯影方法,將所有的魚(yú)進(jìn)行冷凍切片處理;處理前取魚(yú)部分(右側(cè))鰓絲、嗅覺(jué)器官、腎臟及小腸組織,固定在 10%,的甲醛中,以備進(jìn)行光學(xué)顯微鏡放射自顯影檢測(cè)。

    1.3 放線自顯影法

    實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按表 1所述方案取樣,殺死魚(yú)后將其固定在羧甲基纖維素(1%,)水凝膠中,凍結(jié)在用干冰(-72,℃)冷卻的己烷中。用超薄切片機(jī)進(jìn)行全身水平切片(20,μm)并放在膠帶表面上(3M 公司,美國(guó))。[13-14]將切片在-20,℃冷凍干燥后,置于X射線膠片上(Agfa Structurix膠片)并保存于-20,℃下,所有切片暴露30,d。

    表1 暴露實(shí)驗(yàn)方案與取樣時(shí)間Tab.1 Exposure protocols and sampling times

    1.4 顯微放線自顯影法

    虹鱒魚(yú)經(jīng)14,C-靛藍(lán)暴露 12,h后,用含有 1.5%,(v/v)戊二醛和1.5%,(v/v)甲醛的磷酸緩沖液(0.1,M,pH 7.4)固定保存魚(yú)的組織(鰓、嗅覺(jué)器官、腎臟和小腸)24,h。用 70%,(v/v)乙醇沖洗固定后的組織,于室溫下脫水晾干。用乙醇(96%,)將樣品進(jìn)一步脫水后,用超薄切片機(jī)(2,μm)切片并置于載玻片上(Thermo Scientific公司,德國(guó))。用蒸餾水洗滌后,使用Kodak NTB-2(Kodak公司)乳化顯影后置于2,℃冷藏3個(gè)月,用甲苯胺藍(lán)進(jìn)行背景染色。最后用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行切片分析(放大100~400倍)。

    2 結(jié) 果

    為了檢驗(yàn)14,C-靛藍(lán)的生理處置是否受 CYP1代謝影響,實(shí)驗(yàn)比較了對(duì)照組(第1組)與PCB126處理組(第2組)放射自顯影像圖。結(jié)果顯示,在放射性物質(zhì)的分布上,兩組之間不存在明顯的區(qū)別。然而,從整體看來(lái),PCB實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組的魚(yú)鰓中有更明顯的由14,C-靛藍(lán)衍生的放射性物質(zhì)積累。

    由放射自顯影像觀察,14,C-靛藍(lán)在水中很快由魚(yú)鰓快速吸收后立即從肝臟代謝分泌到膽汁中(20,min,見(jiàn)圖2a)。隨后(2~24,h暴露于14,C-靛藍(lán)及換水后1~2,d),在膽汁和小腸中(見(jiàn)圖2b~2g)出現(xiàn)較高濃度的放射性物質(zhì)。在整個(gè)暴露14,C-靛藍(lán)期間,鰓絲中觀察到較高濃度放射性物質(zhì)積蓄(見(jiàn)圖2a~2e),但將魚(yú)放在淡水中凈化后,標(biāo)記物濃度逐漸下降(見(jiàn)圖2f~2g)。在 6~12,h時(shí),觀察到在嗅覺(jué)器官(見(jiàn)圖2d)與腎臟(可能出現(xiàn)在腎小管,待檢)里有14,C-靛藍(lán)衍生的放射性物質(zhì)吸收和保留。在暴露的前期(20,min),肝臟與腎臟中的標(biāo)記物濃度相近;但在隨后的暴露中(24,h,24,h+1,d,24,h+2,d),腎臟中存在的放射性物質(zhì)比肝臟中明顯。

    圖2 暴露于14C-靛藍(lán)中虹鱒魚(yú)的射線自顯影圖Fig.2 Autoradiograms of rainbow trout exposed to14C-indigo via water

    實(shí)驗(yàn)用PCB 126處理組暴露CYP1抑制劑玫瑰樹(shù)堿,使14,C-靛藍(lán)在鰓中的累積幾乎被完全限制(見(jiàn)圖3);暴露于玫瑰樹(shù)堿的魚(yú)中嗅覺(jué)器官表皮細(xì)胞標(biāo)記物也減少了?;诎攵康膶?duì)放線自顯影像圖半定量評(píng)估,在膽和腸中的放射性物質(zhì)似乎沒(méi)有受到排泄的影響。

    圖3 使用CYP1抑制劑玫瑰樹(shù)堿處理后對(duì)照?qǐng)DFig.3 Autoradiograms showing the head region of PCB 126-treated rainbow trout after 12,h of exposure to14C-indigo in water

    3 討 論

    細(xì)胞色素 P450是一種混合功能氧化酶,這種單氧加氧酶體系(CYP)可以將進(jìn)入組織的有機(jī)或無(wú)機(jī)物質(zhì)氧化代謝,因此它在對(duì)外源性生物質(zhì)(exogenous chemicals)的代謝、毒物降解和維持魚(yú)類(lèi)生態(tài)平衡上發(fā)揮著重要的作用,而且還催化內(nèi)源性物質(zhì)(endogenous chemicals)的生物合成、降解。以往大多數(shù)研究都集中在CYP1A亞科,是由于CYP1A可以作為一種生物標(biāo)志物指示外源化合物如多環(huán)芳烴(PAHs)、多氯聯(lián)苯(PCBs)、多氯代二惡英(PCDDs)和多氯代苯并呋喃(PCDFs)等環(huán)境污染物的暴露。[15]此外,相關(guān)研究認(rèn)為 CYP450 一些同工酶的變化與腫瘤、腎上腺增生性疾病、巴金森氏疾病等的發(fā)展有關(guān)。但是,對(duì)于內(nèi)源性CYP1誘導(dǎo)劑的相關(guān)報(bào)道并不多見(jiàn)。靛藍(lán)作為天然的植物成分,是兼?zhèn)鋬?nèi)、外源性 CYP1誘導(dǎo)劑的性質(zhì),深入分析靛藍(lán)的體內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)不僅有利于了解其毒理學(xué)機(jī)理,而且對(duì)探索由其引發(fā)的相關(guān)疾病的保護(hù)策略等有著非常重要的意義。結(jié)果顯示,魚(yú)鰓可從水環(huán)境中快速攝取靛藍(lán),并能以水溶性代謝物形式很快從膽和腸道中代謝消除。魚(yú)鰓絲積蓄了高濃度靛藍(lán)衍生物,這與研究早期發(fā)現(xiàn)的結(jié)果一致,即魚(yú)鰓作為直接暴露于水環(huán)境的組織,與水中存在的14C-靛藍(lán)直接接觸,誘導(dǎo)鰓絲中存在的 CYP1酶產(chǎn)生作用;由于首過(guò)效應(yīng),肝臟對(duì)靛藍(lán)衍生物的吸收程度亞于鰓,這也解釋了在同一暴露條件下肝臟EROD活性低于鰓。[16]

    研究人員利用酶法(β-葡萄糖醛酸酶)或化學(xué)方法(硫酸,pH=2)水解從人類(lèi)尿液中提取出了靛藍(lán)。通過(guò)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),靛藍(lán)可以誘導(dǎo)在酵母細(xì)胞系統(tǒng)中AhR與ARNT的表達(dá),從而表明靛藍(lán)是以共軛形式從人類(lèi)尿液中排出的?;诒狙芯康姆派渥燥@影結(jié)果,表明靛藍(lán)在魚(yú)類(lèi)中的代謝途徑與人類(lèi)相似。本文開(kāi)頭所述,靛藍(lán)存在兩種氧化還原形態(tài),天然的酮基形式以及無(wú)色還原形式;雖然共面的酮基結(jié)構(gòu)是 AhR激動(dòng)劑,但酚基結(jié)構(gòu)卻很有可能無(wú)法激活A(yù)hR。目前雖然我們還未能證實(shí)靛藍(lán)向白色靛藍(lán)的生物轉(zhuǎn)化過(guò)程,但 Sugihara[12]此前也提出相似的理論,根據(jù) EROD在人類(lèi)肝細(xì)胞產(chǎn)生短暫的激活反應(yīng),提出了靛藍(lán)(以及靛紅)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)以還原狀態(tài)(無(wú)色形式)出現(xiàn)。經(jīng)14,C-靛藍(lán)暴露 20,min后,在虹鱒魚(yú)膽汁及尿液中觀察到高劑量放射性排泄物很可能是還原型的白靛藍(lán),隨后形成羥基共軛物。作為平面分子和 CYP1A的誘導(dǎo)物,靛藍(lán)能夠被 CYP1A羥基化;但是經(jīng) CYP1A抑制劑玫瑰樹(shù)堿預(yù)處理的魚(yú)的14,C-靛藍(lán)的代謝消除率沒(méi)有受到影響。由此可見(jiàn),盡管14,C-靛藍(lán)(18,nmol)可以誘導(dǎo)CYP1A的表達(dá),但由 CYP1A介導(dǎo)的新陳代謝對(duì)虹鱒魚(yú)靛藍(lán)的排泄消除并不起主要作用。

    在鰓絲中由能觀察到對(duì)放射性快速積累和持久保留,但原因尚不清楚。當(dāng)考慮靛藍(lán)誘導(dǎo) EROD及 CYP1A表達(dá)時(shí)間非常短暫,[16-17]靛藍(lán)在鰓絲中滯留時(shí)間不應(yīng)該很長(zhǎng)。然而,高濃度標(biāo)記物的積蓄表明是靛藍(lán)自身(或者其代謝產(chǎn)物)被束縛在鰓絲上。在顯微放射自顯影實(shí)驗(yàn)中,使用溶劑處理后,結(jié)果清晰表明,鰓絲上積蓄的放射性物質(zhì)不是由活性中間代謝物(共價(jià))與組織不可逆結(jié)合后形成的。在這點(diǎn)上,靛藍(lán)的性質(zhì)與另一種 CYP1激動(dòng)劑苯并[a]芘完全不同,后者經(jīng)暴露處理后不可逆轉(zhuǎn)地綁定在二級(jí)鰓絲上。[18]經(jīng) CYP1強(qiáng)效抑制劑玫瑰樹(shù)堿處理后,魚(yú)鰓中對(duì)靛藍(lán)的攝取完全被阻攔,[18]可見(jiàn)鰓對(duì)靛藍(lán)的攝取是 CYP1誘導(dǎo)依賴性的,表明與 CYP1的結(jié)合親和力強(qiáng)但過(guò)程可逆。

    我們?cè)谛嵊X(jué)器官上皮細(xì)胞也發(fā)現(xiàn)了標(biāo)記物的吸收。雖然有報(bào)道稱嗅覺(jué)器官上皮細(xì)胞(經(jīng) PCB126預(yù)處理)可以與苯并[a]芘產(chǎn)生不可逆的結(jié)合,但在未經(jīng) PCB126誘導(dǎo)的魚(yú)中卻沒(méi)有發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象。[18]

    4 結(jié) 語(yǔ)

    本實(shí)驗(yàn)采用放射自顯影技術(shù)首次對(duì) CYP1誘導(dǎo)劑靛藍(lán)在虹鱒魚(yú)體內(nèi)的吸收、分布、排泄等情況提供了初步的形態(tài)學(xué)依據(jù)。對(duì)進(jìn)一步研究分析 CYP1類(lèi)誘導(dǎo)劑可能對(duì)有機(jī)體產(chǎn)生的影響及作用機(jī)制提供了科學(xué)依據(jù)。■

    [1] Bechtold T,Turcanu A,Schrott W. Dyeing behaviour of hydrogenated indigo in electrochemically reduced dyebaths [J]. Coloration Technology,2008,124(5):324-330.

    [2] Rond?o R,Melo J S D,Schaberle F A,et al. Excited state characterization of a polymeric indigo [J]. Physical chemistry chemical physics,2012,14(5):1778-1783.

    [3] Bo?i? M,Kokol V. Ecological alternatives to the reduction and oxidation processes in dyeing with vat and sulphur dyes [J]. Dyes and Pigments,2008,76(2):299-309.

    [4] Balan D S L,Monteiro R T R. Decolorization of textile indigo dye by ligninolytic fungi [J]. Journal of Biotechnology,2001,89(2-3):141-145.

    [5] Campos R,Kandelbauer A,Robra K H,et al. Indigo degradation with purified laccases from Trametes hirsuta and Sclerotium rolfsii [J]. Journal of Biotechnology,2001,89(2-3):131-139.

    [6] Hoessel R,Leclerc S,Endicott J A,et al. Indirubin,the active constituent of a Chinese antileukaemia medicine,inhibits cyclin-dependent kinases [J]. Nature Cell Biology,1999,1(1):60-67.

    [7] Xiao Z,Hao Y,Liu B,et al. Indirubin and meisoindigo in the treatment of chronic myelogenous leukemia in China [J]. Leukemia and Lymphoma,2002,43(9):1763-1768.

    [8] Lin Y K,Wong W R,Chang Y C,et al. The efficacy and safety of topically applied indigo naturalis ointment in patients with plaque-type psoriasis [J]. Dermatology,2007,214(2):155-161.

    [9] Hsieh W L,Lin Y K,Tsai C N,et al. Indirubin,an acting component of indigo naturalis,inhibits EGFR activation and EGF-induced CDC25B gene expression in epidermal keratinocytes [J]. Journal of Dermatological Science,2012,67(2):140-146.

    [10] Adachi J,Mori Y,Matsui S,et al. Indirubin and indigo are potent aryl hydrocarbon receptor ligands present in human urine [J]. Journal of Biological Chemistry,2001,276(34):31475-31478.

    [11] Guengerich F P,Martin M V,McCormick W A,et al. Aryl hydrocarbon receptor response to indigoids in vitro and in vivo [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics,2004,423(2):309-316.

    [12] Sugihara K,Kitamura S,Yamada T,et al. Aryl hydrocarbon receptor-mediated induction of microsomal drug-metabolizing enzyme activity by indirubin and indigo [J]. Biochemical and Biophysical Research Communications,2004,318(2):571-578.

    [13] Ullberg S. The technique of whole body autoradiography cryosectioning of large specimens [J]. Science Tools,LKB Instrument Journal,1977:2-29.

    [14] Ullberg S. Studies on the distribution and fate of S35-labelled benzylpenicillin in the body [J]. Acta radiologica. Supplementum,1954(118):1-110.

    [15] Stegeman J J. The cytochromes P450 in fish [J]. Biochemistry and Molecular Biology of Fishes,1993(2):137-508.

    [16] J?nsson E M,Abrahamson A,Brunstr?m B,et al. Cytochrome P4501A induction in rainbow trout gills and liver following exposure to waterborne indigo,benzo [a] pyrene and 3,3,4,4,5-pentachlorobiphenyl[J]. Aquatic Toxicology,2006,79(3):226-232.

    [17] Gao K,Brandt I,Goldstone J V,et al. Cytochrome P450 1A,1B,and 1C mRNA induction patterns in three-spined stickleback exposed to a transient and a persistent inducer [J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part C:Toxicology & Pharmacology,2011,154(1):42-55.

    [18] J?nsson M E,Brunstr?m B,Ingebrigtsen K,et al. Cell-specific CYP1A expression and benzo[a] pyrene adduct formation in gills of rainbow trout(Oncorhynchus mykiss) following CYP1A induction in the laboratory and in the field[J]. Environmental toxicology and chemistry,2004,23(4):874-882.

    Autoradiographic Disposition of Indigo in Rainbow Trout

    GAO Kai1,2,3,HE Ruozhu2,TAN Cuiling1*,LUO Yanhe1,YAN Pei1,J?NSSON E.Maria3,BRANDT Ingvar3,ZHOU Qixing2
    (1.Tianjin Academy of Environmental Sciences,Tianjin 300191,China;2.College of Environmental Science and Engineering,Nankai University,Tianjin 300071,China;3.Environmental Toxicology of Evolutionary Biology Center,Uppsala University,Uppsala SE-752 36,Sweden)

    In the study,the whole-body kinetics of indigo in rainbow trout was examined through exposure via ambient water.Determined by autoradiography,there was an uptake of14,C-indigo(18,nM)from the water and a subsequent elimination into the bile within 20,mins.At later time-points(3-24,h of exposure;24,h of exposure plus 1-2days in clean water),high concentration14C labelled substances were present in the biliary excretory pathways.A high concentration of radioactivity appeared in the gill filaments throughout the exposure period(24,h),and the concentration gradually decreased when fish were put in clean water for depuration.A selective labelling of the olfactory organ was also observed.The uptake of radioactivity in the kidney and liver was pronounced but lower than in the gills.The overall distribution pattern of14,C-indigo was similar in fish exposed to the vehicle(DMSO)and in fish exposed to the CYP1 inducer,PCB126.The accumulation of14,C-indigo in the gills was,however completely blocked in PCB 126-exposed fish exposed to the CYP1 inhibitor ellipticine.

    indigo;autoradiography;rainbow trout

    X171.5

    A

    1006-8945(2015)09-0083-04

    *通訊作者

    天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃(合同編號(hào):14JCYBJC43800)。

    2015-08-02

    猜你喜歡
    魚(yú)鰓虹鱒魚(yú)誘導(dǎo)劑
    蝠鲼過(guò)濾海水有妙招
    間歇浸沒(méi)植物生物反應(yīng)器培養(yǎng)梔子愈傷組織及產(chǎn)藏紅花素條件研究
    那么多海蚌一起游,一起流淚
    詩(shī)林(2020年1期)2020-11-18 22:12:27
    牛脾轉(zhuǎn)移因子聯(lián)合核酸疫苗對(duì)虹鱒魚(yú)IHN病的保護(hù)率影響研究
    快速取魚(yú)鰓器
    誘導(dǎo)劑對(duì)乳白耙齒菌產(chǎn)MnP活性影響研究
    英國(guó)警示含左炔諾孕酮的緊急避孕藥與肝酶誘導(dǎo)劑聯(lián)合使用可能降低緊急避孕效果
    飼料無(wú)酶褐變對(duì)雄性虹鱒魚(yú)胃蛋白酶活性的影響
    飼料博覽(2016年7期)2016-04-05 14:20:34
    葡聚糖類(lèi)抗病誘導(dǎo)劑在水稻上的試驗(yàn)初報(bào)
    買(mǎi)魚(yú)的學(xué)問(wèn)
    在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 免费人妻精品一区二区三区视频| 精华霜和精华液先用哪个| 日韩不卡一区二区三区视频在线| a级毛片免费高清观看在线播放| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 美女内射精品一级片tv| 99热这里只有精品一区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲在久久综合| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 1000部很黄的大片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 少妇的逼好多水| av国产精品久久久久影院| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲人成网站在线播| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 99re6热这里在线精品视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 美女主播在线视频| 午夜激情久久久久久久| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日韩免费高清中文字幕av| 久久99热6这里只有精品| 乱码一卡2卡4卡精品| 91精品一卡2卡3卡4卡| .国产精品久久| freevideosex欧美| 日本午夜av视频| xxx大片免费视频| 日本爱情动作片www.在线观看| 99久久精品国产国产毛片| 干丝袜人妻中文字幕| av在线老鸭窝| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 成人国产麻豆网| 亚洲国产欧美人成| 高清欧美精品videossex| 亚洲成人一二三区av| 亚洲人成网站高清观看| 在线看a的网站| 99热国产这里只有精品6| 一边亲一边摸免费视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲,欧美,日韩| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产精品人妻久久久影院| 日本爱情动作片www.在线观看| 下体分泌物呈黄色| 精品亚洲成国产av| 黄色日韩在线| 精华霜和精华液先用哪个| 麻豆国产97在线/欧美| 国产成人a∨麻豆精品| 国产中年淑女户外野战色| 老女人水多毛片| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲真实伦在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 天天躁日日操中文字幕| 韩国高清视频一区二区三区| 一个人看视频在线观看www免费| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲欧洲国产日韩| 欧美一区二区亚洲| 韩国av在线不卡| 观看免费一级毛片| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 国产伦精品一区二区三区视频9| 久久 成人 亚洲| 免费黄色在线免费观看| 午夜免费观看性视频| 最近中文字幕2019免费版| 街头女战士在线观看网站| 久久久国产一区二区| 午夜福利视频精品| 美女高潮的动态| 精品一区二区三卡| 亚洲欧美精品自产自拍| 七月丁香在线播放| 日本一二三区视频观看| 九九爱精品视频在线观看| 18+在线观看网站| 欧美xxⅹ黑人| 亚州av有码| 国产成人免费无遮挡视频| 国产中年淑女户外野战色| 免费少妇av软件| av福利片在线观看| 99久久精品热视频| 亚洲高清免费不卡视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 免费观看a级毛片全部| 多毛熟女@视频| 日韩欧美精品免费久久| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品酒店卫生间| 国产极品天堂在线| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲av免费高清在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲在久久综合| 国产黄色免费在线视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲精品日本国产第一区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产日韩一区二区| 久久久亚洲精品成人影院| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美日韩在线观看h| 最近中文字幕高清免费大全6| 中文字幕免费在线视频6| 色网站视频免费| 五月玫瑰六月丁香| 妹子高潮喷水视频| 国产有黄有色有爽视频| 激情 狠狠 欧美| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲电影在线观看av| 少妇的逼好多水| 三级国产精品片| 亚洲最大成人中文| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国内精品宾馆在线| 日韩一区二区视频免费看| av在线观看视频网站免费| 色哟哟·www| 99久国产av精品国产电影| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲人成网站在线播| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| av黄色大香蕉| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| av视频免费观看在线观看| 麻豆成人av视频| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲精品视频女| 国产一区二区三区av在线| 国产成人免费观看mmmm| 午夜激情久久久久久久| 久久综合国产亚洲精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 美女视频免费永久观看网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产高清三级在线| 久久精品国产a三级三级三级| 日日啪夜夜爽| 久久久精品免费免费高清| 亚洲久久久国产精品| 亚洲经典国产精华液单| 制服丝袜香蕉在线| av播播在线观看一区| 色婷婷av一区二区三区视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲av不卡在线观看| 免费看不卡的av| 国产av精品麻豆| 亚洲欧洲国产日韩| 我要看黄色一级片免费的| 在线观看人妻少妇| 免费观看av网站的网址| 黑人猛操日本美女一级片| 国产 精品1| 国产淫语在线视频| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 偷拍熟女少妇极品色| 99热这里只有是精品在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 亚洲精品,欧美精品| 一级二级三级毛片免费看| 少妇熟女欧美另类| 国产成人freesex在线| 91aial.com中文字幕在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲精品日本国产第一区| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 亚洲国产精品专区欧美| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲精品一区蜜桃| 大话2 男鬼变身卡| 国产精品免费大片| 色5月婷婷丁香| 国产精品国产三级专区第一集| 丰满乱子伦码专区| 干丝袜人妻中文字幕| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 免费高清在线观看视频在线观看| 永久免费av网站大全| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲精品视频女| 最新中文字幕久久久久| 99九九线精品视频在线观看视频| 精品午夜福利在线看| 免费av中文字幕在线| 午夜福利视频精品| 一级黄片播放器| 在线观看人妻少妇| 日本黄色日本黄色录像| 边亲边吃奶的免费视频| 中文欧美无线码| 九色成人免费人妻av| 在线观看免费高清a一片| 日韩 亚洲 欧美在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| h视频一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲av二区三区四区| .国产精品久久| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 一区二区av电影网| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图 | 亚洲国产av新网站| 91久久精品国产一区二区三区| 美女内射精品一级片tv| 久久人人爽人人片av| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产探花极品一区二区| 中文天堂在线官网| 国产一区二区三区av在线| 亚洲欧美日韩卡通动漫| tube8黄色片| 边亲边吃奶的免费视频| 舔av片在线| 香蕉精品网在线| 夫妻性生交免费视频一级片| 最近最新中文字幕免费大全7| 老司机影院成人| 一级爰片在线观看| 国产精品成人在线| 日韩欧美精品免费久久| 赤兔流量卡办理| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲av在线观看美女高潮| 永久网站在线| 亚洲国产精品一区三区| 内地一区二区视频在线| 插逼视频在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 伊人久久国产一区二区| 亚洲精品视频女| av国产精品久久久久影院| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 我的老师免费观看完整版| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲av不卡在线观看| 国产色婷婷99| 国产极品天堂在线| 六月丁香七月| 久久久欧美国产精品| 久久国产乱子免费精品| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产av一区二区精品久久 | 久久精品久久精品一区二区三区| 久久精品国产a三级三级三级| 国产成人精品久久久久久| 国产精品三级大全| 成年免费大片在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 色视频在线一区二区三区| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美xxⅹ黑人| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 内地一区二区视频在线| 亚洲精品视频女| 免费观看的影片在线观看| 精品酒店卫生间| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产精品久久久久久精品古装| 人妻夜夜爽99麻豆av| 嫩草影院入口| 久久久久久久久久久免费av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日韩成人伦理影院| 夫妻午夜视频| 美女中出高潮动态图| 又大又黄又爽视频免费| 欧美成人精品欧美一级黄| freevideosex欧美| 久久人人爽人人片av| 1000部很黄的大片| 亚洲精品日本国产第一区| 大陆偷拍与自拍| 欧美zozozo另类| 高清视频免费观看一区二区| 青青草视频在线视频观看| a级一级毛片免费在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 成年av动漫网址| 亚洲精品日韩av片在线观看| 美女视频免费永久观看网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 精品一区二区三区视频在线| 国产成人精品久久久久久| 亚洲国产最新在线播放| 大陆偷拍与自拍| 卡戴珊不雅视频在线播放| 一个人看视频在线观看www免费| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 成年女人在线观看亚洲视频| 亚洲内射少妇av| 亚洲第一av免费看| 久久久久视频综合| 丝袜喷水一区| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲不卡免费看| 亚洲天堂av无毛| 日本黄色片子视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产片特级美女逼逼视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久网色| 国产免费一级a男人的天堂| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 男人添女人高潮全过程视频| 1000部很黄的大片| 赤兔流量卡办理| 深夜a级毛片| 最后的刺客免费高清国语| 国产色婷婷99| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产片特级美女逼逼视频| 日韩电影二区| 街头女战士在线观看网站| 春色校园在线视频观看| 内射极品少妇av片p| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 成年免费大片在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 欧美一区二区亚洲| 欧美一级a爱片免费观看看| 日本av免费视频播放| 男人和女人高潮做爰伦理| 十八禁网站网址无遮挡 | 91在线精品国自产拍蜜月| 成年女人在线观看亚洲视频| 日本午夜av视频| av卡一久久| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美zozozo另类| 国产欧美日韩精品一区二区| 26uuu在线亚洲综合色| 久久久色成人| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 多毛熟女@视频| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产在线男女| 久久久久久久久大av| 欧美3d第一页| 高清黄色对白视频在线免费看 | 国产精品熟女久久久久浪| 不卡视频在线观看欧美| 精品久久国产蜜桃| 久久久久国产精品人妻一区二区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 日韩av免费高清视频| 国产爽快片一区二区三区| av免费观看日本| 纯流量卡能插随身wifi吗| 观看av在线不卡| 久热久热在线精品观看| 搡女人真爽免费视频火全软件| 熟妇人妻不卡中文字幕| 99久久中文字幕三级久久日本| 最近最新中文字幕大全电影3| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 大码成人一级视频| 少妇的逼水好多| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲国产精品999| 国产精品女同一区二区软件| 大香蕉久久网| 欧美成人一区二区免费高清观看| 制服丝袜香蕉在线| 午夜激情福利司机影院| 街头女战士在线观看网站| 国产精品久久久久久久久免| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲第一av免费看| 男女国产视频网站| 免费看光身美女| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲av二区三区四区| 插阴视频在线观看视频| 在线看a的网站| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产精品福利在线免费观看| 熟妇人妻不卡中文字幕| 爱豆传媒免费全集在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 多毛熟女@视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 色视频在线一区二区三区| 精品酒店卫生间| 丰满少妇做爰视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 韩国av在线不卡| 成人黄色视频免费在线看| 成年av动漫网址| 亚洲av男天堂| 青春草视频在线免费观看| 精品一区在线观看国产| 99re6热这里在线精品视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 熟女电影av网| 最近2019中文字幕mv第一页| 深夜a级毛片| 欧美成人午夜免费资源| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 男人舔奶头视频| 99热这里只有是精品在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 日韩av免费高清视频| 国产精品不卡视频一区二区| 久久97久久精品| 国产精品一区二区在线观看99| 国内精品宾馆在线| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲欧洲国产日韩| 日韩视频在线欧美| 国产精品精品国产色婷婷| 精品酒店卫生间| 春色校园在线视频观看| 亚洲一区二区三区欧美精品| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲国产精品专区欧美| 精品亚洲成a人片在线观看 | 亚洲真实伦在线观看| 少妇熟女欧美另类| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 中文在线观看免费www的网站| 日韩av免费高清视频| 91狼人影院| 国产精品久久久久久av不卡| 免费观看在线日韩| 国产黄色视频一区二区在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲不卡免费看| 国产成人精品婷婷| 99re6热这里在线精品视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| av.在线天堂| 99热6这里只有精品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产成人aa在线观看| 亚洲精品日韩av片在线观看| 一个人免费看片子| 青春草亚洲视频在线观看| 三级经典国产精品| 久久久色成人| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产高清三级在线| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲成色77777| av女优亚洲男人天堂| 精品人妻视频免费看| 涩涩av久久男人的天堂| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 岛国毛片在线播放| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 久久精品国产a三级三级三级| 日韩av免费高清视频| 国产探花极品一区二区| 亚洲四区av| 日本与韩国留学比较| 97在线人人人人妻| 欧美国产精品一级二级三级 | 26uuu在线亚洲综合色| 日本欧美视频一区| 午夜免费鲁丝| 制服丝袜香蕉在线| 免费看日本二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| kizo精华| 一级毛片我不卡| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲av不卡在线观看| 欧美成人a在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲av综合色区一区| 精品一区二区免费观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 大片免费播放器 马上看| 国产乱人视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 欧美精品国产亚洲| 国产欧美亚洲国产| 国产精品久久久久久精品电影小说 | videossex国产| 午夜福利高清视频| 国产91av在线免费观看| 欧美国产精品一级二级三级 | 一区二区av电影网| 人妻 亚洲 视频| 高清不卡的av网站| 午夜福利高清视频| 久久精品国产亚洲av天美| 成人国产av品久久久| 亚洲国产精品国产精品| 久久ye,这里只有精品| av天堂中文字幕网| 少妇熟女欧美另类| 高清日韩中文字幕在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 春色校园在线视频观看| 欧美日韩视频精品一区| 青春草视频在线免费观看| 国产av国产精品国产| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲美女搞黄在线观看| 日韩强制内射视频| 高清午夜精品一区二区三区| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩制服骚丝袜av| 欧美日本视频| 精品久久久精品久久久| 欧美精品一区二区免费开放| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 久久久久久人妻| 男女国产视频网站| 熟女电影av网| 免费看日本二区| 九色成人免费人妻av| 网址你懂的国产日韩在线| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲国产精品专区欧美| 人妻一区二区av| 在现免费观看毛片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国模一区二区三区四区视频| 黄片无遮挡物在线观看| 中文字幕久久专区| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 久久精品国产a三级三级三级| 中国国产av一级| 精品国产露脸久久av麻豆| 性色av一级| 亚洲精品色激情综合| 十八禁网站网址无遮挡 | 日韩欧美一区视频在线观看 | av在线app专区| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲第一区二区三区不卡| 中文字幕亚洲精品专区| 国产男人的电影天堂91| 伊人久久精品亚洲午夜| 欧美精品亚洲一区二区| 日本wwww免费看| 在线播放无遮挡| 一区二区三区乱码不卡18| 一区在线观看完整版| 久久这里有精品视频免费| 好男人视频免费观看在线| 国产精品福利在线免费观看| 男人添女人高潮全过程视频| 六月丁香七月| 国产精品福利在线免费观看| 美女中出高潮动态图| 在线观看免费高清a一片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久久a久久爽久久v久久| 日韩强制内射视频| 日本黄色日本黄色录像| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品久久久久久久电影| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久热精品热| 亚洲精品456在线播放app| 久久久久久伊人网av| 精品一品国产午夜福利视频| 嫩草影院新地址| av.在线天堂| 国产中年淑女户外野战色| 少妇丰满av| 国产色婷婷99| 视频中文字幕在线观看| 九九在线视频观看精品| 亚洲欧美一区二区三区国产| 一区在线观看完整版| 亚洲不卡免费看|