動(dòng)物iPS 細(xì)胞研究進(jìn)展

方月琴，朱少暉，湯俊梅，陸豪杰

（江蘇蘇州健雄職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物與化學(xué)工程系，江蘇蘇州215411）

誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells，iPS細(xì)胞）技術(shù)是通過(guò)外源性導(dǎo)入特定的轉(zhuǎn)錄因子，將已分化的細(xì)胞重編程回歸到胚胎細(xì)胞狀態(tài)。Takahashi K 等［1］通過(guò)大量試驗(yàn)，在多種轉(zhuǎn)錄因子中 篩 選 得 出Sox2、Klf4、Oct4 和c－Myc（簡(jiǎn) 稱SKOM）這4種轉(zhuǎn)錄因子，成功將小鼠皮膚成纖維細(xì)胞重編程回到類似胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cell，ES細(xì)胞）的一種細(xì)胞類型，稱為iPS細(xì)胞。iPS細(xì)胞具有自我更新能力和分化潛能，其功能與ES細(xì)胞類似，因此無(wú)需制造胚胎，理論上從任何組織的成體細(xì)胞都可制造出具有干細(xì)胞功能的細(xì)胞，在科研工作中避免了胚胎研究所面臨的倫理學(xué)問(wèn)題，成為生命科學(xué)領(lǐng)域的一次巨大革命［2］。經(jīng)過(guò)多年的快速發(fā)展，iPS細(xì)胞技術(shù)在各個(gè)相關(guān)領(lǐng)域都取得了重大進(jìn)展，本文將從iPS細(xì)胞技術(shù)制備動(dòng)物細(xì)胞系和動(dòng)物個(gè)體兩方面，關(guān)注該技術(shù)的研究進(jìn)展。

1 iPS細(xì)胞技術(shù)建立動(dòng)物細(xì)胞系

1.1 嚙齒類動(dòng)物

1.1.1 小鼠 Takahashi K 等［1］利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pMXs攜帶SKOM 4種轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)PLATE細(xì)胞制備高滴度病毒顆粒，感染小鼠皮膚成纖維細(xì)胞，經(jīng)過(guò)3 周左右的培養(yǎng)出現(xiàn)擁有正常核型、與ES細(xì)胞有同樣細(xì)胞表面標(biāo)記，且具有能夠向3個(gè)胚層發(fā)育潛能的iPS細(xì)胞。這項(xiàng)技術(shù)引起了科學(xué)界的轟動(dòng)，引發(fā)熱議［2］。然而利用病毒載體為媒介進(jìn)行感染雖然具有高效穩(wěn)定表達(dá)、較高的轉(zhuǎn)化效率等優(yōu)點(diǎn)，但是逆轉(zhuǎn)錄病毒會(huì)插入靶細(xì)胞基因組中，增加了外源性基因的導(dǎo)入機(jī)會(huì)，甚至激活原宿主染色體上的癌基因，可能會(huì)在后續(xù)的長(zhǎng)期試驗(yàn)中出現(xiàn)不可預(yù)知的現(xiàn)象［3］。鑒于此，很多科研團(tuán)隊(duì)開(kāi)始尋求無(wú)病毒的基因?qū)敕椒?。最早制備無(wú)病毒小鼠iPS細(xì)胞的是Okita K 團(tuán) 隊(duì)［4］，在 小 鼠 胚 胎 成 纖 維 細(xì) 胞（mouse embryonic fibroblast cells，MEF）中轉(zhuǎn)染2種質(zhì)粒，其中一種攜帶Oct3／4、Sox2 和Klf4 的cDNA 序列，另一種攜帶c－Myc的cDNA 序列。所獲得的iPS細(xì)胞移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)長(zhǎng)出三胚層畸胎瘤，表明了iPS細(xì)胞的多能性。但是與病毒感染方法相比，該方法iPS細(xì)胞生成效率降低約100倍（經(jīng)典病毒感染獲得iPS 效率為0.1%左右［1］）。為提高試驗(yàn)成功率與工作效率，Keisuke K 等［5］采用一個(gè)載體同時(shí)表達(dá)SKOM 基因，并與piggyBac轉(zhuǎn)座子基因介導(dǎo)相結(jié)合，高效制備了無(wú)病毒小鼠iPS細(xì)胞；獲得iPS細(xì)胞后，又成功將先前導(dǎo)入的轉(zhuǎn)錄因子基因從iPS細(xì)胞中移除。這一過(guò)程就保證了所獲得的iPS細(xì)胞基因組與初始細(xì)胞是完全一致的。同時(shí)，平均轉(zhuǎn)化效率達(dá)2.5%，相比經(jīng)典方法提高了25倍。此外，小分子化合物的發(fā)現(xiàn)與引入大大提高了iPS細(xì)胞的制備效率，還能在制備過(guò)程中避免引入遺傳物質(zhì)，提高iPS細(xì)胞的安全性［6］。

作為最常用的模式動(dòng)物，小鼠被選作iPS 細(xì)胞系建立的第一種動(dòng)物，并在之后iPS細(xì)胞技術(shù)的發(fā)展里程碑中功不可沒(méi)。經(jīng)過(guò)將近10年的發(fā)展，iPS細(xì)胞技術(shù)取得了長(zhǎng)足的發(fā)展，為應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)、動(dòng)物學(xué)等領(lǐng)域的研究奠定了堅(jiān)實(shí)的科研基礎(chǔ)。

1.1.2 大鼠 小鼠和人iPS細(xì)胞早在2006年就已獲得，Li W 等［7］在重編程過(guò)程中引入化學(xué)因子，大鼠iPS細(xì)胞系才真正建立。該小組通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體將4種因子轉(zhuǎn)染入大鼠肝上皮細(xì)胞，在MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞上，利用傳統(tǒng)的小鼠ES 細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)10d后，能夠獲得堿性磷酸酶陽(yáng)性、類似小鼠ES細(xì)胞的克隆，傳代后細(xì)胞迅速分化，失去ES 細(xì)胞形態(tài)，說(shuō)明傳統(tǒng)的小鼠ES 細(xì)胞培養(yǎng)條件可能不足以維持大鼠iPS細(xì)胞的多能狀態(tài)。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在ES細(xì)胞培養(yǎng)基中添加一些試驗(yàn)證明可抑制分化、支持ES細(xì)胞自我更新的小分子物質(zhì)，包括PD0325901，CHIR99021和A－83－01，可獲得大鼠iPS細(xì)胞；并經(jīng)試驗(yàn)證明具有向3個(gè)胚層分化的潛能。

隨后其他研究團(tuán)隊(duì)也成功獲得了大鼠iPS 細(xì)胞［8］。相對(duì)于小鼠，大鼠更適合于生理學(xué)和行為學(xué)的研究，因此大鼠iPS細(xì)胞系的建立為這些方向的研究擴(kuò)大了科研基礎(chǔ)，并為其他嚙齒類動(dòng)物提供了試驗(yàn)對(duì)照與參考。

1.2 非人類的靈長(zhǎng)類動(dòng)物

繼小鼠iPS細(xì)胞系的成功建立，鄧宏魁教授實(shí)驗(yàn)室于2008 年率先報(bào)道建立了恒河猴iPS 細(xì)胞系［9］。首先利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pMX 攜帶4種轉(zhuǎn)錄因子，制備病毒懸液；將病毒懸液濃縮30倍，感染成年雄性恒河猴的耳部皮膚來(lái)源成纖維細(xì)胞，6d后成纖維細(xì)胞出現(xiàn)初步的形態(tài)改變，再將其轉(zhuǎn)移至MEF細(xì)胞上，并將培養(yǎng)液改為ES 細(xì)胞培養(yǎng)基，經(jīng)26d～29d后出現(xiàn)ES細(xì)胞樣克隆。經(jīng)分子與蛋白水平檢測(cè)，該iPS細(xì)胞與猴ES細(xì)胞具有同樣的基因表達(dá)，并在體內(nèi)、體外試驗(yàn)中表現(xiàn)出向3個(gè)胚層分化的潛能。狨猴［10］、黑猩猩［11］等靈長(zhǎng)類動(dòng)物都建立了相應(yīng)的iPS 細(xì)胞系。作為與人類最接近的模式動(dòng)物，大部分人類疾病可建立恒河猴疾病模型；而靈長(zhǎng)類動(dòng)物iPS細(xì)胞的成功制備，對(duì)于人類疾病的發(fā)生機(jī)理與治療研究具有深遠(yuǎn)的意義，并可作為人類進(jìn)化研究的工具［12］；同時(shí)對(duì)于其他珍稀物種，如金絲猴的保護(hù)也提供了新思路。

1.3 有蹄類動(dòng)物

迄今為止，已獲得小鼠、大鼠、猴和人類4種ES細(xì)胞系；而所有有蹄類家畜的ES細(xì)胞系尚未建立。但是家畜，如豬的體型和器官與人類相似，可作為研究人類疾病的良好模型及器官移植的來(lái)源，因此建立家畜ES細(xì)胞或iPS細(xì)胞系有重要的應(yīng)用價(jià)值。

Wu Z等［13］完成了豬iPS細(xì)胞系的建立。該小組首先采用攜帶4種轉(zhuǎn)錄因子的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體制備相應(yīng)的病毒感染豬成體細(xì)胞，但是以失敗告終。之后采用慢病毒方法，選擇一含多西環(huán)素藥物誘導(dǎo)基因的慢病毒載體，并在載體中克隆入6種轉(zhuǎn)錄因子（SKOM，Nanog 和Lin28），在多西環(huán)素存在時(shí)，這6種基因得以表達(dá)。收集表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子的慢病毒載體感染丹麥長(zhǎng)白豬耳朵成纖維細(xì)胞或骨髓細(xì)胞，2 d后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至MEF，3d 時(shí)換成ES 細(xì)胞培養(yǎng)基。轉(zhuǎn)染7d后開(kāi)始出現(xiàn)類似人ES細(xì)胞；13d克隆變大，并有明顯邊界。試驗(yàn)表明，豬iPS 細(xì)胞與人ES細(xì)胞有相似的形態(tài)與表達(dá)標(biāo)記。與此同時(shí)，Esteban M A 等［14］建立了西藏小型豬的iPS細(xì)胞系，試驗(yàn)采用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體攜帶4種人或小鼠的轉(zhuǎn)錄因子，感染豬胚胎成纖維細(xì)胞8d～10d后，均出現(xiàn)類似人ES細(xì)胞克隆。與其他報(bào)道不同的是，培養(yǎng)細(xì)胞溫度設(shè)置為39 ℃，即豬的生理體溫，這可能影響iPS細(xì)胞生成效率。相比于其他動(dòng)物來(lái)源iPS細(xì)胞，豬iPS細(xì)胞具有正常核型，表達(dá)高水平的ES細(xì)胞標(biāo)記，可分化成含3個(gè)胚層的畸胎瘤，可以說(shuō)更接近于人ES細(xì)胞的特點(diǎn)。迄今為止，已有多個(gè)團(tuán)隊(duì)成功獲得豬iPS細(xì)胞［15］。此后，研究者相繼制備了馬［16］、牛［17］等的iPS細(xì)胞。而北非白犀牛iPS細(xì)胞系的建立［18］，也為瀕臨滅絕珍稀動(dòng)物的保存和生物多樣性的保護(hù)提供了新方法。除以上動(dòng)物，雞［19］、蝙蝠［20］等的iPS細(xì)胞也已建立，說(shuō)明該技術(shù)可廣泛適用于多種物種，為其他動(dòng)物iPS細(xì)胞建系提供了借鑒，并為珍稀動(dòng)物物種保護(hù)，以及當(dāng)前非常困難的轉(zhuǎn)基因大動(dòng)物模型的建立，提供了寶貴的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)與科研新思路。然而，雖然早在2007 年已證實(shí)iPS細(xì)胞能夠嵌合到生殖嵴［21］，說(shuō)明其具有一定的多能性，但是iPS細(xì)胞一直未能通過(guò)四倍體補(bǔ)償試驗(yàn)，即鑒定多能性細(xì)胞發(fā)育能力的黃金標(biāo)準(zhǔn)［22］。因此，如何將成功建立的動(dòng)物iPS細(xì)胞系轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的動(dòng)物個(gè)體，是一項(xiàng)更為復(fù)雜的挑戰(zhàn)。迄今iPS細(xì)胞來(lái)源的小鼠、大鼠和豬已制備成功。

2 制備iPS細(xì)胞來(lái)源動(dòng)物個(gè)體

iPS細(xì)胞與ES細(xì)胞一樣具有自我更新和分化能力，并規(guī)避了轉(zhuǎn)基因所面臨的倫理學(xué)問(wèn)題；此外，在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究中，將iPS細(xì)胞技術(shù)與動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)相結(jié)合，可大大簡(jiǎn)化轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制備過(guò)程。比如，作為轉(zhuǎn)基因的靶細(xì)胞，通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)將外源基因?qū)雐PS細(xì)胞；或是利用iPS 細(xì)胞作為核供體細(xì)胞，同適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞融合后直接獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。也可以針對(duì)iPS細(xì)胞進(jìn)行基因打靶或基因敲除等遺傳修飾，從而根據(jù)人的意愿實(shí)現(xiàn)iPS細(xì)胞內(nèi)基因改造，然后將其注入囊胚腔獲得嵌合體后代，以高效、定向地制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。目前利用iPS細(xì)胞獲得成體小鼠、大鼠和豬即是通過(guò)這些方法。

2.1 iPS細(xì)胞來(lái)源成體小鼠

Zhao X Y 等［23－24］報(bào) 道 獲 得 了iPS 細(xì) 胞 來(lái) 源 的成體小鼠，這是世界上首例完全由iPS細(xì)胞制備的活體小鼠，證實(shí)了完全重編程的iPS細(xì)胞具有與ES細(xì)胞同樣的發(fā)育全能性。iPS細(xì)胞來(lái)源成體小鼠制備過(guò)程分為兩個(gè)階段。第一階段是制備小鼠iPS細(xì)胞。Zhao X Y 等［23］在制備iPS細(xì)胞過(guò)程中，首先通過(guò)2次感染提高感染效率，并在之后的培養(yǎng)液中利用Knockout血清替代物（Knockout serum replacement，KOSR）取代FBS以提高小鼠胚胎的建系效率及加速iPS細(xì)胞形成進(jìn)程，并分別在第14天、第20天和第36天提取克隆。經(jīng)分析，所獲得的iPS細(xì)胞能夠表達(dá)多能性標(biāo)記，如Oct4、Nanog及SSEA1，具有正常的染色體核型；將iPS細(xì)胞注射入裸鼠后對(duì)產(chǎn)生的畸胎瘤進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)能夠產(chǎn)生完整的3個(gè)胚層。之后是第二階段，利用四倍體補(bǔ)償試驗(yàn)培育小鼠。先將選中的iPS細(xì)胞注射到小鼠四倍體囊胚，觀察胚胎發(fā)育到期情況，最終第14天挑取的iPS細(xì)胞獲得了37只到期小鼠；而第20天和第36天挑取的iPS細(xì)胞很難獲得小鼠。該試驗(yàn)所獲得的iPS細(xì)胞四倍體補(bǔ)償小鼠已經(jīng)通過(guò)繁殖獲得了上百只子代及第3代，并存活超過(guò)57周。以上試驗(yàn)證明iPS細(xì)胞可被完全重編程，能夠分化為軀體的各種組織細(xì)胞，具有與ES細(xì)胞同樣的全能性，為iPS細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。

另一方面，重編程過(guò)程中原癌基因c 大腸桿Myc因子的存在會(huì)很大程度上增加iPS細(xì)胞嵌合小鼠腫瘤發(fā)生幾率。研究發(fā)現(xiàn)，可只引進(jìn)Oct4、Sox2和Klf4 制備iPS 細(xì)胞，只是其生成效率會(huì)有所降低［25］。為驗(yàn)證三因子iPS 細(xì)胞是否同樣具有全能性，Kang L 等［26］制備了小鼠三因子iPS細(xì)胞，之后利用四倍體補(bǔ)償方式也獲得了活體小鼠，從而證實(shí)不存在c－Myc因子的情況下所獲得的iPS細(xì)胞仍具有同樣的分化潛能，為iPS細(xì)胞技術(shù)的安全應(yīng)用進(jìn)一步奠定了基礎(chǔ)。

2.2 iPS細(xì)胞來(lái)源轉(zhuǎn)基因大鼠

Li W 等［7］報(bào)道建立大鼠iPS細(xì)胞系時(shí)，就已獲得大鼠iPS細(xì)胞來(lái)源的嵌合體大鼠，但尚未檢測(cè)出其生殖能力。之后，Hamanaka S 等［27］通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)，在Wistar（WI）大鼠和DA 大鼠胚胎成纖維胞內(nèi)導(dǎo)入3種小鼠轉(zhuǎn)錄因子（Oct3／4，Klf4和Sox2），轉(zhuǎn)染1d后在培養(yǎng)基中加入大鼠白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF），第7天在培養(yǎng)基中加入小分子物質(zhì)（PD0325901，CHIR99021或SU5402），第10天時(shí)可出現(xiàn)類似ES細(xì)胞的大鼠iPS細(xì)胞克隆，并已傳代超過(guò)25代。之后將其注入WI／WI大鼠囊胚中，最終WI來(lái)源iPS細(xì)胞獲得了具有遺傳性能的嵌合體大鼠（圖1），圖1中riPS為大鼠iPS細(xì)胞；Microinjection 為顯微注射；WI×WI rat blastocytes為WI大鼠和WI大鼠囊胚；Transfer為移植；Foster mother為代孕媽媽；Chimeric rat為嵌合體大鼠；male為雄性；wt－female WI rat為野生型的 雌 性WI 大 鼠；Transgenic rats from germline transmission為通過(guò)生殖系遺傳獲得的轉(zhuǎn)基因大鼠。Jiang M G 等［28］在iPS細(xì)胞制備過(guò)程中除LIF和小分子物質(zhì)之外，還加入Vc和KOSR 以提高iPS細(xì)胞生成效率，并將大鼠品系擴(kuò)展到DA，SD 和F344大鼠，也獲得了大鼠iPS細(xì)胞及具有遺傳能力的iPS細(xì)胞來(lái)源轉(zhuǎn)基因大鼠。

除了iPS細(xì)胞來(lái)源大鼠和小鼠之外，大鼠－小鼠種間嵌合體也成功獲得，比如將大鼠iPS細(xì)胞注入小鼠囊胚內(nèi)，在小鼠體內(nèi)長(zhǎng)出大鼠胰腺組織［29］。這可應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)，如在豬等動(dòng)物體內(nèi)生長(zhǎng)目的器官，之后再移植給患者，為器官移植提供了選擇；還標(biāo)志著將iPS細(xì)胞技術(shù)與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù)相結(jié)合，打破物種界限，克服種間繁殖障礙，從而獲得用傳統(tǒng)方法無(wú)法得到的新性狀，為新品種培育等轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究提供了試驗(yàn)基礎(chǔ)。

2.3 iPS細(xì)胞來(lái)源豬

繼iPS細(xì)胞來(lái)源小鼠、大鼠的成功獲得，科學(xué)家將目光轉(zhuǎn)移至iPS克隆豬，因?yàn)樨i的解剖、生理與遺傳等方面與人具有高度的相似性。Fan N N 等［30］獲得了iPS細(xì)胞來(lái)源小豬，分別用慢病毒轉(zhuǎn)染和逆轉(zhuǎn)錄病毒方法轉(zhuǎn)染10周大小丹麥長(zhǎng)白豬的耳皮膚成纖維細(xì)胞和骨髓細(xì)胞，以及豬胚胎成纖維細(xì)胞，制備了6株iPS細(xì)胞株。直接將這些iPS細(xì)胞株作為核移植的供體細(xì)胞，利用傳統(tǒng)的克隆方法或者手工克隆方法，克隆至代孕母豬體內(nèi)，雖有部分母豬得以懷孕，但是最終都未能成功分娩得到活小豬。分析原因可能是這些外來(lái)轉(zhuǎn)錄因子未能得以沉默，阻礙了胚胎的順利發(fā)育。研究人員采用了兩種方法，將iPS細(xì)胞分化4d～6d，使細(xì)胞退出快速的細(xì)胞周期，再作為核轉(zhuǎn)移的供體細(xì)胞；將核轉(zhuǎn)移細(xì)胞處以0.5mmol／L濃度Scriptaid，這是一種人工合成低毒性的組蛋白去乙酰化酶抑制劑，可提高克隆胚胎的發(fā)育能力。經(jīng)過(guò)以上兩種處理，發(fā)現(xiàn)核移植后體外發(fā)育囊胚率由原來(lái)的5%提高到20%左右。隨后經(jīng)分化處理的細(xì)胞利用傳統(tǒng)的克隆方法轉(zhuǎn)移至代孕母豬體內(nèi)，經(jīng)114d懷孕獲得1頭小豬；而經(jīng)Scriptaid處理的細(xì)胞，利用手工克隆方法轉(zhuǎn)移，經(jīng)110d懷孕得到4頭小豬。但是這些小豬出生后生存時(shí)間均較短，前者出生后36d被發(fā)現(xiàn)患腦脊髓炎而死亡；經(jīng)Scriptaid處理得到的4頭小豬，其中1頭剛出生即死亡，另3頭分別僅存活了4、14、36d（圖2），圖2中piPS為豬誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞，TC 為傳統(tǒng)克隆法，HMC為手工克隆法，Surrogated mother為代孕母豬。大量研究表明核移植過(guò)程中可能存在一些因素會(huì)造成克隆動(dòng)物的死亡，由此揭示要獲得健康的iPS克隆豬要求更優(yōu)化的核移植操作，以及在代孕母體內(nèi)移植更多數(shù)量的胚胎。通過(guò)iPS細(xì)胞技術(shù)獲得健康克隆豬還有很長(zhǎng)的路要走。

圖1 iPS細(xì)胞技術(shù)制備轉(zhuǎn)基因大鼠Fig.1 Scheme depicting the generation of transgenic rats from iPS cell lines

圖2 iPS細(xì)胞技術(shù)制備活體豬Fig.2 Scheme depicting the generation of viable pigs from iPS cell lines

在過(guò)去的10年內(nèi)，iPS細(xì)胞技術(shù)得到了前所未有的發(fā)展與深入研究，在生命科學(xué)相關(guān)領(lǐng)域取得了許多重大突破。目前，多種動(dòng)物來(lái)源iPS細(xì)胞已制備成功，包括嚙齒類、靈長(zhǎng)類、有蹄類等動(dòng)物，這對(duì)于人類疾病的發(fā)生機(jī)理與治療、人類進(jìn)化研究等具有深遠(yuǎn)的意義。并且iPS細(xì)胞來(lái)源的小鼠、大鼠和豬也成功獲得，可以說(shuō)在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物育種上，iPS細(xì)胞技術(shù)具有潛在的應(yīng)用前景，很可能替代傳統(tǒng)的體細(xì)胞核移植，克服大動(dòng)物難以獲得胚胎干細(xì)胞系的難題；同時(shí)又合理規(guī)避了當(dāng)前在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究過(guò)程中存在的倫理學(xué)問(wèn)題，為轉(zhuǎn)基因研究開(kāi)創(chuàng)了更為廣闊的天地。但是該技術(shù)總體來(lái)說(shuō)仍處于起步階段，尚有許多問(wèn)題亟待解決，如何同時(shí)提高iPS細(xì)胞的安全性和制備效率，如何提高iPS細(xì)胞來(lái)源動(dòng)物的成功率和成活率等。隨著研究的不斷深入，這些問(wèn)題都會(huì)得到解決，并將進(jìn)一步促進(jìn)動(dòng)物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的發(fā)展。

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