豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)及疫苗研究進(jìn)展

趙晨辰，王敏，劉長輝，牟巍，馬阿麗，馬惠宇，張家旺，趙亞榮，王貴華?

（1.北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究中心，北京100195；2.北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司，北京100080）

豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)及疫苗研究進(jìn)展

趙晨辰1，王敏1，劉長輝1，牟巍1，馬阿麗1，馬惠宇1，張家旺2，趙亞榮1，王貴華1?

（1.北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究中心，北京100195；2.北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司，北京100080）

豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）在世界范圍內(nèi)廣泛分布，主要以PCV2a和PCV2b兩種基因型為主，PCV2b亞型為當(dāng)前流行基因型。現(xiàn)有商品化疫苗主要針對(duì)PCV2a型病毒，也可對(duì)PCV2b型病毒產(chǎn)生部分交叉保護(hù)，但不能顯著控制PCV2b型病毒在豬群中的傳播。除此之外，由于已有的商品化疫苗以傳統(tǒng)疫苗為主，存在種毒增殖難、疫苗生產(chǎn)周期長等缺點(diǎn)。因此，研發(fā)PCV2b新型疫苗可能成為未來PCV2疫苗研制的主要方向。對(duì)PCV2的分子流行病學(xué)及疫苗研究現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述，以期為PCV2疫苗的研究提供參考。

豬圓環(huán)病毒2型；分子流行病學(xué)；PCV2b；基因型；疫苗

豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV2）是近年新發(fā)現(xiàn)的豬病毒之一，廣泛存在于自然界中，對(duì)豬有很強(qiáng)的感染力，各種品種、年齡、不同性別的豬均可感染。PCV2主要侵害豬的免疫系統(tǒng)，降低機(jī)體的抵抗力和免疫應(yīng)答反應(yīng)，導(dǎo)致被感染豬產(chǎn)生免疫抑制和其它病原微生物的繼發(fā)感染。該病毒與豬群中發(fā)生的許多疾病關(guān)系密切，這些相關(guān)疾病統(tǒng)稱為豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病（PCVAD）。斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）是最早被認(rèn)識(shí)和確認(rèn)的由PCV2感染所致的疾病，該病于1991年被正式確診，90年代后期在全世界爆發(fā)為流行病，美洲、歐洲、亞洲、澳大利亞等均大量報(bào)道了該病的發(fā)生和流行。目前，國際上統(tǒng)一將PCV2分為PCV2a、PCV2b、PCV2c三個(gè)基因亞型，其中PCV2a和PCV2b是目前存在的主要基因型，PCV2a僅分離自無PMWS感染豬場，PCV2b多分離自PMWS發(fā)生的豬群，PCV2c亞型毒株僅在20世紀(jì)80年代于丹麥分離，在致病性方面未見報(bào)道［1］。PCV2在世界范圍內(nèi)廣泛分布并且在豬群中存在至少有50多年［2］，血清學(xué)和病原學(xué)調(diào)查己證實(shí)全世界范圍內(nèi)許多國家和地區(qū)的豬群均存在PCV2感染，幾乎100%的商品化養(yǎng)豬場感染過PCV2，嚴(yán)重影響世界養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。目前對(duì)該病毒的防控主要依靠疫苗，滅活疫苗、亞單位疫苗和嵌合病毒滅活疫苗已投入使用，核酸疫苗、活載體疫苗和標(biāo)記疫苗等新型疫苗已成為PCV2疫苗研究的熱點(diǎn)。本文就PCV2流行病學(xué)、疫苗方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

1 流行病學(xué)

1.1 國外PCV2流行情況 2008年Olvera［3］對(duì)NCBI上發(fā)表的148株P(guān)CV2序列分析發(fā)現(xiàn)，63.5%的毒株（95／148）屬于基因型PCV2b，在95株P(guān)CV2b中有92.5%的毒株是在2003年之后發(fā)表的，其中所分析PCV2a型基因序列中，62.2%（33／53）是2003年以前發(fā)表的，但是序列提交的時(shí)間和毒株分離的時(shí)間并不是一致的。Dupont等［1］對(duì)GenBank中1997年至2006年間上傳的218個(gè)PCV2全基因組進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2003年前豬群中主要流行PCV2a，之后世界范圍內(nèi)豬群PCV2感染存在轉(zhuǎn)型趨勢(shì)，主要以PCV2b基因型流行為主，同時(shí)PCVAD臨床表現(xiàn)較2003年之前更為嚴(yán)重，但是這些國家不包括韓國、日本和澳大利亞?；谝陨涎芯?，Tanja Opriessnig等［4］分析了1996－2013年間分離自美國和加拿大的750份樣品，1996－2004年間分離到的毒株均屬于PCV2a基因型，2005年出現(xiàn)新基因型PCV2b，2006－2013年的流行株為PCV2b基因型。2012年5月，美國在一PCV2免疫失敗豬場首次分離到毒力均強(qiáng)于PCV2a和PCV2b的突變毒株（Mutant porcine circovirus type 2b，mPCV2b），由于美國商品化疫苗基于PCV2a基因型，mPCV2b毒株的發(fā)現(xiàn)讓人們更加關(guān)注當(dāng)前PCV2a型疫苗的免疫效果［5］。北美地區(qū)在2004年前僅流行PCV2a基因型，2005年爆發(fā)嚴(yán)重的PCVAD，PCV2b基因型替代PCV2a型在北美地區(qū)商業(yè)化豬場迅速蔓延，引起高發(fā)病率和死亡率。隨后在中國、泰國、韓國、丹麥、瑞士也相繼報(bào)道了PCV2b基因型的出現(xiàn)，并在一段時(shí)間內(nèi)與PCV2a基因型循環(huán)流行。韓國研究者對(duì)2005－2007年間分離的毒株進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，發(fā)現(xiàn)這期間PCV2b為主要流行基因型［6］。2007年Chae等［7］在韓國分離到36株P(guān)CV2（PCVAD發(fā)病豬場分離到29株，PCVAD未發(fā)病豬場9株），29株均屬于PCV2b，PCVAD未發(fā)病豬場中有4株屬于PCV2b。2006－2007年間，日本存在PCV2a與PCV2b兩種亞型，但是以PCV2b為主要流行基因型［8］。目前，PCV2b基因型替代PCV2a型成為優(yōu)勢(shì)基因型，有關(guān)PCV2流行毒株遺傳變異的報(bào)道也逐漸增多，在遺傳變異及免疫壓力下可能出現(xiàn)其它形式的突變毒株。2008年Hess等［9］報(bào)道了PCV2a與PCV2b重組毒株，隨后有關(guān)不同PCV2b毒株之間以及PCV1與PCV2a之間毒株發(fā)生基因重組相繼報(bào)道。同時(shí)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，重組毒有很高的體外繁殖能力，且抗原性發(fā)生改變，這些改變對(duì)致病性的影響有待進(jìn)一步研究。

PCV2基因型的漂移最早起源于歐洲，發(fā)生于2003年或更早時(shí)間，北美洲和亞洲約發(fā)生于2005年，大洋洲發(fā)生這種優(yōu)勢(shì)流行株轉(zhuǎn)變約在2006年，時(shí)間上均比歐洲PCV2基因型的改變有輕微的推遲，潛在原因還未得到證實(shí)，可能與進(jìn)口處于該病潛伏期的動(dòng)物有關(guān)［10］。基因型發(fā)生漂移的同時(shí)伴隨著嚴(yán)重的圓環(huán)病毒病的爆發(fā)，雖然現(xiàn)有數(shù)據(jù)不能直接證明這些爆發(fā)是由PCV2b毒株導(dǎo)致，但是時(shí)間和地點(diǎn)上的巧合推測PCV2主導(dǎo)型的變化與PCVAD的發(fā)生存在很大關(guān)系，而基因型轉(zhuǎn)變的原因與機(jī)制目前尚不清楚。相對(duì)于PCV2遺傳變異，PCV2自然重組變異的報(bào)道比較少，其重組與病毒致病性和遺傳進(jìn)化的關(guān)系尚不明確。

1.2 我國PCV2流行情況 自2000年豬圓環(huán)病毒病首次在我國報(bào)道以來［11］，除西藏、新疆、澳門未見報(bào)道外，其余各省、市、自治區(qū)均有PCV2病毒分離和發(fā)生感染的報(bào)道。Wang等［12］從全國分離到49株P(guān)CV2，其中2001年分離到3株均屬于PCV2a型，2002－2006年分離到34株P(guān)CV2中PCV2b有18株，2007－2008年間分離到12株均為PCV2b型。Li［13］對(duì)2001－2009年間分離自我國東部的136株P(guān)CV2進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，PCV2b有127株，PCV2a僅有9株，其中8株P(guān)CV2a分離自2001－2005年間，從2005年以后，幾乎所有的分離株都是PCV2b型，PCV2a型越來越少，中國東部地區(qū)PCV2流行毒株存在由PCV2a向PCV2b漂移的現(xiàn)象。王佳慧［14］利用PCR方法對(duì)中國16個(gè)省市75個(gè)規(guī)?；i場2010－2011年間的688份樣品進(jìn)行檢測，被檢豬場PCV2陽性率為58.67%，共分離到53株P(guān)CV2，與GenBank下載的192株中國分離株進(jìn)行遺傳變異分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，53株P(guān)CV2中PCV2b基因型有50株，且2001年前我國優(yōu)勢(shì)PCV2基因型為PCV2a型，2002年之后流行的PCV2基因型轉(zhuǎn)變?yōu)镻CV2b型，但同期仍有PCV2a型毒株存在。趙英杰［15］對(duì)2011－2012年間采集自我國18個(gè)省市932份樣品分析發(fā)現(xiàn)，2011－2012年我國主要養(yǎng)豬地區(qū)規(guī)?；i場PCV2的感染率高達(dá)67.8%，并選取具有代表性的74株P(guān)CV2進(jìn)行全基因組測序，其中56株P(guān)CV2b基因型。同一時(shí)期，Wei等［16］自我國南方14個(gè)商業(yè)化豬場分離到66株P(guān)CV2，其中92.42%的毒株屬于PCV2b基因型。流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國優(yōu)勢(shì)流行基因型為PCV2b。目前，國外有很多關(guān)于PCV2流行毒株的變異的報(bào)道，但是我國對(duì)此研究比較少。2011年Cai［17］分離到了5株P(guān)CV2a和PCV2b基因型間重組毒，重組位點(diǎn)均位于ORF2區(qū)段內(nèi)。Guo［18］對(duì)2004－2008年采集自我國10個(gè)省份疑似PCV2感染的病料中分離到19株P(guān)CV2，有4株病毒ORF2編碼基因發(fā)生突變，同時(shí)選取了2株突變株進(jìn)行致病性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)突變株所造成的病理損傷、病毒血癥、淋巴組織等免疫器官損傷明顯嚴(yán)重，新出現(xiàn)的突變株如何增強(qiáng)毒力的分子機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

PCV2在我國豬群中已經(jīng)廣泛存在，主要有PCV2a和PCV2b兩種基因型，自2005以來主要以PCV2b基因型流行為主，同時(shí)出現(xiàn)mPCV2b毒株，未發(fā)現(xiàn)PCV2c基因型。

2 PCV2疫苗研究進(jìn)展

目前，疫苗接種是預(yù)防PCV2感染最有效的手段。疫苗免疫能降低PCV2復(fù)制水平，減輕病毒血癥和淋巴組織損傷。通過對(duì)SPF豬和斷奶仔豬的感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)現(xiàn)有商品化疫苗能夠?qū)CV2a和 PCV2b產(chǎn)生免疫保護(hù)，但是都無法完全清除病毒，免疫豬仍然會(huì)感染PCV2［19］。美國科研人員曾經(jīng)提取已免疫PCV2疫苗的健康豬血清，進(jìn)行血清學(xué)檢測，PCV2b呈陽性。2010年Shen等［20］自美國中西部屠宰場的豬血漿樣品中檢測到高比例的PCV2b DNA。國外上市疫苗有滅活疫苗、Cap亞單位疫苗和PCV1－2嵌合病毒滅活疫苗，均基于PCV2a基因型，雖然PCV2a疫苗能降低豬臨床PCVAD，減少PCV2a的流行，但是不會(huì)顯著減少PCV2b在豬群中的傳播。日本研究者發(fā)現(xiàn)，PCV2疫苗的免疫效果與PCV2基因型有很大關(guān)系，流行毒株與疫苗株遺傳關(guān)系越近，疫苗產(chǎn)生的免疫保護(hù)效力越好。為了進(jìn)一步證實(shí)這一發(fā)現(xiàn)，Tanja Opriessniga［21］用PCV2a型疫苗和PCV2b型疫苗分別免疫豬群，PCV2進(jìn)行攻毒，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PCV2b型疫苗可以抵抗PCV2b、PCV2a／PCV2b共感染提供更好的免疫保護(hù)。

國內(nèi)上市疫苗屬于PCV2b型滅活疫苗，雖然與流行毒株屬于同一基因型，但是傳統(tǒng)滅活疫苗抗原制備上病毒滴度低，生產(chǎn)周期長，且誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答主要為體液免疫，忽視了細(xì)胞免疫應(yīng)答在PCV2免疫保護(hù)中的作用。雖然商品化疫苗的應(yīng)用為有效防控PCV2感染發(fā)揮了重要作用，但是疫苗株與流行株分屬不同基因型，且傳統(tǒng)疫苗在免疫保護(hù)效力和生產(chǎn)制備上存在缺陷。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，基于PCV2b型的活載體疫苗、核酸疫苗及標(biāo)記疫苗等新型疫苗也展現(xiàn)出良好的研究前景。2.1 商品化疫苗 目前有很多商品化疫苗用于預(yù)防PCVAD在豬群中的發(fā)生和流行（表1），法國Merial公司的PCV2a全病毒滅活疫苗Circovac＠最先開始推向市場，用于繁育母豬和三周齡以上仔豬。該疫苗能降低仔豬病毒血癥和各組織器官中病毒載量，是唯一一種既可用于母豬又用于仔豬的疫苗。2006年，Intervet公司研制第一支利用桿狀病毒表達(dá)PCV2a Cap蛋白的基因工程亞單位疫苗Circumvent＠在美國堪薩斯州的豬場進(jìn)行了測試，與對(duì)照組比較，免疫組的豬群死亡率和病毒血癥明顯降低、體重增加。Pfizer公司（2010年動(dòng)物保健部門更名為Zoetis，中文名為碩騰）FosteraTMPCV疫苗（原Fort Dodge公司的Suvaxyn＠PCV2 One DoseTM）以PCV1為骨架，用PCV2的ORF2替換PCV1的部分ORF2，構(gòu)建了PCV1－2嵌合病毒疫苗。免疫后豬群的臨床癥狀明顯減輕，血液和淋巴組織中PCV2的病毒載量降低，免疫豬死亡率下降，在母源抗體存在的情況下也可以達(dá)到很好的保護(hù)效果。韓國DAE SUNG公司的DSCirco Pigvac PCV2可免疫1日齡仔豬，是目前上市的唯一一款能克服高滴度母源抗體干擾的全病毒滅活疫苗。

Boehringer－Ingelheim公司研制亞單位疫苗CircoFLEX?，擁有高度免疫原性純化抗原（PCATM）與創(chuàng)新佐劑ImpranFLEXTM，免疫機(jī)體后產(chǎn)生快速、高效和持久的免疫反應(yīng)，安全、穩(wěn)定，疫苗粘度小，易于注射，在國外應(yīng)用效果顯著，應(yīng)用量超過了其它幾家疫苗的總和，占市場份額60%以上，成為全球銷量最大的豬圓環(huán)病毒疫苗?；贗mpanFLEX?水性佐劑的豬肺炎支原體疫苗MycoFLEX?與豬圓環(huán)疫苗CircoFLEX?可以靈活的混合使用，兩種疫苗，一種佐劑，混合后一針免疫更輕松，在生產(chǎn)上節(jié)省大量免疫操作的勞動(dòng)力，也減少了免疫操作對(duì)于豬只的應(yīng)激，已經(jīng)在全球多個(gè)國家注冊(cè)。疫苗的組合使用，將會(huì)成為未來疫苗應(yīng)用發(fā)展趨勢(shì)。免疫一針，預(yù)防多種疾病，既能降低動(dòng)物應(yīng)激，又能減少免疫的工作量，降低免疫相關(guān)成本。碩騰公司最新研發(fā)的產(chǎn)品Fostera PCV MH是全球第一種也是唯一一種單瓶、單劑量的、用于防止豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病和豬肺炎支原體的二聯(lián)苗。

表1 國外PCV2商品化疫苗及其特征

Boehringer－Ingelheim公司的CircoFLEX?疫苗于2010年初獲中國農(nóng)業(yè)部正式批準(zhǔn)上市，國內(nèi)企業(yè)研發(fā)的豬圓環(huán)疫苗在下半年陸續(xù)上市。截至2014年10月，國內(nèi)有15家企業(yè)獲得PCV2全病毒滅活疫苗新獸藥證書，14家企業(yè)批準(zhǔn)簽發(fā)，毒株包括LG株、SH株、DBN－SX07株、ZJ／C株、WH株（表2），其中豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗（DBNSX07株）由大北農(nóng)集團(tuán)動(dòng)物醫(yī)學(xué)研究中心研制，是國內(nèi)第一個(gè)完全由企業(yè)自主研發(fā)獲得三類新獸藥證書的產(chǎn)品。全病毒滅活疫苗最大的瓶頸在于如何獲得高滴度病毒液，早期上市的產(chǎn)品病毒含量比較低，而ZJ／C株最晚上市，抗原含量不低于107.3TCID50／mL，在國內(nèi)同類產(chǎn)品中病毒含量最高。在佐劑選用方面，水質(zhì)佐劑比礦物油佐劑疫苗對(duì)機(jī)體的刺激性小，副反應(yīng)小，WH株、SH株和DBN－SX07株3種國產(chǎn)疫苗應(yīng)用的佐劑含有一定量的礦物油，而LG株與ZJ／C株選用水質(zhì)佐劑。豬圓環(huán)病毒最大的危害對(duì)象是保育豬，對(duì)于首免日齡來說，ZJ／C株與SH株可以做到2周齡首免，這在全病毒滅活疫苗中做到了最優(yōu)。2013年11月6日，青島易邦舉辦“首屆中韓國際養(yǎng)豬及豬病防控高層論壇暨豬圓環(huán)病毒2型基因工程亞單位疫苗研發(fā)成功交流會(huì)”，其利用大腸桿菌表達(dá)PCV2 Cap蛋白，研發(fā)PCV2基因工程疫苗產(chǎn)品即將上市，是國內(nèi)企業(yè)中唯一能生產(chǎn)豬圓環(huán)基因工程疫苗的廠家。

表2 國內(nèi)PCV2商品化疫苗及其特征

2.2 實(shí)驗(yàn)室研制疫苗 商品化的亞單位疫苗和滅活疫苗穩(wěn)定，具有較好的安全性。但是新型疫苗能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生更好的免疫應(yīng)答，阻止PCV2的感染?，F(xiàn)已經(jīng)證實(shí)，RNA的治療方法能夠干擾PCV2的感染和復(fù)制。經(jīng)過修飾的弱毒疫苗能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生更高水平的細(xì)胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答。DNA疫苗和活載體疫苗也可作為替代系統(tǒng)向宿主傳遞PCV2抗原，刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答。

2.2.1 RNA抗病毒治療 根據(jù)報(bào)道，利用RNA分子可以中和感染性PCV2或干擾PCV2的復(fù)制。RNA適配子，一種RNA分子能夠與靶物質(zhì)高特異性、高親和力結(jié)合，在體外阻止PCV2的感染。小干擾RNA（siRNA）已經(jīng)成功用于阻斷體外PCV1和PCV2核酸復(fù)制酶蛋白的表達(dá)，干擾病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制［22］。短發(fā)夾RNA（shRNA）能夠減少PCV2在體外的復(fù)制，小鼠體試驗(yàn)表明shRNA能夠減少PCV2病毒載量［23］。由于RNA分子在體內(nèi)不能遺傳復(fù)制和昂貴的研究成本，RNA抗病毒療法對(duì)PCV2治療的臨床意義尚需進(jìn)一步探索。

2.2.2 修飾的PCV2弱毒疫苗 通常情況下，弱毒疫苗刺激機(jī)體既能產(chǎn)生細(xì)胞免疫應(yīng)答又能產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，與滅活疫苗和亞單位疫苗相比能夠產(chǎn)生更好的免疫保護(hù)效果。野生型PCV2在細(xì)胞內(nèi)連續(xù)培養(yǎng)傳代，病毒毒力減弱。將PCV2分離株在PK－15細(xì)胞中連續(xù)培養(yǎng)120代，第1代和第120代感染SPF豬比較發(fā)現(xiàn)，第120代感染后的病毒血癥發(fā)生率明顯低于第1代，并且感染豬血清中PCV2基因組拷貝數(shù)降低、眼觀及組織學(xué)病變明顯要輕，表明體外傳代可提高PCV2在細(xì)胞內(nèi)的繁殖能力，并能減弱其致病力，這為研制PCV2弱毒疫苗提供了科學(xué)依據(jù)［24］。但是病毒存在毒力返祖的危險(xiǎn)。

根據(jù)PCV1對(duì)豬不致病，PCV2具有致病性，將PCV1和PCV2 ORF2替換構(gòu)建的嵌合病毒PCV1－2在體內(nèi)外均具有感染性，豬體試驗(yàn)表明嵌合病毒毒力致弱，具有免疫原性且能穩(wěn)定遺傳，能對(duì)PCV2a和PCV2b兩種基因型提供較好的免疫保護(hù)［25］，完全排除了毒力返強(qiáng)的可能性。開發(fā)安全有效的弱毒嵌合病毒疫苗是PCV2疫苗研究的新方向。

2.2.3 DNA疫苗 有報(bào)道稱，用PCV2 DNA疫苗免疫豬和小鼠，能產(chǎn)生特異的免疫應(yīng)答。將表達(dá)ORF2基因的質(zhì)粒注射到豬肝臟、淋巴結(jié)和肌肉，均能夠產(chǎn)生類似于PCV2病毒的感染效果。Sylla等［26］成功構(gòu)建表達(dá)Cap蛋白的重組質(zhì)粒pEGFP－Cap，共分三次免疫BALB／c小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)小鼠血清中存在高水平的抗Cap蛋白特異性抗體IgG和細(xì)胞因子（IFN－γ和IL－10），攻毒實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，pEGFP－Cap免疫組能夠抵抗PCV2的攻擊，PCV2病毒載量明顯減少，小鼠臨床癥狀和病理變化明顯減輕。關(guān)淼等［27］構(gòu)建重組核酸疫苗pIRES－ORF2免疫小鼠，結(jié)果表明該疫苗能誘小鼠產(chǎn)生抗PCV2特異的體液免疫和細(xì)胞免疫，并且小鼠體內(nèi)T淋巴細(xì)胞CD3＋、CD8＋亞類顯著高于滅活苗免疫組。豬肌肉注射嵌合型PCV1－2全基因組線性載體，能夠誘導(dǎo)免疫保護(hù)。因此，攜帶有嵌合型PCV1－2全基因組的質(zhì)?？梢宰鳛槿醵疽呙缯T導(dǎo)豬體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，同時(shí)質(zhì)粒相對(duì)容易擴(kuò)大生產(chǎn)，降低疫苗的生產(chǎn)成本，展現(xiàn)出良好的研究前景?，F(xiàn)已證實(shí)，肌肉注射編碼PCV2 Cap蛋白的重組DNA質(zhì)粒能誘導(dǎo)小鼠和豬產(chǎn)生免疫應(yīng)答。DNA疫苗已經(jīng)應(yīng)用于小鼠模型，研究者用基因槍將編碼PCV2 Cap蛋白的ORF2基因（pORF2）注射到小鼠體內(nèi)，在小鼠血清中能檢測到Cap特異性抗體。在小鼠模型中，注射pORF2比單獨(dú)注射Cap蛋白更能有效的刺激機(jī)體產(chǎn)生PCV2中和抗體。攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，免疫過pORF2的小鼠體內(nèi)PCV2病毒載量降低、臨床癥狀以及組織病變明顯減輕［28］。但是外源基因在體內(nèi)的表達(dá)調(diào)控可能會(huì)產(chǎn)生意外的免疫病理反應(yīng)，目前大部分核酸疫苗的研究還僅局限于實(shí)驗(yàn)室。

2.2.4 活載體疫苗 目前商品化的亞單位疫苗是利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)Cap蛋白，其它的表達(dá)系統(tǒng)正處于探索中。以酵母為載體表達(dá)PCV2 Cap蛋白的口服疫苗，免疫小鼠可以產(chǎn)生PCV2抗體［29］。利用重組腺病毒表達(dá)PCV2 Cap蛋白，可誘導(dǎo)免疫豬產(chǎn)生一定水平的抗體，用PCV2感染后，與未免疫豬相比，免疫豬體重增加，組織損傷程度減輕，病毒血癥的發(fā)生率明顯降低［30］。

表達(dá)PCV2衣殼蛋白的重組偽狂犬病毒活載體疫苗，免疫豬后可誘導(dǎo)體液免疫反應(yīng)，機(jī)體產(chǎn)生抗PCV2和PRV的特異性抗體［31］。Kim等［32］向博德特氏菌中插入ORF2基因，構(gòu)建表達(dá)ORF2基因的重組博德特氏菌，然后免疫小鼠和豬，發(fā)現(xiàn)血清中存在高水平的抗Cap蛋白特異性IgG抗體，有效保護(hù)豬群抵抗PCV2感染。Gamage等［33］將PCV2 Cap蛋白的四個(gè)表位序列展示在λ噬菌體顆粒上，構(gòu)建表達(dá)PCV2 Cap蛋白的重組λ噬菌體載體疫苗，免疫豬能引發(fā)體內(nèi)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，刺激產(chǎn)生特異性抗體?；钶d體疫苗能有效的刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并且沒有PCV2病毒感染的危險(xiǎn)。但是，也存在潛在的擔(dān)憂：載體有可能會(huì)干擾疫苗的免疫效力，影響其臨床應(yīng)用。

2.2.5 PCV2標(biāo)記疫苗 PCV2的感染普遍存在于飼養(yǎng)豬群，因此存在不能區(qū)分疫苗抗體和野毒抗體的問題。標(biāo)記疫苗帶有特定的抗原表位，免疫豬群后，可通過血清學(xué)方法檢測到疫苗抗體，在自然感染豬群中將免疫豬群區(qū)分開來。最近，Intervet公司生產(chǎn)的BacucheckTMELISA抗體檢測試劑盒可以檢測出Porcilis?PCV免疫過豬群體內(nèi)抗體，已經(jīng)在德國投入使用。然而，目前沒有類似的產(chǎn)品用于檢測其它商品化疫苗。PCV1－2嵌合病毒和表達(dá)特異性表位的重組病毒有望作為研制標(biāo)記疫苗的候選疫苗株。Beach等［34］將HA、GLU和KT3標(biāo)簽定向插入致弱的嵌合病毒PCV1－2 ORF2基因的C末端，感染豬后可以在血清中檢測到Cap特異的中和抗體和標(biāo)簽蛋白抗體。Huang等［35］在PCV2 Cap蛋白的C末端插入了11個(gè)氨基酸，病毒仍具有感染性，用重組病毒免疫小鼠后能誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體和抗標(biāo)簽的特異性抗體。因此，帶標(biāo)簽的PCV1－2嵌合病毒和重組毒PCV2可以作為標(biāo)記疫苗候選毒株。

3 展望

商品化疫苗能夠有效減少PCV2感染引起的臨床癥狀，顯著降低病毒血癥、系統(tǒng)性疾病和病毒排泄，但是不能完全阻止PCV2的感染和傳播。國外上市疫苗有滅活疫苗、亞單位疫苗和PCV1－2嵌合病毒滅活疫苗，均基于PCV2a基因型，對(duì)PCV2的防控有一定的效果，但是PCV2b基因型是當(dāng)前豬群中優(yōu)勢(shì)基因型，與PCV2a型疫苗相比，PCV2b型疫苗可產(chǎn)生更好的免疫保護(hù)效力。國內(nèi)上市疫苗屬于PCV2b型滅活疫苗，但是傳統(tǒng)滅活疫苗抗原制備上病毒滴度低，且誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答主要為體液免疫，忽視了細(xì)胞免疫應(yīng)答在PCV2免疫保護(hù)中的作用。新型疫苗的研究已取得長足的進(jìn)展，免疫試驗(yàn)證明可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較高的中和抗體效價(jià)，保護(hù)豬群免受強(qiáng)毒的攻擊，但研制費(fèi)用較高、有些效果不明顯是新型疫苗的缺點(diǎn)。亞單位疫苗抗原產(chǎn)量低、生產(chǎn)成本高，活載體疫苗存在外源基因污染的生物安全問題，核酸疫苗由于其重組誘變等危險(xiǎn)限制了其進(jìn)一步發(fā)展。隨著分子生物學(xué)技術(shù)和基因工程技術(shù)的不斷發(fā)展，各國學(xué)者在現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)上對(duì)這些新型疫苗進(jìn)行技術(shù)改進(jìn)，以期克服新型疫苗研制中遇到的困難，研發(fā)安全、高效低廉的PCV2b新型基因工程疫苗已成為疫苗研制的主要方向。

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（編輯：李文平）

An Update Insights to the M olecular Epidem iology and Vaccine of Porcine Circovirus Type 2

ZHAO Chen－chen1，WANG Min1，LIU Chang－h(huán)ui1，MUWei1，MA A－li1，MA Hui－yu1，ZHANG Jia－wang2，ZHAO Ya－rong1，WANG Gui－h(huán)ua1?
（1.Animal Medicine Research Center ofDaBeiNong Group，Beijing 100195，China；2.Beijing DaBeiNong Science＆Technology Group Co.，Ltd，Beijing 100080，China）

Porcine circovirus type 2（PCV2）has been highly prevalent in commercial swine herds of the world，which can be classified into two major types：PCV2a and PCV2b.PCV2b is the main dominant genotype now.Although commercial vaccines mainly based on PCV2a have partially cross－protection against PCV2b，the prevalence of PCV2b could not be controlled significantly.Furthermore，traditional vaccine with disadvantages of lower cultivation titer and longer production period is themajor type of PCV2 vaccines.Therefore，novel vaccines based on PCV2b genotype will be probable themain research trend in the future.In this review，we discussed the molecular epidemiology of PCV2 and current research of PCV2 vaccines in order to provide insight of novel approaches thatwere useful in R＆D of new PCV2 vaccines.

porcine circovirus type 2；molecular epidemiology；PCV2b；genotype；vaccine

2014－09－05

A

1002－1280（2015）02－0063－07

S858.28

趙晨辰，碩士，從事動(dòng)物傳染病疫苗研究工作。

王貴華。E－mail：wanggh＠im.ac.cn