漿水中乳酸菌分離鑒定及其代謝特性的初步研究

孟憲剛,李雪萍,李建宏,謝佳佳,鄭 楠

(蘭州交通大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院,甘肅蘭州 730070)

漿水中乳酸菌分離鑒定及其代謝特性的初步研究

孟憲剛,李雪萍,李建宏,謝佳佳,鄭 楠

(蘭州交通大學(xué)化學(xué)與生物工程學(xué)院,甘肅蘭州 730070)

以漿水為材料,運用涂布法和平板劃線法在選擇性培養(yǎng)基上分離純化其中的乳酸菌,并采用生理生化特性鑒定和分子生物學(xué)鑒定相結(jié)合的方法鑒定其種屬。發(fā)現(xiàn)漿水中含有多種乳酸菌,可歸為5屬17種。并用溶鈣圈法選擇17株菌進行產(chǎn)酸、降解膽固醇和亞硝酸鹽實驗,結(jié)果表明:實驗菌株大多具有良好的產(chǎn)酸、降膽固醇和降亞硝酸鹽功效,其中Q2、M5、H4、Q7、M2、H1等6株菌各方面性能都很優(yōu)異,具有進一步開發(fā)利用之潛力。

漿水,乳酸菌,多樣性,亞硝酸鹽,膽固醇

漿水是將新鮮的芹菜等蔬菜投放入面湯或米湯后經(jīng)多種微生物協(xié)同發(fā)酵而成的一種發(fā)酵食品[1]。傳統(tǒng)漿水大多由自然發(fā)酵而成[2],在這一過程中不可避免的受到許多因素的制約和影響,例如原材料、加工溫度等。在整個發(fā)酵過程中,任何一個環(huán)節(jié)的不慎都可能導(dǎo)致發(fā)酵異常甚至失敗,自然發(fā)酵所需發(fā)酵時間較長,且發(fā)酵質(zhì)量不穩(wěn)定,不利于工廠化、規(guī)?；皹藴驶a(chǎn)。采用人工接種發(fā)酵能避免自然發(fā)酵的不足,并且是實現(xiàn)漿水生產(chǎn)工業(yè)化的較佳加工方法。但目前人工接種發(fā)酵漿水的方法尚處于實驗室研究階段。其瓶頸之一是缺乏特性優(yōu)良的純培養(yǎng)發(fā)酵菌種。

乳酸菌是公認的最好的食品發(fā)酵菌種之一,乳酸菌不僅可以提高食品的營養(yǎng)價值,改善食品風(fēng)味,而且可以提高食品保藏性和附加值[3-4]。近年來還發(fā)現(xiàn)乳酸菌具有特殊生理活性和營養(yǎng)功能,如:乳酸菌能夠調(diào)節(jié)機體胃腸道正常菌群[5]、保持微生態(tài)平衡,提高食物消化率和生物價[6],降低血清膽固醇,控制內(nèi)毒素,抑制腸道內(nèi)腐敗菌生長繁殖和腐敗產(chǎn)物的產(chǎn)生,制造營養(yǎng)物質(zhì)[6],刺激組織發(fā)育,從而對機體的營養(yǎng)狀態(tài)、生理功能、細胞感染、藥物效應(yīng)、毒性反應(yīng)、免疫反應(yīng)、腫瘤發(fā)生、衰老過程和突然的應(yīng)急反應(yīng)等產(chǎn)生作用[7-9];由此可見,乳酸菌的生理功能與機體的生命活動息息相關(guān)?？梢哉f,如果乳酸菌停止生長,人和動物就很難健康生存。也正因為如此,乳酸菌被廣泛用于輕工業(yè)、食品、醫(yī)藥及飼料工業(yè)等許多行業(yè)上。另外,食品安全和飲食健康問題正日益引起人們的重視,典型的如亞硝酸鹽問題,而有諸多研究表明乳酸菌在活動過程中可有效降解亞硝酸鹽,提高食品安全性[10-12]。因此篩選優(yōu)良乳酸菌并研究其代謝特性就是非常重要的一項工作。

本文旨在篩選出具有優(yōu)良功能特性的乳酸菌,綜合運用菌落形態(tài)學(xué)、生理生化實驗和分子生物學(xué)技術(shù)對其進行鑒定,隨后研究其產(chǎn)酸特性,降解膽固醇及亞硝酸鹽的能力等,為漿水的功能特性的研究以及優(yōu)良乳酸菌制劑的研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

樣品 分別從西北五個地區(qū)取樣,取樣時參考當?shù)厥秤昧?xí)慣,在漿水處于風(fēng)味最佳的階段(無泡沫、味酸、漿水清澈、口感清爽)時取樣,取得樣品后,儲存于無菌容器,低溫運輸至實驗室,立即分離,采樣地點如表1所示;細菌基因組DNA提取試劑盒 離心柱型,北京百泰克生物技術(shù)有限公司;2000bp DNA Ladder 美國Biomiga公司;十二烷基硫酸鈉(SDS) 美國Sigma公司;十六烷基三甲基溴化銨(CTAB) 美國Sigma公司;乙二胺四乙酸二鈉(EDTA) 美國Sigma公司;Trise-飽和酚 美國Sigma公司;瓊脂糖 BBI生物工程股份有限公司;β-巰基乙醇 天津市精細化工研究所 分析純;異戊醇 分析純,上海中秦化學(xué)試劑有限公司;PCR擴增試劑 上海生工。

表1 樣品來源Table 1 Source of samples

臺式離心機Centrifuge 5418R 德國艾本德公司;PCR儀MyCycler 美國伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品公司;電泳儀HE-120 上海天能科技有限公司;凝膠成像儀2500 上海天能科技有限公司;紫外分光光度計Nano Drop 2000 美國賽默飛世爾科技公司;各型加樣槍 德國艾本德公司;Sorvall legend RT離心機 美國Kendro實驗室產(chǎn)品公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗所用培養(yǎng)基 MRS培養(yǎng)基;M17培養(yǎng)基;TYC培養(yǎng)基。

1.2.2 菌種的分離及篩選 用無菌生理鹽水稀釋漿水樣本(樣本稀釋度以平板表面出現(xiàn)單菌落為度),涂布于平板培養(yǎng)基表面,37℃下培養(yǎng)48h后觀察。挑選單菌落,再次用劃線法分離純化并鏡檢。挑選菌落形態(tài)統(tǒng)一、菌體顯微形態(tài)一致的菌株進行后續(xù)實驗。

1.2.3 菌株表型特征研究及乳酸菌的初步篩選 將1.2.1所選的菌株劃線于平板上,培養(yǎng)至24～48h時觀察并記錄菌落形狀、色澤、隆起、表面平整度、邊緣形狀等;取培養(yǎng)至24～36h的菌落涂片,用三步法做革蘭氏染色,并在油鏡下觀察菌體形狀和顏色(用Staphyloccocusaureus和Escherichiacoli做陽性和陰性對照)。

以上述觀察結(jié)果為依據(jù),選擇菌落乳白色、光滑濕潤、圓形,革蘭氏染色結(jié)果為陽性的菌株進行進一步研究。

1.2.4 生理生化特征鑒定 將1.2.3所挑選出的菌株活化后,分別做以下實驗[13-14]:接觸酶反應(yīng)實驗、淀粉水解實驗、明膠液化實驗、石蕊牛奶實驗、糖發(fā)酵實驗、硫化氫產(chǎn)生實驗、吲哚產(chǎn)生實驗和乙酰甲基甲醇(V-P)實驗,準確觀察并記錄實驗結(jié)果。根據(jù)菌落形態(tài)、革蘭氏染色結(jié)果及生化特性研究結(jié)果,參照《伯杰細菌鑒定手冊》[15]、《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》[16]查詢各菌株的分類地位。

1.2.5 分子生物學(xué)鑒定

1.2.5.1 DNA的提取 細菌用細菌基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)提取。

1.2.5.2 DNA純度及濃度分析 用瓊脂糖凝膠電泳法和紫外分光光度法檢測。

1.2.5.3 設(shè)計與合成 細菌擴增引物為細菌16S rDNA擴增通用引物27F-1492R,序列分別為:27F:5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3;1492R:5-GGTT ACCTTGTTACGACTT-3,由北京華大基因研究中心合成。

1.2.5.4 擴增反應(yīng) 擴增反應(yīng)在梯度PCR儀上進行PCR反應(yīng),反應(yīng)體系為(25μL):10×buffer緩沖液:2.5μL;l0mmol/L的Mg2+:1.5μL;25mmol/L的dNTP:0.5μL;20μmol/L的 PCR引物各0.5μL;5U/μL的Taq DNA聚合酶:0.25μL;約25ng/μL的模板DNA2.0μL;無菌雙蒸水稀釋至25μL。PCR反應(yīng)程序為:94℃預(yù)變性5min;94℃變性30s;55℃退火60s;72℃延伸30s;重復(fù)擴增40個循環(huán);最后72℃延伸l0min;4℃保存。

1.2.5.5 擴增產(chǎn)物的檢測與測序 反應(yīng)產(chǎn)物檢測通過瓊脂糖凝膠電泳法完成,DNA Marker為2000bp DNA Ladder,將擴增出的產(chǎn)物的測序直接交北京華大基因研究中心完成。

1.2.6 微生物種屬確定 綜合生理生化鑒定結(jié)果與分子生物學(xué)鑒定結(jié)果,確定微生物的種屬。

1.2.7 溶鈣圈實驗 將各菌株活化后點接于含2%碳酸鈣的MRS、M17、TYC培養(yǎng)基中,選取溶鈣圈相對較大的菌株進行后續(xù)實驗。

1.2.8 各菌株產(chǎn)酸性能的測定 將各株乳酸菌增菌培養(yǎng)24h后連續(xù)活化3代,以2%的接種量接入MRS培養(yǎng)液中,每隔8h取樣測定其pH,測至72h。

1.2.9 各菌株降解亞硝酸鹽性能的測定 采用鹽酸萘乙二胺法[17]做亞硝酸鹽標準曲線,得出標準方程。將連續(xù)活化3次后的乳酸菌以2%的接種量接種到含亞硝酸鈉(10mg/L)的培養(yǎng)基中,每12h取樣,采用鹽酸萘乙二胺法[17]測亞硝酸鹽,測至72h,記錄實驗結(jié)果,根據(jù)標準曲線方程計算亞硝酸鹽的含量。

1.2.10 各菌株降解膽固醇性能的測定 采用鄰苯二甲醛法[18]做膽固醇標準曲線,得出標準方程。將增菌培養(yǎng)連續(xù)活化3代后的乳酸菌以2%的接種量接種到高膽固醇培養(yǎng)基中,分別在24、48、72h時取樣,用鄰苯二甲醛法[18]測定膽固醇的含量,準確記錄實驗結(jié)果,根據(jù)標準方程計算膽固醇含量和降解率。

1.3 數(shù)據(jù)處理與結(jié)果分析

DNA序列使用軟件DNAMAN4.0進行分析;利用clustalx1.83對序列分別進行比對;在clustalx1.83中實現(xiàn)“掐頭去尾”;BLAST獲得相似序列。

亞硝酸鹽降解和膽固醇降解相關(guān)數(shù)據(jù)作圖采用spss19.0軟件完成。

在GenBank獲得與實驗菌株親緣較近的菌株16S rDNA測序作為參比序列,用clustalx1.83進行序列比對,使用MEGA5.1.2構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。

2 結(jié)果與分析

2.1 乳酸菌的初步篩選與表型特征的鑒定

以形態(tài)特征和革蘭氏染色結(jié)果為依據(jù),初步篩選出菌落乳白色、光滑濕潤、圓形,革蘭氏陽性的菌株59株。

2.2 生理生化特征鑒定

根據(jù)表型特征鑒定結(jié)果及生理生化特征鑒定結(jié)果,參照《伯杰細菌鑒定手冊》[15]、《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》[16],查詢其分類地位,結(jié)果如表2。

表2 生理生化特性鑒定結(jié)果Table 2 Identification results of physiological and biochemical characterization

鑒定并記錄實驗菌株的接觸酶反應(yīng)和淀粉水解等9項反應(yīng)特征,并結(jié)合形態(tài)特征和革蘭氏染色結(jié)果,分別與《伯杰細菌鑒定手冊》[15]和《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》[16]中描述的反應(yīng)特征相對比,發(fā)現(xiàn)所有實驗菌株在鑒定手冊中均能找到指標完全吻合的對應(yīng)菌株,大部分甚至能鑒定到種,說明本研究中特征實驗選取恰當,實驗結(jié)果準確可靠。

2.3 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果

如表3所示,分子生物學(xué)鑒定結(jié)果和生理生化特性鑒定結(jié)果吻合良好,兩種方法互相印證,說明鑒定準確,而且大部分都鑒定到了種,也說明了分子生物學(xué)鑒定方法的優(yōu)越性。另如圖1所示,從系統(tǒng)發(fā)育學(xué)的角度,本研究分離出的59株細菌的16S rDNA序列與GenBank中序列的相似度均在98%以上,可以確定其分屬為乳球菌屬Lactococcus、乳桿菌屬Lactobacillus、明串珠菌屬Leuconostoc、鏈球菌屬Streptococcus、短桿菌屬Brevibacterium等5屬17種。說明漿水中乳酸菌多樣性較高。

2.4 溶鈣圈實驗結(jié)果

根據(jù)乳酸菌降解膽固醇、降解亞硝酸鹽的機理,降膽固醇及亞硝酸鹽菌株都是產(chǎn)酸的,因而采用碳酸鈣平板透明圈法就可以初步篩選能產(chǎn)酸、能降解膽固醇與亞硝酸鹽的菌株,本研究中,結(jié)合革蘭氏染色結(jié)果和菌落形態(tài)觀察結(jié)果,選取了溶鈣圈大而明顯的菌株(N8、H8、M15、Q19、L14、L15、Q2、M5、H4、Q7、N12、N3、L11、M2、H1、H16、M14等17株)進行后續(xù)研究。

2.5 各菌株產(chǎn)酸性能測定

如圖2所示,本研究分離的各實驗菌株產(chǎn)酸能力和產(chǎn)酸規(guī)律差別較大,如N3、N14和L11等菌株培養(yǎng)液中pH始終在5.5左右,而H16、N8等菌培養(yǎng)液pH在72h時降到了4以下。但是總體來看,大部分實驗菌株都具有良好的產(chǎn)酸性能;就產(chǎn)酸規(guī)律來看,菌株M14、N12、L11產(chǎn)酸不明顯,菌株N3和M15的pH呈現(xiàn)先降低后升高再降低的趨勢;其余菌株pH均先下降,后逐漸趨于穩(wěn)定。

2.6 各菌株降膽固醇能力測定

表3 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果Table 3 Molecular identification results

如圖4所示,實驗菌株都有一定的降解膽固醇的能力,且整體呈現(xiàn)隨培養(yǎng)時間延長降解率增高的趨勢。但是,不同菌株其降解率差別較大,如菌株L14在72h的降解率在25%以下,而菌株M2達到了80%以上,相差3倍多。降解能力較強的菌株有:Q2、M5、H4、Q7、M2、H1、M14,其中,M2的最終的降解率高達92.28%。遠超過了前人們從各種樣品中分離的菌種的膽固醇降解率[19],也反映了漿水的優(yōu)良特性。

圖1 乳酸菌系統(tǒng)進化樹Fig.1 Phylogenetic tree of Lactobacillus

2.7 各菌株降解亞硝酸鹽能力的測定

亞硝酸鹽是引起發(fā)酵蔬菜安全問題的主要原因,由于蔬菜本身含有硝態(tài)氮,在某些微生物的活動下很容易產(chǎn)生亞硝酸鹽,而過量的亞硝酸鹽對人體有毒害作用,因此,去除發(fā)酵蔬菜中亞硝酸鹽就是發(fā)酵蔬菜制作中非常重要的一個方面。如圖5所示,本研究篩選出的菌株都能較好的降解亞硝酸鹽的能力,且培養(yǎng)液中亞硝酸鹽的降解率隨時間延長而增大,另外,不同菌株對亞硝酸鹽的降解率不同。

圖2 各菌株產(chǎn)酸結(jié)果Fig.2 Produce acid results of strains

圖3 膽固醇及亞硝酸鹽標準曲線Fig.3 Cholesterol and Nitrite standard curve 注:1.膽固醇曲線:Y=0.003862857142857143x+ 0.0004285714285714389,R2=0.995 (曲線估計時為0.995,直線估計為0.998) 2.亞硝酸鹽標準曲線:Y=0.6787719298245615x+ -0.005321637426900604,R2=0.997 (曲線估計時為0.997,直線估計為0.998)

圖4 實驗菌株降解膽固醇結(jié)果Fig.4 The results of experimental strains degraded cholesterol

圖5 實驗菌株降解亞硝酸鹽結(jié)果Fig.5 The results of experimental strains degraded nitrite

綜上,就產(chǎn)酸、降解膽固醇和降解亞硝酸鹽性能等綜合來看,較為突出的菌株有乳酸乳球菌3株,分別為:Q2(乳酸乳球菌乳脂亞種Lactococcuslactiscremoris)、M2(乳酸乳球菌乳亞種Lactococcuslactislactis)和H1(乳酸乳球菌乳亞種Lactococcuslactislactis),乳酪短桿菌2株:M5(乳酪短桿菌Brevibacteriumcasei)和H4(乳酪短桿菌Brevibacteriumcasei),另有一株菌Q7(棉籽糖乳球菌Lactococcusraffinolactis)。以上幾株菌都是較為常見的乳酸菌,其中乳酸乳球菌在食品和藥物生產(chǎn)中都有極廣泛的應(yīng)用,如在乳制品的發(fā)酵[20]、生物化工產(chǎn)品的生產(chǎn)[21]、醫(yī)療及科研[22]等。而棉籽糖乳球菌和乳酪短桿菌的應(yīng)用目前報道還較少。本研究結(jié)果顯示了以上6株菌在諸多方面都有優(yōu)良的表現(xiàn),因此,是極有開發(fā)利用前途的微生物資源。

3 討論

如上所述,本研究所分離菌種大多是具有潛在優(yōu)良功效的乳球菌或乳桿菌,如益生功效[23],張莉等[24]以植物乳桿菌K25和C88為菌種,研究了乳酸菌的益生功效,結(jié)果表明:植物乳桿菌C88具有調(diào)節(jié)腸道菌群的作用,而植物乳桿菌K25干酪有助于降低心血管疾病的發(fā)生率。另有張董燕等[25]的研究表明乳桿菌能夠提高生長豬氮表觀消化率,改善血清指標,減少應(yīng)激。諸如此類,大量的研究證據(jù)都顯示乳酸菌具有出色的益生功效,總結(jié)起來,可以歸結(jié)為促進胃腸道健康、促進膽固醇降解、增強免疫力、延緩衰老等幾個方面;除此之外,乳酸菌還具有改善蔬菜品質(zhì)的功效,研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)乳酸菌活動后,蔬菜風(fēng)味得以改善[26]、蔬菜安全和營養(yǎng)價值得以提高[27-29]等。除了上述兩個方面的作用外,某些乳酸菌還可產(chǎn)生細菌素,是良好的生物保鮮劑,其具有抗菌保鮮作用且對人體無毒副作用,可以防止?jié){水的霉變腐敗,可改善食品質(zhì)量和食品安全的天然化合物,具有作為食品生物防腐劑的潛在應(yīng)用價值[30-31]。如研究發(fā)現(xiàn)[32]戊糖乳桿菌產(chǎn)生的戊糖乳桿菌素對部分革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌具有較強抑制作用,因其抑菌譜較廣,對多數(shù)致病菌和食品腐敗菌有較好抑菌作用,目前已有小規(guī)模的應(yīng)用。但是另一方面,不同菌株之間的差別是很大的,因此,本研究分離出菌株的功效還需進一步實驗論證。

本研究產(chǎn)酸實驗中,菌株N3和M15的pH呈現(xiàn)先降低后升高再降低的趨勢,這一結(jié)果與理論預(yù)測和前人研究得出的規(guī)律[33]相反,其可能的原因之一是雜菌污染,但其后經(jīng)過多發(fā)酵液中微生物鏡檢和菌落形態(tài)檢驗,未發(fā)現(xiàn)雜菌,且重復(fù)實驗均出現(xiàn)這一現(xiàn)象,可排除雜菌污染的可能。因此,其最可能的原因就是該菌株本身代謝特性較為特殊,需要從該菌酶系組成加以研究。

4 結(jié)論

4.1 漿水中含有多種乳酸菌,可歸為5屬17種。

4.2 實驗菌株大多具有良好的產(chǎn)酸、降膽固醇和降亞硝酸鹽功效,但不同菌株產(chǎn)酸、降膽固醇和降亞硝酸鹽的能力各不相同。

4.3 Q2(乳酸乳球菌乳脂亞種Lactococcuslactiscremoris)、M5(乳酪短桿菌Brevibacteriumcasei)、H4(乳酪短桿菌Brevibacteriumcasei)、Q7(棉籽糖乳球菌Lactococcusraffinolactis)、M2(乳酸乳球菌乳亞種Lactococcuslactislactis)、H1(乳酸乳球菌乳亞種Lactococcuslactislactis)等6株菌各方面性能都很優(yōu)異,具有進一步開發(fā)利用之潛力。

[1]張軼,王玉麗,陳曉前. 等. 傳統(tǒng)發(fā)酵食品-漿水中微生物的分離與初步鑒定[J]. 食品科學(xué),2007,28(1):219-222.

[2]孟憲剛,張麗珂,周鴿鴿. 傳統(tǒng)發(fā)酵食品-漿水研究進展概況及發(fā)展前景展望[J]. 食品工業(yè)科技,2010,31(10):402-404.

[3]金世琳. 乳酸菌的科學(xué)與技術(shù)[J]. 中國乳品工業(yè),1998(4):26-31.

[4]郭松年,田淑梅,白洪濤. 乳酸菌及乳酸菌發(fā)酵食品[J]. 食品科技,2005,12(1):39-40.

[5]潘鈞陶,張翠霞,王國軍. 簡述酸奶防治腸道疾病的特殊功能[J]. 微生物學(xué)雜志,1993,13(1):74.

[6]趙樹欣. 應(yīng)重視對我國傳統(tǒng)發(fā)酵食品的研究-兼論發(fā)酵食品中的功能成分[J]. 中國食物與營養(yǎng),2004(1):27-29.

[7]Leroy F,De Vuyst L. Lactic acid bacteria as functional starter cultures for the food fermentation industry[J]. Food Science and Technology,2004,15(2):67-78.

[8]Mollet B. Genetically improved starter strains:opportunities for the dairy industry[J]. Int Dairy J,1999,9(1):11-15.

[9]Champagen P P,Tompkins T A,Buckley N D,etal. Effect of fermentation by pure and mixed cultures of Streptococcus thermophilus and Lactobacillus helveticus on isoflavone and B-vitamin content of a fermented soy beverage[J]. Food Microbiology,2010,27(7):962-972.

[10]黃麗慧,張雁,陳于隴,等. 發(fā)酵蔬菜中亞硝酸鹽消長規(guī)律及調(diào)控技術(shù)的研究進展[J]. 食品科學(xué),2013,34(5):303-307.

[11]張慶芳,遲乃玉,鄭學(xué)仿,等. 短乳桿菌去除亞硝酸鹽的研究[J]. 微生物學(xué)通報,2004(2):55-60.

[12]呂玉濤.產(chǎn)亞硝酸鹽還原酶短乳桿菌發(fā)酵條件優(yōu)化及酶的分離純化研究[D]. 上海:上海師范大學(xué),2010.

[13]李振高.土壤與環(huán)境微生物研究法[M]. 北京:科學(xué)出版社,2008:146-190.

[14]楊汝德. 現(xiàn)代工業(yè)微生物學(xué)實驗技術(shù)[M]. 北京:科學(xué)出版社,2009:159-173.

[15]RE布坎南,E吉本斯. 伯杰細菌鑒定手冊[M]. 北京:科學(xué)出版社,1984.

[16]東秀珠,蔡妙英. 常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊[M]. 北京:科學(xué)出版社,2001.

[17]GB5009.33-2010,食品安全國家標準食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定[S]. 北京:中華人民共和國衛(wèi)生部,2010.

[18]田建軍. 高效降膽固醇乳酸菌的篩選及在發(fā)酵乳中的應(yīng)用[D]. 呼和浩特:內(nèi)蒙古大學(xué),2006.

[19]姜華. 降膽固醇功能乳酸菌的篩選及其功能特性的研究[D]. 南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.

[20]曲曉軍,沙長青,李思明,等. 重組乳酸乳球菌的應(yīng)用進展[J]. 黑龍江科學(xué),2013(4):34-39.

[21]張志發(fā). 乳酸乳球菌發(fā)酵生產(chǎn)大豆異黃酮的研究[D]. 長春:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

[22]史達,宋巖,李一經(jīng). 乳酸乳球菌作為黏膜免疫活載體疫苗傳遞抗原的研究進展[J]. 微生物學(xué)報,2006(4):89-93.

[23]趙紅霞,詹勇. 乳酸菌的研究及其應(yīng)用[J]. 江西飼料,2003(1):9-12.

[24]張莉. 植物乳桿菌的黏附特性研究及其在益生菌干酪中的應(yīng)用[D]. 吉林:吉林大學(xué),2013.

[25]張董燕,季海峰,劉輝,等.豬源唾液乳桿菌對生長豬氮表觀消化率及血清指標的影響[J]. 中國畜牧雜志,2013(7):93-96.

[26]馬霞,韓迪,張吉,等. 乳酸菌在發(fā)酵果蔬中的應(yīng)用[J]. 中國乳品工業(yè),2013,41(1):40-42.

[27]蔣欣茵,李曉暉,張伯生,等. 腌制食品中降解亞硝酸鹽的乳酸菌分離與鑒定[J]. 中國釀造,2008(1):13-16.

[28]Yan P M,Xue W T,Tan S,etal. Effect of Inoculating Lactic Acid Bacteria Starter Cultures on the Nitrite Concentration of Fermenting Chinese Paocai[J]. Food Control,2008,19(1):50-55.

[29]Yoon K Y,Woodams E E,HangY D. Production of Probiotics Cabbage Juice by Lactic Acid Bacteria[J]. BioresourceTechnology,2006,97(12):1427-1430.

[30]田曉樂,孟慶繁,周杰,等. 微生物防腐劑-細菌素的研究與應(yīng)用[J]. 食品工業(yè)科技,2004,25(1):120-123.

[31]Cotter P D,Hill C,Ross R P. Bacteriocins:developing innate immunity for food[J]. Nat Rev Micro,2005,3(10):777-788.

[32]于雷雷,王超,施波,等. 戊糖乳桿菌素pentocin LPEM818的初步純化及特性研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2013(2):17-23.

[33]劉振民,王蔭榆. 乳酸菌產(chǎn)酸特性研究[J]. 乳業(yè)科學(xué)與技術(shù),2010(4):169-172.

Isolation and identification of lactic acid bacteria from Jiangshui and preliminary study on metabolic characteristics

MENG Xian-gang,LI Xue-ping,LI Jian-hong,XIE Jia-jia,ZHENG Nan

(College of Chemistry and Bioengineering Sciences,Lanzhou jiaotong University,Lanzhou 730070,China)

Jiangshui as the experimental material and Lactic acid bacteria(LAB)were isolated and purified on the selective culture medium by spread plate method and streak plate method. The species were identified by combining physiological and biochemical characteristics and molecular biology method. It found that there were various lactic acid bacteria which were classified into 5 genus and 17 species in Jiangshui. 17 LAB strains were selected by calcium-dissolving and the strains were used for produced acid,degraded cholesterol and nitrite experiment. The results showed that most of the selected strains had good produced acid,degraded cholesterol and nitrite ability,which Q2,M5,H4,Q7,M2,H1 were better in all aspects,with a potential of development and utilization.

Jiangshui;lactic acid bacteria;diversity;nitrite;cholesterol

2014-01-09

孟憲剛(1974-)，男，教授，博士，研究方向：食品發(fā)酵工程。

2012甘肅省財政廳生物專項項目(213001)；2011甘肅省財政廳高等學(xué)校基本科研業(yè)務(wù)費項目(211135)。

TS201.3

A

1002-0306(2015)01-0181-07

10.13386/j.issn1002-0306.2015.01.029