生萊菔子和炒萊菔子中芥子堿硫氰酸鹽的含量測定

張慶英

生萊菔子和炒萊菔子中芥子堿硫氰酸鹽的含量測定

張慶英

目的 建立用HPLC法測定生萊菔子和炒制萊菔子中芥子堿硫氰酸鹽含量的方法，比較不同產(chǎn)地藥材中芥子堿硫氰酸鹽的含量，并研究炒制對藥材中芥子堿硫氰酸鹽含量的影響。方法 以苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑；進(jìn)樣量5 μL；以乙腈-3%冰醋酸溶液(15∶85)為流動相；檢測波長326 nm。 結(jié)果 芥子堿硫氰酸鹽進(jìn)樣量在0.047 2～1.888 0 μg之間有良好線性關(guān)系；生萊菔子的加樣平均回收率為99.30%，RSD=0.4%(n=6)；炒制萊菔子的加樣平均回收率為94.58%，RSD=0.3%(n=6)。結(jié)論 本法快速、簡便，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠；不同產(chǎn)地藥材芥子堿硫氰酸鹽含量差異大；炒制后萊菔子中芥子堿硫氰酸鹽含量有所增加。

萊菔子；芥子堿硫氰酸鹽；HPLC

0 引言

萊菔子為十字花科一年生或兩年生草本植物蘿卜RaphanussatiouL.的干燥成熟種子，為臨床常用藥物。具有下氣、化痰、消食的作用[1]。萊菔子含有萊菔素(Raphanin)、芥子堿(Sinapine)、亞油酸、植物甾醇等多種成分，其中芥子堿是降壓作用的活性成分之一，多以芥子堿硫氰酸鹽的形式存在于藥材[2-3]，因此，測定芥子堿的含量對控制萊菔子藥材質(zhì)量具有重要意義。萊菔子可生用和炒用，本實(shí)驗(yàn)擬建立生萊菔子和炒制萊菔子中芥子堿硫氰酸鹽含量的檢測方法，并比較炮制對炒制萊菔子含量的影響。

1 試藥與儀器

1.1 對照品與試藥 萊菔子(9批實(shí)驗(yàn)樣品來自國內(nèi)的不同地區(qū)，具有代表性和多樣性)，芥子堿硫氰酸鹽(中國藥品與生物制品檢定所，批號：111702-200501)，乙腈為色譜純，水為純化水，其他為分析純。

1.2 儀器 島津LC-2010A高效液相色譜儀(日本，島津公司)，SCL-LC-10Avp紫外可見檢測器，CLASS-VP工作站CP225D型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)，AS20500A型超聲波清洗器(天津奧特塞斯儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)[4]苯基柱Agilent ZORBOX SB-phenyl(4.6 mm×250 mm，5 μm)；進(jìn)樣量：5 μL；以乙腈-3%冰醋酸(15∶85)為流動相；檢測波長：326 nm。理論板數(shù)按芥子堿硫氰酸鹽峰計(jì)算應(yīng)不低于10 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱定介子堿硫氰酸鹽對照品適量，加70%甲醇制成1 mL含40 μg的溶液(置棕色量瓶內(nèi)或避光保存)。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得(置棕色量瓶內(nèi)或避光保存)。精密吸取對照品溶液和供試品溶液分別注入液相色譜儀，測定，即得液相色譜圖，見圖1、圖2。

圖1 對照品溶液色譜圖

圖1 供試品溶液色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取含介子堿硫氰酸鹽對照品溶液(47.20 μg/mL)1、2、5、10、15、20、25、30、40 μL注入液相色譜儀測定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=3 093 622.16 X+10 073.34，r=0.999 9，表明芥子堿硫氰酸鹽在進(jìn)樣量0.047 2～1.888 0 μg之間有良好線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn) 精密量取含介子堿硫氰酸鹽對照品溶液(45.40 μg/mL)5 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次測定峰面積，RSD為0.5%，精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(110716)生萊菔子樣品6份，分別按樣品含量測定法測定，結(jié)果含量平均值為5.102 1 mg/g，RSD為0.4%，表明本品的重復(fù)性較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 芥子堿硫氰酸鹽對照品溶液和供試品溶液對光不穩(wěn)定，采用超高效液相色譜進(jìn)行考察。將對照品溶液和供試品溶液置棕色量瓶內(nèi)或避光保存，分別于0、1、2、3、4、5、6、8、10、12、24 h分別進(jìn)樣，考察其穩(wěn)定性。結(jié)果表明：對照品溶液RSD為1.42%，供試品溶液RSD為1.59%，在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 精密稱定已知含量(含芥子堿硫氰酸鹽5.102 1 mg/g)的生萊菔子樣品6份，精密加入介子堿硫氰酸鹽對照品適量，按含量測定法測定得峰面積，并計(jì)算含量，平均回收率為99.30%，RSD=0.4%；精密稱定已知含量(含芥子堿硫氰酸鹽5.410 1 mg/g)的炒制萊菔子樣品6份，精密加入介子堿硫氰酸鹽對照品適量，按含量測定法測定得峰面積，并計(jì)算含量，平均回收率為94.58%，RSD=0.3%。

表1 萊菔子回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 炒萊菔子回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.8 樣品含量測定 按所建立的方法，對生萊菔子及炒制萊菔子各9批進(jìn)行含量測定。結(jié)果顯示：生萊菔子含量范圍在0.35%～0.53%之間，炮制品含量范圍在0.39%～0.56%之間，說明炒制后的萊菔子芥子堿硫氰酸鹽的含量有所增加。見表3。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

3.1.1 色譜柱[5-7]首先選用普通C18色譜柱，乙腈-3%冰醋酸(15∶85)為流動相，曾試用3根不同品牌的C18色譜柱，通過調(diào)整流動相的比例，改變流速等，都未能達(dá)到理想的分離效果，對照品峰有拖尾，樣品中待測組分峰與相鄰雜質(zhì)小峰未能有效分離。普通色譜柱不理想，試用苯基柱Agilent ZORBOX SB-phenyl(4.6 mm×250 mm)，能夠達(dá)到有效分離且分離良好。

表3 萊菔子、炒萊菔子含量測定結(jié)果(%)

3.1.2 流動相 在確定上述色譜條件基礎(chǔ)上，試圖降低流動相酸度，依次用2%冰醋酸、1%冰醋酸代替上述流動相中的3%冰醋酸進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示，隨著酸性的減低，峰變寬，峰形變差。通過以上實(shí)驗(yàn)，確定采用苯基色譜柱，流動相為乙腈-3%醋酸溶液(15∶85)。

3.2 提取溶劑的考察 芥子堿硫氰酸鹽雖然也易溶于水，但是樣品很難濾過，芥子堿硫氰酸鹽在甲醇、乙醇中有較好的溶解度[8]，所以選擇不同濃度甲醇、乙醇溶液試驗(yàn)。乙醇系列作為提取溶媒時，結(jié)果顯示，70%乙醇含量最高，但重復(fù)性稍差，有時色譜圖中有小雜質(zhì)峰出現(xiàn)。甲醇系列作為提取溶媒時，80%甲醇含量最高；但是，80%甲醇作為提取溶媒時，溶液呈乳白色，難以濾過，濾過時間長，溶媒蒸發(fā)，使含量偏高，可能致使結(jié)果不準(zhǔn)確。最終決定采用70%甲醇作為提取溶媒。 結(jié)果表明，采用HPLC法測定不同產(chǎn)地的生萊菔子和炒制萊菔子，具有快速、簡便、準(zhǔn)確的特點(diǎn)；不同產(chǎn)地的藥材芥子堿硫氰酸鹽的含量有較大差異；本次研究采購的9批藥材，炒制后的萊菔子芥子堿硫氰酸鹽的含量均有所增加，增加機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

[1] 徐國鈞.中國藥材學(xué)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1996:1229-1231.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上?？茖W(xué)出版社,2000:1801-1802.

[3] 譚鵬,薛玲,呂文海.萊菔子不同炮制品對呼吸系統(tǒng)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].山東中醫(yī)雜志,2005,24(5):300.

[4] 譚鵬,姜虹玉,呂文海.萊菔子研究概況[J].中醫(yī)藥雜志,2005,21(4):254-255.

[5] 戴金玉,賴增發(fā).HPLC法測定婦樂顆粒中芥子堿硫氰酸鹽的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2005,11(4):13-14.

[6] 蘭保強(qiáng),譚瀟,邱宏聰.HPLC測定生骨顆粒中芥子堿硫氰酸鹽的含量[J].華西藥學(xué)雜志,2006,22(3):349-350.

[7] 李健,楊濤,宋毅,等.HPLC測定氣滯胃痛顆粒中的延胡索乙素[J].華西藥學(xué)雜志,2008,23(3):375.

[8] 趙杰余,劉金來,李笑慧,等.HPLC法測定“冬病夏治”貼膏中芥子堿硫氰酸含量[J].海峽藥學(xué),2013,15(8):78-80.

Determination of sinapine thiocyanate in raw and frying Semen Raphani

ZHANG Qing-ying

(Liaocheng Vocational and Technical College,Shandong 252000,China)

Objective To establish a method for content determination of raw and frying semen raphani,compare the content of samples from different regions of sinapine thiocyanate,and explore the effect of frying on sinapine thiocyanate.Methods Phenyl silane bonded silica column was used.The flow rate was 5 μL.The mobile phase was acetonitrile-3%acetate(15∶85).The detection wavelength was set at 326 nm.Results The linear range of sinapine thiocyanate was 0.047 2～1.888 0 μg.The average recovery of raw semen raphani was 99.30%,RSD=0.4%(n=6),and the average recovery of frying semen raphani was 94.58%,RSD=0.3%(n=6).Conclusion The method is rapid,simple,accurate,and reproducible.It has marked discrepancy in the content of samples from different regions.Frying Semen Raphani can increase the content of Sinapine thiocyanate.

Semen Raphani；Sinapine thiocyanate；HPLC

2014-07-22

聊城職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山東 252000

聊城職業(yè)技術(shù)學(xué)院院級科研課題(2012lzyk17)

10.14053/j.cnki.ppcr.201503019

*通信作者