西施舌對(duì)糖尿病小鼠血脂及抗氧化活性的影響*

溫?fù)P敏，萬(wàn)端靜，謝永華，羅彩林，程 晶

1泉州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，福建 泉州 362011；2泉州市中醫(yī)院急診科

西施舌對(duì)糖尿病小鼠血脂及抗氧化活性的影響*

溫?fù)P敏1，萬(wàn)端靜2，謝永華1，羅彩林1，程 晶1

1泉州醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，福建 泉州 362011；2泉州市中醫(yī)院急診科

目的：研究西施舌水提取物對(duì)糖尿病小鼠血脂含量和抗氧化活性的影響。方法：構(gòu)建鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型，分析不同濃度西施舌水提取物對(duì)糖尿病小鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、總抗氧化(T-A O C)活性和N O含量，以及對(duì)肝臟組織羥自由基含量(O H o)、超氧化物歧化酶(SO D)和過(guò)氧化氫酶(CA T)活性的影響。結(jié)果：不同濃度西施舌水提物均具能降低糖尿病小鼠總膽固醇和甘油三酯含量，且不同劑量西施舌水提物實(shí)驗(yàn)組與糖尿病小鼠之間差異顯著(P＜0.05)。結(jié)論：西施舌水提物能提高糖尿病小鼠抗氧化活性，并趨近于正常小鼠水平。

西施舌；降血脂；抗氧化；STZ誘導(dǎo)糖尿病小鼠;酶

近年來(lái)，糖尿病預(yù)防已成為我國(guó)最主要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。糖尿病是以胰島素抵抗及(或)胰島素分泌缺陷改變所引起的以高血糖為主要臨床特征的慢性內(nèi)分泌代謝性疾病［1-2］。根據(jù)對(duì)中國(guó)31個(gè)省(自治區(qū)、直轄市)的161個(gè)檢測(cè)縣(區(qū))18歲及以上常住居民的糖尿病調(diào)查顯示，我國(guó)2010年18歲及以上居民糖尿病患病率達(dá)9.65%，且患者的知曉率和治療率都很低。如不予以有效控制，今后十年中國(guó)的糖尿病患病率仍會(huì)繼續(xù)攀升。西施舌(Coelomactra antiquata)福建俗稱“海蚌”，個(gè)體較大，肉質(zhì)細(xì)嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，是久負(fù)盛名的珍品佳肴［3］。西施舌除可食用外，還具有降低尿糖的功效。據(jù)臨床報(bào)道，糖尿病患者每天早晨空腹食水煮西施舌8個(gè)連湯飲服，5天后即有顯著效果［4］。本文研究西施舌提取物對(duì)糖尿病小鼠降血脂和抗氧化活性影響，為西施舌的藥用價(jià)值研究及功能食品開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 西施舌水提取物的制備 選擇殼長(zhǎng)7～9 cm新鮮西施舌成貝，去殼、洗凈，稱取其肌肉50 g，剪成3小塊，放入1 000 mL燒杯，再加入300 mL的雙蒸水，置于超聲波清洗機(jī)，于60 W、20 kHz、60℃條件下處理20分鐘。冷卻后用新華1號(hào)定性濾紙過(guò)濾，取濾液低溫冷凍干燥得到西施舌水提物粉末。用雙蒸水配置成不同濃度備用。

1.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 糖尿病小鼠模型構(gòu)建：昆明小鼠30只，雌雄各半，體質(zhì)量18～20 g，購(gòu)自斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(滬)2012-0002。自由飲水適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，禁食24小時(shí)。用4℃冰箱冷卻的0.1 mol/L的檸檬酸緩沖液(pH4.5)將STZ溶解，配置成10 mg/mL溶液。小鼠腹腔皮下一次性注射含55 mg/kg STZ溶液。對(duì)照組注射相同體積的檸檬酸緩沖液。小鼠禁食，自由飲食5%葡萄糖水溶液。72小時(shí)后，尾部取血測(cè)定血糖，血糖值大于20 mmol/L為糖尿病模型小鼠。小鼠分成5組，每組6只。第1組為正常對(duì)照組：正常小鼠，每天灌胃相同劑量pH4.5的檸檬酸鈉緩沖液(Control)；第2組為糖尿病對(duì)照組：糖尿病小鼠，每天灌胃相同劑量pH4.5的檸檬酸鈉緩沖液(Diabetes)；第3組為低濃度治療組：糖尿病小鼠，每天灌胃50 mg/kg的西施舌水提物(D+C1)；第4組為中濃度治療組：糖尿病小鼠，每天灌胃100 mg/kg的西施舌水提物(D+C2)；第5組為高濃度治療組：糖尿病小鼠，每天灌胃150 mg/kg的西施舌水提物(D+C3)。21天后，小鼠禁食24小時(shí)，但自由飲水。尾靜脈取血，測(cè)定血糖。再摘眼球取血，用EDTA抗凝，用于總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)，以及總抗氧化(T-AOC)和NO測(cè)定。小鼠脫臼處死，取肝臟，洗凈血污，剪碎。加入固液比(g/mL)為1∶1生理鹽水勻漿。于4℃條件下，6 000 g離心10分鐘，取上清液測(cè)定羥自由基含量、超氧化物歧化酶(SOD)和過(guò)氧化氫酶(CAT)活性。

2 結(jié)果

2.1 西施舌水提取物對(duì)糖尿病小鼠體質(zhì)量及血糖水平的影響 糖尿病小鼠和不同劑量西施舌水提取物處理組小鼠體質(zhì)量均明顯低于正常組(P＜0.05)，而血糖水平均明顯高于正常組(P＜0.05)。治療21天后，不同劑量西施舌水提物均能提高糖尿病小鼠的體質(zhì)量，其中劑量為100 mg/kg和150 mg/kg的實(shí)驗(yàn)組小鼠體質(zhì)量與糖尿病小鼠之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同劑量西施舌水提取物均能降低糖尿病小鼠的血糖濃度，與糖尿病小鼠比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 西施舌水提物對(duì)糖尿病小鼠體質(zhì)量及血糖水平的影響(±s)

表1 西施舌水提物對(duì)糖尿病小鼠體質(zhì)量及血糖水平的影響(±s)

注：a表示與正常組比較，P＜0.05；b表示與糖尿病組比較，P＜0.05。

組別 只數(shù) 劑量/(m g·kg-1) 體質(zhì)量/g 血糖/(m m ol·L-1)正常組 6 － 47.92±3.92 6.64±0.69糖尿病組 6 － 31.68±3.94 22.28±1.60 6 50 36.26±4.89a15.46±2.58ab西施舌組 6 100 39.22±4.30ab12.42±1.51ab6 150 39.84±6.71ab10.84±1.75ab

2.2 西施舌水提物對(duì)糖尿病小鼠血脂的影響 不同劑量西施舌水提物均能降低糖尿病小鼠血清TG和TC含量，并趨近于正常小鼠。與糖尿病小鼠比較，不同劑量西施舌濃度對(duì)游離脂肪酸的影響差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明西施舌水提取對(duì)糖尿病小鼠游離脂肪酸無(wú)改善效果。見(jiàn)表2。

表2 西施舌水提物對(duì)糖尿病小鼠血脂水平的影響

表2 西施舌水提物對(duì)糖尿病小鼠血脂水平的影響

注：a表示與正常組比較，P＜0.05；b表示與糖尿病組比較，P＜0.05。

組別 例數(shù) 劑量/(m g·kg-1) TC/(m m ol·L-1) TG/(m m ol·L-1) FFA/(m m ol·L-1)正常組 6 － 0.74±0.06 1.16±0.06 0.89±0.07糖尿病組 6 － 2.11±0.10 2.17±0.05 1.46±0.05 6 50 1.71±0.07ab1.65±0.04ab1.43±0.09a西施舌組 6 100 1.61±0.05ab1.59±0.04ab1.47±0.08a6 150 1.49±0.11ab1.51±0.03ab1.42±0.05a

2.3 西施舌水提物對(duì)糖尿病小鼠血清抗氧化活性的影響 與糖尿病小鼠比較，不同濃度西施舌水提取均能提高血清總抗氧化活性，其中濃度為100 mg/kg和150 mg/kg的實(shí)驗(yàn)組與糖尿病鼠之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。不同濃度西施舌水提取物均能顯著降低糖尿病小鼠血清的NO含量(P＜0.05)，并趨近于正常小鼠水平。見(jiàn)表3。

表3 西施舌水提取物對(duì)糖尿病小鼠血清抗氧化活性的影響

表3 西施舌水提取物對(duì)糖尿病小鼠血清抗氧化活性的影響

注：a表示與正常組比較，P＜0.05；b表示與糖尿病組比較，P＜0.05。

組別 只數(shù) 劑量/(m g·kg-1) T-A O C/g N O/(m m ol·L-1)正常組 6 － 15.66±0.80 6.64±0.69糖尿病組 6 － 10.93±0.69 22.28±1.60 6 50 12.06±0.58a15.46±2.58ab西施舌組 6 100 13.25±0.56b12.42±1.51ab6 150 14.55±0.51b10.84±1.75ab

2.4 西施舌水提取物對(duì)糖尿病小鼠肝臟抗氧化活性的影響 不同濃度西施舌水提取物均能改善糖尿病小鼠肝臟抗氧化活性。不同濃度西施舌水提物SOD活性和羥自由基含量與正常鼠之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與糖尿病小鼠比較，西施舌水提物濃度為150 mg/kg的實(shí)驗(yàn)組羥自由基含量、SOD和CAT活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，并趨近于正常小鼠水平。見(jiàn)表4。

表4 西施舌水提物對(duì)糖尿病小鼠肝臟抗氧化活性的影響(±s)

表4 西施舌水提物對(duì)糖尿病小鼠肝臟抗氧化活性的影響(±s)

注：a表示與正常組比較，P＜0.05；b表示與糖尿病組比較，P＜0.05。

組別 只數(shù) 劑量/(m g·kg-1) SO D/(m m ol·L-1) CA T/(m m ol·L-1) 羥自由基/(m m ol·L-1)正常組 6 － 15.05±1.34 25.69±3.34 145.79±11.72糖尿病組 6 － 7.93±1.10 18.83±2.14 96.54±4.70 6 50 8.86±1.03a20.01±1.72a105.51±7.12a西施舌組 6 100 10.05±0.30ab21.02±1.85a113.25±9.24ab6 150 12.48±0.62ab23.13±1.36b128.42±6.06ab

3 討論

長(zhǎng)期的糖代謝紊亂可導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激和抗氧化防御體系的失衡，還會(huì)引起機(jī)體內(nèi)的抗氧化酶系統(tǒng)的損傷。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞中的自由基能夠使胰島素信號(hào)通路的反應(yīng)發(fā)生異常，而這些胰島素抵抗效應(yīng)都可以通過(guò)向體系中添加抗氧化物質(zhì)或誘導(dǎo)抗氧化酶類的表達(dá)來(lái)消除［5］。Nshikawa等［6］發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使細(xì)胞中線粒體產(chǎn)的過(guò)氧化物含量正常化可以預(yù)防蛋白激酶c活化通路、糖基化末端產(chǎn)物增加及醛糖還原酶通路所引起的高血糖損傷。肝臟是物質(zhì)代謝的重要器官，也是常見(jiàn)的糖尿病慢性損傷的靶器官之一。氧化應(yīng)激是糖尿病引發(fā)并發(fā)癥的共同發(fā)病機(jī)制，也是導(dǎo)致肝纖維化甚至肝硬化的原因之一。提高機(jī)體肝臟抗氧化能力，減少自由基對(duì)肝臟的損傷對(duì)改善糖尿病及其并發(fā)癥具有重要的意義［7-8］。

本研究結(jié)果表明，西施舌水提取物能提高STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠鼠血清抗氧化活性降低和減少羥自由基的含量，提肝臟抗氧化酶 SOD、CAT活性，減少羥自由基含量，一定程度恢復(fù)機(jī)體的抗氧化能力。表明西施舌降低糖尿病小鼠血脂水平與提高機(jī)體抗氧化活性有關(guān)，西施舌提取物可通過(guò)加強(qiáng)抗氧化活性，對(duì)糖尿病引起的肝臟損傷有一定的保護(hù)作用，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

［1］ Raj asekaran S，Si vagnanamK，Ravi K，et al.H ypogl ycem i c effectof al oe vera gelon st rept ozot oci n-i nduced di abet es i n experi m ent alrat s［J］.J M ed Food，2004，7(1):61-66.

［2］ 康繼宏，寧光.中國(guó)糖尿病防治研究的現(xiàn)狀與挑戰(zhàn)［J］.轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究：電子版，2012，3:1-24.

［3］ 齊秋貞，高如承，邱文仁，等.西施舌的生活史［J］.福建師范大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1995，44(4):82-88.

［4］ 邢湘成.西施舌的藥用［J］.藥膳食療，2004，7(4):32.

［5］ 賀凱，楊勇，李學(xué)剛.糖尿病的抗氧化治療及問(wèn)題［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2013，34(4):640-643.

［6］ N i shi kaw a T，Edel st ei n D，D u X L，et al.N orm al i zi ng m i t ochondri alsuperoxi deproduct i on bl ockst hree pat hw ays ofhypergl ycaem i c dam age［J］.N at ure，2000，404(13):787-790.

［7］ H arri son SA.Li ver di sease i n pat i ent s w i t h di abet es m el l i t us［J］.JournalofCl i ci nalG ast roent erol ogy，2006，40(1):68-76.

［8］ 謝欣梅，龐曉斌.覆盆子提取物對(duì)2型糖尿病大鼠糖脂代謝的影響及對(duì)肝臟保護(hù)作用的研究［J］.中成藥，2013，35(3): 460-465.

Influence of Surf Clam Shell on Blood Lipid and Antioxidant Activity of Diabetic Mice

WEN Yangmin1,WAN Duanjing2,XIE Yonghua1,LUO Cailin1,CHENG Jing1
1 Quanzhou Medical College,Quanzhou 362011,China;
2 Emergency Department of Quanzhou Municipality TCM Hospital

Objective:To study the influenee of surf shell(Mactra antiquata)aqueous extract on blood lipid and antioxidant activity of diabetic mice.Methods：After mice models with diabetes mellitus(DM)were established by streptozotocin(STZ),the influences of different concentrations of surf clam shell aqueous extract on total cholesterol(TC),triglyceride(TG),free fatty acids(FFA),total antioxidant activity(T-AOC),the contents of NO,the contents of hydroxyl radicals(OHo)in the liver tissue,the activity of superoxide dismutase(SOD)and catalase(CAT) were analyzed.Results:The results showed that different concentrations of surf clam shell aqueous extract could decrease the contents of TC and TG of diabetic mice,and there were significant differences existed in the comparisons among different doses groups of surf clam shell aqueous extract(P＜0.05).Conclusion:Surf clam shell aqueous extract could improve antioxidant activity of diabetic mice,which was closing to the levels of normal mice.

surf clam shell;decreasing blood lipid;antioxidantion;STZ-induced diabetes mellitus mice; enzyme

R285.5

A

1004-6852(2015)10-0019-03

2014-12-27

泉州市科技發(fā)展重點(diǎn)項(xiàng)目(編號(hào)2011Z28)。

溫?fù)P敏(1979—)，男，碩士學(xué)位，講師。研究方向：天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)。